原发性免疫性血小板减少症(ITP)患者CD5+B细胞对CD4+T细胞Th1/Th2型细胞因子分泌的影响

 目的 探讨原发性免疫性血小板减少症（immune thrombocytopenia，ITP）患者CD5⁺B细胞对CD4⁺T细胞分泌Th1/Th2型细胞因子的调节作用及其在大剂量地塞米松（high dose dexamethasone，HD-DXM）治疗后的变化。方法 采集5例初发原发性ITP患者HD-DXM治疗前后外周静脉血各20 mL及5例健康对照者外周静脉血20 mL，Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），进一步以免疫磁珠法分选CD5⁺B细胞、CD5^-B细胞和CD4⁺T细胞。CD5⁺B细胞或CD5^-B细胞与CD4⁺T细胞按1：9、1：5、1：3、1：1、3：1的梯度比例混合培养72 h或144 h。ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ（代表Th1型细胞因子）和IL-4（代表Th2型细胞因子）水平。结果 共培养72 h后，健康对照者CD5⁺B细胞与CD4⁺T细胞比例在1：3时，细胞培养上清液IFN-γ浓度与T细胞单独培养时相比明显下降[（2 427.99±632.62）pg/mL vs.（1 109.25±338.10）pg/mL，P=0.001 2）]；而ITP患者CD5⁺B细胞与CD4⁺T细胞比例在3：1时才对IFN-γ的分泌有显著抑制[（3 060.02±493.98）pg/mL vs.（1 769.45±634.73）pg/mL，P=0.000 3]。共培养144 h后得到相似的结果。HD-DXM治疗有效的ITP患者CD5⁺B细胞与CD4⁺T细胞比例在1：1时共培养72 h后，对IFN-γ的分泌有明显抑制[（3 600.02±838.00）pg/mL vs.（1 157.97±383.20）pg/mL，P<0.000 1]。健康对照者及ITP患者CD5⁺B细胞对CD4⁺T细胞分泌IL-4均无明显影响。结论 原发性ITP患者CD5⁺B细胞抑制CD4⁺T细胞分泌Th1型细胞因子IFN-γ的能力明显受损，经HD-DXM治疗后CD5⁺B细胞抑制IFN-γ分泌的能力可部分恢复。     

IL-36γ促进人CD8+T淋巴细胞细胞因子的分泌

目的: 探讨白细胞介素36γ（IL-36γ）是否能够增强体外培养的人CD8⁺T淋巴细胞分泌γ干扰素。方法: 经密度梯度离心法从健康人外周血分离获得外周血单个核细胞（PBMC）,经磁珠阳性选择富集纯化CD8⁺T淋巴细胞,分别用CD3单克隆抗体（mAb）+CD28 mAb,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12,CD3 mAb+CD28 mAb+IL-36γ以及CD3 mAb+CD28 mAb+IL-12+IL-36γ 4种因子组合刺激培养24 h和72 h。收集细胞,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析分选富集的CD8⁺T淋巴细胞纯度以及γ干扰素的表达;采用实时PCR检测各组细胞IL-36受体（IL-36R）、γ干扰素和颗粒酶B mRNA的表达。结果： 人CD8⁺T淋巴细胞表达IL-36R;各组因子刺激的人CD8⁺T淋巴细胞形态没有明显差异;人CD8+T淋巴细胞经IL-36γ刺激后,γ干扰素、颗粒酶B mRNA表达上调;同时, IL-36γ和IL-12 具有协同刺激CD8⁺T淋巴细胞的作用。结论： IL-36γ能促进体外培养的人CD8⁺T淋巴细胞分泌细胞因子,并且与IL-12具有协同作用。     

雷公藤多甙对小鼠异种骨移植急性排斥反应的抑制作用

目的：观察雷公藤多甙对小鼠异种骨移植急性排斥反应的抑制作用。方法：BALB/C小鼠随机分为治疗组（n=20）和对照组（n=20）,治疗组小鼠行雷公藤多甙（30 mg·kg^-1·d^-1）灌胃3 d,对照组给予等量生理盐水灌胃,将猪骨作为供体分别移植至治疗组和对照组小鼠体内,移植2周后,通过流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞数量,ELISA法检测2组小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的含量,观察移植骨周围组织形态学改变,比较2组小鼠异种骨移植后发生急性排斥反应的情况。结果：骨移植2周后治疗组小鼠脾脏中的CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞数量、CD4⁺/CD8⁺T淋巴细胞的比值较对照组均明显降低（P<0.05）,治疗组小鼠血清中IL-2、IFN-γ和IL-4含量较对照组均明显降低（P<0.05）,治疗组较对照组小鼠移植骨周围组织中淋巴细胞浸润明显减少。结论：雷公藤多甙可以减轻小鼠异种骨移植急性排斥反应。     

