日本血吸虫酚氧化酶同工酶分析

目的：观察日本血吸虫成虫单酚氧化酶(monophenol oxidase，MPO)和二酚氧化酶(diphenol oxidase，DPO)的同工酶酶谱形式。方法：将收集到的42d活成虫置含0．05％戊巴比妥钠的RPMIl640培养基中，23℃孵育8h，分别研磨雌、雄成虫呈匀浆，显色单酚氧化酶的样品匀浆时另加5％的TX-100。超声粉碎、低温高速离心取上清(含PO)．进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及酶染色后分析两种酚氧化酶同工酶酶谱形式。结果：单酚氧化酶的同工酶酶谱与二酚氧化酶的同工酶酶谱基本一致，电泳位置相同，表现为迁移率相同的一条带，但是单酚氧化酶的酶谱谱带较二酚氧化酶的酶谱显色弱。同时，雌虫及雄虫的单酚氧化酶和二酚氧化酶亦表现为迁移率相同的一条主带；但雄虫的酶带显色反应较雌虫弱。结论：日本血吸虫成虫体内酚氧化酶存在两种形式：单酚氧化酶和二酚氧化酶。而且不仅雌性虫含有酚氧化酶，雄性成虫也含有少量的酚氧化酶且两者酶分子相同。雄性成虫含有少量酚氧化酶的生理意义有待进一步研究。     

家蝇Attacin基因在家蝇三龄幼虫中的时间表达模式研究

目的探讨家蝇Attacin mRNA在幼虫各个时期的表达,为进一步研究家蝇的免疫防御打下基础。方法对家蝇三龄幼虫进行诱导,分别取诱导前0h和诱导后2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h、48h的家蝇mRNA,进行RT-PCR,分析attacin基因在家蝇体内的时间表达模式。结果家蝇三龄幼虫体内的attacin基因在诱导前后均有表达,诱导后表达增强16h达到相对高水平,维持约24h,而后开始下降。结论Attacin基因在家蝇三龄幼虫中是组成性表达,对进一步了解其在家蝇免疫系统,丰富对昆虫天然免疫的认识具有积极作用。     

三种监测家蝇抗药性方法的比较

本次采用三种生物测定方法监测溴氰菊酯、二氯苯醚菊酯、狄氏剂和 DDT 对三个家蝇品系的 LD_(50),LC_(50)和 KT_(50)。从 DDT 和狄氏剂对二个抗性家蝇品系的 KT_(50)表明,其击倒速率有明显的降低,对溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯仅有一些降低,由此可见 KT_(50)仅仅反映杀虫剂引起家蝇中毒的敏感性,并不能作为监测家蝇抗药性的依据。从二个家蝇抗性种群对四种杀虫剂的 LC_(50)和 LD_(50)的结果表明,二者测定的抗性程序基本上是一致的,LC_(50)测得的抗性倍数稍高,这符合抗性种群的情况,所以用不同浓度的三角瓶药膜法测定 LC_(50),不但方法简单,更能反映抗性种群的抗性程度。     

联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析

目的测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能。方法从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5’端序列,使用3’-RACE法补全3’端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析。结果通过巢式PCR扩增出1145bp的核苷酸序列,测序后设计5’端序列的下游引物,扩增出约900bp的核苷酸序列,设计3’端的上游引物,配合3’RACE试剂盒扩增出约600bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2244bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列。生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性最高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族。结论联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确。为进一步对其进行功能的研究奠定了基础。     

金乡县家蝇对三种化学杀虫剂抗药性分析

本文应用常规点滴法探讨金乡县家蝇对三种化学杀虫剂的抗药性现状。结果该地区 家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性水平普遍较高,且用量大,使用频率高的地方抗性发展较快。因此,家蝇抗药水平与化学杀虫剂用量大小和使用频率高低密切相关。     

荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比较

目的 比较荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤脱氢酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量的差异,为改进实验研究方法学提供参考依据。方法 提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR与半定量PCR进行相对定量检测,结果做比对分析。结果 两种检测方法均能检测到健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织0.4ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,半定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织15.625 ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR较半定量灵敏度高39倍。两种方法检测结果均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR与半定量PCR检测结果存在有一定差异。结论 两种方法均可用于检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量,荧光实时定量PCR灵敏度较高于半定量PCR法。     

