姜黄素对小鼠黑素瘤的抑制作用及对核因子κB激活和生存素表达的影响

目的 探讨姜黄素抑制小鼠黑素瘤作用的可能机制.方法 将黑素瘤细胞株B16F10接种于小鼠右大腿外侧皮下,建立荷黑素瘤小鼠模型,于接种后第7天分别予以50和100 mg/kg姜黄素干预,以0.5 mL无血清RPMI 1640培养基腹腔注射为对照组,观察不同处理组瘤体的变化,采用免疫印迹方法检测肿瘤组织核因子κB(NF-κB)p65表达程度,应用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测生存素mRNA的水平.结果 姜黄素治疗组小鼠瘤重均较肿瘤对照组降低,尤以50 mg/kg姜黄素组为著,抑瘤率可达55.56%(P<0.01);治疗组肿瘤组织NF-κBp65表达水平均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg姜黄素组降低63.19%,100 mg/kg姜黄素组降低55.74%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);治疗组生存素mRNA均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低51.02%,100mg/kg组降低34.69%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤组织NF-κB活性与生存素mRNA表达水平呈正相关(r=0.81,P<0.01).结论 姜黄素可能通过抑制NF-κB活化从而下调其下游生存素基因表达来抑制恶性黑素瘤的生长.     

姜黄素对小鼠黑素瘤的抑制作用

目的:研究姜黄素(curcumin)对小鼠黑素瘤的抑制作用及对MT1-MMP基因表达、MMP-2基因活化的影响,探讨姜黄素抑瘤作用的可能机制.方法:将黑素瘤细胞株B16接种于小鼠右大腿外侧皮下,建立小鼠黑素瘤模型,予以腹腔注射姜黄素治疗,观察不同实验组瘤体及瘤重变化,采用Western blotting方法检测MMP-2活化程度,应用反转录(RT)-PCR方法检测MT1-MMP mRNA的表达水平.结果:治疗组小鼠瘤体均较肿瘤对照组缩小,瘤重均减轻,尤以50mg/kg组为著,缩小约55.61%,减轻约55.56%;治疗组MMP-2活性均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低50.94%,100 mg/kg组降低45.75%;治疗组MT1-MMP mRNA的表达水平均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低52.85%,100 mg/kg组降低48.73%;肿瘤组织MMP-2活性与MT1-MMP mRNA表达水平呈正相关.结论:姜黄素可以抑制小鼠黑素瘤的生长,下调MT1-MMP mRNA表达,从而抑制下游的MMP-2基因活化,这可能是姜黄素治疗黑素瘤的重要机制.     

A375细胞外信号调节激酶通路与核因子κB通路的交互作用初探

【摘要】 目的 探讨黑素瘤细胞A375细胞外信号调节激酶（ERK）通路与核因子κB（NF-κB）信号转导通路的交互作用。 方法 将培养的A375细胞分为对照组、选择性ERK信号通路抑制剂U0126（10 μmol/L、5 μmol/L）处理组和选择性NF-κB通路抑制剂BMS-345541（10 μmol/L、5 μmol/L）处理组,分别提取蛋白质和mRNA,用Western 印迹、RT-PCR观察U0126抑制ERK通路后,NF-κB P65、p-IκBα蛋白及NF-κB P65 mRNA的表达,观察BMS-345541抑制NF-κB通路后ERK1/2 、p-ERK1/2蛋白及ERK1 mRNA的表达。 结果 应用10 μmol/L、5 μmol/L U0126抑制ERK通路后,胞核NF-κB P65蛋白表达（分别为0.60 ± 0.04、0.56 ± 0.06）均较对照组（1.54 ± 0.15）减少（P < 0.01）,其表达量与药物浓度无显著相关性（P > 0.01）;p-IκBα蛋白的表达（0.90 ± 0.05、0.70 ± 0.02）均较对照组（0.61 ± 0.03）增加（P < 0.01）,两药物浓度组之间的表达量差异有统计学意义（P < 0.01）;NF-κB P65 mRNA的表达（0.79 ± 0.05,0.75 ± 0.04）均较对照组（0.86 ± 0.05）减少（P < 0.01）。应用10 μmol/L BMS-345541抑制NF-κB通路后,ERK1/2、p-ERK1/2蛋白及ERK1 mRNA的表达（0.73 ± 0.07、0.75 ± 0.09、1.51 ± 0.02）较对照组减少（P < 0.01）,BMS-345541浓度为5 μmol/L时,ERK1/2、p-ERK1/2蛋白和ERK1 mRNA的表达（0.94 ± 0.11、0.99 ± 0.04、1.62 ± 0.03）较对照组的差异无统计学意义（均P > 0.05）。 结论 NF-κB通路和ERK通路在黑素瘤A375细胞中存在交互作用。     

