IKKε在糖尿病大鼠肝脏的表达及利拉鲁肽对其干预作用的研究

目的观察糖尿病大鼠肝脏组织IKKε、核因子κB(NF-κB)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达及利拉鲁肽对其干预的作用。方法采用高脂饮食联合STZ诱导建立T2DM大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病组(T2DM)、低剂量利拉鲁肽组(LL)、高剂量利拉鲁肽组(HL),另设正常对照组(NC),每组各10只。Western blot检测肝脏组织IKKε、NF-κB、p-Akt的蛋白表达,RT-PCR检测IKKε、NF-κB的mRNA表达。结果 T2DM组FPG、FIns、HOMA-IR、TG、白介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)较NC组、LL组、HL组高(P0.05或P0.01),HL组FPG、FIns、IL-6、MDA、HOMA-IR较LL组低(P0.05)。与NC组比较,HL组、LL组、T2DM组IKKε、NF-κB的蛋白表达依次升高(P0.05或P0.01),p-Akt的蛋白表达依次降低[(0.762±0.112)vs(0.598±0.085)vs(0.476±0.112)vs(0.342±0.097),P0.05或P0.01]。结论肝脏组织IKKε表达升高可能参与了糖尿病的发生,利拉鲁肽呈浓度依赖下调肝脏组织IKKε的表达,可能是其改善IR、糖代谢的部分机制。     

阿托伐他汀对动脉粥样硬化大鼠热休克蛋白60、核转录因子-κB表达的影响

目的:探讨阿托伐他汀对动脉粥样硬化大鼠主动脉及心肌热休克蛋白60(HSP60)及核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法:选取普通级SD雄性大鼠18只,分为健康对照组(6只)、模型组(6只)和阿托伐他汀干预组(6只)。对照组给予基础饲料喂养;模型组给予高脂饲料喂养;阿托伐他汀干预组给予高脂饲料喂养12周后,阿托伐他汀干预4周(10 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃)。实验终点处死大鼠,腹主动脉取血检测各组TC、TG、LDL-C,HE染色观察各组主动脉的病理改变,免疫组织化学法检测主动脉及心肌HSP60、NF-κB的蛋白表达。结果:模型组大鼠TC、LDL-C均高于对照组(均P0.01)。模型组大鼠主动脉组织内可见动脉粥样斑块形成;主动脉及心肌HSP60、NF-κB的表达均高于对照组(均P0.01)。阿托伐他汀干预组大鼠TC、LDL-C均低于模型组(均P0.01);主动脉组织内动脉粥样硬化斑块病变减轻;主动脉及心肌HSP60、NF-κB的表达均低于模型组(均P0.05)。结论:阿托伐他汀可调节血脂,降低HSP60的表达;并通过抑制NF-κB信号通路,减轻动脉粥样硬化病变。     

厄贝沙坦通过核转录因子κB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡的研究

目的探讨厄贝沙坦通过抑制核转录因子κB(NF-κB)的表达减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。方法将H9C2细胞分为:对照(Con)组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、二甲基亚砜(DMSO)组(5.5 mmol/L葡萄糖+1‰二甲基亚砜)、高糖(HG)组(33 mmol/L葡萄糖)、厄贝沙坦(Ir)组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L厄贝沙坦),每组3个细胞。检测细胞增殖抑制率;IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TNF-α、Bax、Bcl-2 mRNA;核转录因子κB(NF-κB)、caspase-3蛋白表达及细胞凋亡率。结果 Ir组低于高糖诱导的Bax[(50.31±2.18)vs(61.96±4.08)]、IL-6[(7.67±1.53)vs(25.33±4.16)]、MCP-1[(26.67±6.11)vs(43.33±3.06)]、TNF-α[(35.33±3.06)vs(44.67±4.16)]、NF-κB[(2.19±0.52)vs(3.58±0.53)]及caspase-3[(2.28±0.10)vs(2.86±0.12)]表达及细胞凋亡[(10.73±1.78)vs(16.46±2.24)],差异均有统计学意义(P0.05);上调高糖抑制的Bcl-2[(0.62±0.04)vs(0.45±0.06)]的表达(P0.05)。结论厄贝沙坦通过NF-κB信号通路,可减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。     

