线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用

目的: 探讨线粒体活性氧在心肌成纤维细胞NLRP3炎症小体激活中的作用。方法: 培养原代小鼠心肌成纤维细胞，细胞分为对照组（正常培养组），使用脂多糖刺激的引发组，使用脂多糖加三磷酸腺苷的激活组，以及再加用mito-TEMPO的干预组。通过MitoSOX染色检测各组细胞线粒体活性氧水平;通过蛋白质印迹法检测细胞内NLRP3、凋亡相关微粒样蛋白（ASC）、Pro-caspase-1、Pro-IL-1β及上清液中caspase-1 p20、IL-1β蛋白水平; 用酶联免疫吸附法检测上清液中IL-1β蛋白的含量; 使用免疫共沉淀法观察ASC与NLRP3蛋白的结合情况。结果： 激活组细胞胞内线粒体活性氧水平较对照组明显增加（P＜0.05），而干预组线粒体活性氧水平较激活组明显下降（P＜0.05）；心肌成纤维细胞经脂多糖刺激后，细胞内NLRP3和Pro IL 1β蛋白较对照组明显升高（P＜0.05），干预组中Pro-IL-1β较激活组明显升高（P＜0.05）。激活组上清液中caspase-1 p20和IL-1β较对照组明显升高（P＜0.05），干预组caspase-1 p20和IL-1β较激活组明显减少（P＜0.05）。激活组NLRP3-ASC连接形成复合体，干预组NLRP3和ASC的结合减少。结论： 心肌成纤维细胞中线粒体活性氧通过促进NLRP3蛋白和ASC蛋白的结合，使NLRP3炎症小体激活。     

NLRP3炎症小体在动脉粥样硬化中的作用研究进展

NOD样受体热蛋白结构域3（NLRP3）炎症小体是核酸结合的寡聚化结构域样受体（NLR）炎性通路中的重要组成部分,由NLRP3支架、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1前体（pro-Caspase-1）组成,激活的NLRP3炎症小体通过促进含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）等关键下游细胞因子的产生和分泌,增强炎症反应,以维持机体的固有免疫和特异性免疫。研究显示,NLRP3炎症小体可影响动脉粥样硬化、免疫性疾病、炎症性疾病等多种类型疾病的进程,是目前研究最为广泛的炎性小体,已成为近年来的研究热点。文章从炎症反应机制角度出发,主要探讨NLRP3炎症小体的激活对动脉粥样硬化的调控作用。     

NLRP3炎症小体对口腔鳞状细胞癌作用的研究进展

慢性炎症在肿瘤的进展过程中发挥着重要作用,NLRP3炎症小体作为NLRs家族的核心蛋白,其激活后可以招募ASC,裂解Caspase-1并使其活化,促进IL-1β和IL-18分泌成熟,进而介导炎症反应.目前,关于NLRP3炎症小体的研究较为深入,其与体内炎症、肿瘤等多种疾病的发生、发展密切相关.该文针对NLRP3炎症小体...     

WP1130通过抑制NLRP3炎症小体活化缓解小鼠的感染性休克

目的 探究小分子化合物WP1130抑制NLRP3炎症小体活化并缓解感染性休克的作用机制。方法 细胞生物学水平：WP1130预处理小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDM）或人THP-1细胞后,利用多种NLRP3炎症小体活化剂（Nigericin、ATP、MSU、胞内LPS转染）活化NLRP3炎症小体,使用poly A:T活化AIM2炎症小体,通过Western blot和ELISA检测细胞培养上清中caspase-1和IL-1β的分泌水平,确定WP1130对NLRP3炎症小体的抑制效果及其特异性。利用激光共聚焦显微镜观察Nigericin诱导的线粒体损伤情况,探究WP1130是否影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号。动物水平：将SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组（Control组）、感染性休克组（LPS组）、WP1130治疗组（WP1130+LPS组）,ELISA检测小鼠血清和腹腔液中IL-1β、TNF-α的分泌水平。结果 WP1130可剂量依赖性的抑制多种激动剂诱导的NLRP3炎症小体活化（P<0.05）,但对非炎症小体相关炎性因子IL-6、TNF-α的分泌无显著影响（P>0.05）。此外,WP1130对AIM2炎症小体的活化无显著影响（P>0.05）。机制研究表明,WP1130并不影响NLRP3炎症小体组装活化的上游信号线粒体损伤。动物实验结果表明,相较感染性休克组（LPS组）,WP1130治疗组（WP1130+LPS组）小鼠血清和腹腔液中IL-1β的水平显著降低（P<0.05）,而TNF-α的分泌水平无统计学差异（P>0.05）。结论 WP1130能够特异性抑制NLRP3炎症小体活化并缓解LPS诱导的小鼠感染性休克。     

