实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在101例白血病融合基因检测中的比较

目的探讨实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在白血病融合基因检测中的价值并进行比较。方法对101例白血病患者分别应用定时定量PCR法和巢式PCR法进行融合基因的检测,主要包括BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO三类,并结合病人骨髓细胞形态学及临床表现予以分析。结果 RT-PCR和nPCR对融合基因的检出率比较:40例慢性粒细胞白血病患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为91.2%和88.4%;21例急性淋巴细胞白血病患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为41.2%和35.5%;26例急性早幼粒细胞白血病患者中,RT-PCR与nPCR检测PML/ARa融合基因阳性率分别为66.4%和61.2%;14例急性粒细胞白血病M2患者中,RT-PCR与nPCR检测AML/ETO融合基因阳性率分别为49.3%和31.2%。结论定时定量PCR较巢式PCR有更强的敏感性、更为准确,另外RT-PCR可以提高微小残留病的检出率,对临床早期干预治疗具有重要价值。     

天津160例急性B淋巴细胞白血病儿童常见融合基因检测分析

目的了解天津160例B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿常见融合基因的检出情况,为儿童B-ALL诊疗提供基础资料。方法选择天津市血液病医院2015年全部住院B-ALL患儿共160例为研究对象,采用实时定量聚合酶链反应方法对160例B-ALL患儿进行TEL/AML1、E2A/PBX1、BCR/ABL和MLL/AF4共4种常见融合基因检测。用SPSS20.0进行t检验和χ2检验。结果 160例儿童ALL中,47例检测出融合基因阳性,阳性率为29.4%,其中TEL/AML1阳性29例(18.1%),E2A/PBX1阳性12例(7.5%),BCR/ABL阳性6例(3.8%),未检出MLL/AF4阳性病例。结论天津160例B-ALL患儿常见融合基因为TEL/AML1、E2A/PBXI和BCR/ABL,其中TEL/AML1融合基因检出率最高。     

混合系白血病基因相关白血病骨髓细胞形态学特征

目的观察混合系白血病(MLL)基因相关白血病患者的骨髓细胞形态学特征,来明确混合系白血病基因的重排特征和FAB形态学分型之间的关系。方法用多重巢式的RT-PCR方法对300例白血病以及淋巴瘤的白血病关联融合基因进行检查,从中选择出现MLL基因异常白血病患者的骨髓细胞涂片后进行形态学观察,并对不同的形态进行比较。结果 300例患者中14例MLL基因重排,其中有9例FABM5型MLL/AF6融合基因,跟典型原始单核细胞白血病存在较多相同特征:细胞体积很大,细胞核折叠且染色体很疏松,核仁清晰,胞质毛玻璃状嗜碱性。大部分细胞核的旁边有明显的淡染区,胞浆中有细长奥氏小体和纤细染色体。经非特异脂酶染色之后呈阳性,可以被氟化钠抑制。12例MLLPTD,其中包括3例M1型,5例M4型,2例M5型,2例幼淋细胞白血病MLLPTD阳性。结论 MLL基因异常主要在和单核细胞关联的白血病中,发生MLL/AF6重排是急性原始单核细胞型白血病一种独立亚型的重要标志,融合基因和单核细胞的分化关系密切。     

维甲酸受体β在宫颈癌中的表达及其意义

目的:检测维甲酸受体β(RARβ)基因在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法:收集该院68例宫颈癌和28例宫颈炎患者的临床资料和组织标本,RT-PCR法检测宫颈癌和宫颈炎组织中RARβmRNA的表达水平。采用免疫组织化学法和酶联免疫吸附试验检测宫颈癌和宫颈炎组织中RARβ蛋白的表达情况。统计两组临床资料并对随访的患者资料进行对比。结果:宫颈癌组中的RARβmRNA相对表达量低于宫颈炎组,宫颈癌组中的RARβ蛋白表达阳性比例低于宫颈炎组,宫颈癌组中的RARβ蛋白含量平均值低于宫颈炎组平均值,差异均具有统计学意义(P<0.05)。RARβ蛋白在宫颈癌Ⅲ/Ⅳ期阳性表达比例低于Ⅰ/Ⅱ期,差异具有统计学意义(P<0.05)。有淋巴结转移患者中RARβ表达阳性比例低于无淋巴结转移,差异具有统计学意义(P<0.05)。RARβ表达阴性的宫颈癌患者中死亡率和复发率高于阳性表达患者,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:RARβ在宫颈癌的发生过程中发挥重要作用,故其可作为宫颈癌患者发生、发展和预后判断的重要参考指标。     

