DNMT1在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在卵巢癌组织中的表达及对卵巢癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:采用免疫组化方法检测15例正常卵巢组织及31例卵巢癌组织中DNMT1的表达水平;利用DNMT1的过表达质粒及DNMT1 siRNA瞬时转染SKOV3细胞系,Western blot检测DNMT1的蛋白表达水平,CCK8法检测各组细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测DNMT1对卵巢癌细胞迁移能力的影响。结果:31例卵巢癌组织中DNMT1阳性率（83.9%,26/31）显著高于15例正常卵巢组织（20.0%,3/15）。临床分期Ⅲ-Ⅳ期、病理分级G3、远处转移者DNMT1阳性率明显升高（P＜0.05）。过表达DNMT1后,SKOV3细胞增殖能力及迁移能力均增强;敲低DNMT1后,SKOV3细胞生长及迁移能力受抑。结论:DNMTl在卵巢癌组织中的表达明显高于正常卵巢组织,其具有促进卵巢癌细胞增殖和远处转移的作用。     

抑癌基因OVCA1体外对卵巢癌细胞A2780迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨卵巢癌基因1[ovarian cancer gene 1,OVCA1;也称为DPH2L( diphthamide synthesis protein 2-like)基因]体外对卵巢癌细胞系A2780迁移和侵袭能力的抑制作用.方法:采用脂质体法将GFP标记的携带OVCA1的重组质粒pEGFP-OVCA1或GFP空白质粒分别转染A2780细胞后,G418筛选稳定转染细胞,有限稀释法筛选稳定转染细胞的单克隆细胞株,荧光显微镜检查绿色荧光蛋白的表达及RT-PCR方法检测A2780细胞OVCA1基因mRNA的表达.A2780-OVCA1细胞为实验组, A2780-GFP细胞和A2780细胞为对照组,采用划痕实验、Transwell体外迁移实验和Matrigel体外侵袭实验检测OVCA1对A2780细胞迁移和侵袭能力的影响.结果:重组质粒pEGFP-OVCA1转染后获得了稳定表达GFP标记OVCA1蛋白的A2780细胞株.A2780-OVCA1组划痕后的细胞迁移速度明显小于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Transwell滤膜的迁移细胞数明显少于两对照组(P<0.05);A2780-OVCA1组穿过Matrigel滤膜的侵袭细胞数明显少于两对照组(P<0.05).结论:OVCA1在体外具有显著抑制卵巢癌A2780细胞迁移和侵袭的作用.     

LINC01139靶向miR-1262影响卵巢癌细胞增殖和侵袭及迁移的机制

目的 探讨长链基因间非编码RNA01139(LINC01139)在卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移中的可能机制.方法 采用基因表达谱交互分析(GEPIA2)数据库分析LINC01139在乳腺癌组织的表达.qRT-PCR检测正常卵巢IOSE-80以及卵巢癌SKOV3、A2780、OVCAR3和A547细胞的LINC01139、...     

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移及侵袭的影响

目的:探讨下调microRNA-214 (miR-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞迁移和侵袭的作用及其可能机制.方法:采用脂质体介导法将miR-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,Real-time PCR法检测miR-214、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uridylyl phosphate adenosine,uPA)基因mRNA的表达,Western blotting法检测细胞NF-κB和uPA蛋白表达.划痕试验检测细胞迁移能力,Transwell小室法检测细胞侵袭能力.结果:经转染miR-214抑制剂后,人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达降低,细胞迁移和侵袭能力降低.同时NF-κB和uPA mRNA和蛋白表达也降低.结论:下调人卵巢癌SKOV-3细胞miR-214表达可抑制细胞迁移和侵袭能力,下凋NF-κB和uPA基因表达可能是其作用机制.     