姜黄素对THP-1细胞Toll样受体4信号传导通路中相关因子mRNA水平的影响

目的 研究姜黄素对人单核细胞株THP-1 Toll样受体4(TLR4)信号传导通路中相关因子mRNA水平的影响.方法 用不同浓度姜黄素(50、25、12.5 mg/L)预处理THP-1细胞12 h,0.043 mg/L地塞米松处理组作为阳性对照,继而用1 mg/L脂多糖(LPS)刺激诱导细胞4 h,以不做处理的THP-1作为阴性对照,仅用1 mg/L LPS刺激的THP-1作为LPS刺激组.提取细胞总RNA,用RT-PCR方法检测TLR4信号传导通路中TNF受体相关因子(TRAF)6、IL-1受体相关激酶(IRAK1)、核因子κB(NF-κB)mRNA的表达情况.结果 未经处理的THP-1细胞经LPS刺激4 h,可以显著提高TRAF6、IRAK1、NFκB mRNA的表达,与阴性对照组比较,t值分别为38.69、39.13、23.99(P<0.01). 50、25 mg/L姜黄素可以明显抑制THP-1细胞经LPS诱导后TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的表达(P值均<0.01),抑制率均在50%以上.结论 一定浓度的姜黄素可以抑制LPS诱导后THP-1细胞TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的表达,表明姜黄素对TLR4信号传导通路中相关因子mRNA水平有调节作用.     

姜黄素对鼠黑素瘤抑制效应的研究

目的:确定姜黄素对鼠黑素瘤的抑制效应.方法:建立鼠黑素瘤模型,予以不同剂量姜黄素干预.采用Western blot方法检测不同瘤组织中生存素(survivin)及MMP-2的表达水平.结果:姜黄素可以抑制恶性黑素瘤的生长,50 mg/kg姜黄素抑瘤率可达55.56%.各干预组中survivin及MMP-2的表达水平较肿瘤对照组均下调(P<0.05).结论:姜黄素具有抑制鼠恶性黑素瘤生长的作用,其机制可能与其抑制survivin及MMP-2的表达有关.     

阿维A对鼠B16黑素瘤的增殖抑制及诱导分化作用

目的 探讨阿维A对鼠B16黑素瘤移植瘤的增殖抑制及诱导分化可能的作用机制。方法 小鼠黑素瘤B16细胞接种C57BL/6J小鼠,观察阿维A及其联合顺铂对移植瘤生长状态的影响。应用HE染色观察移植瘤形态学改变;免疫组化法检测肿瘤组织中生存素、促细胞凋亡蛋白Fas及血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果 阿维A能显著抑制鼠B16黑素瘤的生长,各治疗组瘤重及瘤体积均低于阴性对照组（P < 0.05）。HE染色观察瘤组织：对照组瘤组织边界不清,细胞密集排列,异形性明显,治疗组瘤组织中心及边缘可见不同程度的大片状或灶性坏死。免疫组化结果显示：生存素和VEGF蛋白的表达在阿维A高剂量组及联合用药组的免疫组化评分分别为3.600 ± 0.966,2.100 ± 0.568和4.600 ± 0.966,2.400 ± 0.516,均低于对照组5.900 ± 1.370,6.100 ± 1.197（P < 0.01,P < 0.01）,Fas蛋白的表达均高于对照组（P < 0.01）,且各治疗组生存素的表达与Fas的表达呈负相关（rs = -0.77,P < 0.01）,与VEGF的表达成正相关（rs = 0.72,P < 0.01）。结论 阿维A能抑制鼠B16黑素瘤增殖,诱导其分化,作用机制可能与下调抑凋亡基因生存素、上调促凋亡基因Fas的表达及抑制VEGF的表达有关。     

