二甲酸精氨酸二甲胺水解酶-非对称性二甲基精氨酸系统对老年冠心病患者血管内皮细胞的影响

目的探讨二甲酸精氨酸二甲胺水解酶-非对称性二甲基精氨酸(DDHA-ADMA)系统对老年冠心病患者组织因子(TF)表达的影响。方法选取45例老年冠心病患者为冠心病组,同时选取40例老年健康体检者为对照组,分别采用RT-PCR测定两组内皮祖细胞DDAH mRNA表达,酶联免疫法测定两组ADMA表达,采用流式细胞仪测定两组细胞内一氧化氮酶(NOS)、TF、溶血性磷脂酰胆碱(LPC)水平。结果冠心病组DDAH mRNA为(1.14±0.21),对照组为(0.07±0.04),随着患者Gensini积分升高,DDAH mRNA相对表达量显著下降,与对照组相比,冠心病组ADMA含量显著上升,且随着患者Gensini积分升高ADMA含量显著升高,不同积分间相比差异有统计学意义。冠心病组NOS、TF、LPC水平显著高于对照组,且随着Gensini积分升高,NOS、TF、LPC水平显著增加(P0.05)。经相关性分析可知,DDAH与NOS、TF、LPC呈负相关,而ADMA与NOS、TF、LPC呈正相关。结论老年冠心病病情的发生及进展与DDAH-ADMA通路参与NOS、TF、LPC表达有密切关系。     

非对称性二甲基精氨酸促进大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶表达

目的观察非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)对培养的大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,探讨其在脂质沉积中的作用及机制。方法分组①正常对照组以PBS缓冲液与巨噬细胞共孵育,②氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)组在巨噬细胞培养液中加oxLDL(50mg/L),③O A组在巨噬细胞培养液中加oxLDL(50mg/L)和ADMA(20μmol/L),④O A L组在培养液中加ox-LDL(50mg/L)、ADMA(20μmol/L)、L-Arg(1.2mmol/L)。以硝酸还原酶法和化学比色法分别测定培养液中一氧化氮(NO)含量与iNOS活力,以RT-PCR和Western Blotting分别检测iNOSmRNA和蛋白表达。结果①OxLDL组与O A组NO含量降低,iNOS活力升高,且以O A组明显,与正常对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05);NO与iNOS呈负相关(r=-0.697,P<0.05)。②O A组iNOS mRNA和蛋白表达增强,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论ADMA抑制大鼠腹腔巨噬细胞合成NO,增强iNOS基因与蛋白表达,可能是ADMA促使巨噬细胞转变为泡沫细胞、促进动脉粥样硬化发生发展的机制之一。     

