乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究

目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。     

增生性瘢痕成纤维细胞生长特性的研究

目的：研究增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞生长特性的差异。方法：应用消化法建立成纤维细胞系，在倒置相差显微镜下观察细胞形态，应用细胞计数方法绘制细胞生长曲线，测定细胞生长速度。结果：增生性瘢痕成纤维细胞比正常皮肤成纤维细胞胞体大，形态不规则。前者细胞倍增时间约为6d，后者细胞倍增时间为3d。细胞融合后前者细胞数为后者的56％。结论：增生性瘢痕成纤维细胞与正常皮肤成纤维细胞是两种不同基因表现型的细胞。     

醋酸曲安缩松及丝裂霉素对瘢痕成纤维细胞整联蛋白表达的影响

目的：了解醋酸曲安缩松、丝裂霉素对瘢痕成纤维细胞整联蛋白表达的影响,初步探讨两种药物抗瘢痕增生的作用机制。方法：体外培养瘢痕组织成纤维细胞,利用β１,α１～４整联蛋白单克隆抗体,通过原位ＥＬＩＳＡ技术检测瘢痕成纤维细胞在不同质量浓度醋酸曲安缩松（１,１０,５０,１００μｇ／ｍｌ）和丝裂霉素（１,５,１０,２０μｇ／ｍｌ）作用下整联蛋白的表达水平。结果：醋酸曲安缩松、丝裂霉素均能不同程度地抑制瘢痕成纤维细胞整联蛋白的表达,抑制效果在实验范围内随药物浓度的增加而提高。其中醋酸曲安缩松对β１,α１～４整联蛋白表达的最大有效抑制浓度（μｇ／ｍｌ）分别为５０,１００,１００,５０,１００,抑制率分别达１６．４４％,３４．７４％,１５．９２％,３７．９５％和３２．１７％;丝裂霉素对它们的最大有效抑制浓度（μｇ／ｍｌ）分别为     

Expression of MMP-3 mRNA in hypertrophic scar fibroblasts and MMP-3 gene transfection

Hypertrophicscarring,whichoftencausescosmeticproblemsandfunctionaldisorders,isacommonclinicalproblemforpatientswhohavesurvivedextensivethermalinjury;itrepresentsthedermalequivalentoffibroproliferativedisorders.Histologically,hypertrophicscarringischaracterizedbyexcessiveaccumulationofextracellularmatrix(ECM)inthewoundllj.However,themechanismforexcessivescarformationhasstillnotwellelucidated.Someresearchershavesuggestedthattheexcessivecollagenaccumulationmightbeduetothetransformationofnormalfi…     

激活蛋白-1调控转化生长因子β1诱导的人肺成纤维细胞Ⅰ型胶原分泌

目的：探讨核转录因子激活蛋白-1（activator protein-1，AP-1）在转化生长因子B1（transfor-ming growth factor-β1，TGF-β1）诱导人肺成纤维细胞I型胶原分泌中的作用。方法：以人肺成纤维细胞HLF-02细胞系为研究对象，给予10μg／L的TGF-β1刺激，于不同时间点收集细胞，采用RT-PCR和Wester blot检测细胞I型胶原转录和分泌；阻断实验中选用AP-1抑制剂姜黄素为阻断剂，凝胶阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）检测细胞内AP-1的DNA结合活性变化，同时Western印迹检测I型胶原分泌变化。结果：TGF-β1能诱导HLF-02细胞I型胶原mRNA的转录和分泌（P〈0.05）；TGF-β1能提高HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力（P〈0.05）；姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞AP-1的DNA结合活力，抑制率分别为17．1％，17．6％，24.2％，31.3％（P〈0.05）；同时，姜黄素能明显抑制TGF-β1诱导的HLF-02细胞I型胶原的分泌，抑制率分别为62．1％，58.8％，62.1％，59.6％（P〈0．05）。结论：核转录因子AP-1参与TGF-β1刺激的HLF-02细胞I型胶原的分泌调控。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

