血管钠肽抑制低氧刺激心成纤维细胞c-fos的表达

目的　研究血管钠肽 (VNP)对低氧作用时心成纤维细胞增殖的影响 ,并对其机制进行探讨 .方法　分离纯化乳鼠心成纤维细胞 ,随机分为 4组 :对照组、低氧组 (2 0～ 30m L· L- 1 )、VNP组 (10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 )和 VNP (10 - 6mol· L- 1 ) +低氧组 .以免疫组织化学染色方法观察各组 c-Fos的表达情况 ,采用激光共聚焦方法测定了 [Ca2 + ]i 水平 .结果　 1低氧组较对照组可以显著升高 Fos样免疫阳性细胞数及染色强度 (P<0 .0 5 ) ;2 VNP预处理心成纤维细胞可以减弱低氧的作用 (P<0 .0 5 vs低氧组 ) ,但 Fos的表达量仍高于对照组 (P<0 .0 5 ) ;3对照组 [Ca2 + ]i 水平无显著变化 ,低氧组 [Ca2 + ]i 水平显著升高 ,而 VNP能使升高的 [Ca2 + ]i 水平较对照组和低氧组显著降低 (P<0 .0 5 ) .结论　 VNP能减弱低氧对心成纤维细胞生长的刺激作用 ,其机制可能与 Ca2 + 等信号转导分子及 c- fos表达有关     

血管钠肽抑制低氧诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的　观察血管钠肽 (Vasonatrin peptide,VNP)对低氧状态下大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)增殖及胶原合成的影响 ,探讨其防治低氧所致心肌间质结构重建的作用机制 .方法　培养新生大鼠 CFs,应用流式细胞仪分析细胞周期 ,以 3H- proline掺入率反映胶原合成速率 .结果　单纯低氧不改变 CFs的细胞周期 ,但增加低浓度血清 (2 5 m L· L- 1 )作用基础上的细胞增殖指数 PI(S+G2 / M) / (S+G2 / M+G0 / G1 )(P<0 .0 1) ,10 - 6 m ol· L- 1的 VNP抑制低氧诱导的 PI增加(P<0 .0 1) .低氧可以增加基础胶原合成 (增加 19.6 % ,P<0 .0 5 ) ,也增加低浓度血清 (2 5 m L· L- 1 )诱导的胶原合成速率 (增加 37.2 % ,P<0 .0 1) . 10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 的 VNP浓度依赖性抑制低氧诱导的胶原合成速率 (P<0 .0 1) .结论　低氧增加胶原合成以及血清刺激的 CFs的增殖反应 ,VNP抑制上述作用 ,从而抑制低氧引起的心肌纤维化     

血管钠肽对慢性低氧性肺动脉高压的治疗作用

目的：研究血管钠肽（vasonatrin peptide,VNP)、C型钠尿肽（C-type natriuretic peptide,CNP）和心房钠尿肽（atrial natriuretic peptide,ANP）对大鼠慢性低氧性肺动脉高压（hypoxic pulmonary hypertension,HPH）的治疗作用及其机理。方法：采用整体给药和离体血管灌流方法,测定肺血流动力学参数和离体肺动脉的等长张力变化。结果：VNP,CNP和ANP都能有效降低大鼠慢性HPH的平均肺动脉压（mPAP),P＜0．05－P＜0．01;除CNP外,VNP和ANF均能明显降低肺血管阻力（PVR）,P＜0．05－P＜0．01,其中VNP降低mPAP和PVR的作用明显大于CNP和ANP;VNP,CNP和ANP对体循环血压（mCAP）和心率（HR）均无明显影响,P＜0．05,VNP,CNP和ANP对离体肺动脉均有浓度依赖性舒张作用,但不受内皮细胞的影响;在浴槽内预先加入优降糖或心得安可显降低肺动脉对VNP和CNP的最大舒张反应（Rmax）,P＜0．05－P＜0．05,而对ANP却无明显影响。结论：VNP对大鼠慢性HPH具有显的治疗作用,它是一个新型的、强效的、非内皮依赖性的血管松驰多肽,较CNP和ANP更具有潜在的临床应用价值。     