槲皮素对非对称性二甲基精氨酸诱导损伤的脑血管内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的探讨槲皮素对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导下人脑血管内皮细胞(HBMECs)损伤的保护作用及其作用机制。方法采用ADMA(30μmol/L,作用24 h)诱导建立HBMECs损伤模型。实验分为对照组(不加任何干预因素)、ADMA组、ADMA+槲皮素处理组(加入终浓度分别为0. 1、1、10、100μmol/L的槲皮素预处理2 h后再加入终浓度为30μmol/L的ADMA作用24 h)、100μmol/L槲皮素处理组(100μmol/l的槲皮素预处理2 h后换常规培养液)、10μmol/l槲皮素处理组(10μmol/L的槲皮素预处理2 h后换常规培养液)、茴香霉素(ANISO)/P79350+ADMA+槲皮素处理组[加入终浓度为10μmol/L的槲皮素预处理2 h后再加入终浓度为30μmol/L的ADMA作用24 h,实验结束前1 h加入10μmol/L的ANISO或50μmol/L的P79350]以及ANISO/P79350处理组(常规培养液培养,实验结束前1 h加入10μmol/L的NAISO或50μmol/L的P79350),每组6个样本。不同浓度槲皮素预处理2 h后,噻唑蓝法测定细胞活性,酶联免疫吸附试验法测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧、丙二醛、脑源性神经营养因子(BDNF)水平,Western blotting分析Bax、Bcl-2、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化JNK(p-JNK)、p38、磷酸化p38(p-p38)表达水平,逆转录-聚合酶链式反应检测内皮型一氧化氮合酶(e NOS) mRNA表达,caspase-3活性试剂盒检测caspase-3活性,应用JNK激动剂ANISO和p38激动剂P79350观察JNK/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路在槲皮素介导的细胞损伤保护中的作用。结果与对照组比较,ADMA组HBMECs活性(52±8)明显降低,LDH水平(356±28)显著升高,BDNF浓度(51±8)明显下降,差异均有统计学意义(均P 0. 05);与ADMA组比较,ADMA+10μmol/L槲皮素处理组和ADMA+100μmol/L槲皮素处理组HBMECs细胞活性显著改善(分别为80±5、86±7),LDH水平明显下调(分别为162±20、141±17),BDNF浓度明显增加(分别为82±5、94±6),差异均有统计学意义(均P 0. 05)。应用10μmol/L的槲皮素处理进行后续实验,结果显示,与ADMA组比较,ADMA+槲皮素处理组Bcl-2 mRNA、e NOS mRNA和SOD水平均明显升高(分别为0. 75±0. 10、0. 81±0. 07、81±10),Bax表达水平和caspase-3活性、活性氧、丙二醛水平均明显减低(分别为1. 63±0. 12、1. 85±0. 16、169±16、159±13),差异均有统计学意义(均P 0. 05)。进一步机制分析表明,与对照组比较,ADMA组可显著提高HBMECs中JNK和p38的磷酸化水平(p-JNK/JNK和p-p38/p38分别为3. 46±0. 32、3. 66±0. 31);与ADMA组比较,ADMA+槲皮素处理组有效抑制了ADMA诱导下HBMECs的JNK和p38磷酸化水平(p-JNK/JNK和p-p38/p38分别为2. 60±0. 19、2. 72±0. 20),差异均有统计学意义(均P 0. 05);与ADMA+槲皮素处理组比较,ANISO+ADMA+槲皮素处理组p-JNK/JNK(4. 06±0. 30)和P79350+ADMA+槲皮素处理组p-p38/p38(3. 84±0. 32)明显增高,两组细胞活性和BDNF水平明显降低,LDH水平明显增加,差异均有统计学意义(均P 0. 05)。结论槲皮素可缓解ADMA诱导的HBMECs损伤,其机制可能与抑制JNK/p38 MAPK信号通路有关。     

丹参酮ⅡA对糖尿病大鼠主动脉内皮细胞非对称性二甲基精氨酸和一氧化氮的影响

目的观察丹参酮ⅡA对糖尿病大鼠主动脉内皮细胞非对称性二甲基精氨酸和一氧化氮的影响。方法制备2型糖尿病大鼠模型,组织块法原代培养大鼠主动脉内皮细胞,丹参酮ⅡA 0、25、50 mg/L干预细胞6 h、12 h和24 h,采用ELISA检测细胞培养基非对称性二甲基精氨酸含量,硝酸还原酶法检测一氧化氮含量。结果丹参酮ⅡA抑制内皮细胞分泌非对称性二甲基精氨酸的作用呈剂量、时间依赖性(P<0.05)。随浓度增高,其促进一氧化氮分泌的作用增强,于12 h时促进作用达高峰(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA能降低糖尿病大鼠主动脉内皮细胞分泌非对称性二甲基精氨酸,同时促进一氧化氮的合成。     

非对称性二甲基精氨酸对人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的 探讨非对称性二甲基精氨酸对人脐静脉内皮细胞表达可溶性细胞间粘附分子1、内皮素1、一氧化氮的影响。并观察不同浓度L-精氨酸对非对称性二甲基精氨酸效应的拮抗作用。方法 以不同浓度的非对称性二甲基精氨酸（分别为1、4、8、12和16μmol/L）与人脐静脉内皮细胞共育及固定浓度的非对称性二甲基精氨酸（16μmol／L）加不同浓度的L-精氨酸（分别为0.2、0．4、0．8、1．6和3．2mmol／L）与人脐静脉内皮细胞共育24h，分别用酶联免疫吸附法、硝酸还原酶法、放射免疫法检测培养基中可溶性细胞间粘附分子1、内皮素1及一氧化氮的浓度。结果 非对称性二甲基精氨酸呈剂量依赖性增加人脐静脉内皮细胞可溶性细胞间粘附分子1和内皮素1的表达，降低一氧化氮的表达（P〈0．05），接近生理范围的非对称性二甲基精氨酸（即1μmol／L）对内皮功能没有明显的影响；外源性补充L-精氨酸可逆转非对称性二甲基精氨酸的效应，且呈剂量依赖性（P〈0．05），但当外源性L-精氨酸的剂量大到一定程度时即加入L-精氨酸／非对称性二甲基精氨酸〉100时，内皮功能并不能得到进一步改善。相关分析显示培养基中可溶性细胞间粘附分子1、一氧化氮、内皮素1的表达和加入非对称性二甲基精氨酸的的浓度明显相关。其相关系数r分别为0．943、-0．937和0．934（P〈0.01）。结论 非对称性二甲基精氨酸可通过增加内皮细胞表达可溶性细胞间粘附分子1和内皮素1，减低内皮细胞产生一氧化氮来导致内皮功能紊乱，且内皮功能紊乱的程度与非对称性二甲基精氨酸的浓度明显相关；外源性补充L-精氨酸可逆转非对称性二甲基精氨酸的效应；寻找有效的方法调节非对称性二甲基精氨酸的浓度可能是改善内皮功能，防治心血管疾病的一个新目标。     