人上皮性卵巢癌组织中PFTK1的表达及其对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究PFTAIRE蛋白激酶1（PFTAIRE protein kinase 1,PFTK1）在人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达,以及PFTK1基因的沉默对人卵巢癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。方法: 随机选取我院2015年6月至2016年11月收治的25例EOC患者为研究对象,采用Western blot检测癌组织以及癌旁组织中PFTK1蛋白的表达情况。选取PFTK1高表达的人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,转染PFTK1-siRNA后,采用流式细胞仪检测PFTK1基因的沉默对SKOV3细胞周期的影响,采用细胞迁移和侵袭实验（Transwell）检测SKOV3细胞迁移、侵袭能力的变化,采用平板克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖能力的变化。结果:Western blot检测结果显示,EOC患者癌组织中的PFTK1蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示,PFTK1-siRNA组细胞出现明显的生长抑制,细胞多停滞在G0/G1期,与对照组相比差异显著（P＜0.01）;细胞迁移和侵袭实验（Transwell）结果显示,PFTK1-siRNA组细胞的迁移和侵袭能力与对照组比较显著下降,且差异均显著（P＜0.01）;平板克隆形成实验结果显示,PFTK1-siRNA组细胞增殖能力显著降低,与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结论:PFTK1在人EOC癌组织中呈现高表达状态;PFTK1基因沉默后,EOC细胞株SKOV3的细胞迁移、侵袭及增殖能力均受到不同程度的抑制,这将为基因治疗人卵巢癌提供一定的理论依据。     

MTA1在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞侵袭转移影响的研究

  目的  研究转移相关基因1(metastasis-associated-gene1, MTA1)表达与卵巢癌发生发展转移的关系, 研究MTA1对卵巢癌侵袭转移能力的影响, 并探讨抑制卵巢癌侵袭转移的潜在靶点。  方法  免疫组织化学法检测110例卵巢癌组织中MTA1的蛋白表达水平, 分析MTA1蛋白表达与卵巢癌分化程度、临床分期及与腹腔转移的关系。并通过脂质体介导方法, 将特异性siRNA表达载体psilenter2.0-MTA1-siRNA转染入人卵巢癌细胞系HO-8910PM, 采用RT-PCR以及Western blot检测特异性siRNA对MTA1mRNA及蛋白表达的抑制效果。应用划痕损伤实验及Transwell实验检测MTA1对卵巢癌细胞侵袭转移能力的影响。  结果  MTA1随卵巢癌组织学分化程度的升高而降低, 呈负相关, MTA1的表达随着FIGO分期期别的增加而增加, 呈正相关, MTA1的表达随卵巢癌腹腔转移而增加, 呈正相关。RT-PCR及Western blot结果显示, siRNA成功抑制卵巢癌细胞系HO-8910PM中MTA1的表达。划痕损伤实验显示转染后划痕损伤愈合明显减慢, 迁移率明显降低, Transwell体外侵袭实验结果显示, 转染后穿膜细胞百分率显著降低(P < 0.05)。  结论  MTA1表达水平的增高与卵巢癌的分化程度、临床分期及远处转移密切相关, 体外研究显示抑制MTA1在卵巢癌细胞中的表达, 使细胞生长、侵袭及转移能力均受到抑制, 提示MTA1在卵巢癌的远处侵袭转移过程中发挥重要作用, 可能成为卵巢癌基因治疗的潜在靶点。      

