GATA-1调节血细胞发育成熟的机制

GATA-1是GATA超家族的重要成员之一,是一种识别GATA基序并与之结合的重要转录调节因子.GATA-1通过促进红系和巨核系特异性基因的转录从而促使红系和巨核系细胞的发育成熟.特别是近来又发现GATA-1也是肥大细胞、嗜酸细胞分化发育,基因表达的重要调控因子.     

造血转录因子GATA-3的研究进展

转录因子GATA-3是具有锌指结构的GATA家族中的一员,它的表达范围非常广泛,而且与造血细胞发育、分化的关系十分密切。GATA-3是T祖细胞发育中所必需的转录因子;可调控Th1和Th2细胞的生成;还可调节一些细胞因子的表达以及调控嗜酸性细胞相关基因的表达,并与白血病、肿瘤等疾病的形成有一定相关。     

白血病骨髓基质细胞中GATA-1和GATA-2基因的表达特点

为了解转录因子GATA-1和GATA-2基因在白血病和正常骨髓基质细胞(BMSC)中表达的情况,采集了42例白血病患者的骨髓标本及34例正常骨髓标本并分离骨髓单个核细胞,在体外扩增培养后收集悬浮细胞(骨髓细胞)和扩增后的贴壁细胞(BMSC),应用RT-PCR-ELISA方法分别检测GATA-1和GATA-2基因的表达情况,并对其相对表达水平进行半定量分析.结果发现,GATA-1和GATA-2基因在正常和白血病的BMSC和骨髓细胞中均有一定的表达.在BMSC中急性淋巴细胞白血病(ALL)组的GATA-1基因表达率(857%)与正常组(882%)相近,而急性髓性白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)组的GATA-1表达率(55.6%和41.2%)均比正常组低(P=0.008,0.000),且ALL的BMSC中GATA-1基因表达水平＞AML＞正常＞CML(P均＜0.05);而各白血病组BMSC中GATA-2的表达率和表达水平与正常组相比均无显著性差异(P均＞0.05).骨髓细胞中AML组的GATA-1基因表达水平＞正常＞ALL＞CML,AML组的GATA-2基因表达水平＞CML＞ALL＞正常(P均＜0.05).AML、CML和正常组的BMSC和骨髓细胞中均以GATA-2的表达占优势.可以推论,转录因子GATA-1和GATA-2基因在正常和白血病BMSC的表达可能影响骨髓微环境的造血调控作用.是否对白血病的发生发展有一定的影响也值得进一步探索.     

CML中转录因子GATA-3的表达和突变分析

应用RT-PCR分析转录因子GATA-3基因在慢性粒细胞白血病(CML)中的表达情况。表达GATA-3基因的标本进一步应用单链构象多态性(SSCP)分析GATA-3基因的锌指结构区,发现异常电泳迁移带的标本进行序列分析。结果显示:18/28例CML外用血单个核细胞有GATA-3基因表达,SSCP分析发现一例CML出现异常迁移带,序列分析显示为基因点突变引起精氨酸改变为赖氨酸。结果提示,GATA-3表达于大多数GML中,并存在突变情况。     

支气管哮喘小鼠支原体感染模型肺组织中T-bet、GATA-3和NF-κB转录因子的变化

目的:检测支气管哮喘支原体肺炎(Mycoplasma pneumonia,MP)感染小鼠模型肺组织的T-box转录因子(T-box expressed in T cells,T-bet)、GATA结合蛋白3(GATA binding protein-3,GATA-3)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)转录因子的水平,分析支气管哮喘MP感染时这些主要转录因子的变化及其与哮喘发病间的关系。方法:健康雌性BALB/c小鼠,分为卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)致敏合并MP感染组(支气管哮喘MP感染组)和OVA致敏组(支气管哮喘组),另设正常对照组,每组15只。运用荧光半定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测各组小鼠模型肺组织中T-bet、GATA-3和NF-κB的表达。结果:支气管哮喘MP感染组和支气管哮喘组小鼠模型肺组织中GATA-3的表达明显高正常对照组(P<0.01),而2组的T-bet表达明显低于正常对照组(P<0.01)。支气管哮喘MP感染组小鼠模型肺组织中NF-κB的表达高于支气管哮喘组及正常对照组(P均     