奈必洛尔对非对称性二甲基精氨酸诱导损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的观察奈必洛尔对非对称性二甲基精氨酸(ADMA)诱导损伤人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法用ADMA16μmol/L培养HUVECs 24 h,不加或加入阿替洛尔20μmol/L、奈比洛尔(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)预处理1 h。0.25%胰酶消化细胞,获取细胞悬液,离心收集细胞上清液,检测一氧化氮(NO)水平、一氧化氮合酶(NOS)活性。提取HUVECs总RNA,用RT-PCR分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达。结果 ADMA16μmol/L刺激HUVECs 24 h后,上清液NO含量和NOS活性降低,eNOS mRNA表达下调。奈比洛尔可剂量依赖性抑制ADMA所致的上述损伤。阿替洛尔对ADMA诱导的损伤无显著改善。结论奈必洛尔可保护ADMA诱导损伤HUVECs。     

沙格列汀改善过氧化氢诱导损伤的血管内皮细胞一氧化氮和内皮素-1分泌异常的观察

目的 观察二肽基肽酶-4 （DPP-4）抑制剂沙格列汀对过氧化氢（H2O2）诱导损伤的血管内皮细胞分泌一氧化氮（NO）及内皮素1（ET-1）的影响. 方法 以培养人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）作为靶细胞,在内皮细胞培养基中加入100 μmol/L H2O2制备细胞损伤模型,以不同浓度沙格列汀（5、10、20、40 μmol/L）进行干预,观察不同培养时间（0、12、24、36 h）各浓度组的差异.分别采用硝酸还原酶法和放射免疫法检测细胞上清液中NO及ET 1含量. 结果 H2O2作用HUVEC后,细胞上清NO含量降低,而ET-1含量升高（P＜0.05）.各浓度沙格列汀组NO含量均高于模型组（100 μmol/L H2O2）,而ET-1含量降低,这种作用在一定剂量范围内随药物剂量增加而增强,在一定时间范围内随时间增加而增强（P＜0.05）. 结论 沙格列汀可改善H2O2引起血管内皮细胞NO、ET-1分泌异常.     

醛固酮对血管外膜诱导型一氧化氮合酶/一氧化氮通路影响的实验研究

目的观察醛固酮对血管外膜诱导型一氧化氮合酶（iNOS）／一氧化氮（NO）通路的影响及作用机制。方法取sD大鼠胸主动脉外膜,分别给予不同浓度醛固酮（ALD）10^-8～10^-6mol／L、ALl）＋螺内酯以及ALD＋RU486进行孵育,此外在给予脂多糖激活血管外膜iNOS／NO的情况下,观察以上各组药物刺激后iNOS／NO系统的变化。与上述药物共同孵育6h后通过Griess法测定相对稳定的代谢产物硝酸盐和亚硝酸盐（NOx）代表NO的产生量,采用[^3H]-L-精氨酸标记的同位素法测定外膜iNOS活性。结果（1）NOx产生的变化：ALD刺激后血管外膜NOx生成无明显变化。用螺内酯拮抗盐皮质激素受体后,高浓度ALD组（10～～10^-6mol／L）血管外膜NOx产生呈下降趋势（P〈0．05）。用RU486拮抗糖皮质激素受体后随ALD浓度增加NOx生成量也呈浓度依赖性增加（P〈0．01）。脂多糖刺激后上述趋势更为明显。（2）iNOS活性的变化：ALD刺激后iNOS活性无明显变化,螺内酯刺激后血管外膜iNOS活性有下降趋势,但无统计学意义。而RU486刺激后血管外膜iNOS活性显著增加（P〈0．05）。同时给予脂多糖刺激后,螺内酯＋ALD组血管外膜iNOS活性显著下降（P〈0．01）,ALD＋RU486组血管外膜iNOS活性显著增加（p〈0．05）。结论ALD主要通过盐皮质激素受体和糖皮质激素受体通路两种途径直接影响血管外膜iNOS／NO系统,醛固酮作用于盐皮质激素受体能够诱导iNOS激活、刺激NO产生,作用于糖皮质激素受体抑制iNOS／NO激活。     