出入境人员丙型肝炎病毒核心蛋白基因巢式RT-PCR检测及分型研究

目的建立一种检测丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白基因的巢式RT-PCR方法,以及HCV核心蛋白基因区测序分型方法。方法从国际HCV数据库查找HCV核心蛋白基因序列,设计HCV RNA巢式RT-PCR引物及测序引物,并建立巢式RT-PCR反应体系。采用出入境人员抗-HCV阳性血清60份,及50份标本为HCV抗体检测阴性,且谷丙转氨酶(ALT)>100U/L的血清进行巢式RT-PCR检测,阳性结果使用本研究建立的测序引物进行基因测序以确定HCV基因型。结果 60份抗-HCV阳性血清中,42份(70.0%)核心蛋白基因RT-PCR扩增阳性,其中1b型27例、1a型12例、6a型1例、3a型1例、2a型1例。50份ALT>100U/LR抗-HCV阴性标本中,1份HCV核心蛋白基因RT-PCR扩增阳性,测序鉴定为3a型。结论本研究建立了一种HCV RNA核心蛋白基因的巢式RT-PCR检测和分型方法,为出入境人员HCV的诊断和监测提供重要依据。     

应用2种RT-PCR方法检测和分析北京市市场销售牡蛎中诺如病毒基因特征

目的:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法检测和分析牡蛎中诺如病毒的基因特征。方法:应用实时荧光RT-PCR和半巢式RT-PCR方法,对2014年11月至2015年10月北京市采集的新鲜市售牡蛎进行诺如病毒GⅠ/GⅡ组并联试验检测,分析检出率,应用符合率和一致性检验（Kappa值）对半巢式RT-PCR方法进...     

41例具有高超二倍体急性淋巴细胞白血病儿童患者的遗传学及免疫表型特征分析

目的探讨41例具有高超二倍体的ALL患儿的遗传学、融合基因和免疫表型特点以及对预后的判断。方法226例ALL患儿常规R显带分析染色体核型,FISH检测融合基因,双激光6色流式细胞术检测免疫分型。结果 R显带染色体核型分析共检出高超二倍体41例(18.14%),常见增多的染色体按检出率从大到小依次为+21、+8、+18和+6等。FISH检测儿童ALL遗传学异常阳性率明显高于常规染色体核型分析,异常包括AML1信号扩增(40.22%)、BCR信号扩增(20.65%)、TEL/AML1融合(21.20%)、MLL断裂(13.04%)、ABL信号扩增(3.92%)、TEL信号扩增(8.70%)、BCR/ABLL融合(6.52%)。8例复发患者中5例伴CD20表达,2例伴T淋巴系统表达,其中1例同时表达CD20和T淋巴系统抗原。结论联合R显带染色体核型分析与FISH检测超二倍体和融合基因和流式细胞术检测免疫分型,对白血病的预后判断与指导临床治疗有重要价值,三者联合应用可提高儿童染色体异常检出率。     

β-地中海贫血表型儿童地中海贫血基因突变分析

目的:了解本地区β-地中海贫血表型儿童中地中海贫血发生情况、基因突变类型。方法:选取2010年1月~2014年6月在该院就诊的1 713例β-地中海贫血表型儿童进行β-地中海贫血基因检测,确诊为β-地中海贫血者再进行α-地中海贫血基因检测。结果:1 713例β-地中海贫血高危儿童中确诊为β-地中海贫血儿童1 428例(83.36%),其中合并α-地中海贫血222例(15.55%)。共发现11种突变、30种基因类型中以CD41-42(-TCTT)(42.23%)和CD17(A→T)(27.31%)杂合子突变为主,双重杂合子突变111例(7.77%),纯合子突变42例(2.94%)。6种α-地中海贫血突变、11种基因类型中以--sea(31.99%)、αWSα(18.91%)和-α3.7(18.47%)突变杂合子最常见,Hb H病3例(1.35%),其中合并β-地中海贫血双重杂合子和纯合子突变30例(13.51%)。结论:本地区儿童地中海贫血突变类型、基因类型多样,中重型β-地中海贫血及α-合并β-地中海贫血发生率高,应加强地中海贫血干预工作,以避免中间型或重型地中海贫血儿的出生。     

PML/RARα的异常转录调控机制

t(15;17)(q22;q12)是急性髓系白血病中常见的染色体易位之一,这种易位产生PML/RARα融合蛋白,PML/RARα可作用多种转录因子,从而影响细胞的增殖,分化,凋亡;另外,PML/RARα也能直接作用与某些基因,影响它们的转录调控,综上,通过这些作用我们对PML/RARα这一异常融合蛋白已知的作用机制作一综述.     