糖皮质激素致星形胶质细胞内钙浓度的快速升高

目的:研究应激水平的糖皮质激素(GC)在早期快速效应中对星形胶质细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响及作用机制. 方法:原代培养新生Wistar大鼠海马星形胶质细胞,用1 μmol/L的皮质酮(CORT)处理星形胶质细胞,激光共聚焦显微镜下观察CORT快速作用致星形胶质细胞内游离[Ca2 ]i的变化,并设立N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA),受体拮抗剂5-甲基二氢丙环庚烯亚胺马来酸(MK-801),牛血清白蛋白偶联CORT (BSA-CORT)及无细胞外钙等干预组,进一步检测[Ca2 ]i变化. 结果:与未处理对照细胞(141.2±4.7)相比,CORT可快速介导星形胶质细胞内荧光强度增加(177.1±3.8, P＜0.01),但细胞外钙为零时无明显变化(148.5±6.3);NMDA受体激活可使荧光强度进一步增强(195.3±7.2,P＜0.01),NMDA受体拮抗剂MK-801可部分拮抗荧光强度升高(186.4±1.8);BSA-CORT可产生与CORT类似的效应(200.7±12.2,P＜0.01). 结论:应激水平的GC在早期可快速增加星形胶质细胞胞内[Ca2 ]i,激活NMDA受体是其中的重要机制之一.     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用

目的：观察三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的作用。方法：体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞，分别以400μg／mL和800μg／mLPNS处理细胞，在激光共聚焦显微镜下观察细胞内钙离子浓度的变化。结果：随着给药浓度的增加，和空白对照组相比，各给药组的细胞内钙离子浓度均有所下降（P〈0．05），两给药组之间差异也具有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总甙能够抑制人增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度，并具有剂量依赖效应。     

炎症反应及细胞内钙浓度异常升高在脓毒症发展中的作用分析

探讨炎症反应及细胞内钙浓度异常升高(钙超载)在脓毒症发展中的作用。构建血管内皮细胞损伤模型,后使用基质相互作用分子1(Stim1)抑制表达载体、Tlr4抑制表达载体转染细胞,再通过脂多糖活化Toll样受体4(Tlr4)抑制表达载体转染12 h,脂多糖刺激6 h,使用核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂PDTC 以及Tlr4抑制表达载体转染1 h、12 h。结果显示脂多糖刺激人脐静脉内皮细胞后Tlr4、髓质分化蛋白2、NF-κB mRNA相对表达量明显高于刺激前(P<0.05)。Stim1抑制表达载体转染可显著逆转脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞外钙离子内流。Tlr4抑制表达载体+脂多糖组、Tlr4及Stim1抑制表达载体+脂多糖组钙离子浓度明显低于脂多糖组(P<0.05)。 实验表明,下调Tlr4、NF-κB、Stim1表达可显著抑制脂多糖诱导的血管内皮细胞炎症反应和钙超载,缓解脓毒症病情进展。     

血管钠肽对慢性缺氧大鼠离体血管条的舒张作用

目的：观察血管钠钛（ＶＮＰ）对慢性缺氧大鼠离体肺动脉，腹主动脉和腹腔静脉的舒张作用及内皮细胞的存在与否、ＡＴＰ敏感性钾通道和β受体阻断剂对其作用的影响。方法：采用离体血管灌注方法，以去甲肾上腺素（ＮＥ，１０μｍｏｌ／Ｌ）使血管环收缩的效应为基础，测定ＶＮＰ对血管环张力的影响，求出最大舒张反应值。     

哇巴因对大鼠血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨哇巴因对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）内Ca2+浓度的影响。方法用组织
块贴壁法进行大鼠胸主动脉VSMCs原代培养,用免疫组织化学方法进行细胞鉴定,采用放射自显影术检测哇巴因对大鼠胸主动
脉VSMCs的结合能力,采用Fluo 3-AM（钙离子荧光探针）法研究哇巴因在短时间内对VSMCs细胞内Ca2+浓度的影响,探讨不同
浓度的钠泵α2亚单位截断性片段的拮抗作用。结果（1）放射自显影术检测结果显示,哇巴因与VSMCs间有一定的结合能力。
在0.1~100 nmol/L浓度范围,随着哇巴因浓度的增加,VSMCs与哇巴因的结合能力增加;（2）Fluo 3-AM检测VSMCs内Ca2+浓度
结果显示：不同浓度的哇巴因在短时间内能够引起VSMCs内Ca2+浓度的变化。在0~3200 nmol/L浓度范围,细胞内Ca2+离子浓
度会随着哇巴因浓度的增加呈现出逐渐升高的趋势;（3）不同浓度的钠泵α2亚单位截断性片段可以拮抗哇巴因引起的VSMCs内
Ca2+浓度的升高作用。结论哇巴因引起的细胞内高钙是高哇巴因高血压发生的细胞学基础,钠泵α2亚单位截断性片段可以拮
抗哇巴因引起的VSMCs内Ca2+浓度的升高作用,为进一步探讨哇巴因的作用机制结高血压的治疗提供了实验依据。
     