非对称性二甲基精氨酸与血管病变的关系

非对称性二甲基精氨酸（ADMA）是内源性一氧化氮合酶（NOS）抑制剂,可以抑制血管活性物质一氧化氮（NO）生成,导致内皮功能障碍,是一种新的内皮功能障碍预测因子。研究表明,ADMA是动脉粥样硬化、高血压、缺血性脑卒中的危险因素,ADMA可能通过引起脑血流自我调节障碍、慢性低灌注和血脑屏障受损参与脑白质疏松的发生和发展。干扰ADMA的合成或代谢可能为防治血管病变开辟一条新途径。     

云南地区汉族2型糖尿病患者二甲基精氨酸二甲胺水解酶1、二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因单核苷酸多态性与动脉粥样硬化关系的研究

目的探讨云南地区汉族T2DM患者发生动脉粥样硬化(AS)与二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAH1)基因rs233113、二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)基因rs805304单核苷酸多态性(SNP)的相关性。方法选取2016年10月至2018年12月于昆明医科大学第一附属医院内分泌二科住院的T2DM患者464例,根据有无AS分为单纯T2DM组(n=208)和合并AS组(AS,n=256)。另选取同期我院体检健康人群294名为正常对照(NC)组。ELISA法检测各组血浆非对称性二甲基精氨酸(ADMA)的浓度,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)对DDAH1、DDAH2基因SNP进行基因分型。结果 T2DM、AS组CC基因型频率高于NC组(P0.05),AS组CC基因型频率高于T2DM组(P0.05)。AS组DDAH1基因rs233113 AA基因型ADMA水平低于TT+AT基因型(P0.05),DDAH2基因rs805304 CC基因型LDL-C水平高于AA、AC基因型(P0.05)。Logistic回归分析显示,SBP、FPG、LDL-C、ADMA、DDAH2基因rs805304位点CC基因型是T2DM患者发生AS的影响因素。结论云南地区汉族T2DM患者DDAH2基因rs805304CC基因型可能与AS易感性相关,携带该基因型患者LDL-C水平升高。DDAH1基因rs233113位点SNP可能与T2DM发生AS无相关性,携带该位点AA基因型患者ADMA水平降低。     

非对称性二甲基精氨酸诱导内皮祖细胞氧化应激损伤及L-精氨酸的保护作用

目的研究非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对人脐带血内皮祖细胞氧化应激影响及观测L-精氨酸对内皮祖细胞的保护作用.方法从脐带血中分离出内皮祖细胞,细胞随机分5组对照组,ADMA组,ADMA L-精氨酸组,ADMA PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸酯)组,L-精氨酸组.运用荧光染料检测细胞活性氧的产生.逆转录多聚酶链反应检测还原型辅酶Ⅱ氧化酶亚基及细胞内抗氧化剂超氧化物歧化酶mRNA变化.结果①ADMA显著增加细胞内活性氧的生成;L-精氨酸和抗氧化剂(PDTC)能抑制ADMA刺激后的细胞内活性氧产生.②ADMA诱导还原型辅酶Ⅱ氧化酶p22phox亚基、gp91phox亚基mRNA的表达明显上调,L-精氨酸和抗氧化剂(PDTC)能阻断这些基因的上调.但ADMA对抗氧化剂超氧化物歧化酶mRNA表达没有影响.结论ADMA可能通过诱导氧化应激,抑制内皮祖细胞的生物学活性,影响内膜的再生化,而给与外源性L-精氨酸能起到保护作用.     