糖尿病神经病变患者单核细胞TOLL样受体4的表达及其与血浆肿瘤坏死因子α、白介素6的相关性研究

目的研究T2DM伴糖尿病神经病变患者外周血单核细胞TOLL样受体4(TLR4)的表达及其与促炎因子TNF-α、IL-6的相关性。方法将研究对象分为正常组(NC,n=44),T2DM组(n=44),T2DM神经病变组(n=44)。分离和提取外周血单核细胞,流式细胞术和RT-PCR检测单核细胞表面TLR4蛋白和mRNA;ELISA检测血浆TNF-α和IL-6。结果 T2DM神经病变组HbA_1 c[(9.09±-1.62)%vs(8.36土1.10)%vs(5.30±0.89)%]、单核细胞TLR4蛋白[(42.02±9.69)%vs(31.27±6.87)%vs(11.96±5.54)%]和TLR4 mRNA[(2.98±1.06)vs(1.74±0.47)vs(1.12±0.52)]、血浆TNF-α[(8.75±3.14)vs(6.27土3.64)vs(3.19±1.17)Pg/m1]、IL-6[(3.63±1.81)vs(2.60±1.14)vs(1.54±0.58)pg/ml]水平均高于T2DM和NC组(P0.01);T2DM神经病变组TLR4蛋白与TNF-α、IL-6呈正相关(r=0.631,P0.0001;r=0.447,P=0.0023)。结论糖尿病神经病变患者单核细胞TLR4参与机体炎症反应,与糖尿病神经病变的发生发展密切相关。     

低氧和复氧对大鼠糖脂代谢的影响及其作用靶点的研究

目的探讨慢性持续性低氧和复氧对大鼠糖脂代谢和不同组织中低氧诱导因子1α(HIF-1α)、核转录因子κB(NF-κB)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)mRNA表达的影响。方法建立慢性低氧大鼠模型,随机分为7组:常氧3周、6周、12周对照组,低氧3周、6周组和复氧6周、12周组,每组各8只。比较各组血糖、血脂水平和不同组织中HIF-1α、NF-κB和AMPK的表达情况。结果 (1)低氧6周组FPG低于常氧6周组[(3.52±0.59)vs(8.80±1.64)mmol/L,P0.01];复氧6周组FPG高于低氧6周组[(7.20±2.2)vs(3.52±0.59)mmol/L,P0.05],与常氧6周组比较,差异无统计学意义。(2)低氧组TC、TG、HDL-C水平低于常氧组(P0.01),复氧后TC和HDL-C可恢复至常氧水平。低氧组LDL-C、FFA水平高于常氧组(P0.01),且在复氧后可完全恢复至常氧水平。(3)低氧组皮下脂肪组织中HIF-1α、NF-κB和AMPK mRNA表达水平高于常氧组[(276.87±2.77)vs(100±4.03),(184.41±2.17)vs(100±1.56),(259.88±3.03)vs(100±2.95),P0.05]。结论慢性持续性低氧可导致大鼠血糖、血脂的改变,复氧可使其恢复至正常水平。大鼠皮下脂肪组织中HIF-1α、NF-κB和AMPK等基因的表达可能在上述过程中发挥了一定的作用。     

