异常黑胆质成熟剂与清除剂对H2O2诱导的淋巴细胞NF—kB表达的影响

目的：研究异常黑胆质成熟剂与清除剂及H2O2诱导的淋巴细胞调亡过程中对转录因子NF—kB表达的影响。方法：体外培养淋巴细胞，分别应用H2O2、异常黑胆质成熟剂与清除剂及两者联用处理，以及westernblot检测细胞中NF-kB表达变化。结果：在淋巴细胞中，H2O2可使p65蛋白表达水平增高；异常黑胆质成熟剂与清除剂自身能使p65表达水平增高。且成熟剂强于清除剂，但同时对H2O2所致p65蛋白表达均有抑制作用。结论：异常黑胆质成熟剂与清除剂能拮抗H2O2所致淋巴细胞调亡时NF-kB的表达及异常活化。     

H2O2浓度的快速质量测定法

H2O2水溶液的比重随H2O2的含量同向变化，溶液的体积等于H2O和H2O2两者偏摩尔体积之和，溶液的体积与H2O2质量摩尔浓度关系方程式为：V^=1002.96 17.51m 2.96m^3/2-0.45m^2(25℃），推导出H2O2水溶液的定体积质量与H2O2的含量（0％－30％）的关系表。此方法用于实验室快速测定H2O2的含量，结果令人满意。     

有氧运动通过上调Dhcr24改善H2O2诱导的心肌细胞凋亡

目的 研究Dhcr24在有氧运动改善心肌梗死(myocardial infarction,MI)后心肌细胞功能中的潜在作用及分子机制。方法 通过H2O2建立心肌细胞(H9C2)凋亡模型,并通过AMPK激动剂AICAR来模拟心肌细胞的运动效果。通过流式细胞术和TUNEL检测心肌细胞凋亡水平;通过Western blot检测心肌细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Dhcr24的表达水平;通过RT-qPCR检测细胞中Dhcr24 mRNA的水平。结果 与对照组相比,H2O2诱导的心肌细胞凋亡率增加、TUNEL阳性粒子数升高、抗凋亡蛋白Bcl-2水平降低、促凋亡蛋白Bax水平升高、Dhcr24水平降低。与H2O2诱导的心肌细胞相比,AMPK激活剂AICAR处理后,心肌细胞凋亡率、TUNEL阳性粒子数降低、Dhcr24水平升高。在H2O2和AICAR共同处理的心肌细胞中敲低Dhcr24,降低的细胞凋亡率、TUNEL阳性粒子数得到逆转。结论 有氧运动对H2O2诱导的心肌细胞凋亡具有明显保护作用,可能与其上调Dhcr24表达有关。     

硫酸多糖916对细胞因子和H2O诱导ECV304细胞产生一氧化氮的影响

目的：研究硫酸多糖916（PS916）对TNFα、IL-1β和H2O2诱导ECV304细胞产生一氧化氮（NO）的影响。方法：用Griess试剂测定ECV304细胞产生的NO，用MTT法测定细胞的增殖，用荧光法测定NO合酶的活性。结果：40ng/mlTNFα和40ng/mlIL-1β使ECV304细胞NO产生下降，0.1mmol/L H2O2使NO的产生增加。PS916剂量依赖性增加TNFα、IL-β诱导的ECV304细胞NO的产生，降低H2O2诱导ECV304细胞产生的NO。TNFa和H2O2抑制ECV304细胞的增殖，而IL-1β对ECV304细胞的增殖没有明显影响。PS916剂量依赖性的抑制TNFα和H2O2的作用，增加存活细胞数。在体外，PS916对细胞的NO合酶无明显的影响。结论：PS916在体外实验中对细胞因子和H2O2引起的ECV304细胞损伤有拮抗作用，对细胞表现出明显的保护作用。     