病理性瘢痕和正常皮肤来源成纤维细胞CD90、α-SMA表达的研究

目的检测体外培养的病理性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中CD90、α-SMA表达情况,并分析二者的相关性。方法取手术切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮肤（瘢痕边缘）16例,每组标本中选取特异性较强的组织块各3例,原代培养不同组织来源的成纤维细胞,取第3代细胞制成细胞爬片,免疫荧光双重标记（CD90和α-SMA）细胞,通过计算每系成纤维细胞CD90、α-SMA的荧光值,检测成纤维细胞中CD90、α-SMA的表达情况,并分析CD90和α-SMA表达的关系。结果增生性瘢痕来源成纤维细胞的CD90表达强于正常皮肤的成纤维细胞（P〈0.05）,瘢痕疙瘩来源成纤维细胞的CD90表达和正常皮肤的表达无差异（P〉0.05）;增生性瘢痕与其周围皮肤、瘢痕疙瘩与其周围正常皮肤来源成纤维细胞的α-SMA表达均无差异（P〉0.05）;在同一细胞内CD90和α-SMA具有共区域和共趋势表达的特点。结论增生性瘢痕来源的成纤维细胞存在CD90多量表达的特异表型,瘢痕成纤维细胞CD90和α-SMA有共区域表达的特点和一致的表达趋势,二者可能有一定的协同关系。     

高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用

目的：体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞c-met表达的影响，并观察黄芪药物血清对其的调节作用。 方法：体外培养人肾脏间质成纤维细胞，按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h，采用逆转录-聚合酶链反应方法检测c-met和转化生长因子βl（transforming growth factor-betal，TGF-β1）mRNA表达，蛋白印迹分析检测c-met蛋白的表达。制备含药血清，将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10％黄芪含药血清组，作用24h和48h后，检测c-met蛋白和mRNA表达情况。 结果：与正常对照组比较，高糖组细胞培养12h时c-metmRNA表达增加（P〈0．05），24h达高峰（P〈0．01），之后表达逐渐下降；高糖组细胞培养24h时，TGF-β1的表达开始增加（P〈0．05），96h达到高峰（P〈0．01）。与高糖组以及对照血清组比较，黄芪含药血清可使细胞c-met mRNA和蛋白表达增加（P〈0．01，P〈0．05）。 结论：高糖刺激早期诱导c-met表达，之后表达下降。黄芪可以通过诱导c-met表达延缓糖尿病肾病的进展。     

Effect of vascular endothelial growth factor on fibroblasts from external auditory canal cholesteatoma

BACKGROUND: EACC is a disease of the external auditory canal resulting in destruction of adjacent tissue. However, the role of the surrounding mesenchymal fibroblasts of the perimatrix still remains unclear. In this study we treat isolated fibroblasts of EACC with VEGF and determine FGF-2 levels. We also treat the fibroblast cultures with FGF-2 and measured VEGF levels. METHODS: All EACC cell cultures were obtained from five patients undergoing surgery and used at passage 3. After 1-4 days incubation with 50 ng/mL FGF-2, and 1-8 days incubation with 50 pg/mL VEGF incubation, the expression of the FGF-2 and VEGF protein in the supernatants of the HGF/SF-treated and -untreated culture cell lines was analyzed, respectively. RESULTS: After 8 days of incubation with 50 ng/mL VEGF, the levels of FGF-2 decreased. However, after 4 days of incubation with FGF-2 the VEGF levels increased significantly in treated tissue culture (p <0.05) in comparison to untreated EACC fibroblasts. The total protein concentration showed no significant difference in both cultures (p >0.05). CONCLUSIONS: In summary, exogenous FGF-2 increased fibroblast expression of VEGF, which is a major autocrine mediator of FGF-2-induced angiogenesis and proliferation. However, incubation with VEGF resulted in decrease of FGF-2 levels. Regarding the slow growth of the fibroblasts, they may not be as likely to exhibit a reactive or invasive phenotype as seen in middle ear cholesteatoma fibroblasts.     