胶质瘤患者T淋巴细胞表面CTLA-4的表达及其临床意义

目的: 探讨胶质瘤患者外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达与胶质瘤WHO分级及手术的关系,阐明CTLA-4的临床意义。方法: 选择本院胶质瘤患者60例作为胶质瘤组,健康志愿者46名作为健康对照组。流式细胞术检测胶质瘤组和健康对照组研究对象外周血中CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达,分析其与胶质瘤WHO分级及手术的关系。结果: 胶质瘤组患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平明显高于对照组(P<0.01);Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平最高,Ⅳ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅲ级胶质瘤(P<0.01),Ⅲ级胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平高于Ⅱ级胶质瘤(P<0.01);术后胶质瘤患者CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4表达水平低于术前(P<0.01)。结论: 胶质瘤患者外周血CD4⁺和CD8⁺T细胞表面CTLA-4的表达水平随着胶质瘤恶性程度的升高而升高,并在胶质瘤发生发展过程中发挥促进作用。     

鼻咽癌患者外周血中程序性死亡分子1的表达及其作用机制研究

目的：探讨鼻咽癌患者外周血中T细胞表面程序性死亡分子1(PD-1)在鼻咽癌发生、发展中的意义。方法：选取2018年2-12月中山市人民医院收治的50例鼻咽癌患者作为鼻咽癌组,选取同期50例在康体保健中心体检的人员作为对照组。比较两组外周血中T细胞表面PD-1、穿孔素和颗粒酶的表达情况。结果：鼻咽癌组CD4⁺T、CD8⁺T淋巴细胞的PD-1阳性表达率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);PD-1⁺的CD8⁺T细胞表达穿孔素和颗粒酶的阳性率低于PD-1^-的CD8⁺T细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：PD-1与配体PD-L1相结合,可诱导T细胞丧失功能,PD-1⁺的CD8⁺T细胞表达穿孔素和颗粒酶的阳性率降低,这可能成为鼻咽癌治疗的新思路,值得进一步探索,PD-1有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。     

S-ChE联合T细胞表面PD-1水平对脓毒症患者病情预后状况评估的价值

目的 观察脓毒症患者血清胆碱酯酶(S-ChE)和T细胞程序性死亡分子-1(PD-1)以及炎症因子水平,并分析其与患者预后关系。方法 选取2018年8月—2021年5月在我院接受治疗的脓毒症患者为研究对象,同时选取同期在我院接受体检的健康人群为对照组。根据脓毒症患者的预后分为存活组和死亡组。比较脓毒症组和对照组、脓毒症存活组和死亡组患者S-ChE、PD-1水平和炎症因子水平的差异,并分析与患者预后的关系。结果 脓毒症患者的S-ChE水平低于对照组,PD-1水平高于对照组(P<0.05)。脓毒症患者的CRP、PCT水平高于对照组,CD3⁺T、CD3⁺CD4⁺T和CD4⁺CD8⁺T水平低于对照组(P<0.05)。死亡组患者的S-ChE水平低于存活组,PD-1水平高于存活组(P<0.05)。死亡组患者的CRP、PCT水平高于存活组,CD3⁺T、CD3⁺CD4⁺T和CD4⁺CD8     

IFN-γ在多囊卵巢综合征中的表达及对卵巢颗粒细胞的影响#br#

目的: 探讨炎症因子γ-干扰素（IFN-γ）在多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）疾病发生及发展过程中的作用。方法: 收集31例PCOS患者及22例健康志愿者肝素抗凝外周血,分离单个核细胞,分析IFN-γ⁺ Th1和IL-4⁺ Th2细胞比例;流式CBA法检测PCOS患者血浆IL-4、IL-6和IFN-γ水平;将人卵巢颗粒细胞瘤KGN细胞分为对照组（常规培养）和干扰素处理组（250 ng/mL IFN-γ）,分析IFN-γ对KGN细胞周期、增殖及凋亡的影响。结果： 与对照组相比,PCOS患者外周血单个核细胞中Th1细胞的比例明显上调(P<0.01);PCOS患者血浆中IFN-γ水平较对照组增高(P<0.05)。IFN-γ与KGN细胞体外共培养后,干扰素处理组CFSE标记KGN细胞的增殖较对照组明显右移,G₀-G₁期细胞增加(P<0.01),同时IFN-γ处理组凋亡比例增高(P<0.01)。结论： PCOS患者外周血中IFN-γ⁺ Th1细胞比例和血浆中IFN-γ均增高,IFN-γ可抑制KGN细胞增殖并促进KGN细胞凋亡。     