姜黄素对人单核细胞株THP-1细胞NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达的影响

目的: 评价姜黄素对人单核细胞株THP-1中炎症相关因子NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA表达的影响.方法: 采用佛波酯(TPA)构建鼠耳肿胀急性炎症反应模型,采用不同浓度的姜黄素处理THP-1细胞,1 μg/mL脂多糖(LPS)刺激细胞4 h,提取细胞总RNA.用RT-PCR方法检测NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA的表达.结果: 局部外用0.8和1.6 μmol的姜黄素及腹腔注射50 mg/kg和100 mg/kg姜黄素,对鼠耳肿胀急性炎症反应均有明显抑制作用.浓度为50 μg/mL和25 μg/mL的姜黄素可以明显抑制THP-1细胞中LPS诱导的NF-κB、TNF-α和IL-1β mRNA的表达.结论: 姜黄素对炎症因子有抑制作用.     

内皮抑制素对黑素瘤A375细胞侵袭能力的影响

目的探讨内皮抑制素对体外培养的黑素瘤A375细胞核因子κB(NF-κB)和基质金属蛋白酶-9(MMP9)表达的影响。方法 CCK-8法检测内皮抑制素对A375细胞增殖的抑制作用;Transwell小室试验检测内皮抑制素对A375细胞侵袭能力的影响;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法分别检测内皮抑制素对A375细胞NF-κB,MMP9 mRNA和二者蛋白表达的影响。结果内皮抑制素对A375细胞增殖抑制作用呈时间-浓度依赖性;20μg/mL内皮抑制素作用A375细胞72h后:细胞穿膜数(21.5±7.3)低于对照组(56.8±6.2);胞内NF-κB,MMP9 mRNA以及二者蛋白表达水平均有明显下降,与对照组相比的差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论内皮抑制素可下调NF-κB和MMP9的表达,从而抑制黑素瘤浸润和转移。这为内皮抑制素临床治疗皮肤黑素瘤提供了部分理论依据。     

姜黄素对人单核细胞株THP-1细胞NF—κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响

目的：评价姜黄素对人单核细胞株THP-1中炎症相关因子NF—κB、TNF-α和IL-1βmRNA表达的影响。方法：采用佛波酯（TPA）构建鼠耳肿胀急性炎症反应模型,采用不同浓度的姜黄素处理THP-1细胞,1μg／mL脂多糖（LPS）刺激细胞4h,提取细胞总RNA。用RT—PCR方法检测NF-κB、TNF-α和IL-1βmRNA的表达。结果：局部外用0．8和1．6μmol的姜黄素及腹腔注射50mg／kg和100mg／kg姜黄素,对鼠耳肿胀急性炎症反应均有明显抑制作用。浓度为50μg／mL和25μg/mL。的姜黄素可以明显抑制THP-1细胞中LPS诱导的NF—κB、TNF—α和IL-1βmRNA的表达。结论：姜黄素对炎症因子有抑制作用。     

银屑1号下调小鼠银屑病模型炎性因子及NF-κB表达的调控机制

目的研究银屑1号对咪喹莫特诱导小鼠银屑病模型血清中炎性因子IL-6,IL-17,INF-γ和角质形成细胞内核转录因子-κB(NF-κB)及NF-κB mRNA表达的影响。方法入选动物随机分为5组:正常组(Normal)、模型组(Model)、银屑1号高(HD)、中(MD)、低(LD)剂量组,除正常组外,所有小鼠外涂咪喹莫特软膏14日诱导为银屑病模型,银屑1号高、中、低剂量组给药剂量分别为50g/(kg·d),25g/(kg·d),12.5g/(kg·d),连续10d,正常组及模型组予等量生理盐水对照。检测表皮垂直厚度,血液蛋白芯片法检测血清I-L6,IL-17,INF-γ水平,苏木精-依红染色观察皮损组织结构改变,免疫组化法检测NF-κB含量,应用逆转录-聚合酶链反应检测NF-κB mRNA表达情况。结果与正常组比较,模型组角质增厚,镜下T淋巴细胞浸润明显,其炎性因子、NF-κB蛋白及基因表达均升高(P0.01);同模型组比较,银屑1号高、中剂量组IL-6,IL-17,INF-γ水平下降明显(P0.01);高、中、低剂量组表皮增厚程度明显降低(P0.01),NF-κB蛋白水平明显降低(P0.01),中、低剂量组NF-κB mRNA表达降低(P0.05)。结论银屑1号对银屑病小鼠模型的角质增殖和炎性反应具有抑制作用,抑制NF-κB蛋白及基因的过度表达是其作用机制之一。     