异常黑胆质成熟剂与清除剂对H2O2诱导的淋巴细胞NF-κB表达的影响

目的:研究异常黑胆质成熟剂与清除剂及H2O2诱导的淋巴细胞调亡过程中对转录因子NF-κB表达的影响.方法:体外培养淋巴细胞,分别应用H2O2、异常黑胆质成熟剂与清除剂及两者联用处理,以及Western blot检测细胞中NF-κB表达变化.结果:在淋巴细胞中, H2O2可使p65蛋白表达水平增高;异常黑胆质成熟剂与清除剂自身能使p65表达水平增高,且成熟剂强于清除剂,但同时对H2O2所致p65蛋白表达均有抑制作用.结论:异常黑胆质成熟剂与清除剂能拮抗H2O2所致淋巴细胞调亡时NF-κB的表达及异常活化.     

二甲双胍激活Nrf2通路对PC12细胞H2O2氧化损伤的机制研究

目的：研究二甲双胍对H2O2诱导的PC12 细胞损伤可能的保护作用机制。方法：使用CCK-8法检测二甲双胍对PC12细胞的细胞活力;建立H2O2损伤PC12细胞的细胞模型,使用CCK-8法和LDH法检测二甲双胍对PC12细胞生存率和LDH释放量,采用Hoechst 33342染色法和流式细胞术检测二甲双胍对PC12细胞的凋亡和ROS水平情况。qPCR和Western blot法检测二甲双胍对Nrf2/HO-1通路mRNA和蛋白表达水平。使用小干扰RNA沉默Nrf2检测二甲双胍对H2O2诱导细胞的保护作用。结果：二甲双胍在浓度0.5、1和2 mmol/L下对PC12细胞不表现毒性作用。预处理二甲双胍可对H2O2造成的PC12细胞损伤产生浓度依赖性保护作用和降低LDH。同时,二甲双胍降低H2O2造成的细胞凋亡和ROS水平。二甲双胍能激活细胞内Nrf2/HO-1通路起到抗氧化保护作用。结论：二甲双胍预处理后通过激活细胞内Nrf2/HO-1通路对H2O2诱导的 PC12 细胞损伤具有保护作用。     

青葙皂苷对过氧化氢诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究青葙皂苷（Celosins,CES）对H2O2诱导的H9c2凋亡的保护作用。方法 噻唑蓝检测各组细胞活力以确定CES的最佳作用浓度,以及对H2O2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用。细胞分组为：空白对照组、H2O2处理组、低剂量青葙皂苷+H2O2处理组、中剂量青葙皂苷+H2O2处理组、高剂量青葙皂苷+H2O2处理组。利用流式细胞术检测心肌细胞凋亡比例、ROS的产生情况。蛋白印记法（WB）检测凋亡信号通路相关蛋白的表达和Nrf2 /ARE 信号通路相关蛋白表达。结果 （1）青葙皂苷可升高H2O2处理的H9c2细胞活力,差异具有统计学意义(P＜0.05)。（2）青葙皂苷可降低H2O2处理的H9c2细胞凋亡率(P＜0.05)。降低ROS的产生(P＜0.05)。（3）青葙皂苷可降低蛋白细胞质细胞色素C、cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3、Bax的表达(P＜0.05),升高蛋白Bcl-2、Nrf2 核转位与HO-1的表达(P＜0.05)。结论 CES通过激活Nrf2 /ARE信号通路抑制H2O2诱导的H9c2细胞损伤。     

H2O2对平滑肌细胞凋亡及p38MAPK活性的影响

目的：了解H2O2对兔血管平滑肌细胞（VSMC）p38蛋白激酶（p38MAPK)磷酸化的影响及其与细胞凋亡的关系。方法：取兔主动脉血管平浮雕肌细胞培养，加或不加H2O2孵育，用四甲基偶氮唑盐微量酶反应（MTT）法检测平滑肌细胞活性。以Western杂交检测p38MAPK磷酸化。结果：（1）随着H2O2浓度增加，VSMC活性呈剂量依赖性降低；（2）磷酸化p38MAPK的表达随H2O2浓度的增高而增加，且磷酸化的p38MAPK在H2O2作用后15min时达到峰值。（3）加用特异性的p38MAPK抑制剂SB203580后可显著降低p38MAPK的活化，并能逆转H2O2诱导细胞凋亡的作用。结论：H2O2通过激活p38MAPK而使平滑肌细胞凋亡增加，这也许是糖尿病患者更易患心血管疾病的原因之一。     