外周血淋巴细胞亚群、NK细胞检测在诊断儿童传染性单核细胞增多症中的临床价值

目的 分析传染性单核细胞增多症(IM)患儿外周血中淋巴细胞亚群及NK细胞计数及比例的变化,探讨淋巴细胞亚群及NK细胞检测对IM患儿的临床意义。方法 选择2020年3月—2021年7月本院儿科收治的IM患儿21例作为IM组,同时选择同期在本院儿科就诊的其他疾病患儿20例作为对照组。比较两组患者之间CD3⁺T细胞、CD3⁺CD4⁺T细胞、CD3⁺CD8⁺T、CD19⁺B细胞及CD16⁺CD56⁺NK细胞计数和百分比的变化,并比较他们之间的差异。结果 IM组患儿CD3⁺T细胞、CD4⁺T细胞、CD8⁺T细胞及CD16⁺56⁺NK细胞计数值均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),并且IM组CD4⁺T细胞/CD8⁺T细胞比值倒置;两组患儿之间CD19B+细...     

小鼠CD4+ T细胞活化后4种microRNAs的表达分析

目的: 研究小鼠脾脏CD4⁺ T淋巴细胞活化后微小RNA(microRNA,miRNA)的表达水平。方法: 采用CD3/CD28 免疫磁珠法刺激培养小鼠脾脏CD4⁺T细胞24 h,应用流式细胞术检测刺激前后CD4⁺T细胞的活化率,使用实时荧光定量PCR技术分别检测培养0 h,6 h,12 h以及24 h后的CD4⁺T细胞中miR-181d、miR-342-3p、miR-9、miR-122-3p的表达水平。结果： CD3/CD28 免疫磁珠法刺激培养24 h后CD4⁺ T细胞活化率由5.2%升高至60.9%,差异有统计学意义（t=22.01,P <0.01）。与培养0 h相比,miR-181d和miR-342-3p在经刺激培养6 h,12 h和24 h后的CD4⁺T细胞中的表达水平均明显降低（P <0.05）,而miR-9和miR-122-3p的表达各组间的差异无统计学意义（P>0.05）。结论： 小鼠脾脏CD4+T细胞活化后,miR-181d和miR-342-3p的表达明显下调。     

HIV机会性感染患者外周血IL-6、CD4+T淋巴细胞水平变化及意义

目的 探讨人免疫缺陷病毒(HIV)机会性感染患者外周血白细胞介素6(IL-6)及CD4⁺T淋巴细胞水平变化及意义。方法 将浙江大学医学院附属杭州市西溪医院2020年8月至2021年6月收治的134例HIV患者按照入院当天机会性感染情况分为感染组(n=58)和非感染组(n=76),比较两组患者IL-6及CD4⁺T淋巴细胞水平。根据预后情况分为预后良好组和预后不良组,评估IL-6及CD4⁺T在患者预后中的价值。结果 感染组患者IL-6水平高于非感染组,CD4⁺T水平低于非感染组(均P <0.05);CD4⁺T水平越低,机会性感染病原体种类越多(P<0.05)。预后不良组患者IL-6水平高于预后良好组,CD4⁺T水平低于预后良好组(P<0.05);IL-6、CD4⁺T预测HIV机会性感染不良预后敏感度、特异度均较高。结论 IL-6水平升高及CD4⁺T水平降低是HIV机会性感染发生的高危因素,二者可用于...     

胸腺法新对不同型别COVID-19患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨胸腺法新对不同型别COVID-19患者外周血T淋巴细胞亚群的影响.方法 选取2020年1—3月成都市公共卫生临床医疗中心确诊的65例新型冠状病毒肺炎患者(观察组),其中将采用胸腺法新治疗的31例患者作为胸腺法新组,未使用胸腺法新治疗的34例患者作为非胸腺法新治疗组,另选取30名本院职工体检者作为对照组,测定观...     