转录因子GATA-3在T细胞发育过程中的作用

脊椎动物的造血是一个极其复杂的过程。机体内多能造血干细胞的相关基因在各种不同转录因子的参与下通过诱导或沉默其表达从而促使造血干细胞向各系细胞分化与成熟。GATA-3属Ⅳ型锌指蛋白GATA家族,是辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子,它不但直接参与T淋巴细胞的分化调控,诱导Th2细胞的生成,亦可通过直接或间接作用参与红细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞、NK细胞的分化调控,同时对CD8+T淋巴细胞分化成熟产生抑制作用。     

环孢菌素A对慢性再生障碍性贫血患者T-bet、GATA-3、相关信号分子、细胞因子及Th1/Th2的影响

本研究探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(CAA)免疫发病中的作用,从Th细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平研究环孢菌素(CsA)治疗慢性AA的免疫调节机理。采用实时荧光定量PCR(real-time FQ-PCR)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达;采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平,并与正常人进行比较。结果表明:慢性AA患者PBMNC T-bet、STAT4mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、Th1/Th2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(p0.01),经CsA治疗6月后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降,但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,GATA-3、STAT6mRNA表达、Th2比例、IL-4表达在治疗前后与正常人比较均无明显差异(p0.05)。结论:IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及Th平衡向Th1型偏移在AA免疫异常的发病过程中起到关键的作用;CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及纠正Th1过度极化而减轻AA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。     

血必净对心肺复苏后转录因子GATA-3和T-bet表达调节的实验研究

目的 探讨血必净对心肺复苏后转录因子GATA-3和T-bet表达的调节作用.方法 建立心肺复苏大鼠模型,30只SD大鼠动物随机(随机数字法)分为三组:假手术组(B组),仅进行麻醉和气管切开插管、血管穿刺,不进行窒息及心肺复苏;常规复苏组(C组),常规复苏+生理盐水4 mL/kg;血必净治疗组(D组),常规复苏+血必净4mL/kg.动态观察血清GATA-3和T-betmRNA表达及白介素-12(IL-12)、白介素-4(IL-4)、r-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的变化.多组间均数比较采用单因素方差分析,方差齐则采用成组设计资料的t检验,两两比较用SNK法;如方差不齐,则采用随机区组设计的秩和检验(Wilcoxon检验),P<0.05为差异有统计学意义.结果 C,D组复苏后6 h与对照组、复苏后即刻比较,IL-12,IFN-γ,TNF-α水平均升高(P<0.01);C组复苏后6 h GATA表达下调(P>0.05),T-bel表达上调(P<0.01),GATA-3/T-bet下降(P<0.05).D组复苏后6 h T-bet表达上调(P>0.05),GATA表达上调(P<0.01),GATA-3/T-bet升高(P<0.05);D组复苏后6h与C组同时点比较,IL-12,IFN-γ,TNF-α水平低于C组(P<0.01),GATA-3表达上调、T-bet表达下调、GATA-3/T-bet升高均有统计学意义(P<0.01).结论 心肺复苏后存在转录因子T-bet和GATA-3失衡表达,血必净可调节GATA-3/T-bet趋向平衡及细胞因子IL-12,IFN-γ,TNF-α水平.     

转录因子GATA-3在T细胞发育过程中的作用

脊椎动物的造血是一个极其复杂的过程。机体内多能造血干细胞的相关基因在各种不同转录因子的参与下通过诱导或沉默其表达从而促使造血干细胞向各系细胞分化与成熟。GATA-3属Ⅳ型锌指蛋白GATA家族，是辅助性T细胞(Th2)特异性转录因子，它不但直接参与T淋巴细胞的分化调控，诱导Th2细胞的生成，亦可通过直接或间接作用参与红细胞、巨核细胞、嗜酸性粒细胞、NK细胞的分化调控，同时对CD8 T淋巴细胞分化成熟产生抑制作用。     