芹菜素对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病样皮损的影响及机制

目的：观察芹菜素对咪喹莫特（IMQ）造模小鼠及对角质形成细胞（HaCaT细胞）炎症通路和细胞增殖的影响。方法：小鼠随机分为4组，连续6 d使用凡士林或IMQ涂抹背部皮肤建立对照组和银屑病模型，期间每日予芹菜素或玉米油灌胃。于第7天比较治疗后各组皮损变化；蛋白免疫印迹法（western blot）检测各组核因子κB抑制蛋白（IKB)α、磷酸化（phosphorylation,p)-IKBα、凋亡及细胞核因子-κB p65(NF-κB p65）、p-NF-κB p65、信号转导与转录激活因子（STAT)3、p-STAT3、细胞增殖抗原（Ki-67）和角蛋白（keratin,K)17蛋白变化。体外实验设对照组、模型组、5μmol/L芹菜素处理组和10μmol/L芹菜素处理组；western blot检测各组角质形成细胞p-STAT3、STAT3、p-IKB α、IKB α、p-NF-κB p65、NF-κB p65、Ki-67和K17变化。结果：芹菜素改善了IMQ诱导的银屑病样小鼠的皮损及病理改变。与造模组比较，干预组小鼠皮损中p-STAT3、p-IκB、p-NF-κB p65、Ki-67、...     

姜黄素对小鼠角质形成细胞核转录因子κB及其抑制因子IκBα的影响

目的观察姜黄素对小鼠角质形成细胞291增殖的影响,并探讨姜黄素对核转录因子κB(NF-κB)及其抑制因子IκBα的干预作用。方法常规培养291细胞至90%融合,分别加入5,10,15,20,25μmol/L的姜黄素,继续培养3h和6h,MTT法检测不同浓度的姜黄素作用不同时间,291细胞增殖的情况;在常规培养至90%融合的291细胞中,分别加入肿瘤坏死因子(TNF-α)20ng/mL和/或姜黄素20μmol/L,继续培养3h,显微镜下观察细胞形态和活性;采用MTT法检测细胞吸光度;Western blot法分析各组细胞NF-κB及IκBα蛋白的表达情况。结果姜黄素对291细胞增殖抑制作用随剂量增大、时间延长而增加;显微镜下可见,姜黄素作用于291细胞3h后,细胞收缩,形态变圆,单个视野死亡细胞数较空白组和TNF-α组显著增加,姜黄素组细胞吸光度显著下降(P<0.05);Western blot实验结果显示,姜黄素组NF-κB蛋白表达显著下降,IκBα蛋白的表达显著升高(P<0.05);而TNF-α组NF-κB蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论姜黄素抑制角质形成细胞增殖的机制,可能是抑制NF-κB表达,增加IκBα表达。     

狼疮肾炎患者外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达

目的：检测狼疮肾炎患者单个核细胞核因子-κB（NF一κB）与糖皮质激素受体mRNA（GR-mRNA）的表达水平。方法：免疫组织化学方法及逆转录酶链反应检测狼疮肾炎患者和正常对照组外周血单个核细胞NF-κB与糖皮质激素受体mRNA的表达。结果：与对照组相比,狼疮肾炎患者外周血单个核细胞GRmRNA表达水平降低,NF-κB表达水平升高（P〈0．01）;激素治疗前,激素敏感组、激素依赖组及激素抵抗组GRmRNA表达水平均降低（P〈0．01）,NF—κB表达水平升高（P〈0．01）。激素敏感组与激素抵抗组GRmRNA表达水平有统计学差异（P〈0．01）。结论：NF—κB与GRmRNA的异常表达可能与狼疮。肾炎病情及糖皮质激素疗效不同有关。     