双酚A通过MLL1调控子宫内膜蜕膜化分子标志物HOXA10表达的分子机制

目的 探讨组蛋白甲基化转移酶混合谱系白血病基因(MLL1)在双酚A(Bisphenol, BPA)影响子宫内膜间质细胞蜕膜化中的作用机制。方法 CCK-8实验检测10pM、10nM、10μM BPA对细胞增殖能力的影响;RT-PCR和Western Blot检测BPA暴露后蜕膜化子宫内膜间质细胞中的MLL1及同源盒基因A10(HOXA10)mRNA和蛋白表达情况;CoIP实验验证MLL1和雌激素受体α(ERα)是否相互结合,以及BPA是否影响两者的结合;ChIP检测MLL1和ERα在HOXA10启动子区的富集效率。结果 三种浓度BPA均不损害细胞的增殖能力;蜕膜化子宫内膜间质细胞中MLL1和HOXA10 mRNA和蛋白表达随着BPA浓度的升高逐渐降低;MLL1是ERα的共同作用因子,BPA暴露影响MLL1与ERα的结合;BPA暴露抑制了MLL1和ERα在HOXA10启动子ERE元件区域的富集。结论 BPA通过影响转录因子ERα和共同作用因子MLL1在HOXA10启动子区的富集,调控HOXA10的表达,影响子宫内膜间质细胞蜕膜化。     

用逆转录聚合酶链反应方法检测SARS冠状病毒

目的 应用双位点逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和改良巢式实时RT-PCR方法检测临床标本中SAILS冠状病毒(SAILS-CoV)核酸,以提高检测的可靠性和灵敏度。方法 对2003年杭州市3例严重急性呼吸综合征(SARS)临床确诊患者、4例疑似和27名医学观察者的咽拭子标本用巢式实时RT-PCR检测SAILS-CoV核酸,对阳性扩增产物进行核酸序列测定,同时对3例患者的标本应用半巢式RT-PCR检测另一位点SARS-CoV核酸片段,并应用常规实时RT-PCR技术及改良实时RT-PCR技术进行检测。结果 3例患者的巢式RT-PCR检测结果2例阳性,4例疑似和27名医学观察者均为阴性;阳性扩增产物的核酸序列与SAILS-CoV基因组相应部分序列完全一致。3例患者标本的另一位点的半巢式RT-PCR及实时RT-PCR结果均相同。在检测低拷贝数标本时,常规实时RT-PCR技术在约35个循环后出现弱阳性信号,但改良的巢式实时RT-PCR技术可使强阳性信号在10个扩增循环后出现。结论 双位点RT-PCR方法是提高检测准确性的有效方法,改良巢式实时RT-PCR技术较常规实时RT-PCR技术具有更高的灵敏度。     

急性髓系白血病患者外周血WT1 mRNA表达水平的检测

目的 建立real time RT-PCR检测WT1基因表达的方法,了解急性髓系白血病(AML)患者外周血WT1基因的表达水平。方法建立real time RT-PCR方法,用PEABI 7700PCR仪检测66例AML患者、26例非白血病患者和36例正常人外周血中WT1基因的mRNA表达水平。结果22例AML初发患者WT1基因的表达量为(10^5～10^6)拷贝／μgRNA,取得部分缓解的26例AML患者的表达水平为(10^2～10^4)拷贝／μgRNA,而取得完全缓解的17例AML患者的表达水平为(0～10^2)拷贝／μgRNA。结论WT1基因在AML外周血中有高的表达水平,可作为疗效考核及监测微残留病的指标。     

FLT3基因内部串联复制与儿童急性白血病的关系

目的:探讨FLT3基因内部串联复制(FLT3/ITD)与儿童急性白血病的关系及其临床意义。方法:采用PCR法检测76例急性髓系白血病(AML)、24例ALL患儿FLT3/ITD的发生情况。结果:AML患者发生FLT3/ITD的突变几率为11.8%(9/76),急性淋巴细胞白血病(ALL)患者均未检出FLT3/ITD;2~10岁AML患儿FLT3/ITD发生率4.76%(2/42),11~18岁AML患儿FLT3/ITD发生率20.58%(7/34),两者有显著差异(P<0.05)。结论:FLT3/ITD检测可作为AML最具意义的分子标志,对AML预后判断及治疗方案的确定有重要价值。     