人参皂甙诱导巨核细胞GATA-2转录因子磷酸化

目的：探讨与造血祖细胞增殖有关的GATA转录调控蛋白经人参皂甙(GS)诱导后的磷酸化状况。方法：取生长因子依赖MO7e巨核细胞株经GS．血小板生成素(TPO)或自介素(IL-3)刺激处理后、提取核蛋白作电泳带移动阻滞试验(EMSA)、抗体胶移动试验(Antibody Gel Supershift Assay)、免疫沉淀和蛋白免疫印迹法(Western Blot)。结果：GS、TPO或IL-3均能诱导MO7e细胞核内GATA-2转录调控蛋白含量增加．且呈磷酸化状态。结论：GS能够诱导GATA2转录因子的磷酸化，GATA-2参与造血细胞对GS反应的信号传递途径。     

荧光定量聚合酶链反应检测GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人骨髓间充质干细胞中的表达

背景:GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在骨髓造血及成脂调控机制中起重要作用。目的:观察GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人间充质干细胞中的表达。方法:收集6例再生障碍性贫血患者及6位正常人骨髓液各10mL,Ficoll贴壁法分离培养骨髓单个核细胞,达70%~80%融合后扩增传代。取传至第3代的间充质干细胞,应用流式细胞仪进行鉴定。提取总RNA,比较各组基因与内参基因之间的差别。荧光定量聚合酶链反应检测GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人间充质干细胞中的表达量。结果与结论:与正常人间充质干细胞相比,再生障碍性贫血患者间充质干细胞的GATA-2和干细胞因子基因表达量降低(P=0.012,0.039),过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因表达量升高(P=0.035);两组GATA-1基因表达量差异无显著性意义。提示GATA-2、干细胞因子基因的异常表达可能影响AA患者骨髓微环境的造血调控作用;过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的异常表达可能解释再生障碍性贫血患者骨髓易成脂的原因。     

转录因子GATA-2对iASPP基因的转录调控研究

癌基因iASPP促进细胞增殖、抑制细胞凋亡,其转录起始位点上游序列有转录因子GATA-2的假定结合位点,GATA-2在造血干/祖细胞的增殖和分化中起重要作用。本研究旨在探讨GATA-2对iASPP的转录调控作用。首先检测了部分白血病细胞系中iASPP和GATA-2蛋白的表达,然后构建带有GATA-2开放读码框的真核表达载体与带有iASPP转录起始位点上游3000 bp至下游500 bp序列中GATA-2假定结合位点的荧光素酶报告载体,共转染HEK293和CV-1细胞,检测荧光素酶活性,并对荧光素酶活性上调的结合位点区进行染色质免疫共沉淀实验。结果显示,白血病细胞系中iASPP高表达的细胞大多存在GATA-2的高表达;GATA-2对iASPP报告基因荧光素酶活性有显著影响,并呈现明显的＂剂量-效应＂关系。当pCMV5-GATA2转染剂量上升至100 ng时,iASPP荧光素酶活性在HEK293细胞中上调到2倍;此转录激活作用在CV-1细胞中尤为显著,荧光素酶活性上调可达6.7。染色质免疫共沉淀结果证实GATA-2与iASPP转录起始区nt-361～-334有特异性结合。结论：转录因子GATA-2可以与iASPP的转录调控区结合,并促进iASPP基因转录。     

三氧化二砷影响EVI1基因调控造血转录因子的体外研究

目的:观察三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)在体外影响反转录病毒整合位点1基因(ecotropic viral integration site-1,EVI1)基因对造血转录因子的调控作用。方法:实验选取EVI1高表达的急性髓系白血病细胞株THP-1,利用健康成人外周血单个核细胞作为对照,通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RFQ-PCR),检测EVI1基因及造血转录因子GATA1、GATA2、RUNX1、MPO、LMO2、CMYB、PU.1和SCL的m RNA相对表达量。分别以1μmol/L、3μmol/L、5μmol/L的ATO溶液处理THP-1细胞株后,再通过反转录RFQ-PCR检测EVI1基因及造血转录因子的m RNA相对表达量。结果:通过反转录RFQ-PCR检测证实,存在EVI1基因的THP-1细胞中GATA2和CMYB基因的表达上调,而GATA1、RUNX1、MPO、LMO2、PU.1及SCL基因的表达水平下调。ATO对EVI1基因的下调作用具有浓度与时间依赖性,并对其他造血转录因子进行调控。结论:通过体外研究发现,高表达EVI1基因的THP-1细胞有GATA2基因的表达上调,同时存在其他造血转录因子的表达异常,与促进原始细胞增殖及髓系、红系的分化成熟受抑密切相关。ATO可特异性地下调EVI1基因的表达,并抑制GATA2转录因子的激活。     