美洲大蠊提取物对慢性萎缩性胃炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨美洲大蠊提取物对慢性萎缩性胃炎大鼠的疗效及对Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路的影响.方法将60只清洁级SD大鼠随机分为6组:正常对照组,模型组,维酶素组以及美洲大蠊提取物组(低、中、高剂量组),通过N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍法干预制造慢性萎缩性胃炎大鼠模型.通过光镜下观察大鼠胃黏膜组织病理学改变,酶联免疫吸附测定法检测血清炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β的含量,Western blot法检测胃黏膜组织TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD 88)、NF-κB p65蛋白的表达.结果模型组大鼠胃黏膜腺体萎缩,腺体腔扩张,数量减少、排列紊乱,间质可见淋巴细胞等炎症浸润,提示造模成功.药物干预后,各组大鼠胃黏膜较模型组均有不同程度改善,其中以美洲大蠊提取物高剂量组改善最为明显;造模后,模型组血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平及胃黏膜组织中TLR4、MyD 88、NF-κB p65蛋白表达较空白对照组明显升高(P0.01),药物干预后,各组TNF-α、IL-6、IL-1β水平及胃黏膜组织中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达较模型组降低,其中维酶素组、美洲大蠊提取物低剂量组与模型组比较,差异均具有统计学意义(P0.05),美洲大蠊提取物中剂量组、美洲大蠊提取物高剂量组与模型组比较,差异均具有显著统计学意义(P0.01).结论美洲大蠊提取物能够显著改善萎缩性胃炎大鼠模型胃黏膜组织形态,降低血清炎性因子,其作用机制是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达实现的.     

涤痰汤对动脉粥样硬化兔炎性因子的影响

目的观察涤痰汤对动脉粥样硬化兔炎性因子核因子-κB(NF-κB)、E-选择素(E-selectin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的影响,探讨涤痰汤防治动脉粥样硬化的作用机制。方法应用高脂饲料制备动脉粥样硬化兔模型,随机分为6组,分别加入涤痰汤以及阿托伐他汀钙干预,用酶联免疫方法(ELISA)检测血清TNF-α和IL-6的含量;用荧光定量PCR检测TNF-α和IL-6mRNA表达;用Western blot检测NF-κB和E-selectin蛋白的表达。结果与动脉粥样硬化模型组比较,涤痰汤能显著降低动脉粥样硬化兔血清TNF-α和IL-6的水平,降低主动脉TNF-α和IL-6mRNA的表达,降低NF-κB和E-selectin蛋白的表达。结论涤痰汤能降低NF-κB、E-selectin、TNF-α以及IL-6等炎性因子的表达,这可能是涤痰汤防治动脉粥样硬化的作用机制之一。     

高血糖介导炎性反应加重大鼠急性心肌缺血损伤的作用

目的探讨NF-κB和TNF-α等炎性因子在高血糖大鼠急性心肌缺血组织的加重损伤机制。方法选择SPF级雄性SD大鼠48只,按随机数字表法分为假手术组、高血糖合并急性心肌梗死(AMI)组(高血糖AMI组)、正常血糖AMI组,每组16只。采用分光光度法和酶联免疫吸附法检测各组大鼠心肌组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,Western blot法检测缺血心肌组织NF-κB和TNF-α表达。结果与假手术组比较,高血糖AMI组MPO、IL-1β、IL-6水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。与高血糖AMI组比较,正常血糖AMI组MPO、IL-1β、IL-6水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与假手术组比较,高血糖AMI组NF-κB和TNF-α表达明显升高(P0.01)。与高血糖AMI组比较,正常血糖AMI组NF-κB和TNF-α表达明显降低(1.231±0.245 vs 1.743±0.383,1.109±0.247 vs 1.624±0.413,P0.01)。结论高血糖介导的炎性因子MPO、IL-1β、IL-6、NF-κB和TNF-α表达增加可能是加重急性心肌缺血损伤的主要机制之一。     

肾衰饮对CRF大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及炎症状态的影响

目的基于toll样受体(TLR)4/髓样细胞分化因子(MyD)88/核转录因子(NF)-κB信号通路探讨肾衰饮对慢性肾衰竭(CRF)大鼠炎症状态的干预机制。方法将60只SD大鼠,随机分成四组,分别为正常组、模型组、尿毒清组和肾衰饮组。进行4 w的干预治疗后,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理形态改变,检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,分别采用免疫组化法和Western印迹检测大鼠肾脏组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果与正常组比较,模型组HE染色显示大鼠肾脏组织发生明显病理改变,血Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(P<0.01),肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,尿毒清组和肾衰饮组肾脏组织病理改变明显改善,血清Scr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.01),肾脏组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论肾衰饮能有效改善CRF大鼠的肾功能,其机制可能是抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路从而抑制炎症反应发生,达到治疗CRF的目的。     

