慢病毒介导的靶向骨桥蛋白的siRNA对人脑胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响

目的 研究骨桥蛋白(osteopontin,OPN)下调后对胶质瘤细胞侵袭和凋亡的影响.方法 在体外以慢病毒介导的OPN小干扰RNA(small interference,siRNA)感染胶质瘤细胞系U251细胞,实时PCR和Western印迹检测OPN表达.通过Transwell实验、流式细胞仪检测,观察OPN表达下调后对胶质瘤细胞侵袭和细胞凋亡的影响.结果 慢病毒介导的OPN siRNA感染能显著降低U251细胞OPNmRNA水平及蛋白表达,有效抑制U251细胞侵袭能力,并诱导其凋亡,OPN siRNA感染组中Bcl-2、尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、MMP-2和MMP-9明显减少,Bax显著增多.结论 慢病毒介导的OPNsiRNA可显著抑制U251细胞的侵袭,并促进其凋亡.     

慢病毒介导的moesin基因沉默对U251细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨慢病毒介导的moesin基因沉默对U251细胞增殖与侵袭的影响。方法构建moesin基因沉默shRNA慢病毒载体并鉴定,将慢病毒表达载体稳定转染人胶质瘤细胞U251后,real time PCR方法与Western blot方法检测U251细胞moesin mRNA与蛋白的表达, MTT方法检测U251细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力的改变。结果转染moesin基因沉默shRNA慢病毒载体后,人胶质瘤细胞U251 moesin mRNA和蛋白表达水平均明显降低,结果表明成功建立了稳定沉默moesin基因的U251细胞株。与空白对照组比较,在抑制moesin表达后,U251细胞增殖和侵袭能力也明显下降。结论成功建立了稳定沉默moesin基因的U251细胞株,moesin可能参与U251细胞增殖和侵袭的发病过程。     

NEDD9在神经胶质瘤中的表达及基因沉默对人胶质瘤U251细胞增殖与侵袭的影响

目的研究NEDD9在神经胶质瘤中的表达及NEDD9基因沉默对人胶质瘤U251细胞增殖与侵袭的影响。方法选取手术切除的脑胶质瘤组织36例及正常脑组织10例,采用qRT-PCR和Western blot法检测各组脑组织中NEDD9mRNA和蛋白表达情况,构建靶向NEDD9的shRNA重组慢病毒载体,将慢病毒载体转染U251细胞,应用qRT-PCR与Western blot方法检测NEDD9mRNA与蛋白表达,MTT方法检测转染后U251细胞活力的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果脑胶质瘤组织NEDD9的蛋白与mRNA表达水平显著高于正常脑组织。成功建立了稳定沉默NEDD9基因的U251细胞株,与空白对照组及阴性对照组比较,转染NEDD9-shRNA组U251细胞活力与侵袭能力显著降低(P0.01)。结论 NEDD9可能是治疗胶质瘤U251细胞的潜在靶点。     

ATP1A1基因沉默抑制人胶质瘤细胞U251侵袭

目的探讨沉默Na+/K+ATP酶A1亚基(ATP1A1)对人U251胶质瘤细胞系侵袭能力的影响及其机制。方法用shRNA-ATP1A1慢病毒感染人U251胶质瘤细胞,RT-q PCR及Western blot分别检测ATP1A1 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞体外的增殖;细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达。结果沉默ATP1A1细胞的ATP1A1 mRNA和蛋白表达均受到了明显抑制;细胞的增殖和迁移、侵袭能力也显著受抑(P0.05);MMP-2和MMP-9的表达也明显降低(P0.05)。结论靶向ATP1A1干扰能够明显抑制胶质瘤U251细胞的体外增殖、迁移及侵袭,其机制可能与MMP-2、MMP-9的下调相关,ATP1A1可能作为胶质瘤治疗的一个潜在靶点。     

人Hes1-shRNA,Hes5-shRNA慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定

目的 构建人Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,为Notch-Hes信号通路的相关研究奠定基础.方法 根据人Hes1,Hes5基因mRNA序列分别设计、合成多对互补的DNA单链寡核苷酸,退火后克隆至pENTR /U6入门载体.通过入门载体瞬时转染神经胶质瘤U251细胞筛选有效干扰序列.将含有效干扰序列的入门载体与pLenti6/BLOCK-iT-DEST载体进行LR重组构建Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体,经脂质体介导入293FT细胞,包装成慢病毒.用该慢病毒感染U251细胞,Western印迹法分别检测Hes1,Hes5蛋白的表达.结果 分别构建了针对Hes1和Hes5基因的特异性shRNA慢病毒表达载体,其包装获得慢病毒可有效感染U251细胞并分别对Hes1,Hes5蛋白的表达有显著抑制作用.结论 成功构建了Hes1-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体.     