非对称性二甲基精氨酸通过Caspase-3信号转导通路诱导晚期内皮祖细胞凋亡

目的 观察非对称性二甲基精氨酸对晚期内皮祖细胞的诱导凋亡作用,通过检测Caspase-3的活性探讨其诱导凋亡的信号转导通路.方法 从脐带血中分离培养晚期内皮祖细胞.Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双荧光染色法鉴定其内皮属性;不同浓度非对称性二甲基精氨酸(0、1、5、10和30μmol/L)作用于细胞48h,激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪测定细胞凋亡率;不同浓度非对称性二甲基精氨酸作用于细胞48h或10μmol/L非对称性二甲基精氨酸作用于细胞不同时间(0、3、6和9h),酶标仪测Caspase-3活性;加入Caspase-3特异性抑制剂(ac-DEVD-CHO)半小时后加入10μmol/L非对称性二甲基精氨酸作用48h,流式细胞仪测细胞凋亡率.结果 非对称性二甲基精氨酸作用于晚期内皮祖细胞后,可见典型的细胞凋亡形态学改变,且随非对称性二甲基精氨酸浓度增加细胞凋亡增加.在此过程中,Caspase-3被活化,其活化程度随非对称性二甲基精氨酸浓度增加及作用时间延长而升高.加入Caspase-3特异性抑制剂后细胞凋亡减少.结论 非对称性二甲基精氨酸可呈浓度依赖性诱导晚期内皮祖细胞凋亡,此作用可能是通过激活内源性凋亡途径Caspase-3信号转导通路实现的.     

核因子-κB介导非对称性二甲基精氨酸上调大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶的表达

目的:探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)上调大鼠腹腔巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达是否受核因子-κB(NF-κB)调控。方法:分离培养原代Wistar大鼠腹腔巨噬细胞。分组:①正常对照组:以含10%胎牛血清(FBS)DMEM培养液与巨噬细胞共孵育;②氧化型LDL(oxLDL)组:在培养液中加oxLDL50mg/L;③A+O组:在培养液中加ADMA(15μmol/L)和oxLDL(50mg/L);④P+A+O组:在培养液中加NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,25μmol/L)、ADMA(15μmol/L)和oxLDL(50mg/L)。以实时荧光定量PCR和Westen blotting分别检测iNOSmRNA和蛋白表达,以电泳迁移率变动分析(EMSA)和增强化学发光法(ECL)检测NF-κB活性。结果:①与正常对照组相比,oxLDL组与A+O组iNOSmRNA和蛋白表达增强,以A+O组尤为明显,2组比较差异有统计学意义(P0.05);P+A+O组iNOSmRNA和蛋白表达降低,与A+O组比较差异有统计学意义(P0.05)。②与正常对照组相比,oxLDL组与A+O组NF-κB活性增强,以A+O组尤为明显,2组相比差异有统计学意义(P0.05);P+A+O组NF-κB活性降低,与A+O组相比差异有统计学意义(P0.05)。③相关分析:NF-κB活性与iNOSmRNA和蛋白表达量均呈正相关。结论:ADMA可能通过NF-κB途径增强iNOS表达而促进巨噬细胞转化为泡沫细胞、促进动脉粥样硬化的发生发展。     

二甲基精氨酸二甲胺水解酶2基因-449G/C多态性及二甲基精氨酸水平与2型糖尿病的相关性研究

目的研究二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)基因-449G/C多态性及非对称性二甲基精氨酸(ADMA)水平与T2DM的关系。方法选取T2DM患者(T2DM组)288例和健康对照者(NC组)279名,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测DDAH2基因-449G/C多态性,应用ELISA检测血浆ADMA的浓度。结果(1)T2DM组DDAH2基因-449G/C位点的G/G基因型和G等位基因频率高于NC组(χ~2=16.742、12.178,P0.001);(2)T2DM组DDAH2基因449G/G多态性携带者具有较高的ADMA水平[(11.15±2.71)vs(7.04±1.46)μmol/L,P0.05];DDAH2基因-449G/C多态性与胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)无相关性(P0.05)。(3)T2DM组血浆ADMA水平高于NC组[(9.51±2.44)vs(4.64±0.92)μmmol/L,P0.05];(4)ADMA水平与TC、LDL-C、FPG、2 hPG、SBP、DBP呈正相关(P0.05),与HOMA-IR无相关性(P0.05);多元逐步回归分析显示,FPG是血浆ADMA水平的影响因素(P0.001);(5)Logistic回归分析显示,DDAH2-449G/G多态性、血浆ADMA水平是T2DM发生的独立危险因素(P0.05)。结论(1)在云南地区汉族人群中,DDAH2基因-449G/G多态性可能是T2DM的遗传危险因素;此基因型携带者具有较高的ADMA水平;(2)T2DM患者血浆ADMA水平升高,FPG是其影响因素;(3)DDAH2基因-449G/C多态性及血浆ADMA水平与HOMA-IR无相关性。     