2型糖尿病患者外周血microRNA-155、细胞核因子-κB和可溶性细胞间黏附分子-1的表达及其与血管并发症的关系研究

目的观察T2DM患者外周血microRNA-155(miR-155)、细胞核因子-κB(NF-κB)和可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)的表达情况,探讨miR-155在T2DM合并血管病变中的作用。方法选取T2DM患者165例和健康体检者(NC)60名,分为无血管病变组、有血管病变组,有血管病变组进一步分为微血管病变组、大血管病变组、微血管病变+大血管病变组;依据24hUAlb水平分为尿白蛋白正常(NAU)组、微量白蛋白尿(MAU)组、大量白蛋白尿(MAAU)组。RT-PCR检测外周血miR-155、NF-κB和sICAM-1的表达变化。结果与NC组比较,T2DM组miR-155、NF-κB、sICAM-1表达升高[(1.00±0.12)vs(1.82±0.71),(1.04±0.33)vs(2.28±0.66),(1.03±0.30)vs(1.88±0.80)](P0.05);与无血管病变组比较,有血管病变组miR-155、NF-κB、sICAM-1表达升高[(1.34±0.29)vs(1.95±0.73),(1.65±0.16)vs(2.40±0.65),(1.07±0.41)vs(2.01±0.77)](P0.05);微血管病变+大血管病变组miR-155表达高于大血管病变组[(2.36±0.61)vs(1.77±0.59)](P0.05),NF-κB也高于微血管病变组和大血管病变组(P0.05);与NAU组比较,MAU组和MAAU组miR-155表达升高,且MAAU组高于MAU组[(1.04±0.20)vs(1.41±0.49)vs(2.64±0.52)](P0.05),NF-κB、sICAM-1也高于NAU组(P0.05)。Pearson相关分析显示,miR-155与NF-κB、sICAM-1呈正相关(t=4.235、9.728,P0.01)。结论 T2DM患者及不同血管并发症组miR-155表达升高,且与NF-κB、sICAM-1升高趋势一致,提示miR-155的炎症调控机制可能参与糖尿病慢性血管病变的发生发展。     

冠心舒通胶囊干预NF-κB信号通路抗动脉粥样硬化的机制研究

目的观察冠心舒通胶囊是否通过调控核转录因子-κB(NF-κB)信号通路,控制或延缓动脉粥样硬化的进展。方法选取16只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠为正常对照组,予普通饮食;选取48只6~8周龄雄性同系ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠,采用高脂饲料喂养,至12周建立动脉粥样硬化模型(杀死3只,油红O染色,脂质斑块形成,造模成功),造模成功小鼠随机分为3组:模型组、冠心舒通组、阿托伐他汀组,每组15只。冠心舒通组给予冠心舒通胶囊0.41 g/(kg·d)灌胃,阿托伐他汀组给予阿托伐他汀钙片5 mg/(kg·d)灌胃,对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。灌胃8周后,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;取主动脉,免疫组织化学染色法检测主动脉组织中NF-κB p65蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织中TNF-α蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,模型组血清IL-6、TNF-α水平均升高(P<0.01),主动脉组织中NF-κB p65和TNF-α蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,冠心舒通组和阿托伐他汀组血清IL-6、TNF-α水平均降低(P<0.01),主动脉组织中NF-κB p65蛋白和TNF-α蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论冠心舒通胶囊对ApoE-/-小鼠具有抗动脉粥样硬化的作用,其作用机制可能与其抑制NF-κB信号通路及相关炎性因子(IL-6、TNF-α)的表达,发挥抗炎、抗动脉硬化作用有关。     