异丙酚对H2O2刺激下细胞内ASK1蛋白激活的影响

目的探讨在H2O2刺激下,异丙酚对细胞中Daxx-ASK1信号通路的影响。方法对体外培养的HEK293细胞分为对照组、H2O2刺激组以及H2O2刺激合并异丙酚处理组。采用免疫荧光、Westernblot及MTT等方法,观察异丙酚预处理对H2O2刺激下的HEK293细胞存活率以及细胞中Fas死亡结构域相关蛋白(Daxx)的亚细胞定位以及凋亡信号调节激酶1(ASK1)激活的影响。结果在200～500μmol/LH2O2刺激下,异丙酚在一定程度上能有效保护细胞,缓解抗氧化应激损伤。进一步实验发现,H2O2刺激细胞后,与H2O2刺激组相比,异丙酚处理组细胞中Daxx蛋白大部分仍然聚集在细胞核中,只有少部分移入到细胞浆中,相应ASK1的激活程度也较低。结论氧化应激刺激下,异丙酚可通过抑制细胞中Daxx蛋白的出核,进而抑制胞浆中ASK1蛋白的激活,从而起到保护细胞、抑制细胞死亡的效能。     

HSP70抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

目的：阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：采用基因瞬间转染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达，采用Hoechst 33258染色观察H2O2 (0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase-9和caspase-3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2所致Smac从线粒体释放的影响。结果：HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋亡核百分率明显降低, DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase-9和caspase-3的活化明显受到抑制;并进一步发现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论：HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来抑制H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡。     

肌肽对H2O2、Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究肌肽对H2O2和β淀粉样蛋白片段（Aβ25－35）诱发PC12细胞损伤的保护作用。方法 将培养的PC12细胞分为3组：正常对照组；损伤组，分别加入H2O2和Aβ25－35；保护组，在用H2O2、Aβ25－35处理前30min加入肌肽。用LDH法、MTT法观察肌肽的神经保护作用。结果 保护组LDH活性显著少于损伤组（P＜0．01）；MTT测定结果显著高于损伤组（P＜0．01）。结论 肌肽对H2O2和Aβ25－35诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用。     

异常黑胆质成熟剂与清除剂对H2O2诱导的淋巴细胞毒性的影响

目的：观察异常黑胆质成熟剂和异常黑胆质清除剂对H2O2诱导的淋巴细胞毒性的作用。方法：采用健康人外周血中分离的淋巴细胞作为研究对象，用四氮甲基唑蓝法(MTT)检测淋巴细胞活性。结果：异常黑胆质成熟剂在100μg／ml和50000μg／ml的浓度下，明显的拮抗H2O2800μmol／LH2O2对细胞生长的抑制。异常黑胆质清除剂对H2O2处理诱导的淋巴细胞的生长抑制未显示出明显作用。结论：异常黑胆质成熟剂能显著提高H2O2抑制的淋巴细胞的生存率。     

大蒜素对人脐静脉细胞抗氧化损伤保护作用

目的：研究大蒜素（Allicin）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）凋亡的保护作用及其作用机理。方法建立H2O2诱导HUVEC细胞的氧化应激凋亡模型;采用MTT、RT-PCR、Western-blot等方法检测来探究大蒜素对其保护作用与可能作用机制。结果大蒜素能够减少H2O2诱导HUVEC的凋亡;使基因eNOS的表达显著增加;使凋亡相关PARP蛋白切割减弱、前体Caspase-3蛋白表达增加,Bax蛋白表达减弱。结论大蒜素对H2O2诱导HUVEC凋亡具有较好的保护作用,对氧化应激状态下的HUVEC细胞起保护作用。     