非对称性二甲基精氨酸通过Rho／ROCK信号通路介导大鼠血管平滑肌细胞迁移

目的探讨非对称性二甲基精氨酸（Asymmetric Dimethylarginine,ADMA）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）迁移和形态变化的影响,并探索Rho／ROCK和MAPK信号转导通路在其中的作用。方法原代培养大鼠VSMCs,并通过转染二甲基精氨酸二甲胺水解酶hDDAH2过表达载体,L-精氨酸（1mM）或ROCK抑制剂Y27632等预处理,观察细胞RhoA蛋白与底物rhotekin蛋白结合程度,ROCK底物MYPT-1磷酸化程度、VSMC迁移能力和细胞骨架及黏着斑定位情况。结果（1）ADMA诱导平滑肌细胞Rho/OCK信号转导通路;（2）Rho/OCK和ERK信号通路交联介导ADMA对平滑肌细胞迁移能力的诱导作用;（3）ADMA通过Rho/OCK诱导平滑肌细胞骨架无序排列、黏着斑定位改变;（4）L-精氨酸对上述变化有逆转作用。结论ADMA通过Rho/OCK和ERKl／2信号交联诱导VSMC迁移和表型转化,而L-精氨酸逆转ADMA引起的改变。     

硫化氢供体对实验性门静脉高压及内源性一氧化氮/一氧化氮合酶体系的影响

目的探讨硫化氢供体一硫氢化钠（sodium hydrosulfide，NaHS）对大鼠门静脉高压及内源性一氧化氮（nitric monoxide，NO）／一氧化氮合酶（nitricoxide synthase，NOS）体系的影响。方法将30只健康成年雄性sD大鼠随机分为4组：部分门静脉结扎（partly portal vein ligation，PPVL）组（10只）、PPVL＋NariS组（10只）、假手术组（5只）和正常组（5只）。PPVL组和PPVL＋NaHS组行部分门静脉结扎术建立门静脉高压的动物模型。模型制作14天后，分别测定各组大鼠的门静脉压力（PVP）和平均动脉压力（MAP）；采用免疫组织化学检测大鼠肝细胞中一氧化氮合酶（NOS2、NOSS）的蛋白水平表达情况，RT-PCR方法检测大鼠肝组织中NOS2和NOS3的mRNA水平的表达情况。结果术后14d，假手术组和正常组比较，各项检测指标无显著差异，NOS2蛋白及mR-NA水平未见明显表达；NOS3蛋白及mRNA表达水平无显著差异。PPVL组与假手术组比较，PVP明显升高（P〈0．05），MAP则下降（P〈0．05），PPVL＋NaHS组与PPVL组相比较，PVP进一步升高（P〈0．05），MAP则进一步降低（P〈0．05）。PPVL组和PPVL＋NaHS组NOS2在蛋白及mRNA水平均有表达，且后者NOS2蛋白及mRNA表达水平减少（P〈0．05）。4组之间NOS3的蛋白及mRNA表达水平则无显著差异。结论H2S参与了门静脉高压的形成与发展，NaHS可以加重门静脉高压，其作用可能与NO／NOS2体系有关。．     

尼莫地平对过氧化氢诱导人血管内皮细胞凋亡的影响

目的　探讨尼莫地平对过氧化氢 (H2 O2 )诱导人血管内皮细胞凋亡的影响。方法　在人脐静脉血管内皮细胞培养基中分别加入 H2 O2或 H2 O2 尼莫地平 ,培养 2 4 h,用流式细胞仪 PI标记法、原位末端脱氧核苷酸转移酶 (Td T)标记法 (TUNEL)和 HE染色法对细胞凋亡进行鉴定和检测。结果　 H2 O2 能明显地诱导培养的人血管内皮细胞发生凋亡 ,尼莫地平可显著降低 H2 O2 诱导的内皮细胞凋亡率 (P<0 .0 1 )。结论　尼莫地平对 H2 O2 诱导的血管内皮细胞凋亡具有保护作用。     