短发卡RNA对黑素瘤B16F10细胞BAG-1基因表达的抑制作用

目的 构建针对小鼠BAG-1（Bcl-2-associated athanogene 1）基因的短发卡RNA（shRNA）真核表达质粒，探讨其对小鼠黑素瘤B16F10细胞BAG-1基因表达的抑制作用。方法 以小鼠BAG-1 mRNA编码区作为RNA干扰靶点，构建shRNA真核表达质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1，应用lipofectaminTM 2000转染小鼠黑素瘤B16F10细胞，设阴性对照组（转染阴性对照质粒Neg）和空白对照组（未转染），转染后48 h开始G418筛选。转染1个月后采用RT-PCR、蛋白质印迹检测BAG-1基因的表达。结果 酶切及测序结果证实，重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1构建成功。质粒在B16F10细胞的转染效率为20% ~ 30%。阴性对照组细胞BAG-1基因表达与空白对照组无差异，shRNA质粒处理组细胞BAG-1基因表达较空白对照组显著下降（P < 0.05），表达抑制率在mRNA和蛋白水平分别为77% ± 4%和62% ± 2%。结论 针对小鼠BAG-1基因的shRNA真核表达质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1能高效特异地抑制小鼠黑素瘤B16F10细胞BAG-1基因的表达。     

丹皮酚对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨丹皮酚对体外培养人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 方法 CCK8法检测0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后A375细胞增殖水平。用0、1.25、2.5和5 mmol/L浓度丹皮酚作用24 h后,以Annexin-Ⅴ/PI法观察A375细胞凋亡的变化、分别测定caspase 3,caspase 8和caspase 9的活性,并以Western印迹检测p53,NF-κB及相关蛋白水平的变化。 结果 与空白对照组比较,0.5,1,2,4,8 mmol/L丹皮酚作用24,48 和72 h后均对A375细胞的增殖有抑制作用,且与时间、浓度呈依赖性。1.25、2.5、5 mmol/L丹皮酚在作用24 h时,A375细胞早期凋亡率由对照组的（3.11 ± 0.53）%分别上升至（13.74 ± 1.73）%、（25.95 ± 0.57）%、（46.44 ± 0.81）%,各组与对照组间差异均有统计学意义（P < 0.05或 < 0.01）。2.5 mmol/L和5 mmol/L作用组的caspase 3,caspase 8,caspase 9活性升高,且与对照组间比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或< 0.01）。p53及Bax的蛋白水平随药物浓度的增加而升高,NF-κB、bcl-2、bcl-XL的蛋白水平随药物浓度增加而降低。 结论 丹皮酚对黑素瘤A375细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。可通过细胞内和细胞外两条途径发挥促凋亡作用,其机制可能与调节p53及NF-κB基因有关。     

灯盏花素灌胃对紫外线致SD大鼠皮肤光老化的保护作用

目的探讨灯盏花素抗光老化的作用机制,为防治光老化性疾病提供实验依据。方法 SD大鼠随机分成6组,正常对照组(A组)、模型对照组(B组)、模型+维生素E30mg/kg对照组(C组)、模型+灯盏花素35mg/kg低剂量组(D组)、模型+灯盏花素70mg/kg中剂量组(E组)、模型+灯盏花素140mg/kg高剂量组(F组),模拟日光中UV(UVA+UVB)长期照射,造成皮肤光老化模型。观察皮肤的肉眼改变、组织结构改变及核转录因子κB(NF-κB)和增殖细胞核抗原(PCNA)在大鼠皮肤中的表达与分布情况。结果 E组、F组大鼠皮肤红斑、脱屑、皱纹等光老化改变明显比B组轻;D组、E组、F组皮肤光老化病理改变逐渐减轻;D组、E组、F组分别与B组比较,NF-κB和PCNA的表达均有所减少,D组与B组间比较及F组与E组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 NF-κB,PCNA在光老化模型中的高表达提示两者可能与光老化的形成有关;灯盏花素可能通过抑制PCNA的表达,抑制表皮细胞的增殖及通过抑制NF-κB的活化,从而下调炎症介质的合成,发挥其抗皮肤光老化的作用。     