miRNA-145在卵巢癌组织中的表达及其对增殖、迁移与侵袭的影响

摘 要：［目的］ 检测不同卵巢组织中miRNA-145的表达,并探讨miRNA-145在卵巢细胞SKOV-3增殖、迁移与侵袭的作用。［方法］ 采用定量聚合酶链反应（qPCR）测定正常卵巢组织、卵巢癌旁组织与卵巢癌卵巢组织的miRNA-145表达水平,随机将SKOV-3细胞分为正常对照组、空白病毒组和病毒转染组,分别采用MTT法测定各组细胞的增殖情况,采用qPCR测定miRNA-145的表达水平,采用划痕实验测定迁移能力,采用Transwell小室法测定侵袭能力。［结果］ 卵巢癌组织miRNA-145表达水平为0.56±0.23,较卵巢癌旁组织和正常卵巢组织显著性降低（P<0.05）。卵巢癌组织miRNA-145表达水平与患者国际妇产科联合会分期和组织分化程度相关（P<0.05）,但与年龄无关（P >0.05）。病毒转染组细胞的miRNA-145表达水平为4.63±0.47,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增加（P<0.05）。病毒转染组细胞在培养24h、48h和72h时OD值分别为0.68±0.15、1.17±0.23和1.62±0.26,均较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。病毒转染组细胞的划痕宽度为675±46μm,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增大（P<0.05）。病毒转染组穿膜细胞数量为36±6个,较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。［结论］ miRNA-145低表达可能与卵巢癌的发生发展有关,过表达miRNA-145能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭。miRNA-145可以作为治疗卵巢癌的新作用靶点。     

人卵巢癌组织中Tiam1和Rac1的表达与肿瘤侵袭转移的关系

目的:检测Tiam1和Rac1蛋白在人卵巢癌组织中的表达,探讨其与卵巢癌组织学类型、临床分期、病理分级和侵袭转移的关系.方法:采用免疫组织化学SP法和半定量方法检测Tiam1和Rac1蛋白在52例卵巢癌、12例良性卵巢肿瘤及14例正常卵巢组织中的表达.结果:Tiam1和Rac1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率分别为80.77%和78.00%,明显高于正常卵巢组织和良性病变(P＜0.01);在不同组织学类型和年龄中表达差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅰ～Ⅱ期阳性表达率为61.53%和46.15%,明显低于Ⅲ～Ⅳ期87.18%和89.74%,(P＜0.05);随组织分化程度的降低,二者的染色强度有逐渐增高的趋势,Ⅱ级和Ⅲ级阳性表达率明显高于Ⅰ级(P＜0.05);有转移者阳性表达率90.63%和96.87%明显高于无转移者65.00%和50.00%,两者差异有显著性(P＜0.05).结论:Tiam1和Rac1蛋白的表达与临床分期、分化程度及肿瘤转移等密切相关,提示Tiam1和Rac1信号通路在人卵巢癌侵袭转移中起重要作用.     

SOX1对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

[目的]探究性别决定区Y框蛋白1(sex determining region Y-box,SOX1)对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。[方法]选择稳定表达SOX1基因的HeLa细胞株为实验组,同时选择稳定表达空白质粒的He La细胞株和HeLa细胞为对照组。采用二甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测SOX1对HeLa细胞增殖的影响;通过细胞基质黏附实验、体外细胞迁移实验、体外细胞侵袭实验分别研究SOX1对HeLa细胞粘附、迁移、侵袭能力的影响;采用明胶酶谱法检测细胞内相关蛋白的水平。[结果]在研究第1天,两组的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05),实验组在研究第3天(0.526±0.067)、第5天(1.169±0.148)、第7天(1.160±0.134)的增殖能力均显著性低于对照组(P<0.05)。实验组黏附率(0.754±0.041)显著性低于对照组(0.931±0.135)(P<0.05);实验组在24h(5.84±1.20)、48h(10.28±3.01)、72h(14.51±2.31)迁移距离均显著性小于对照组(P<0.05);实验组侵袭细胞的数量(120.09±10.04个)明显较对照组(215.67±6.98个)少(P<0.05)。实验组基质金属蛋白酶2(0.981±0.199)、基质金属蛋白酶9(0.536±0.033)、波形纤维蛋白(0.429±0.029)表达水平显著性低于对照组,SOX1、E钙黏附蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。[结论]SOX1表达水平升高,会使宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭抑制,MMP2、MMP9、Vimentin蛋白表达水平降低,Ecadherin表达水平升高。     