非对称性二甲基精氨酸对高血压病患者外周血单核细胞趋化活性的影响

目的检测原发性高血压患者血管内皮功能和外周血单核细胞趋化活性,并探讨一氧化氮合酶抑制剂非对称性二甲基精氨酸在其中所起的作用。方法在湘雅医院门诊和住院部收集42名原发性高血压患者和40名门诊健康体检者。检测肱动脉血流介导舒张功能、血浆中非对称性二甲基精氨酸含量、单核细胞趋化因子1浓度和外周血单核细胞趋化因子受体CCR2蛋白表达。结果与健康对照组比较,原发性高血压患者血管内皮依赖性舒张功能障碍,表现为肱动脉血流介导舒张功能下降、血浆中非对称性二甲基精氨酸水平升高(P<0.05),一氧化氮水平下降(P<0.05),同时伴有血中单核细胞趋化因子1水平升高(P<0.05)。原发性高血压患者分离的外周血单核细胞上CCR2蛋白表达明显高于健康对照组,给与外源性的非对称性二甲基精氨酸(30μmol/L)培养24h后可进一步上调CCR2的表达。结论非对称性二甲基精氨酸可能促进原发性高血压患者的血管内皮功能不全和外周血单核细胞活化的发生。     

高压培养对血管内皮细胞P-选择素和一氧化氮合酶的影响

高血压时血管壁侧压 (静水压 )对血管内皮细胞 (ＥＣ)的影响了解甚少。我们曾发现 180ｍｍＨｇ (1ｍｍＨｇ =0 .133ｋＰａ)压力培养对猪主动脉ＥＣ的生长具有双向性的影响 ,本研究观察高压培养对ＥＣ的一氧化氮合酶 (ＮＯＳ)及Ｐ 选择素分泌的影响。一、材料与方法4～ 6代的人脐静脉内皮细胞 (5× 10 5/ｍｌ的单细胞悬液3ｍｌ)用于实验。培养压力分为常压 (大气压 )、12 0ｍｍＨｇ和180ｍｍＨｇ三组。每一压力又分为对照组、左旋精氨酸干预组 (Ｌ ａｒｇ组 ,终浓度 1× 10 -5ｍｏｌ/Ｌ)及卡托普利 (ＣＡＰ ,终浓度 1× 10 -5ｍｏｌ/Ｌ)干预…     

褪黑素对过氧化氢诱导血管内皮细胞损伤的拮抗作用及其机制

目的:研究不同浓度褪黑素（melatonin,MLT）对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活力的影响,以及对过氧化氢(H2O2)诱导血管内皮细胞损伤的拮抗作用及机制。方法: 分别用不同浓度（125、250、500 μmol/L）的MLT处理体外培养的HUVECs 2 h、4 h和6 h后,用噻唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度的MLT对HUVECs存活率的影响。以300 μmol/L的H2O2建立HUVECs损伤模型,用125、250、500 μmol/L的MLT与H2O2（300 μmol/L）共同处理HUVECs 2 h、4 h和6 h后,分别用噻唑蓝（MTT）比色法测细胞的存活率、细胞黏附实验评价细胞黏附能力、酶活性测定法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量和细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活力。用Griess法测定细胞培养液中NO-2的浓度来反映HUVECs的一氧化氮(NO)释放量。结果: 以不同浓度的MLT处理内皮细胞 2 h、4 h和6 h后,内皮细胞的存活率无统计学差异。MLT能明显提高H2O2损伤的内皮细胞的存活率、黏附能力及细胞内SOD的活力（P<0.01）,增加培养液中NO含量（P<0.01）,降低内皮细胞LDH的释放（P<0.01）。以500 μmol/L的MLT效果最明显。结论: 不同浓度的MLT对HUVECs的存活率均无影响,提示MLT药物浓度的安全范围较大。MLT对H2O2诱导HUVECs损伤的拮抗作用可能与其抗氧化能力和促进内皮细胞合成NO有关。