急性胰腺炎大鼠肝脏核因子κB活化与肝损伤的关系

目的:观察急性胰腺炎大鼠肝脏中核因子κB(nuclear factorkappa B,F-κB)的活化及其与肝损伤之间的关系.方法:Wistar大鼠72只,随机分为3组:急性胰腺炎组(AP),急性胰腺炎PDTC处理组(APP),假手术组(SO).分别于术后3,,12,4 h检测肝组织中NF-κB活性、血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、淀粉酶(AMS)水平,并观察肝脏及胰腺病理改变.结果:SO组术后未见NF-κB活化,血浆ALT及肝脏病理无显著变化.与SO组相比,P组术后3～6 h NF-κB活性显著增加(3.13±0.57 vs 0.71±0.10,.92±0.26 vs 0.67±0.11,＜0.01),血浆ALT在3～24 h也显著高于SO组(1.1±0.2 vs 0.7±0.09,.6±0.2 vs 0.7±0.1,.4±0.4 vs 0.7±0.09,.5±0.7vs 0.8±0.1,＜0.01),肝组织病理改变明显重于SO组.在运用了NF-κB抑制剂PDTC的APP组,F-κB活性显著低于AP组(1.85±0.38 vs 3.13±0.57,.36±0.22 vs 1.92±0.26,＜0.01),血浆ALT较AP组也有了显著下降(1.2±0.2,s 1.6±0.2,.7±0.2 vs 2.4±0.4,.1±0.4 vs 3.5±0.7,＜0.01或P＜0.05)肝脏病理改变较AP组也有明显减轻.结论:急性胰腺炎大鼠肝组织中存在着NF-κB的显著活化,活化的NF-κB参与了肝损伤的发生.     

新型肠促胰岛素类似物对糖尿病大鼠脑缺血再灌注模型炎性反应的影响

目的探讨新型胰高血糖素样肽1和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽双受体激动剂(DA3-CH)对糖尿病大鼠脑缺血再灌注模型炎性反应的影响。方法将54只SD大鼠随机分为5组:对照组6只、模型组12只、单模组12只、实验组12只、药物组12只。后4组用改良线栓法造脑缺血再灌注模型,其中模型组和药物组于脑缺血再灌注模型前先用链脲佐菌素造糖尿病模型,实验组和药物组造模前给腹腔注射DA3-CH 10 nmol/(kg·d),连续14 d。测定各组血糖、体质量及Longa评分,氯化-2,3,5-三苯基四氮唑染色法测定脑梗死体积比,采用Western blot测定TNF-α、白细胞介素(IL)-1β、NF-κB蛋白表达。结果与对照组和单模组比较,模型组血糖明显升高[(22.82±7.04)mmol/L vs(5.58±1.09)mmol/L和(5.29±0.78)mmol/L,P0.01];体质量明显下降[(292.6±10.1)g vs(303.6±10.7)g和(301.2±12.8)g,P0.05]。模型组较单模组和药物组Longa评分明显升高(P0.05,P0.01)。模型组较单模组脑梗死体积比明显增大(0.44±0.02 vs 0.16±0.02,P0.01);实验组较药物组脑梗死体积比明显减小(0.12±0.01 vs 0.37±0.02,P0.01);药物组较模型组脑梗死体积比亦明显减小(P0.05)。模型组TNF-α和IL-1β及NF-κB蛋白表达较单模组和药物组增加(P0.01);实验组TNF-α和IL-1β及NF-κB蛋白表达较单模组减少(P0.05)。结论糖尿病加重脑缺血再灌注损伤,炎性反应在糖尿病加重脑缺血再灌注损伤中有重要作用;DA3-CH可能通过减轻神经炎症对合并糖尿病的脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