GPX1在结直肠癌组织中的表达及其对癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的:探讨谷胱甘肽过氧化物酶1 (glutathione peroxidase 1,GPX1)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)组织中的表达水平及其对CRC细胞株HT29和LOVO细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:收集2015年6月至2016年3月间海口市人民医院滨江分院普外科手术切除的60例临床CRC组织及癌旁组织,应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测CRC组织及癌旁组织中GPX1 mRNA水平.在高表达GPX1 mRNA的HT29细胞株用慢病毒携带shRNA感染的方法构建敲除GPX1的细胞株,瞬时转染法在低表达GPX1 mRNA的LOVO细胞系构建过表达GPX1的细胞株,并在GPX1 mRNA及蛋白水平进行验证.通过MTS法检测CRC细胞的增殖能力的变化,用划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测CRC细胞迁移侵袭能力的变化,同时用Western blotting检测E-钙黏蛋白和波形蛋白表达的变化.结果:CRC组织中GPX1 mRNA表达水平显著低于癌旁组织(0.051±0.024 vs 0.142±0.051,P＜0.01).敲除GPX1后,HT29细胞的增殖能力显著增强(12.901±2.790 vs 6.617±2.462,P＜0.01)、侵袭能力显著增强[(384.7±37.9) vs (209.2±31.2)个,P＜0.01]、迁移能力显著增强[(0.139±0.025)vs (0.251±0.038)mm,P＜0.01]、E-钙黏蛋白表达下调(P＜0.01)、波形蛋白表达上调(P＜0.05).过表达GPX1的LOVO细胞的增殖能力显著降低(P＜0.01)、迁移和侵袭能力下降(均P＜0.05)、E-钙黏蛋白上调(P＜0.01)、波形蛋白表达下调(P＜0.01).结论:GPX1mRNA在人CRC组织中低表达,GPX1负向调控CRC细胞的增殖、迁移和侵袭,其在CRC中可能发挥抑癌作用.     

顺铂耐药促进卵巢癌OVCAR-3细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:观察人卵巢癌顺铂(cisplatin,CDDP)敏感细胞株OVCAR-3和耐药细胞株OVCAR-3/CDDP生物学行为的差异,并探讨其可能的机制。方法:取对数生长期的OVCAR-3和OVCAR-3/CDDP细胞,软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖能力;Transwell小室、失巢凋亡实验和裸鼠皮下移植瘤实验分别检测细胞体外和体内的侵袭、迁移能力;免疫组织化学实验检测移植瘤组织中MMP-2和MMP-9的表达。结果:与OVCAR-3细胞比较,OVCAR-3/CDDP细胞克隆形成能力显著增加[(0.66±0.09)%vs(0.31±0.07)%,P<0.05]。Transwell小室实验发现,OVCAR-3/CDDP细胞较OVCAR-3细胞侵袭和迁移能力均明显增强[(233.1±8.5)vs(167.4±5.9),P<0.01;(143.6±9.1)vs(95.8±6.2),P<0.01];OVCAR-3/CDDP细胞较OVCAR-3细胞更易聚集,细胞凋亡指数下降[(7.78±1.32)%vs(15.41±1.26)%,P<0.01]。OVCAR-3/CDDP细胞移植瘤组织中MMP-2、MMP-9的表达高于OVCAR-3细胞。结论:顺铂耐药OVCAR-3/CDDP细胞的增殖、抗失巢凋亡、侵袭和迁移能力显著增强,其机制可能与MMP-2和MMP-9表达升高有关。     

Claudin-1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达及促进其表达后对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究紧密连接跨膜蛋白(Claudin-1)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学行为及裸鼠皮下成瘤能力的影响.方法:收集50例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织,采用RT-qPCR和免疫组化检测Claudin-1的表达;RT-qPCR和Western Blot检测Claudin-1在人胃癌细胞株MKN45、SGC790...     