大同市家蝇对三种杀虫剂的抗性测定(摘要)

大同市家蝇对三种杀虫剂的敏感性:敌敌畏的 LD_(50)为0.0537微克/雌蝇;敌百虫为3.154微克/雌蝇;溴氰菊酯的0.0108微克/雌蝇。与1985年相比,抗药性均有所增长,而其中以溴氰菊酯为最。     

荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比对

目的 分析荧光定量PCR 与半定量PCR 检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶（XDH/XO）的mRNA的相对表达量的差异,其结果具有一定的参考价值。方法 提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR 与半定量PCR 进行相对定量检测,结果做比对分析。结果 两种检测方法的特异性没有差异,荧光定量PCR较半定量PCR灵敏性高,均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR 与半定量PCR检测结果有一定差异。结论: 荧光实时定量PCR优于半定量PCR 法。     

实时荧光定量PCR在检测人ANP基因表达的应用

目的 建立心房钠尿肽(ANP)基因mRNA表达水平的实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行初步评价.方法 以基因表达产物为模板,建立实时荧光定量PCR检测方法,对样本中的心房钠尿肽含量进行相对定量,比较不同样本组的基因表达水平.结果 所建立的实时荧光定量PCR方法熔解曲线中熔解峰单一.肺癌患者胸腔样本的ANP含量为对照样本的4.68倍,血清样本为对照样本的16.03倍.结论 所建立的ANP实时荧光定量PCR检测方法具有较高的特异性.肺癌患者胸腔液和血清中ANP的含量明显增高.     

家蝇三龄幼虫血细胞形态的观察

目的通过姬氏染色法以便观察家蝇三龄幼虫的各种血细胞形态。方法取家蝇三龄幼虫血淋巴制作血涂片,姬氏染液染色,油镜观察。结果染色效果良好,家蝇三龄幼虫的各种血细胞结构清晰。可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5种。其中浆血胞可分为大核浆血胞和小核浆血胞两种。结论家蝇三龄幼虫血细胞分为5种。     

房山区家蝇抗药性检测结果

目的为了解掌握房山区家蝇对常见杀虫剂的抗药性,为科学合理使用杀虫剂提供依据。方法玻瓶药膜法。结果2007年房山区家蝇对0.05%残杀威、0.05%高效氯氰菊酯的LD50为3.39、0.09,抗性系数为1784.21,186.54。结论家蝇对0.05%残杀威的抗性高于0.05%高效氯氰菊酯。应根据抗药性检测结果,科学合理使用杀虫剂,提倡综合防制。     

北京市海淀区家蝇对5种杀虫剂的抗性测定和分析

目的了解北京市海淀区现场品系家蝇对5种常用杀虫剂的抗性水平,为合理选择用药提供依据。方法采用点滴法测定抗性水平。结果现场品系家蝇对溴氰菊酯、氯氰菊酯、毒死蜱、乙酰甲胺磷和残杀威的抗性系数分别为40.10,46.48,10.36,15.33和5.43。结论北京市海淀区现场品系家蝇对5种杀虫剂均产生了明显的抗性,但抗性的程度不同,从高到低依次为:氯氰菊酯、溴氰菊酯、乙酰甲胺磷、毒死蜱和残杀威。     

天津市北辰家蝇抗药性调查

目的了解天津北辰区家蝇抗药性情况,指导合理使用杀虫剂。方法用点滴法测定家蝇半数致死量(LD50)。结果北辰区家蝇对5种常用杀虫剂的LD50依次为敌敌畏0.0 530μg/只、高效氯氰菊酯0.0 310μg/只、溴氰菊酯0.0217μg/只、残杀威0.1 902μg/只、氯菊酯0.0 262μg/只。与敏感试虫相比,R/S值敌敌畏为10.0倍、高效氯氰菊酯为50.82倍、溴氰菊酯为22.85倍、残杀威为3.30倍、氯菊酯为2.34倍。结论北辰区野外家蝇对5种常见杀虫剂均产生不同程度的抗药性,以高效氯氰菊酯和溴氰菊酯最为著。建议加强抗药性监测,科学合理用药,采取综合防治措施,减缓抗药性的发展。     