白细胞介素37对Toll样受体4激活人冠状动脉内皮细胞核因子κB和细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨抗炎症因子白细胞介素37(IL-37)对人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)中Toll样受体4(TLR4)激活后下游信号核因子κB(NF-κB)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及机制。方法将HCAEC培养3~5代后进行实验,分为3组:对照组、IL-37干扰组、IL-37过表达组。利用脂质体转染将IL-37干扰序列加入IL-37干扰组,IL-37 DNA过表达质粒加入IL-37过表达组;孵育24 h后,用实时荧光定量PCR检测基因转染效率以确定转染成功。各组给予TLR4激活剂脂多糖(200μg/L)进行干预。Western blot检测干预24 h后ICAM-1蛋白的表达及干预30、60、120 min时磷酸化NF-κB蛋白的表达。结果对照组在TLR4激活后ICAM-1蛋白表达升高,与之相比,IL-37干扰组在TLR4激活后ICAM-1蛋白明显升高(P0.05),但在IL-37过表达组中没有升高(P0.05)。与对照组相比,IL-37干扰组TLR4激活后30、60、120 min各时间点磷酸化NF-κB的蛋白表达明显升高(P0.05),而IL-37过表达组磷酸化NF-κB蛋白表达并没有明显升高(P0.05)。结论 IL-37可以抑制TLR4激活HCAEC中炎症因子ICAM-1的升高,其机制可能是通过抑制NF-κB磷酸化的程度。IL-37的抗炎作用可以防治动脉粥样硬化。     

脂联素对2型糖尿病大鼠主动脉内皮功能影响的研究

目的观察APN对T2DM大鼠主动脉内皮功能的影响。方法采用高脂饮食加腹腔注射STZ建立T2DM大鼠模型。造模成功后随机分为DM组9只和APN组8只,另设正常对照(NC)组10只。APN组给予尾静脉注射腺病毒重组APN(0.71×109 IU/只),DM组和NC组给予同等剂量生理盐水注射。测定各组胸主动脉内皮功能,核因子-κB(NF-κB)表达及一氧化氮(NO)水平。结果与DM组相比,APN组高敏C反应蛋白(hsC-RP)[(1.85±0.56)vs(3.13±0.38)mg/L]和丙二醛水平[(2.44±0.28)vs(4.80±0.59)mg/L]降低,APN水平[(273.50±21.20)vs(94.97±25.12)μg/L]升高(P0.01)。NC组主动脉环最大舒张率高于其他两组[(81.7±5.2)%vs(65.9±9.9)%vs(36.0±8.9)%,P0.05]。DM组主动脉NF-κB表达高于APN组和NC组,且APN组表达高于NC组(P0.05)。NC组器官池中NO水平高于DM组和APN组[(125.6±17.7)vs(103.5±20.3)vs(72.5±9.1)μmol/g,P0.05]。结论 APN能改善T2DM大鼠主动脉内皮功能,其机理可能与通过减少氧化应激和炎症反应,增加NO的产生有关。     

核转录因子κB、Toll样受体和炎性细胞因子在颅内动脉瘤破裂中的表达及相关性

目的探究核转录因子κB(NF-κB)、Toll样受体(TLR)和炎性细胞因子在颅内动脉瘤(IA)破裂中的表达及相关性。方法通过手术收集IA以及IA破裂的动脉瘤组织作为IA组和IA破裂组,同时收集健康血管组织作为对照组。通过qPCR检测动脉瘤组织中NF-κB、TLR4、白细胞介素1β(IL-1β)以及超敏C反应蛋白(hs-CRP)mRNA水平,通过Western blot检测NF-κB和TLR4蛋白水平。酶联免疫吸附法检测各组血清中IL-1β和hs-CRP的水平。结果 IA组和IA破裂组动脉瘤组织中的NF-κB、TLR4、IL-1β、hs-CRP mRNA和NF-κB、TLR4蛋白水平显著高于对照组(P0.05),此外,IA破裂组动脉瘤组织中的NF-κB、TLR4、IL-1β、hs-CRP mRNA和NF-κB、TLR4蛋白水平显著高于IA组(P0.05)。IA组和IA破裂组血清IL-1β和hs-CRP显著高于对照组(P0.05),IA破裂组血清IL-1β和hs-CRP水平显著高于IA组(P0.05)。结论与IA患者相比,IA破裂患者的动脉瘤组织中具有更高水平的NF-κB、TLR4、IL-1β以及hs-CRP mRNA和蛋白的表达,并且血清中IL-1β和hs-CRP的水平也更高,这说明NF-κB、TLR4、IL-1β以及hs-CRP可能与IA破裂有关。     