氧化苦参碱对人黑素细胞增殖与炎症因子自分泌的影响

目的：明确氧化苦参碱(OMT)对黑素细胞增殖、TLR3、NF-κB的mRNA表达及相关细胞因子的影响。方法：人表皮黑素细胞传代培养,分为空白对照组及不同浓度的氧化苦参碱组（10 μmol/L,50 μmol/L和100 μmol/L）,用MTT法测定细胞增殖,RT-qPCR检测TLR3、NF-κB的mRNA表达,ELISA试剂盒检测IL-6、IL-8及IL-17表达。结果：各组黑素细胞的吸光度值均显著高于空白对照组,随OMT浓度上升而升高,当OMT浓度为50 μmol/L时增殖率达到平台期。OMT组TLR3及NF-κB mRNA 及IL-6、IL-8及IL-17蛋白表达较对照组显著降低,差异有统计学意义 (P<0.05)。结论： 氧化苦参碱可促进黑素细胞的增殖,下调TLR3、NF-κB的mRNA表达,减少IL-6、IL-8及IL-17的生成。     

阿维A对P物质诱导的HaCaT细胞NF-κB表达的影响

目的:明确阿维A对HaCaT细胞NF-κB表达的影响。方法:细胞共分5组:对照组、单纯P物质刺激组、P物质+小剂量阿维A组、P物质+中剂量阿维A组、P物质+大剂量阿维A组。应用免疫细胞化学法、Western-blot和RT-PCR法检测各组HaCaT细胞中NF-κB阳性细胞表达率、细胞蛋白和基因表达的变化。结果:单纯P物质刺激组较对照组阳性细胞表达率、细胞蛋白、mRNA表达均增强。各阿维A剂量组较P物质组阳性细胞表达率、蛋白和mRNA表达均降低(P0.05或P0.01)。结论:阿维A对人角质形成细胞NF-κB的调控是其治疗皮肤病的作用途径之一。     

中波紫外线对角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的影响北大核心CSCD

目的 探讨不同剂量中波紫外线（UVB）照射对体外培养的人皮肤角质形成细胞NF-κB p65及其抑制因子IκBα表达的调控效应.方法 4.5、10及50 mJ/cm2UVB照射人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞,设置未经照射的对照组,在照射后4h使用Western印迹法测定细胞总蛋白中IκBα及NF-κB p65的表达水平.并对人原代角质形成细胞进行50 mJ/cm2UVB照射,照射后继续培养2、4、8、12h,分别测定4个时间点IκBα及NF-κB p65的表达水平.蛋白条带密度分析使用Quantity One（R）4.6.8软件,分别计算IKKβ、IκBα、NF-κB p65以及磷酸化IKKα/β、IκBα、NF-κB p65和β肌动蛋白条带吸光度和面积的乘积,再分别计算IKKβ、IκBα和NF-κB p65与β肌动蛋白的比值,取3次实验结果.结果 4.5和10 mJ/cm2 UVB照射后4h,相对于对照组细胞,人角质形成细胞系及人原代角质形成细胞总蛋白中IKKβ、IκBα、NF-κB p65表达水平均无明显变化（P＞ 0.05）;50 mJ/cm2 UVB照射后4h,细胞系及原代角质形成细胞中IKKβ表达水平均无明显变化（P＞0.05）;原代角质形成细胞IκBα表达水平（0.173±0.055）较对照组细胞（0.462±0.142）显著降低（t=5.64,P＜ 0.05）,NF-κB p65表达水平（0.076±0.030）也较对照组细胞（0.120±0.034）降低（t=5.40,P＜0.05）;角质形成细胞IκBα表达水平（0.160±0.046）较对照组细胞（0.398±0.136）轻度下调（t=4.37,P＜0.05）,NF-κB p65的表达水平无明显变化（P＞0.05）.50 mJ/cm2 UVB照射原代角质形成细胞后2h,IκBα表达水平（0.140±0.034）相对于对照组细胞（0.208±0.031）开始下调（t=17.55,P＜ 0.05）,并随照射后时间延长下调效应更为显著;NF-κB p65的表达水平在2h和4h时较对照细胞无明显变化（P＞0.05）,8h时（1.162±0.345）较对照细胞（1.235±0.349）表达水平下调（t=36.67,P＜0.05）,12 h时（1.061±0.246）较对照细胞（1.390±0.226）仍下调（t=8.71,P＜0.05）,随着时间的推进下调效应无明显改变;磷酸化IKKα/β（ser176/180）、IKKβ、磷酸化IκBα（ser32）、磷酸化NF-κB p65（ser536）表达量均无明显改变（P＞0.05）.结论 高剂量（50 mJ/cm2）UVB照射可显著抑制人原代角质形成细胞IκBα表达,同时轻度抑制NF-κB p65蛋白的表达,提示可能存在UVB照射人原代角质形成细胞引起NF-κB p65活化的另一种通路.     