HBV慢性感染者肝脏组织中CD4+T、CD8+T和FoxP3+Tregs细胞的表达水平

?目的:计数慢性乙型肝炎病毒( HBV)感染者肝脏组织中CD4⁺T、CD8⁺T和FoxP3⁺Tregs细胞,观察不同免疫状态下的肝脏组织中CD4⁺T和CD8⁺T细胞表达水平之间的差异,探索其临床意义。方法: 选取慢性HBV感染者68例,健康对照组(非HBV感染组)30例,运用免疫组织化学的方法进行检测。结果:慢性HBV感染组的CD4⁺T、CD8⁺T和FoxP3⁺Tregs细胞表达水平明显升高,与非HBV感染组相比,P均<0.001;在HBV感染组中,CD4⁺T和CD8⁺T细胞在免疫耐受期患者肝脏组织中的表达水平最低,CD4⁺T、CD8⁺T细胞在免疫清除期、再活动期中的表达水平与二者在免疫耐受期相比,均有增高趋势,然而CD4⁺T、CD8⁺T细胞的表达水平在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期及再活动期任意两期之间比较,P均>0.05。结论:CD4⁺T和CD8⁺T细胞在免疫耐受期、免疫清除期、低复制期及再活动期患者肝脏组织中表达水平的变化趋势在一定程度上反应了各期肝脏的免疫状态;FoxP3⁺ Tregs细胞可能与HBV感染慢性化有关。     

钩吻素子对免疫磁珠分离纯化的小鼠CD4+T细胞体外增殖的影响

目的 探讨小鼠脾脏CD4⁺T细胞的分离方法,观察钩吻素子(Kou)对小鼠脾脏CD4⁺T细胞体外增殖的影响.方法 以免疫磁珠分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD4⁺T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝法检测细胞活力.将10～20μg/ml Kou分别作用于经刀豆蛋白A或植物血凝素刺激的小鼠T淋巴细胞,四唑盐比色法检测细胞增殖情况,用酶联免疫法检测细胞上清中IL-2的含量.结果 经过流式细胞仪测定分离后的小鼠脾脏CD4⁺T细胞纯度达到90.%±5.8%:0.2%台盼兰染色细胞活力为94.9%±.6%;增殖试验表明分离后未加Kou的CD4⁺T细胞对刀豆蛋白A、植物血凝素的刺激保持了良好的增殖能力,当浓度范围为20～20μg/ml时,Kou均能抑制淋巴细胞的增殖(P<0.05),且表现出一定的剂量相关性;不同浓度的Kou(20、100、200μgm1)作用后,CD4⁺T细胞培养上清中的IL-2水平明显低于对照组(P<0.05).结论 免疫磁珠阴性分选法操作简单、快速,可获得较高纯化率、有活性的CD4⁺T细胞;Kou明显抑制小鼠CD4⁺T淋巴细胞增殖反应,此抑制作用可能与Kou抑制小鼠CD4⁺T细胞IL-2的分泌及免疫抑制作用相关.     

皮内注射灭活卡介苗对哮喘大鼠CD4+CD25+Treg细胞数量和CTLA-4 mRNA表达的影响

目的:探讨皮内注射灭活卡介苗(BCG)后哮喘大鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量、细胞毒性T 淋巴细胞抗原4(CTLA-4)的表达及血清转移生长因子β(TGF-β)水平变化,阐明灭活BCG对CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量及CTLA-4 mRNA表达的影响。方法:30只健康雄性成年SD大鼠随机分为:对照组、模型组和BCG组,每组10只;除对照组外,模型组和BCG组大鼠采用卵清蛋白(OVA)致敏3周;再激发6周,构建大鼠慢性哮喘模型。BCG组大鼠在致敏前3 d开始皮内注射BCG,共9周。各组大鼠均行气道高反应性检测,检测CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量及CTLA-4 mRNA相对表达水平,行肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞(EOS)百分比计数,检测各组大鼠血清中TGF-β水平。结果:模型组大鼠BALF中细胞总数及EOS百分比明显高于对照组(P<0.05),BCG组明显低于模型组(P<0.05)。组胺质量浓度从0.32 g·L^-1开始,模型组和BCG组大鼠气道阻力明显高于对照组 (P<0.05);组胺质量浓度从0.64 g·L^-1开始, BCG组大鼠气道阻力明显低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠CD4⁺CD25⁺Treg细胞/CD4⁺细胞数量明显低于对照组(P<0.05),BCG组明显高于模型组(P<0.05)。模型组大鼠CTLA-4 mRNA相对表达水平明显低于对照组(P<0.05),BCG组明显高于模型组(P<0.05)。模型组大鼠血清TGF-β水平明显低于对照组(P<0.05),BCG组明显高于模型组(P<0.05)。结论:灭活BCG改善气道炎症和气道阻力作用可能与恢复CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量及功能有关联。     