糖尿病/肥胖相关的炎症,心肌细胞死亡及心肌病

糖尿病心肌病（DCM）是糖尿病引发的一种慢性心肌病理改变。在这一慢性病理过程中,急性心肌反应如心肌细胞死亡起关键性的启动作用。除了高血糖,炎症反应也是引起糖尿病性心肌病心肌细胞死亡的一个重要因素。研究证实,糖尿病或肥胖经常可导致全身包括心脏中的肿瘤坏死因子-α（TGF—α）,白介素-18和血小板激活抑制因子-1（PAI—1）的升高。这些细胞因子引起心肌细胞死亡的机制主要是与氧化和／或氮化损伤相关。金属硫蛋白做为一个有效的抗氧化剂,可以保护心肌免受氧化应激损伤以及细胞因子引发的心肌细胞死亡,从而有效地防止DCM的发生。应用特异性的超氧化抑制荆可以完全阻断细胞因子导致的心肌细胞死亡,所以抑制氧化应激可以有效防止心肌死亡。因此,糖尿病诱发的炎症因子通过氧化应激反应所诱发的心肌细胞死亡是糖尿病心肌病（DCM）发生发展中的重要始动因子。     

NLRP3炎症小体在心肌梗死中作用的研究进展

NLRP3炎症小体是固有免疫系统中模式识别受体家族的重要组成部分。NLRP3炎症小体一旦被激活,将募集适配器凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC),并与之相互作用,从而招募并结合半胱天冬氨酸蛋白酶-1前体(procaspase-1),使其自身裂解活化为半胱天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1),最终使IL-1β前体(pro-IL-1β)和IL-18前体(pro-IL-18)成熟活化为有活性的促炎性细胞因子(IL-1β和IL-18),并启动焦亡性细胞死亡(pyroptosis)。NLRP3炎症小体与多种疾病的发病机理有着密切的关系。近年来研究报道,NLRP3炎症小体识别非微生物危险信号引起的无菌性炎性反应在心肌梗死的发展过程中发挥着重要作用。本文就NLRP3在心肌梗死中的相关研究作一综述。     

NLRP3炎性小体在炎症疾病中的研究进展

炎症是清除体内危险刺激的一种防御反应,炎性小体通过促炎细胞因子的裂解并使其成熟来调节炎症。NLRP3炎性小体能活化胱天蛋白酶(caspase)1,并引起白细胞介素(IL)1β、IL-18和IL-33等促炎细胞因子的分泌,参与机体抵抗病原体免疫应答。各种内源或外源的刺激可通过不同的信号通路激活NLRP3炎性小体来活化caspase-1。该文介绍了NLRP3炎性小体的结构、激活途径及其对非感染性炎症疾病的研究进展。     

NLRP3炎症小体及其在消化系统疾病中的作用

Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体是固有免疫系统的重要组成部分,其通过与下游的效应蛋白组装形成炎性小体而发挥作用,白细胞介素-1β(IL-1β)是其发挥作用的主要细胞因子。NLRP3炎性小体能被多种病原微生物以及内源性分子激活,从而使得组织中IL-1β的表达上调,其介导的炎性反应在消化系统疾病的发生发展中发挥着一定的作用。文章就NLRP3炎症小体的活化机制及其与消化系统疾病的关系作一综述。     