CML加速期伴PML/RARα融合基因阳性2例报告

1临床资料例1,女,11岁。2003-02于上海某医院经骨穿等检查诊断为急性非淋巴细胞白血病-M3型。予维甲酸治疗1个月后,3月25日复查骨髓示:原粒+早幼粒占15·5%,病情好转出院。患者于03-03为求进一步治疗入本院。入院后查体:浅表淋巴结无肿大,肝肋下1cM,脾肋下3cM,质中,无压痛。血象正常。骨髓象示:原始+早幼粒细胞占23%,形态正常。PML/RARα融合基因阳性。予复方黄黛片治疗37d,复查骨髓象示:原始+早幼粒细胞占4·5%,PML/RARα融合基因转阴,次后患者定期于我院巩固治疗。03-09复查时血象:WBC19·9×109/L,可见大量中晚幼粒细胞。骨髓检…     

HIV-1结构基因多重巢式RT-PCR方法检测

目的建立一种简便、可靠的可用于诊断人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染的多重巢式逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法。方法针对广西壮族自治区HIV-1主要流行毒株pol、gag和env基因区设计PCR引物,建立同时扩增3个基因的多重巢式RT-PCR方法,检测118例HIV-1阳性样本和48例HIV-1阴性样本,并与免疫印迹法检测结果比较,对多重巢式PCR方法进行评价。结果多重巢式RT-PCR方法的检测下限为250 copies/mL,灵敏度和特异度分别为96.6%,97.9%,重复性为98.3%,与免疫印迹法的一致性为97.6%。结论本研究建立的多重巢式RT-PCR检测方法具有高灵敏度、高特异度、重复性好、快速等优点,可作为一种快速、简便、可靠的HIV-1感染辅助诊断方法。     

南充市育龄夫妇地中海贫血基因检测结果分析

目的 了解南充市育龄夫妇地中海贫血(简称地盆)基因类型及分布特点。方法 选取2018年1月至2020年12月于南充市中心医院就诊的疑似地贫的育龄夫妇3 075例,采用Gap-PCR技术和反向斑点杂交法行α、β地贫基因检测。结果 3 075例患者中检测出地贫基因变异647例,阳性检出率达21.04%。其中α-地贫319例,β-地贫315例,αβ复合型地贫13例。319例α-地贫以^--SEA/αα、-α^3.7/αα、-α^4.2/αα基因型为主,分别占α-地贫的51.10%、28.52%、6.90%;315例β-地贫以CD17、CD41-42、IVS-II-654基因型为主,分别占β-地贫的38.10%、32.38%、18.10%。13例αβ复合型地贫以^--SEA/αα复合CD41-42为主,占αβ复合型地贫的30.77%。与非地贫基因携带组比较,地贫组红细胞(red blood cell, RBC)明显升高(t=73.421,P<0.01),血红蛋白(hemoglobin, Hb)、平均红细胞体积...     

自贡市3 040例育龄夫妇地中海贫血基因检测结果分析

目的 了解四川自贡地区地中海贫血的基因分布特点,为本地区的地中海贫血诊断和预防提供科学依据,减少出生缺陷。 方法 选择2015年1月－2016年12月在自贡市妇幼保健院进行产前咨询的育龄夫妇和接受产前筛查的孕妇共3 040例,所有研究者在纳入研究时进行血常规检测,并于1周内进行血红蛋白电泳,血红蛋白检查阳性的患者进行地贫基因诊断,采用液相芯片技术检测常见的23类地贫基因,包括α地贫基因6种,β-地贫基因17种。 结果 3 040例研究者经过血红蛋白电泳筛查366例疑似地贫患者,筛查阳性率12.04%。基因诊断确诊295例(9.70%)地贫患者。其中α地贫表型阳性106例(35.93%),β地贫表型阳性185例(62.71%),αβ复合型4例(1.36%)。106例α-地贫患者中,以--^SEA/αα(71.07%)、-α^3.7/αα(14.47%)、-α^4.2/αα(4.72%)、-α^3.7/--^SEA(3.14%)、α^CSα/αα(2.52%)为主。185例β-地贫患者中,以CD17(A>T)(35.51%)、CD41/42(-TCTT)(26.45%)、IVS-2-654(C>T)(24.28%)、-28(A>G)(6.88%)、CD27/28(+C)(2.54%)为主。 结论 自贡地区地中海贫血基因携带率显著低于广东、广西地区而略高于四川,α地中海贫血基因型以缺失型为主,β地中海贫血基因型以CD17(A>T)、CD41/42(-TCTT)、IVS-2-654(C>T)三种最为常见,应该加强本地区产前咨询和产前诊断工作,减少地贫患儿的出生。     