瞬时感受器电位香草酸受体1在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞内钙升高中的作用

目的观察记录低氧条件培养的人肺动脉平滑肌细胞中瞬时感受器电位香草酸受体1(transient potential vanilloid receptor1,TRPV1)对细胞内Ca2+浓度(用340nm/380nm的荧光强度比值表示)的影响,探讨TRPV1在低氧性肺动脉平滑肌细胞增生中的作用。方法应用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色、流式细胞周期测定以及细胞内Ca2+浓度测定的方法检测细胞增生及细胞内Ca2+浓度变化。结果低氧能明显促进人肺动脉平滑肌细胞的增生,升高人肺动脉平滑肌细胞内静息Ca2+浓度,显著加强环并偶氮酸(cyclopiazonic acid,CPA)诱发的库容性Ca2+内流(capacitative Ca2+entry,CCE),上述效应均可被TRPV1阻断剂Capsazepine(CPZ)所抑制。结论在人肺动脉平滑肌细胞中,TRPV1可能是低氧所致细胞内Ca2+浓度增加、CCE增强和细胞过度增生的重要途径或调制因素。     

Ghrelin对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的：研究Ghrelin对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）内游离钙离子浓度的影响,并揭示Ghrelin血管活性的调节机制。方法：组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs,Western blot验证生长激素促泌素受体（GHS-R1a）在VSMCs中的表达。钙荧光染料furo-2AM标记VSMCs,高速钙离子成像分析系统检测Ghrelin对静息状态胞内钙荧光强度（FI）的影响,并观察Ghrelin对KCl和AngII增强胞内钙FI作用的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536和GHS-R1a拮抗剂（D-Lys3）-GHRP-6对Ghrelin作用的影响。结果：GHS-R1a在VSMCs内有表达。Ghrelin本身对VSMCs内钙FI无作用,也不能抑制KCl引起的VSMCs内钙FI升高,但可抑制AngII引起的VSMCs内钙FI升高,而这种抑制作用可被Sq22536和GHS-R1a逆转。结论：Ghrelin可抑制由AngII引起的大鼠主动脉VSMCs胞内钙离子的升高,机制可能和激活cAMP/PKA信号通路有关。     

血管紧张素II和醛固酮对大鼠心成纤维细胞增殖的影响

目的: 探讨血管紧张素(angiotensin,ang) II、醛固酮及其拮抗剂干预对大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)活性和胶原蛋白表达的影响。方法: 采用胶原酶 II消化法、差速贴壁法、差速脱壁法获取并纯化SD乳鼠CFs,将3,4代CFs分为：ang II组、醛固酮组、ang II+醛固酮组、ang II+氯沙坦组、醛固酮+螺内酯组、对照组。采用CCK-8活细胞计数试剂盒检测细胞活性; RT-PCR检测细胞中I型胶原前胶原A1(collagen,type I,alpha 1,COL1A1)、III型胶原前胶原A1(collagen,type III,alpha 1,COL3A1)以及MMP1,基质金属蛋白酶的组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP1)mRNA的变化; Western印迹检测COL1A1,COL3A1,MMP1,TIMP1蛋白表达的变化。结果: 与对照组比较,ang II、醛固酮可明显促进CFs增殖(增殖率分别为38.5%,28.5%; P<0.05),ang II+醛固酮组的增殖率较ang II、醛固酮单独干预组更高(增殖率54.4%,P<0.05),氯沙坦、螺内酯可显著抑制ang II、醛固酮诱导的细胞增殖效应(P<0.05); 与对照组比较,ang II,醛固酮可显著促进COL1A1,COL3A1,MMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时抑制TIMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),氯沙坦、螺内酯可显著抑制ang II、醛固酮诱导的COL1A1,COL3A1,MMP1 mRNA和蛋白表达的增加(P<0.05),同时升高TIMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论: Ang II、醛固酮可促进体外培养CFs增殖和增加I,III型胶原表达; Ang II、醛固酮同时干预时具有协同和叠加效应,而氯沙坦、螺内酯可抑制这一效应; 其作用机制可能通过影响MMPs/TIMPs的平衡,使心胶原代谢紊乱,增加CFs活性,促进心纤维化。     

灯盏花素抑制肾上腺素诱导的心肌细胞内钙升高的机制

目的探讨灯盏花素抑制肾上腺素诱导的心肌细胞内钙升高的机制。方法培养乳鼠心肌细胞,经Fluo-3/AM染色后应用激光共聚焦技术检测细胞内钙水平。结果灯盏花素(10、30、100μM)显著抑制肾上腺素诱导的细胞内钙升高及细胞体积增大。灯盏花素抑制氯化钾(KCl)诱导的细胞外钙内流,但对L-型钙通道开放剂BAYK8644诱导的细胞内钙升高无影响。另外,灯盏花素能够抑制咖啡因介导的细胞内钙升高。结论灯盏花素通过抑制外钙内流和内钙释放降低细胞内游离钙的浓度,其抑制外钙内流的作用与L-型钙通道无关。     