病理性瘢痕成纤维细胞的增殖调控及Fas基因突变的筛选

目的 从细胞生物学及基因水平探讨正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩周边部和中央部不同生长特性及瘢痕疙瘩发生的可能机制。方法 （１）取手术切除的正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织各６例为标本,通过细胞培养６～１０代后,应用流式细胞仪、粘附式细胞仪检测不同来源的成纤维细胞ｐ５３蛋白的表达和细胞周期的分布。（２）取瘢痕疙瘩、增生性瘢痕患者的组织及外周血标本,聚合酶链式反应（ＰＣＲ）特异性扩增Ｆａｓ分子外显子     

通过共培养观察醛固酮活化后的肾小管上皮细胞对肾脏成纤维细胞的作用

目的探讨被醛固酮(ALDO)活化的人近端肾小管上皮细胞系(HKC)对人肾间质成纤维细胞(hRIFs)合成Ⅰ型胶原(ColⅠ)的影响。方法利用体外细胞培养及共培养技术进行如下试验。(1)用不同浓度及不同作用时间的外源性ALDO刺激HKC,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附(ELISA)方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA及蛋白质表达。(2)用不同浓度及不同作用时间的安体舒通与内皮素-1(ET-1)共同刺激HKC,同上检测TGF-β1mRNA及蛋白质表达。(3)用外源性ALDO活化的HKC与hRIFs共培养(培养液中加或不加抗TGF-β1抗体),ELISA方法检测hRIFs的ColⅠ合成量。结果(1)外源性ALDO使TGF-β1表达呈剂量依赖及时间依赖性增加。1×10-9及1×10-7mol/LALDO刺激组TGF-β1表达量显著高于0mol/LALDO组(P<0.05或0.01);10-7mol/LALDO刺激不同时间后,TGF-β1表达量显著高于0h组(P<0.05或0.01)。(2)安体舒通使TGF-β1表达呈剂量及时间依赖性减少。10-9、10-7mol/L安体舒通组TGF-β1表达量显著低于0mol/L安体舒通组(P<0.05或P<0.01)。10-9mol/LET-1加10-7mol/L安体舒通与单用10-9mol/LET-1刺激不同时间后,两组间TGF-β1表达,差异有显著意义(P<0.05或0.01)。(3)10-7mol/LALDO刺激HKC12h活化细胞后,再与hRIFs共培养48h,hRIFs对ColⅠ的合成量显著增多(P<0.01);1.0、2.0μg/ml抗TGF-β1抗体能部分抑制此反应(P<0.05)。结论外源性ALDO能使HKC合成TGF-β1增加;内皮素刺激HKC产生的内源性ALDO能促进其自身合成TGF-β1;被ALDO活化的HKC能通过“传话”作用促进hRIFs合成Col-1,该作用部分为TGF-β1介导。     

PDGF-AB对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨ＰＤＧＦ－ＡＢ促进伤口愈合的作用机理及其在瘢痕增生中的作用。方法：取体外培养的人正常皮肤及增生性瘢痕成纤维细胞（ＨＴＳＦＢ）测定生长曲线,用ＭＴＴ法观察ＰＤＧＦ－ＡＢ对其增殖影响的差异。结果：两种细胞生长曲线存在差异,ＰＤＧＦ－ＡＢ对两种成纤维细胞增殖均有明显刺激作用,且均呈剂量依赖性关系,但作用有差异。结论：ＰＤＧＦ－ＡＢ可能通过刺激成纤维细胞增殖促进伤口愈合,同时在瘢痕增生性疾病中起     

半边旗5F对瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的通过对天然药物半边旗5F对瘢痕成纤维细胞凋亡作用的研究,以期探寻新的治疗病理性瘢痕的有效药物。方法以四甲基偶氮唑(MTT)法、流式细胞术和原位末端标记技术检测半边旗5F对成纤维细胞增殖和凋亡的影响。结果半边旗5F对成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性。采用流式细胞术和TUNEL法检测凋亡指数,均呈剂量依赖性增高(P<0.05)。结论半边旗5F对瘢痕成纤维细胞的增殖具有显著的抑制作用,并且能够诱导其发生凋亡,为寻找有效治疗增生性瘢痕的药物进行了新的尝试。     