黄芩茎叶总黄酮对H2O2诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaftotal flavonoid,SSTF)对过氧化氢(H2O2)诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白表达的影响.方法 培养大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为3组,即正常对照组;H2O2损伤组;SSTF干预组.以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达变化;心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示.结果 H2O2损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白的阳性表达指数(positive expression index,PEI)显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白PEI明显高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.01).SSTF干预组Bcl-2蛋白的PEI显著高于H2O2损伤组(P＜0.01),Bax蛋白PEI明显低于H2O2损伤组(P＜0.01),细胞存活率明显高于H2O2损伤组(P＜O.01).结论 SSTF对心肌细胞的保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达,抑制Bax蛋白的表达从而抑制心肌细胞凋亡有关.     

复方玫瑰胶囊对家兔心肌缺血-再灌注损伤中血清 GSH-PX、H2O2影响的实验研究

目的：探讨复方玫瑰胶囊对家兔心肌缺血一再灌注损伤的保护作用。方法：以家兔血清中GSH—PX、H2O2为指标进行实验观察。结果：复方玫瑰胶囊对心肌缺血一再灌注损伤家兔血清中GSH—PX的升高与H2O2的降低有非常显著作用（P〈0．01）。结论：复方玫瑰胶囊通过对GSH—PX与H2O2含量的影响，对心肌缺血再灌注损伤有保护作用。     

黑果枸杞对H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的探讨黑果枸杞(Lrm)对H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法建立H2O2诱导的H9c2心肌细胞氧化应激损伤模型,将H9c2心肌细胞分为空白组、模型组(H2O2400μmol/L)以及实验组(Lrm 1.00 g/L加H2O2400μmol/L)。实验组于H2O2刺激前加入Lrm预处理2 h,再加入H2O2干预6 h。观察各组细胞形态,MTT法测定细胞活力、TUNEL法测定细胞凋亡率、Western Blotting检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x基因(Bax)蛋白表达。结果与空白组相比,模型组细胞形态明显异常、细胞活力降低、凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少,同时促凋亡蛋白Bax表达增加;与模型组相比,实验组细胞形态得到明显改善、细胞活力升高、凋亡率显著降低(P0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达增加,同时促凋亡蛋白Bax表达减少,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Lrm能够有效改善H2O2干预后的H9c2心肌细胞形态,提高细胞活力及降低凋亡率,其减轻氧化应激损伤作用机制与上调Bcl-2蛋白表达和下调Bax蛋白表达有关。     

消退素D1通过抑制p38 MAPK活化上调H2O2诱导心肌细胞HO-1表达的实验研究

目的探讨消退素D1(RvD1)对H2O2诱导状态下H9C2心肌细胞血红素氧合酶-1(HO-1)的调节作用及相关的分子机制。方法将大鼠心肌H9C2细胞分为对照组、消退素D1+H2O2组(Resolvin D1+H2O2组)和H2O2组3组,在200μM的H2O2干预6小时后使用RT-PCR法和western blot法对各组H9C2心肌细胞HO-1mRNA和蛋白的表达水平进行检测;并使用western blot法对H9C2心肌细胞p38 MAPK磷酸化水平(Phospho-p38 MAPK/total p38MAPK比值)进行测量。结果与对照组比较,在H2O2干预6小时后H9C2心肌细胞HO-1mRNA和蛋白的表达水平明显降低,而p38 MAPK磷酸化水平均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);但H2O2组较Resolvin D1+H2O2组HO-1mRNA和蛋白表达的降低以及p38 MAPK磷酸化水平的增加更加显著,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论本研究结果表明,在过氧化氢诱导的H9C2心肌细胞氧化应激和损伤过程中消退素D1可能是通过抑制P38 MAPK的活化上调了HO-1的表达,对心肌细胞有保护作用。     