NLRP3炎性小体与动脉粥样硬化相关性研究进展

NLRP3炎性小体是模式识别受体激活后所形成的一种多蛋白复合体。活化的NLRP3炎性小体可使caspase-1前体转变为有活性的caspase-1,促进白介素（IL）-1β和IL-18的成熟和分泌,进而引发机体的炎性反应。动脉粥样硬化作为心脑血管疾病的发病基础,严重威胁着人类的健康。近年研究结果表明,动脉粥样硬化是一种慢性炎性反应性疾病。炎性小体在动脉粥样硬化炎性反应中发挥关键作用,其中NLRP3炎性小体与动脉粥样硬化的形成有着密切联系。本文就NLRP3炎性小体活化机制及其与动脉粥样硬化的相关性进行综述。     

NLRP3炎症小体在肝疾病中的作用

NLRP3炎症小体是一种多蛋白复合物,能识别来自损伤细胞和病原生物释放的信号分子,介导caspase-1活化,从而剪切活化细胞因子IL-1β和IL-18。IL-1β是一种正反馈式促炎因子,可放大炎症反应。与其他炎症反应不同,NLRP3炎症小体活化需要两种信号参与,因而具有较高的激活阈值。NLRP3炎症小体活化与肝疾病发病机制有密切关系,在不同病因诱导的肝疾病及实验动物模型研究中已证明,NLRP3炎症小体活化在肝细胞损伤、细胞活化以及促进肝纤维化中发挥重要作用。这些研究有助于转化应用到临床治疗实践中,为肝疾病的治疗提供理论依据和新的药物作用靶点。本文主要探讨了炎症小体的功能、活化机制及其不同肝损伤过程中的活化及生物学功能效应,并根据国内外最新相关研究报道,对NLRP3炎症小体在酒精性肝病、非酒精性肝病、慢性HCV感染和肝纤维化中的作用进行综述。     

NLRP3炎症小体对种植体植入的影响

核苷酸结合寡聚化结构域样受体热蛋白结构域相关蛋白（NLRP）3炎症小体在种植体周围骨稳定的保持中发挥重要作用。NLRP3通过其下游的促炎性细胞因子白介素-1β和白介素-18,以及胱天蛋白酶-1介导的细胞焦亡,促进种植体周围骨吸收。通过抑制NLRP3炎症小体的产生可能有利于种植过程中提高患者的舒适度和种植后的骨稳定。种植体周围环境中存在的金属颗粒和菌斑可以激活NLRP3炎症小体进而促进骨吸收。已有研究多聚焦于骨科植入物周围骨组织和牙周炎,针对种植体周围炎的研究较少。本文就NLRP3炎症小体对种植体周围骨形成、骨吸收及种植体植入所致疼痛产生的影响展开综述,并对NLRP3炎症小体作为预防种植体周围炎的可能进行阐述。     

NLRP3炎症体与糖尿病并发症的研究进展

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症体包含NLRP3、细胞凋亡相关的斑点样蛋白质和caspase-1前体,可以通过激活胱天蛋白酶caspase-1,促进白细胞介素(IL)1β和IL-18的成熟和分泌,引起炎性反应。糖尿病及其并发症(如动脉粥样硬化、糖尿病肾病)通过高血糖、高胆固醇血症、高尿酸血症等激活NLRP3炎症体,引起IL-1β、IL-18水平升高,诱发炎性反应。目前研究发现,减少对NLRP3炎症体激活的刺激,可以预防和减轻糖尿病并发症,为糖尿病及其并发症的防治开拓了新的空间。     