GATA-3在乳腺癌发生转移过程中的作用研究

目的研究锌指结构转录因子GATA家族的一员(GATA-3)在乳腺癌发生转移过程中的作用。方法统计分析2010年5月至2015年5月唐山市滦县人民医院收治的160例乳腺癌患者的临床资料。结果组内比较,乳腺癌组织中浸润性导管癌、浸润性小叶癌、导管原位癌、黏液腺癌、派杰病、浸润性神经内分泌癌的GATA-3阳性表达率之间差异均无统计学意义(P0.05),癌旁乳腺组织中导管上皮细胞的GATA-3阳性表达率显著高于肌上皮细胞,差异有统计学意义(P0.05);组间比较,乳腺癌组织的GATA-3阳性表达率显著低于癌旁乳腺组织,差异有统计学意义(P0.05);乳腺癌组织中GATA-3表达和雌激素受体表达、组织分级呈显著正相关关系(P0.05),和淋巴结转移呈显著负相关关系(P0.05),但是和年龄、肿块大小无相关性(P0.05)。结论 GATA-3在乳腺癌组织中低表达,与其发生转移过程密切相关,值得临床充分重视。     

GATA-2与免疫球蛋白重链胚系基因Cμ在白血病细胞中的表达及其意义

应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)对不同类型白血病患者骨髓(BM)或外周血(PB)细胞GATA-2和IgH胚系基因CμmRNA的表达进行检测,探讨GATA-2与IgH胚系基因Cμ在白血病细胞中的表达与共表达及意义.在正常人BM和PB细胞中未检测到GATA-2和IgH胚系基因Cμ.在急性髓性白血病(AML)和急性淋巴细胞白血病(ALL)以及慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)GATA-2检出率分别为91.3%,75%和83.3%,而IgH胚系基因Cμ检出率分别为47.8%,41.6%和5.6%,慢性粒细胞白血病加速期(AP)和急变期(BC)全部表达GATA-2,其中部分病例表达IgH胚系基因Cμ.47.8%的AML,41.6%的ALL,5.6%的CML-CP和33.3%的CML-AP及40%的CML-BC患者共表达GATA-2和IgH胚系基因Cμ.GATA-2+IgH胚系基因Cμ+AML和ALL细胞表面标志以HLA-DR的表达为主.GATA-2作为造血系统的转录调节因子在白血病中的异常高表达是一个常见现象,胚系基因的活化与白血病的发生密切相关,是白血病发生机制中的另一重要环节.GATA-2与IgH胚系基因Cμ的共表达提示白血病的发生是多种机制共同作用的结果.GATA-2+IgH胚系基因Cμ+白血病(包括AML,ALL,CLL)以HLA-DR的表达占优势,推测其起源在早期造血干/祖细胞水平.     

荧光定量聚合酶链反应检测GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人骨髓间充质干细胞中的表达

背景：GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在骨髓造血及成脂调控机制中起重要作用。目的：观察GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人间充质干细胞中的表达。方法：收集6例再生障碍性贫血患者及6位正常人骨髓液各10mL,Ficoll贴壁法分离培养骨髓单个核细胞,达70%~80%融合后扩增传代。取传至第3代的间充质干细胞,应用流式细胞仪进行鉴定。提取总RNA,比较各组基因与内参基因之间的差别。荧光定量聚合酶链反应检测GATA-1、GATA-2、过氧化物酶体增殖物激活受体γ和干细胞因子基因在再生障碍性贫血患者及正常人间充质干细胞中的表达量。结果与结论：与正常人间充质干细胞相比,再生障碍性贫血患者间充质干细胞的GATA-2和干细胞因子基因表达量降低（P=0.012,0.039）,过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因表达量升高（P=0.035）;两组GATA-1基因表达量差异无显著性意义。提示GATA-2、干细胞因子基因的异常表达可能影响AA患者骨髓微环境的造血调控作用;过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的异常表达可能解释再生障碍性贫血患者骨髓易成脂的原因。     