桔梗多糖对H2O2诱导PC12细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的 研究桔梗多糖（PGP）对H2O2致PC12细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 建立H2O2诱导PC12细胞氧化损伤模型,MTT法检测细胞存活率;比色法测定细胞内乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）以及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性;DCFH-DA检测细胞内ROS;qPCR、Western Blot方法分别检测NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达。结果 与模型组相比,PGP预处理24h后,加入终浓度为600 μmol/L H2O2处理2h,LDH、MDA含量和细胞内ROS减少,SOD与GSH-Px活性增强,同时,PGP下调NOX2、p22和Rac mRNA和蛋白的表达水平。结论 PGP对H2O2诱导的PC12细胞的氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制NADPH氧化酶2(NOX2)过表达有关。      

紫檀芪抗H2O2诱导H9C2心肌细胞肥大

目的 探讨紫檀芪（pterostilbene,PTE）对H2O2诱导H9C2心肌细胞肥大的影响。方法 培养H9C2心肌细胞,使用50μmol/L的H2O2诱导心肌肥大,随机将其分为对照组（control组,C组）、心肌肥大组（hypertrophy组,H组）和心肌肥大+PTE组（H+PTE组）。干预48h后,采用细胞免疫荧光法检测H9C2心肌细胞表面积,采用蛋白免疫印迹法检测p62和p-mTOR蛋白表达。结果 与C组比较,H组心肌细胞的表面积显著增大,p62表达显著升高,p-mTOR/mTOR表达显著降低（P<0.05）。与H组比较,H+PTE组心肌细胞的表面积显著减小,p62表达显著降低,p-mTOR/mTOR表达显著升高（P<0.05）。结论 PTE通过抑制mTOR信号通路调节自噬进而减轻H2O2诱导的H9C2心肌细胞肥大。     

硫氧还蛋白-2 在氧化损伤的人晶状体上皮细胞中的表达及其意义

目的：探讨硫氧还蛋白-2(thioredoin-2,Trx-2)是否参与白内障的发病过程及其对过氧化氢(H2O2)诱导的 人晶状体上皮细胞氧化损伤的影响。方法：选取志愿者(因外伤行透明晶状体取出术患者)10例和行超声乳化白内 障手术患者(年龄大于60岁)30例的晶状体前囊膜,采用链霉素亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法检测志 愿者和白内障患者晶状体上皮细胞中Trx-2蛋白的表达情况。体外培养SRA01/04细胞,根据不同处理分为空白对照 组、20 μmol/L H2O2组、50 μmol/L H2O2组、100 μmol/L H2O2组、阴性对照组(转染对照空pCMV6质粒并用100 μmol/L H2O2处理)和过表达Trx-2组(转染pCMV6-Trx-2过表达质粒并用100 μmol/L H2O2处理)。采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2- thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法检测各组细胞活力;采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡;采用 化学比色法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活性,谷胱甘肽 (glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;采用Western印迹检测各组细胞中Trx-2以及B细胞淋巴瘤/白 血病-2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸 蛋白水解酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)的表达。结果：与志愿者相比,白内障患者晶状体上皮 细胞中Trx-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。与空白对照组比较,20, 50,100 μmol/L H2O2组Trx-2蛋白表达量均明显降低 (均P<0.05)。与空白对照组相比,100 μmol/L H2O2组和阴性对照组细胞存活率降低、凋亡率增加,细胞内SOD和CAT 活性降低、GSH含量减少、MDA含量增加,Trx-2和Bcl-2蛋白表达降低,Bax和caspase-3蛋白表达增加(均P<0.05)。与 阴性对照组比较,过表达Trx-2组细胞存活率增加、凋亡率降低,SOD和CAT活性增加、GSH含量升高、MDA含量降 低,Trx-2和Bcl-2蛋白表达增加,Bax和caspase-3蛋白表达减少(均P<0.05)。结论：Trx-2参与白内障发病中上皮细胞的凋 亡,过表达Trx-2能够减少H2O2诱导的细胞凋亡,这可能与拮抗H2O2诱导的氧化损伤有关。