NLRP3炎症小体及其下游炎症因子在动脉粥样硬化炎症反应中的作用

目的：探讨NLRP3炎症小体及其下游炎症因子在动脉粥样硬化炎症反应中的作用。方法选择氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)作用于人单核细胞系THP-1,经Western blot法检测NLRP3及其下游炎症因子半胱天冬酶-1(Caspase-1)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-18(IL-18)的表达;并采用SiRNA技术下调空白处理组(Blank组)和ox-LDL处理组NLRP3基因表达,分别检测以上指标。结果与空白处理组相比,50 mg/L、100 mg/L、150 mg/L的ox-LDL作用于单核细胞后可促进NLRP3的表达,NLRP3下游的Caspase-1、IL-1β和IL-18表达水平与NLRP3表达一致,表达也均明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。NLRP3小干扰RNA (SC-45469)转染后,Blank组与ox-LDL组的NLRP3及其下游炎症因子Caspase-1、IL-1β和IL-18的表达均有显著下降(P<0.05);而转染后Blank组与ox-LDL组各指标下降率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NLRP3炎症小体参与动脉粥样硬化发生发展的过程,其可能通过改变ox-LDL的表达水平,诱发炎症相关因子Caspase-1、IL-1β和IL-18的分泌来调节, NLRP3炎症小体具有成为临床上防治动脉粥样硬化的新靶点的重要潜力。     

NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞EMT中的作用

目的:观察NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞上皮间质转化(EMT)中的作用.方法:以小鼠肾小管上皮细胞为研究对象,高糖处理24 h后,采用real-time PCR法检测细胞表型标志分子(E钙粘素和α-SMA)和NLRP3炎症小体mRNA的表达,ELISA法检测细胞上清液中IL-1β含量.采用NLRP3炎症小体特异性抑制剂MCC950探讨NLRP3炎症小体在高糖诱导小鼠肾小管上皮细胞ETM中的作用.结果:高糖处理24 h可降低小鼠肾小管上皮细胞E钙粘素mRNA表达,上调α-SMA mRNA表达;同时上调NLRP3、pro-IL-1β和pro-caspase-1 mRNA表达,以及IL-1β分泌;抑制NLRP3炎症小体可部分逆转高糖诱导的小鼠肾小管上皮细胞EMT.结论:高糖应激可能通过激活NLRP3炎症小体促进IL-1β分泌诱导肾小管上皮细胞发生EMT.     

shRNA干扰NLRP3对晚期糖基化终末产物诱导的心肌细胞炎症反应的影响

目的  探讨沉默NOD 样受体家族pyrin域3 (NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3, NLRP3)炎性小体对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)诱导的心肌细胞损伤的调节作用及机制。 方法  H9c2心肌细胞分为4组:对照组、 AGEs组、AGEs+sh-Ctrl组、 AGEs+sh-NLRP3组,后两组细胞首先将短发夹RNA（shRNA）对照（sh-Ctrl）和shRNA干扰NLRP3（sh-NLRP3）质粒分别转染入H9c2细胞,然后后3组细胞用100 mg/L AGEs处理24 h,建立H9c2损伤模型,对照组细胞用溶剂处理24 h。Western blot检测NLRP3、凋亡相关微粒蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC)、 Caspase-3、 Caspase-9、核转录因子κB(nuclear factor κB, NF-κB) P65和磷酸化P65（p-P65）的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-18和IL-1β的水平,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色检测细胞核中NF-κB P65的水平。结果  AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NLRP3、 ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均高于对照组( P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NLRP3、ASC、Caspase-3和Caspase-9的表达均下降( P<0.05)。与对照组相比,AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组IL-6、IL-18、IL-1β水平升高,细胞凋亡率上升(P<0.05)。AGEs+sh-NLRP3组IL-6、IL-18、IL-1β水平和细胞凋亡率低于AGEs组( P<0.05)。AGEs组和AGEs+sh-Ctrl组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平高于对照组(P<0.05)。与AGEs组相比,AGEs+sh-NLRP3组NF-κB P65磷酸化水平及细胞核的NF-κB P65水平降低( P<0.05)。结论  沉默NLRP3可通过抑制NF-κB P65的活化减轻AGEs诱导的心肌细胞凋亡及炎症反应。     