家蝇幼虫血细胞的分类及感染后的形态变化

目的用不同方法观察家蝇三龄幼虫血细胞的分类、各类血细胞计数及感染大肠杆菌后血细胞的形态变化。方法(1)应用姬氏染色结合相差显微镜对家蝇三龄幼虫血细胞形态进行观察并分类。(2)倒置显微镜下观察家蝇三龄幼虫血细胞总数(THC),姬氏染色法计数各类血细胞(DHC)。(3)观察大肠杆菌感染后家蝇幼虫血细胞形态的变化。结果(1)家蝇三龄幼虫血细胞可分为原血胞、浆血胞、粒血胞、珠血胞、类绛血胞5类。其中浆血胞又分为大核浆血胞和小核浆血胞两种。(2)家蝇三龄幼虫血细胞总数为7090±651/μl,其中原血胞约1.2%、浆血胞约50.4%、粒血胞11.4%、珠血胞约36.2%、类绛血胞约0.8%。(3)感染大肠杆菌后,浆血胞发生空泡、细胞变形等变化。结论家蝇三龄幼虫血细胞分为5类,血细胞总数为7090±651/μl,其中浆血胞是主干血细胞,并参与感染后的细胞免疫。     

家蝇幼虫天蚕素基因的克隆与序列分析

目的对家蝇幼虫天蚕素基因进行克隆和序列分析。方法根据Genbank公布的家蝇成虫天蚕素Cecropin基因序列设计一对引物，以家蝇幼虫cDNA库液为模板，PCR扩增该基因的编码区序列。结果家蝇幼虫天蚕素cDNA目的基因的长度为229bp，与成虫防御素基因一致性为96％；最大的ORF位于20bp～211bp，含192bp。编码63个氨基酸。结论初步预测了该基因编码蛋白的化学性质和二级结构，为该基因的重组表达研究打下基础。     

舍蝇幼虫金属硫蛋白的提取和测定

金属硫蛋白是富含半胱氨酸的低分子金属蛋白质。采用高速离心和凝胶过滤法从舒蝇蚴虫体内分离出金属硫蛋白，用银饱和分析法进行了测定。每克舍蝇幼虫中约含金属硫蛋白０．８ｍｇ。结果提示，舍蝇可以用于提取有实用价值的金属硫蛋白，为进一步探讨舍蝇抗杀虫剂和抗衰老机理提供参考。     

滞育家蝇幼虫糖的变化

目的观察家蝇幼虫滞育前后血淋巴中总糖、海藻糖、糖原的变化,探讨家蝇幼虫滞育发生的生化机制。方法低温诱导家蝇幼虫滞育,用蒽酮比色法测定滞育10d、15d、20d组及非滞育组血淋巴总糖、海藻糖、糖原的含量。结果滞育组与非滞育组比较,(1)家蝇幼虫血淋巴总糖含量滞育10d组显著升高,15d组、20d组则降低。(2)血淋巴海藻糖含量滞育10d组、20d组明显升高,15d组差异无显著性。(3)血淋巴糖原含量滞育10d组、15d组降低,20d组则升高。结论家蝇滞育幼虫的糖醇积累型属于海藻糖积累型。     

佳木斯、大庆2市家蝇抗药性的动态分析

目的了解佳木斯和大庆2市家蝇对3种杀虫剂的抗性动态,为科学合理使用杀虫剂,有效提高灭蝇效果提供科学依据。方法采用点滴法测定家蝇LD50。结果从1996-2010年,佳木斯市家蝇对溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯的抗性分别由8.14倍和2.24倍上升至106.57倍和27.77倍,对敌敌畏的抗性由190.82倍下降至26.91倍;大庆市家蝇对溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯的抗性分别由4.00倍和0.78倍上升至60.43倍和12.15倍,对敌敌畏的抗性由8.64倍下降至3.82倍。结论 2市家蝇对溴氰菊酯和二氯苯醚菊酯的抗性呈明显上升趋势,对敌敌畏的抗性呈下降趋势。