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用。方法 将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中，其中25mmol／L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF，分别于不同时间段收集细胞，采用MTT法检测细胞增殖．流式细胞仪检测细胞周期结果高糖作用早期细胞增殖旺盛，随着高糖的持续刺激，细胞增殖发生停滞，同时细胞出现肥大外源性加入HGF后，对高糖造成的细胞损伤具有修复作用。结论 高糖作用下的肾间质成纤维细咆早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞，出现肥大HGF可以通过促进细胞增殖，抑制由于高糖诱导的细胞肥大。     

鞘氨醇激酶在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用

目的 探讨鞘氨醇激酶(SphK)1和SphK2在人瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其作用.方法 取12例瘢痕疙瘩患者手术切除的瘢痕疙瘩及其周围正常皮肤标本,原代组织块法培养成纤维细胞,分为正常皮肤组、瘢痕疙瘩组和瘢痕疙瘩加转化生长因子β1(TGF-β1)组(瘢痕疙瘩+TGF-β1组).用免疫荧光法观察各组细胞中SphK1和SphK2蛋白的分布;实时PCR法检测SphK1和SphK2 Mrna的表达;蛋白质印迹法检测SphK1和SphK2蛋白的表达.结果 Sphk1蛋白在3组成纤维细胞中均主要分布于细胞核;而Sphk2蛋白在细胞核和胞质中均有表达.瘢痕疙瘩组SphK1mRNA和蛋白表达(分别为0.0608±0.0190、0.8308±0.1093)明显高于正常皮肤组(分别为0.0383±0.0147、0.6800±0.1126,均P＜0.05),但明显低于瘢痕疙瘩+TGF-β1组[分别为0.0790±0.0280(P＜0.05)、1.4267±0.1938(P＜0.01)];SphK2 Mrna和蛋白在3组中的表达差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖过程中具有重要作用.TGF-β1可促进SphK1在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达,提示SphK1可能参与了TGF-β信号转导通路的调节.     

内皮素1及内皮素受体A拮抗剂对人肾间质成纤维细胞的作用

目的 探讨内皮素1（ET－1）受体A拮抗剂（ETaRA）对人肾间质成纤维细胞（hRIF）的作用。方法 在体外培养的hRIF中进行如上试验：（1）MTT比色法检测细胞增殖情况。（2）逆转录多聚酶链反应法（RT－PCR）观察Ⅰ型胶原（ColⅠ）、转化生长因子β（TGF－β）、基质金属蛋白酶1（MMP－1）、金属蛋白酶组织抑制物1,2（TIMP－1,TIMP－2）mRNA表达的变化。结果 （1）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,24h）可以促进hRIF增殖,10^-7mol/L增殖最显著（P＜0.05）,呈剂量相关;10^-7mol/L刺激8h,hRIF即明显增殖,24h达高峰（P＜0.01）。（2）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,16h）可上调hRIFr ColⅠ、TGF-β、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达,10^-7mol/L作用最显著（P＜0.05）,呈剂量相关。10^-7mol/L刺激hRIFs时,ColⅠmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;TGF－βmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）且达高峰;TIMP－1及TIMP－2mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;MMP－1mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,且达高峰。（3）上述作用可特异地被ETaRA阻断。结论 ET－1可刺激hRIF增殖,并上调ColⅠ、TGF－β、MMP－1、TIMP－1、TIMP－2mRNA的表达,ETaRA可抑制上述反应。ET－1可能在上参与肾间质纤维化过程。     

茶多酚对原代培养的大鼠皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长的影响

目的　探讨茶多酚对原代培养的皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长作用的影响。方法　利用原代培养的两种主要的皮肤细胞———角朊细胞和成纤维细胞,采用丙酮酸比色法、ＴＢＡ比色法和ＤＴＮＢ（双硫代对硝基苯甲酸）法测定细胞培养的上清液胞浆酶（ＬＤＨ）释放情况、脂质过氧化产物（ＭＤＡ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）,并测定培养细胞的生长情况,对茶多酚在皮肤中可能起到的作用进行评价。结果　在加入茶多酚后不同时间,发现茶多酚具有保护细胞膜的功能,即减少ＬＤＨ的释放、减少ＭＤＡ产生、增加ＧＳＨＰｘ含量、促进细胞生长。结论　体外实验表明茶多酚具有促进皮肤细胞生长、抗脂质过氧化的功效,其最低有效作用浓度为０．０５％～０．１％。     