NLRP3炎症小体介导血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉血管内皮细胞炎症因子IL-1β的表达

目的研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）NLPR3 炎症小体激活与炎症因子白介素-1β （IL-1β）表达的影响。方法体外培养HUVECs,用AngⅡ的不同浓度和刺激时间刺激HUVECs,找到最适合的AngⅡ刺激浓度 与时间。AngⅡ刺激HUVECs前,预用AngⅡ受体阻断剂氯沙坦阻断AngⅡ作用;NAD（P）H抑制剂DPI或H2O2清除剂CAT降 低胞内活性氧（ROS）含量;用caspase-1抑制剂YVAD阻断caspase-1作用;用NLRP3 siRNA沉默胞内NLRP3表达。运用蛋白 印迹法（western blot）分别检测细胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β含量。结果（1）HUVECs在浓度10-9MAngⅡ刺激 12 h后,胞内NOX4、NLRP3、caspase-1以及IL-1β的蛋白表达显著增加;（2）氯沙坦、DPI、CAT、YVAD和NLRP3 siRNA都可减 轻AngⅡ诱导的上述反应。结论AngⅡ通过促进HUVECs活性氧生成,激活NLRP3炎症小体,促进胞内炎症介质IL-1β P17活 性片段生成增加,诱导血管炎症的发生。     

NLRP3炎症小体调节创伤后炎症反应的作用

创伤在造成机体原发损伤的同时,诱发炎症反应,对机体产生继发性损伤.炎症小体通过影响促炎细胞因子的裂解及其成熟、释放来调节炎症反应.NLRP3炎症小体能活化半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1),并引起白细胞介素(IL-1β、IL-18)等促炎细胞因子的分泌,参与机体抵抗病原体的免疫应答.本文就NLRP3炎症小体在创伤诱发的炎症反应中的作用的研究进展做一综述.     

雷公藤甲素对IgA肾病大鼠的肾保护作用及对NLRP3炎症小体的影响

目的探讨雷公藤甲素对IgA肾病（IgAN）大鼠的肾保护作用及其与NLRP3炎症小体的关系。方法40只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组和雷公藤甲素低、高剂量组。采用口服牛γ-球蛋白（BGG）8周及尾静脉注射BGG方法建立IgAN大鼠模型。于造模完成后灌胃给予低、高剂量雷公藤甲素治疗8周。观察大鼠血清中肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）及24 h尿蛋白（24 h TUP）水平;血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-17A、γ干扰素（IFN-γ）及IL-4水平;肾组织中IgA沉积情况;肾脏中IL-1β、Caspase-1、IL-18及NLRP3的表达情况。结果与模型组相比,雷公藤甲素组血清Scr、BUN及尿液中24 h TUP含量明显降低（P < 0.05~P < 0.01）;雷公藤甲素能降低血清中TNF-α、IL-17A、IFN-γ和L-4水平（P < 0.05~P < 0.01）,减轻IgA的沉积（P < 0.01）,抑制IL-1β、Caspase-1、IL-18及NLRP3的表达（P < 0.05~P < 0.01）。结论雷公藤甲素对IgA肾病大鼠肾脏具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制NLRP3炎症小体的激活,进而抑制炎症反应。     

NLRP3炎症体在血管疾病中的作用

NLRP3炎症小体是核苷酸结合和寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding and oligomerization domain-like receptors,NLRs)家族中的一种蛋白复合体,在固有免疫中发挥重要作用。当机体遭遇有害因子刺激时,NLRP3炎症体诱导pro-caspase 1裂解成具有活性的caspase 1,促进IL-1β,IL-18的成熟和释放,从而参与宿主抗感染和无菌性炎症反应。近年来大量研究表明NLRP3炎症体与血管疾病的发生发展密切相关,NLRP3炎症体参与的血管壁无菌性炎症反应在大、中、小及微血管的病理生理过程中起重要作用。