红细胞抗高血压因子对大鼠血管平滑肌细胞升高的钙浓度的影响（简报）

红细胞抗高血压因子（antihypertensivefactor，AHF）是近年本实验室从动物和人的红细胞中提取的一种具有降压作用的小分子物质。已有的研究发现，其降压机制与其呈内皮依赖性的舒张血管平滑肌（VSM），减弱心功能，降低Ca2 内流，抑制血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及。c－myc和CaM基因表达有密切关系。本实验观察了从火红细胞中提取的抗高血压因子（AHF）对自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压WKY大鼠培养的主动脉平滑肌细胞胞内游离Ca2 浓度（[Ca2 ]i）的影响，以进一步揭示其降压作用与VSMC［Ca2 ］i的关系，为寻找防治高血压的…     

熊果酸对大鼠血管外膜成纤维细胞增殖的影响

目的:研究采用MTT法检测不同浓度的熊果酸对大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞增殖的影响。方法:解剖分离SD大鼠的胸主动脉,获取胸主动脉血管外膜。对血管外膜成纤维细胞进行培养、纯化、传代。采用TGF-β_1诱导血管成纤维细胞增殖,用不同浓度的熊果酸抑制细胞增殖,用MTT法检测不同浓度的熊果酸对TGF-β_1诱导血管外膜成纤维细胞增殖的影响。结果:随着熊果酸浓度的增加,UA组的OD值逐渐减小,血管外膜成纤维细胞的抑制率逐渐增加,且各组UA细胞抑制率比较,差异均有统计学意义(P0.05),UA3组(UA浓度45μmol/L)的细胞抑制率作用最强。结论:熊果酸对TGF-β_1介导的胸主动脉外膜成纤维细胞增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用随着熊果酸的浓度增加而增强。     

环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响

目的研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制。方法原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响。结果原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10μmol/LCPA能使含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA能使含5μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高。结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关。     

高密度脂蛋白介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出的机制

目的研究高密度脂蛋白-3(HDL3)介导大鼠皮肤成纤维细胞胆固醇(ch)流出机制。方法用N-乙酰咪唑修饰HDL,阻断HDL与细胞受体相互作用,观察其对HDL3介导细胞ch流出的影响。用FITC标记HDL示踪HDL3在介导细胞ch流出中自身代谢过程。结果牛血清白蛋白(对照组)介导4.74%细胞ch流出,HDL3组和N-乙酰咪唑HDL组分别为31.85%和8.41%。FITC-HDL3与细胞37-℃培养3h后,细胞内吞荧光强度(FS)占细胞结合FS的65.78%,其中93.5%FS存在于TCA可沉淀部分。细胞进一步37-     

高密度脂蛋白介导大鼠皮肤成纤维细胞内胆固醇流出的机制

目的 研究高密度脂蛋白－３（ＨＤＬ３）介导大鼠皮肤成纤维细胞胆固醇（ｃｈ）流出机制。方法 用Ｎ－乙酰咪唑修饰ＨＤＬ,阻断ＨＤＬ与细胞受体相互作用,观察其对ＨＤＬ３介导细胞ｃｈ流出的影响。用ＦＩＴＣ标记ＨＤＬ示踪ＨＤＬ３在介导细胞ｃｈ流出中自身代谢过程。结果 牛血清白蛋白（对照组）介导４．７４％细胞ｃｈ流出,ＨＤＬ３组和Ｎ－乙酰咪唑ＨＤＬ组分别为３１．８５％和８．４１％。ＦＩＴＣ－ＨＤＬ３与细胞３７     

氯化钴化学模拟低氧与低氧环境对大鼠肺动脉成纤维细胞的作用比较

目的 比较氯化钴(CoCl2)化学模拟低氧及低氧环境对于原代大鼠肺动脉成纤维细胞(PAFs)增殖、迁移、表型转化的作用.方法 分离培养原代大鼠PAFs,利用CoCl2刺激细胞,或通过低氧细胞培养(1% O2)刺激诱导PAFs,通过CCK-8试验、细胞划痕、细胞迁移、表型转化标志蛋白及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达的实验结果比较CoCl2与低氧环境对于PAFs的作用.结果 与对照组相比,100 μmol/mL CoCl2刺激对PAFs的细胞增殖活力、迁移能力、细胞表型转化能力的作用无明显影响(P>0.05);而1% O2可以明显提高PAFs的细胞增殖活力和迁移活力,并可以使α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达上调(P<0.05).结论 CoCl2化学模拟低氧与低氧环境对PAFs的促增殖、促迁移、促表型转化作用存在差异.