ERK通路在单核巨噬细胞集落刺激因子调控成纤维细胞血管内皮生长因子表达中的作用

目的研究单核巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）对成纤维细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,初步探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路对此过程的调控作用。方法在对数生长期人皮肤成纤维细胞培养液中添加GMCSF和（或）ERK通路特异性抑制剂（PD98059）进行干预,实验分为空白对照组、PD98059组、GMCSF组及PD98059＋GMCSF组。收集各组细胞及培养上清液,采用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测各组人皮肤成纤维细胞内VEGFmRNA和蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌水平。结果与空白对照组和PD98059组比较,GMCSF组人皮肤成纤维细胞内VEGFmRNA和蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中VEGF蛋白质量体积浓度明显升高（P〈0.05）;而在GMCSF＋PD98059组中,人皮肤成纤维细胞内和细胞培养上清液中相应指标表达水平均显著低于GMCSF组（P〈0.05）。结论 GMCSF可促进人皮肤成纤维细胞VEGF表达,ERK通路在此过程中发挥重要作用。     

蛋白激酶C抑制剂对精氨酸升压素调控心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响

目的　观察蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红 (chelerythrine)对精氨酸升压素 (AVP)介导的心脏成纤维细胞 (CF)增殖及p2 7蛋白表达的影响 ,探讨AVP促CF增殖的细胞内信号传导机制。方法　以培养的新生SD大鼠CF为实验模型 ,实验分 3组基础状态组 ;10 -7mol/LAVP组 ;10 -7mol/LAVP +10 -6mol/L白屈菜红组。每组 4只SD大鼠。采用胰酶消化、差速贴壁法培养CF ,四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖 ,碘化丙啶标记细胞DNA、p2 7蛋白的单抗和标记了FITC的二抗标记细胞内的p2 7蛋白 ,采用流式细胞分析仪 (FCM)技术测定细胞周期及p2 7蛋白表达的阳性率。结果　 ( 1)10 -7mol/LAVP和 10 -6mol/L白屈菜红共同作用 48h ,MTT比色法测定的CF的A值 ( 0 32± 0 0 1)明显低于 10 -7mol/LAVP组 ( 0 39± 0 0 1,P <0 0 1) ;( 2 )AVP与白屈菜红共同作用组CF的S期细胞百分率 ( 4 4%± 1 7% )和细胞增殖指数 ( 2 0 9%± 1 2 % )分别明显低于AVP组 ( 15 5 %± 1 4%和31 4%± 1 5 % ) ,而G0 /G1期细胞百分率 ( 79 1%± 1 2 % )明显高于AVP组 ( 6 8 6 %± 1 5 % ) ,两组间比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;( 3)AVP与白屈菜红共同作用组CF的p2 7蛋白表达阳性率( 91 7%± 2 2 % )明显高于AVP单独作用组 ( 6 3 3%± 1 9% ) ,二     

ERK通路在单核巨噬细胞集落刺激因子调控成纤维细胞血管内皮生长因子表达中的作用

目的 研究单核巨噬细胞集落刺激因子（GMCSF）对成纤维细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响,初步探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路对此过程的调控作用。方法 在对数生长期人皮肤成纤维细胞培养液中添加GMCSF和（或）ERK通路特异性抑制剂（PD98059）进行干预,实验分为空白对照组、PD98059组、GMCSF组及PD98059+GMCSF组。收集各组细胞及培养上清液,采用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测各组人皮肤成纤维细胞内VEGF mRNA和蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白分泌水平。结果 与空白对照组和PD98059组比较,GMCSF组人皮肤成纤维细胞内VEGF mRNA和蛋白相对表达量以及细胞培养上清液中VEGF蛋白质量体积浓度明显升高（P<0.05）;而在GMCSF+PD98059组中,人皮肤成纤维细胞内和细胞培养上清液中相应指标表达水平均显著低于GMCSF组（P<0.05）。结论 GMCSF可促进人皮肤成纤维细胞VEGF表达,ERK通路在此过程中发挥重要作用。