泛素结合酶2S在恶性黑素瘤中的表达及其对黑素瘤细胞生物学行为的影响

【摘要】 目的 探讨恶性黑素瘤（MM）组织中泛素结合酶2S（UBE2S）的表达及其对黑素瘤细胞生物学行为的影响。方法 应用免疫组化检测UBE2S在128例原发性MM、64例转移性MM、16份非瘤组织（8份瘤旁组织、8份正常表皮组织）芯片中的表达。实时定量PCR检测A375、MUM?2B及MUM?2C黑素瘤细胞株中UBE2S mRNA表达水平。将黑素瘤A375及MUM?2B细胞株分别分为两组,干扰组使用含有UBE2S RNA干扰序列的慢病毒转染,对照组使用含有对照序列的慢病毒转染, 72 h后实时定量PCR检测 A375和MUM?2B黑素瘤细胞株中UBE2S mRNA表达水平。用试剂盒检测各组细胞caspase3/7活性,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率及周期分布;应用Transwell法及Western印迹分别检测敲减UBE2S对A375细胞迁移侵袭能力及N-钙黏蛋白表达的影响。使用SPSS 22.0软件进行统计学分析,正态分布数据组间比较采用独立样本t检验,计数资料采用卡方检验,非正态分布数据比较采用Mann?Whitney U检验,通过Spearman系数评估UBE2S表达水平与T分期的相关性。结果 UBE2S在98例（51.0%）MM组织中高表达,16例非瘤组织中均低表达,两组间高表达率差异有统计学意义（χ2 = 11.905,P＜0.01）;UBE2S表达水平与肿瘤T分期呈负相关（ρ = -0.210,P = 0.043）。A375、MUM?2B、MUM?2C细胞间UBE2S mRNA相对表达量差异有统计学意义（F = 817.228,P＜0.01）。Caspase3/7活性在干扰组A375细胞（t = 17.572,P＜0.01）与干扰组MUM?2B细胞（t = 24.552,P＜0.01）分别较相应对照组明显增加;干扰组A375细胞较对照组G1期细胞比例明显升高（t = 7.365,P＜0.01）,而S期比例明显降低（t = -9.190,P＜0.01）,G2/M期无明显变化（t = -0.227,P＞0.05）;干扰组MUM?2B细胞G1期（t = 12.676,P＜0.01）、G2/M期（t = 13.045,P＜0.01）细胞比例高于对照组,但S期比例低于对照组（t = -15.718,P＜0.01）。Transwell实验显示,干扰组较对照组A375细胞迁移（t = -35.727,P＜0.05）及侵袭（t = -125.000,P＜0.01）能力降低。Western印迹检测显示,干扰组较对照组A375细胞N-钙黏蛋白表达下调。结论 UBE2S在黑素瘤组织过表达,其表达水平与肿瘤分期相关;敲减UBE2S对黑素瘤细胞凋亡、细胞周期、细胞迁移及侵袭能力均有影响,并且可能通过调控N-钙黏蛋白表达促进MM细胞转移。