宁波市孕妇地中海贫血基因检测及其孕早期红细胞参数变化分析

目的了解宁波市孕妇地中海贫血(地贫)基因检测及产前诊断结果, 分析其孕早期红细胞参数特征。方法选取2019年1月至2021年9月在宁波市妇女儿童医院就诊的636例疑似地贫孕妇作为研究对象, 采集孕妇干血斑进行地贫基因检测;并对夫妻双方均携带地贫基因者, 抽取孕妇羊水进行产前诊断, 分析孕妇地贫基因检测及产前诊断结果。同时, 在宁波市妇女儿童医院病案系统, 查询地贫基因携带孕妇(地贫组)和同期产检健康孕妇(对照组)的孕早期红细胞参数检测结果, 包括血红蛋白(Hb)、红细胞计数(RBC)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、平均红细胞体积(MCV)、红细胞比容(HCT)和红细胞分布宽度(RDW), 比较组间及不同地贫基因变异类型的红细胞参数变化情况。结果 636例疑似地贫孕妇中, 共检出254例地贫基因携带者, 检出率为39.94%(254/636), 包括α-地贫114例、β-地贫132例、αβ-复合型地贫8例。经遗传咨询, 最终有11例孕妇接受产前诊断, 共检出7例胎儿携带地贫基因, 检出率为7/11, 包括--SEA/αα、βCD17/βN各2例, ...     

反转录实时荧光定量PCR用于检测白血病相关融合基因分型的性能及应用评价

目的评价反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测白血病相关融合基因的性能,以确定临床使用该方法的可行性。方法采用RT-qPCR检测临床骨髓标本中的白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的RNA,验证准确性、特异性、最低检出限、精密度、抗干扰和融合基因亚型检出能力等性能指标,并对其临床应用进行初步评价。结果RT-qPCR检测白血病相关融合基因BCR-ABL、PML-RARα及AML1-ETO的阴阳性符合率为100%,特异性和准确性得到验证;该方法检测下限为100 copies/每反应,其批内和批间精密度CV值均<10%;精密度符合实验要求;胆红素、甘油三酯和血红蛋白对该方法无明显干扰作用;均能检出融合基因亚型;白血病患者治疗前融合基因表达为阳性,完全缓解、巩固、维持各期的相关融合基因表达均为阴性,此结果与疾病进展关系一致。结论采用RT-qPCR检测白血病相关融合基因试剂盒符合规定的性能指标,该检测方法具有较高的灵敏度和较好的准确性和重复性等优势,适合应用于临床。     

地中海贫血筛查方案用于孕前检查人群的价值分析

目的探讨地中海贫血筛查方案用于孕前检查人群的价值。方法选择2017年1月-2019年2月期间本辖区内进行孕前检查的93对新婚夫妇(共186例)作为研究对象。受检者先进行血液学表型初筛,统计1600例受检者血液学表型初筛对地中海贫血筛查阳性检出率,并进一步观察阳性者及其阴性配偶地贫基因检测结果,统计地贫各基因型检出情况。结果 186例受检者初筛(MCV)结果显示,检出18例为阳性者,地中海贫血筛查阳性检出率为9.68%。地中海贫血筛查阳性者共18例,另有16例阴性配偶,同时参与地贫基因检测。8例地中海贫血筛查阳性者,经地贫基因检测确诊16例(88.89%),筛阳性者中标准型α地贫占比最高(44.44%),显著高于静止型α地贫(11.11%)、Hb H(5.55%)、轻型β地贫(16.67%)、标准型α/轻型β(5.55%)、静止型α/轻型β(5.55%)差异具有统计学(P0.05); 16例地中海贫血筛查阴性受检者中,经地贫基因检测确诊1例,为静止型α地贫。经过血液学表型初筛和地贫基因检测后,共检出17例地贫基因携带者,其中标准型α地贫检出率最高(4.30%),其次为轻型β地贫(2.51%)。结论地中海贫血筛查方案可有效检出孕前检查人群中存在的地中海贫血基因,对于预防该病胎儿出生具有深刻意义,临床应用价值较高。