灭幽汤对幽门螺杆菌相关性胃炎脾胃湿热证模型小鼠TLRs/NF-κB65信号通路的影响

目的:观察灭幽汤对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)相关性胃炎脾胃湿热证模型小鼠Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)、TLR4、核转录因子-κB65(nuclear factorkappa B 65,NF-κB65)蛋白及mRNA,白介素(interleukin,IL)-6、IL-8表达的影响,探讨灭幽汤治疗H.pylori相关性胃炎脾胃湿热证的机制.方法:将70只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、高浓度灭幽汤组(高灭组)、低浓度灭幽汤组(低灭组)、胃三联组(替硝唑+克拉霉素+枸橼酸铋钾颗粒),每组14只;采用复合因素(肥甘食物+湿热环境+H.pylori)建立BALB/c小鼠H.pylori相关性胃炎脾胃湿热证模型;造模成功后连续给药14 d后,分别采用免疫组织化学检测TLR2、TLR4、NF-κB65蛋白,qPCR检测TLR2 mRNA、TLR4mRNA、NF-κB65 mRNA的表达情况,采用ELISA检测血清IL-6、IL-8的表达.结果:模型组TLR2、TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、血清IL-6、IL-8含量表达均高于对照组,差异有统计学意义;通过药物治疗后,低灭组、高灭组、胃三联组TLR2、TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、血清IL-6、IL-8含量表达均低于模型组,差异有统计学意义;高灭组TLR2、TLR4、NF-κB65的蛋白及mRNA、血清IL-6、IL-8含量表达虽低于胃三联组,但差异无统计学意义.结论:灭幽汤可能通过干预TLRs/NF-κB65信号通路抑制TLR2、TLR4、NF-κB65及下游因子的表达以达到治疗H.pylori相关性胃炎脾胃湿热证的目的.     

黄芪多糖对LPS损伤小肠上皮细胞的保护作用

目的:探讨黄芪多糖(APS)在内毒素-脂多糖(LPS)损伤小肠上皮细胞(IEC-6)中的作用机制及对细胞因子和核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法:以小肠上皮细胞株IEC-6为研究对象, 将培养的细胞分为6组: 对照组、LPS组、LPS APS 50 mg/L组、LPS APS 100 mg/L组、LPS APS 200 mg/L组和LPS APS 500 mg/L组. 采用RT-PCR法检测细胞因子TNF-α和IL-8 mRNA的表达, 采用凝胶电泳迁移率法分析NF-κB蛋白活性.结果: LPS损伤IEC-6细胞后, TNF-α, IL-8 mRNA水平和NF-κB蛋白定量表达均升高, 均显著高于对照组(TNF-a: 1.26±0.06 vs 0.65±0.05, IL-8 mRNA: 1.19±0.05 vs 0.57±0.06, NF-kB: 2.76±0.07 vs 0.07±0.03, P均<0.01). 而黄芪多糖呈浓度和时间依赖性地抑制LPS诱导IEC-6细胞分泌的TNF-α, IL-8等细胞因子的mRNA的表达水平(P<0.01), 并能降低NF-κB的表达活性(P<0.01).结论:APS具有抑制LPS刺激IEC-6细胞产生的TNF-α, IL-8炎性因子的作用, 并能降低NF-κB的表达活性, 其对LPS所致的肠道损伤具有保护作用.     