血管细胞黏附分子-1增强人脑胶质瘤细胞系迁移和侵袭能力

目的探讨血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)在脑胶质瘤细胞迁移侵袭能力中作用。方法用慢病毒p SGU6/GFP/Neo介导VCAM-1的shRNA、慢病毒EF1a-GFP/puro介导VCAM-1过表达载体、划痕迁移、Transwell侵袭、蛋白免疫印迹(Western blot)和细胞染色等实验技术和方法,观察了VCAM-1蛋白表达水平对人脑胶质瘤T98G和U251细胞系细胞迁移和侵袭能力的影响。其中,T98G细胞分为空白对照组、空载体对照组、乱序对照组和实验组(抑制VCAM-1蛋白表达水平组),U251细胞分为空白对照组、空载体对照组和实验组(过表达VCAM-1组),每组6个复孔。结果首先利用慢病毒介导VCAM-1的shRNA和过表达载体建立了稳定低表达VCAM-1的T98G细胞和稳定过表达VCAM-1的U251细胞。稳定低表达VCAM-1的T98G细胞划痕恢复能力(迁移能力)明显减弱(P0.01);而稳定过表达VCAM-1的U251细胞迁移能力明显提高(P0.05)。同样,稳定低表达VCAM-1的T98G细胞侵袭能力显著减弱(P0.05);而稳定过表达VCAM-1的U251细胞侵袭能力明显增强(P0.01)。结论VCAM-1可显著增强人脑胶质瘤细胞系细胞的迁移和侵袭能力。     

慢病毒介导的TLR4基因沉默对U251细胞增殖与迁移的影响

目的探讨慢病毒介导的TLR4基因沉默对U251细胞增殖与迁移的影响。方法构建TLR4基因沉默sh RNA慢病毒载体并鉴定,将慢病毒表达载体稳定转染人胶质瘤细胞U251后,real time PCR方法与Western blot方法检测U251细胞TLR4 m RNA与蛋白的表达,MTT方法检测U251细胞增殖情况,transwell实验检测细胞迁移能力的改变。结果 real time PCR方法与Western blot方法检测结果显示,转染TLR4基因沉默sh RNA慢病毒载体后,人胶质瘤细胞U251 TLR4在m RNA和蛋白水平表达均明显降低,结果表明成功建立了稳定沉默TLR4基因的U251细胞株。与空白对照组比较,在抑制TLR4表达后,U251细胞增殖和迁移能力也明显下降。结论成功建立了稳定沉默TLR4基因的U251细胞株,沉默TLR4基因后U251细胞增殖和迁移能力明显下降。     

含B7-H1 shRNA基因的慢病毒表达载体的制备及其抑制效果鉴定

目的 设计针对B7-H1的shRNA序列,构建慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒后检测其对U251细胞中B7-H1基因的沉默效果.方法 设计3对针对B7-H1 mRNA的shRNA,化学合成正义链和反义链,退火后与酶切后的pLKO.1载体进行连接.测序正确后包装成病毒并感染U251细胞,分别用qRT-PCR及Western blot法检测干扰效果.结果 qRT-PCR及Western blot结果证实设计的3条RNA干扰序列中有2条可有效沉默U251细胞中B7-H1的表达.结论 所制备的针对B7-H1的shRNA慢病毒能特异性沉默B7-H1.     

慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响

目的探讨慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法构建靶向E2F-1的shRNA重组慢病毒载体,将慢病毒载体转染U251细胞,real-time PCR与Western blot在m RNA与蛋白水平鉴定转染结果,MTT方法检测转染后U251细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 real-time PCR方法与Western blot检测结果均表明成功建立了稳定沉默E2F-1基因的U251细胞株。与空白对照组及阴性对照组比较,转染E2F-1-shRNA的U251细胞活力显著降低,细胞周期被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高,侵袭能力显著降低(P0.01)。结论转染E2F-1-shRNA能够显著降低U251细胞增殖侵袭能力。     

靶向ANGPTL4基因shRNA慢病毒载体抑制SiHa细胞迁移与侵袭

目的探讨慢病毒介导短发夹RNA(shRNA)沉默血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)基因对人宫颈癌细胞系Si Ha细胞迁移与侵袭的影响。方法实验分为3组,即空白对照组、阴性对照组及LV3/ANGPTL4组。用ANGPTL4shRNA慢病毒干扰载体感染Si Ha细胞,Western blot检测Integrinβ1、VEGF及MMP9蛋白表达,划痕实验检测Si Ha细胞迁移能力,Transwell实验检测Si Ha细胞迁移与侵袭能力。结果重组慢病毒载体成功感染Si Ha细胞,与空白对照组及阴性对照组比较,LV3/ANGPTL4组Si Ha细胞Integrinβ1、VEGF及MMP9蛋白表达水平降低(P0.01),细胞迁移与侵袭能力减弱(P0.05)。结论靶向ANGPTL4基因shRNA慢病毒载体可降低Si Ha细胞Integrinβ1、VEGF及MMP9蛋白表达水平,抑制Si Ha细胞迁移与侵袭能力。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.