溃疡性结肠炎患者外周血T-bet/GATA-3基因平衡的检测

目的研究溃疡性结肠炎(UC)患者Th1、Th2类细胞因子和转录因子T-bet和GATA-3的相关性,探讨它们在UC患者发病机制中的作用。方法选择40例UC患者,分离外周血单核细胞,分别用酶联免疫吸附实验和RT-PCR技术检测UC患者血清中的IFN-γ、IL-4和外周血单核细胞转录因子T-bet和GATA-3的表达状态,同时以40例健康人作对照。结果 UC患者血清中IL-4水平较健康人降低,IFN-γ的水平升高;GATA-3mRNA表达水平下降,T-betmRNA表达水平升高。结论 UC患者外周血Th1/Th2比例失衡,可能与外周血中GATA-3基因表达下降、T-bet基因表达升高相关;T-bet/GATA-3的表达失调可能引起UC患者的细胞免疫紊乱。     

儿童再生障碍性贫血骨髓间充质干细胞GATA-2基因表达的研究

目的 本研究旨在探索儿童再生障碍性贫血（AA）骨髓间充质干细胞（MSC）GATA-2基因的表达及意义.方法 采集38例AA患儿骨髓标本及20例正常儿童骨髓标本,分离骨髓单个核细胞后体外扩增培养骨髓基质细胞,实时定量PCR（QRT-PCR）方法检测AA儿童免疫抑制治疗前后GATA-2基因表达的变化.结果 AA儿童免疫抑制治疗前GATA-2基因表达水平明显低于正常对照组（P＜0.05）,免疫抑制治疗2年后对治疗有反应的AA儿童GATA-2表达水平高于发病时,且与正常对照组表达水平无统计学差异（P〉0.05）.结论 GATA-2基因的低表达可能影响AA患儿骨髓微环境的造血调控作用.     

系统性红斑狼疮合并血小板减少患者GATA-1基因的表达及其临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)合并血小板减少患者骨髓有核细胞GATA-1基因的表达及其临床意义。方法:收集SLE合并血小板减少患者48例,ELISA法检测抗血小板膜糖蛋白GPⅡbⅢ抗体及血小板生生成素受体抗体等血小板相关抗体。实时荧光定量PCR法检测上述抗体阴性SLE合并血小板减少患者8例(血小板减少组)、SLE血小板正常患者10例(病例对照组)及健康志愿者10例(健康对照组)骨髓有核细胞GATA-1 mRNA的表达情况。结果:血小板减少组患者骨髓有核细胞GATA-1 mRNA的表达明显低于病例对照组及健康对照组,3组之间差异具有统计学意义。结论:GATA-1基因转录因子在SLE合并血小板减少患者骨髓有核细胞中表达降低。GATA-1低表达引起造血干细胞成熟分化障碍可能是SLE患者血小板减少的发病机制之一。     

心脏转录因子GATA结合蛋白4真核表达质粒的构建

背景:有研究表明心脏转录因子GATA结合蛋白4(GATA4)与先天性心脏病的发生有密切的关系,但其机制不明,而目前尚未查及GATA4真核表达质粒构建类的报道.目的:构建人类心脏特殊转录因子GATA4的真核表达质粒.方法:对重组质粒pUC57-GATA4进行酶切获得GATA4基因编码区序列,将真核表达载体pCMV-Myc和GATA4基因在双酶切后用T4连接酶连接,构建重组质粒pCMV-Myc-GATA4,转化至大肠杆菌,提取质粒后经聚合酶链反应、双酶切及测序鉴定.结果与结论:实验成功酶切重组质粒获得GATA4基因编码区约1.3 kb的目的片段,聚合酶链反应和酶切鉴定以及基因测序结果显示,构建的重组真核表达质粒中含有正确的GATA4基因序列,证实成功构建了含有GATA4基因的真核表达重组质粒.