外周血淋巴细胞亚群检测在系统性硬化症治疗中的应用

目的: 检测免疫抑制剂治疗中系统性硬化症 (systemic sclerosis, SSc) 患者外周血T淋巴细胞、B淋巴细胞及自然杀伤 (natural killer,NK) 细胞的表达水平,分析其与临床实验室指标之间的相关性,进而探讨外周血淋巴细胞亚群检测在SSc治疗中的意义。方法: 采用流式细胞术检测使用免疫抑制剂的32例SSc患者(SSc组)和 30例健康对照(healthy control,HC)组外周血T、CD4⁺T、CD8⁺T、B、NK细胞数量及比例,比较SSc组与HC组外周血淋巴细胞亚群的差异,分析外周血淋巴细胞亚群与SSc其他实验室及临床指标之间的相关性。结果: 与HC组相比,SSc组中T、CD4⁺T、CD8⁺T、B、NK细胞数量均明显减少 (P<0.05), 同时,NK细胞占淋巴细胞的百分比也明显降低(P=0.004); 此外,使用免疫抑制剂的SSc患者中65%以上外周血存在各淋巴细胞亚群细胞数量减少。CD4⁺T淋巴细胞数量降低组与正常组相比,其出现雷诺现象的比例明显升高(P=0.024), 红细胞沉降率和C-反应蛋白也明显升高(P<0.001,P=0.018); CD8⁺T淋巴细胞数量降低组与正常组相比,红细胞沉降率明显升高(P=0.022);B淋巴细胞数量降低组与正常组相比,发生指尖溃疡的风险明显增高(P=0.019); NK细胞数量降低组与正常组相比,发生指尖溃疡的风险明显增高(P=0.033),而体内免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)M水平明显降低(P=0.049)。相关性分析可见,红细胞沉降率与总T淋巴细胞(r=-0.455,P=0.009)、CD4⁺T淋巴细胞(r=-0.416,P=0.018)、CD8⁺T淋巴细胞(r=-0.430,P=0.014)、B细胞(r=-0.366,P=0.039)数量呈负相关。结论: ⁺T、CD8⁺T、B及NK细胞数量明显减少,某些淋巴细胞亚群的变化可能与雷诺现象、指尖溃疡的发生有关,与红细胞沉降率、C-反应蛋白呈明显负相关,使用免疫抑制剂治疗SSc中应定期检测外周血淋巴细胞亚群的细胞数量。     

抗MDA5抗体相关皮肌炎合并急进性肺间质病变的临床特点

目的 回顾性分析抗黑色素瘤分化相关基因5(melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)抗体相关皮肌炎合并急进性肺间质病变(rapidly progressive interstitial disease,RP-ILD)患者临床特点及预后不良因素.方法 回顾性分析201...     

HIV/AIDS 患者骨髓抑制与CD4+T细胞计数及HIV病毒载量相关性分析

目的 了解HIV/AIDS患者骨髓抑制与CD4⁺T细胞计数及病毒载量的关系。方法 入组53例北京佑安医院2015年1月—2017年12月收治住院的HIV/AIDS患者,观察外周血象特征、骨髓造血情况、CD4⁺T淋巴细胞计数及HIV病毒载量情况,比较不同骨髓抑制程度与CD4⁺T细胞计数、病毒载量的差异。结果 按CD4⁺T细胞计数,将53例患者分为CD4⁺T细胞>200个/μL组和CD4⁺T细胞≤200个/μL组,CD4⁺T细胞>200个/μL组16例,CD4⁺T细胞≤200个/μL组37例。CD4⁺T细胞≤200个/μL组患者外周血中红细胞计数、白细胞计数、淋巴细胞计数均明显低于CD4⁺T细胞>200个/μL组,差异有统计学意义（P<0.05）。CD4⁺T细胞≤200个/μL组中,三系减少8例,两系减少12例,一系减少9例;但在CD4⁺T细胞>200个/μL组,三系减少1例,两系减少2例,一系减少5例,两组比较差异有统计学意义（P<0.05）。按骨髓分级分0、I~Ⅱ、Ⅲ~Ⅳ级三组,HIV病毒载量中位数分别为1.60 、4.08、4.67 Log（copies/mL）,三组比较差异有统计学意义（P<0.05）。三组的CD4⁺T细胞分别为156、131、28个/μL,三组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HIV/AIDS 患者病毒载量越高,骨髓抑制现象越明显,导致血细胞减少为主的外周血血象异常。