DUSP10对人卵巢癌A2780细胞迁移及侵袭的影响

目的：探讨DUSP10在浆液性卵巢癌组织中的表达情况及其与卵巢癌细胞迁移及侵袭能力的关系。方法：实时荧光定量PCR方法检测浆液性卵巢腺癌和正常输卵管伞端组织中 DUSP10的表达情况;转染DUSP10过表达和干扰质粒至人卵巢癌A2780细胞,划痕实验和Transwell实验观察癌细胞迁移及侵袭能力的变化。结果：DUSP10在浆液性卵巢癌组织的表达低于正常输卵管伞端组织（ P﹤0.05）。与对照组相比,转染DUSP10过表达质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力受到抑制,转染DUSP10干扰质粒后A2780细胞迁移及侵袭能力增强。结论：DUSP10在浆液性卵巢癌组织中低表达;DUSP10可抑制人卵巢癌A2780细胞的迁移及侵袭能力。     

miR-19b对卵巢癌细胞侵袭和迁移的作用探讨

目的:探讨微小RNA-19b（microRNA-19b,miR-19b）在卵巢癌细胞侵袭和迁移中的作用机制。方法:应用qRT-PCR方法检测正常卵巢组织、卵巢癌组织及卵巢癌细胞系(SKOV-3、OVCAR-3)中miR-19b的表达情况。将miR-19b抑制剂或阴性对照寡核苷酸转染到OVCAR-3细胞中,Transwell实验检测miR-19b的表达对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。免疫印迹分析（Western blot）技术检测miR-19b对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN）的表达及对PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达水平的影响。双报告基因实验用于检测miR-19b与PTEN的 3’-UTR区之间的相互作用。结果:与正常卵巢组织比较,卵巢癌组织及卵巢癌细胞系 SKOV-3和OVCAR-3中miR-19b高表达,其相对表达水平分别为3.56±0.68、3.01±0.02、3.78±0.04（P均<0.05）。Transwell 实验表明,抑制miR-19b 的表达可降低OVCAR-3细胞的侵袭和迁移能力。上调miR-19b的表达可抑制OVCAR-3细胞中PTEN蛋白的表达水平,并使磷酸化的AKT蛋白的表达水平显著升高。双报告基因检测结果显示,与对照组相比,miR-19b可与PTEN的3’-UTR区结合使其重组载体的荧光素酶活性下降。结论:miR-19b在卵巢癌细胞中存在异常高表达,可促进卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,有望作为卵巢癌患者潜在的生物标志物和治疗靶点。     

LncRNA UCA1对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响及机制

目的:探讨长链非编码RNA UCA1对卵巢癌细胞SKOV3侵袭及迁移能力的影响及可能的作用机制。方法:用脂质体2000将pc DNA/UCA1表达载体及pc DNA3.1空载体转染卵巢癌细胞SKOV3细胞。用G418筛选,建立稳定表达UCA1 RNA的SKOV3/pc DNA-UCA1细胞及转染空载体的SKOV3/pc DNA3.1细胞。RT-PCR方法检测两株细胞中UCA1的表达,鉴定阳性细胞株。Millicell小室检测两株细胞侵袭及迁移能力的变化,蛋白印迹法检测两株细胞MMP2及MMP9蛋白表达的变化。结果:成功构建稳定表达UCA1的SKOV3细胞,表达UCA1 RNA后,SKOV3细胞的侵袭及迁移能力均增加,MMP2及MMP9蛋白表达增加。结论:UCA1 RNA可能通过增加SKOV3细胞中MMP2及MMP9的表达来增强其侵袭及迁移能力,在卵巢癌侵袭及进展中发挥作用。     

大肠癌组织和细胞中KDM3A的表达及其对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究大肠癌组织和细胞中赖氨酸组蛋白甲基化酶(lysine histone demethylase 3A,KDM3A)的表达及其对大肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:通过生物信息学检索分析公开数据库中KDM3A在大肠癌组织中的表达及相关临床信息。采用qRT-PCR技术检验KDM3A在4种大肠癌细胞HT-29、SW480、SW620、DLD-1以及正常人结肠上皮细胞NCM460中的表达水平,筛选出KDM3A表达量低的大肠癌细胞系进行过表达并进行CCK-8增殖实验、Transwell实验及Western blot检测KDM3A过表达对细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结果:KDM3A在大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织,且KDM3A高表达患者生存率更低。过表达KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论:高表达的KDM3A可以促进大肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。