基于TLR4/NF-κB信号通路研究调肝理脾方联合熊去氧胆酸干预原发性胆汁性胆管炎小鼠的作用机制

目的:通过研究肿瘤坏死因子-a(TNF-α)及Toll样受体4/核转录因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路相关基因在原发性胆汁性胆管炎(PBC)模型小鼠回肠组织中的表达情况,探讨中药调肝理脾方(TGLP)联合熊去氧胆酸(UDCA)干预PBC小鼠的作用机制。方法:将100只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(UDCA 0.1g·kg~(-1)·d~(-1))、中药组(TGLP 5.4g·kg~(-1)·d~(-1))、联合组(TGLP 5.4g·kg~(-1)·d~(-1)+UDCA 0.1g·kg~(-1)·d~(-1)),每组20只;采用聚肌胞苷酸(poly l:C)5mg/kg复制PBC小鼠模型;给药8w、16w后颈脱位法处死小鼠,采集末端回肠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法及实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测回肠组织中TLR4、TNF-α的表达水平,RTPCR法测定回肠组织中TLR4、NF-κB mRNA的相对表达水平。结果:与模型组比较,正常组小鼠回肠组织中NF-κB、TNF-α表达水平较低,差异有显著性意义(P0.01);经治疗后3个治疗组小鼠TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平均较模型组降低,差异有显著性意义(P0.01或P0.05),且联合组小鼠TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平下降最显著;与联合组相比,中药组小鼠NF-κB表达水平较高,差异有显著性意义(P0.01或P0.05)。结论:负性调节小鼠回肠组织中TLR4/NF-κB信号通路并抑制TNF-α因子的释放可能是TGLP联合UDCA干预PBC模型小鼠的作用机制之一。     

TLR4/NF-κB信号通路在微小隐孢子虫感染中的作用机制

目的探讨Toll样受体4/核因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路在微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)感染小鼠致肠黏膜损伤中作用的分子机制。方法 30只4周龄雄性BALB/c小鼠随机分成感染1周组、感染2周组和未感染组,每组10只。感染组每鼠经口灌胃微小隐孢子虫卵囊(1×10~5个/只),未感染组小鼠正常饮食、饮水。感染组小鼠分别于感染后第1周和第2周剖杀,未感染组小鼠于第2周剖杀。取小鼠肠组织,HE染色观察小鼠肠黏膜的病理变化。抽提肠黏膜组织总RNA,逆转录成c DNA,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测TLR4和NF-κB p65的m RNA相对表达量。蛋白质印迹(Western blotting)检测肠黏膜组织中TLR4和NF-κB p65的相对表达量。ELISA检测肠黏膜组织中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。结果HE染色结果显示,感染组小鼠肠绒毛明显萎缩变短、脱落,黏膜下层水肿,与肌层间形成明显的间隙;未感染组小鼠肠绒毛结构完整。q RT-PCR结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中TLR4的m RNA相对表达量分别为2.3±0.4、3.5±0.1,均高于未感染组(1.0±0.0)(P0.05,P0.01);NF-κB p65的m RNA相对表达量分别为2.6±0.3、3.6±0.2,均高于未感染组(1.1±0.1)(P0.05,P0.01)。Western blotting结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中TLR4的相对表达量分别为0.4±0.0、0.6±0.0,均高于未感染组(0.2±0.0)(P0.05,P0.01);NF-κB p65的表达量分别为0.6±0.0、0.8±0.1,均高于未感染组(0.4±0.0)(P0.05,P0.01)。ELISA检测结果显示,感染1周组和感染2周组小鼠肠黏膜组织中IL-1β的表达量分别为33.3±2.2、46.1±2.5,均高于未感染组(22.3±5.0)(P0.01);TNF-α的表达量分别为45.7±2.0、55.4±3.6,均高于未感染组(25.7±9.3)差异有统计学意义(P0.01)。结论微小隐孢子虫感染小鼠后,通过激活TLR4/NF-κB信号通路,可上调TLR4和NF-κB p65的表达,促进IL-1β和TNF-α的释放,诱发肠黏膜炎症反应。