PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的:比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法:不同浓度顺铂(cisplatin, DDP)干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)表达水平;应用10μmol/L顺铂(相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC₅₀值)干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白(Beclin 1、LC3Ⅱ及p62)、凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3)、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白(p-FOXO3a)表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1(Baf A1)干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A5...     

下调 HER2 降低自噬活性抑制人肺癌细胞增殖 转移作用的体外研究

目的 探讨下调 HER2 表达是否抑制细胞自噬活性, 从而影响人肺癌细胞的增殖、 迁徙和侵袭。方法 采用浓度 5 μmol/L 自噬抑制剂 3-MA、 10 μmol/L HER2 抑制剂 Neratinib 分别作用人肺癌细胞 A549。Western blot 检测肺癌细胞 A549 中 HER2、 Beclin-1 及 LC3B （Ⅱ/Ⅰ） 蛋白表达水平; Wound healing 和 Transwell invasion 实验检测 细胞迁徙、 侵袭能力; 四甲基偶氮唑盐 （MTT） 检测细胞的增殖能力。结果 Neratinib 和自噬抑制剂 （3-MA） 作用 24 h 后, 细胞 HER2、 Beclin-1 及 LC3B（Ⅱ/Ⅰ）蛋白表达水平显著低于阴性对照组; Neratinib、 自噬抑制剂（3-MA）处理组 的细胞增殖、 迁徙和侵袭能力显著低于阴性对照细胞。结论 下调 HER2 能降低人肺癌细胞 A549 的自噬活性并抑 制其增殖、 迁徙和侵袭     

尾加压素Ⅱ对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制研究

目的：探讨尾加压素Ⅱ（U-Ⅱ）对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及相关机制。方法：将体外培养A549细胞分为正常对照组、顺铂组（25μg/mL）及U-Ⅱ＋顺铂组（10-7mol/L U-Ⅱ＋25μg/mL顺铂）,TUNEL法测定A549细胞凋亡,免疫细胞化学方法检测A549细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果：与正常对照组相比,顺铂组肺腺癌A549细胞的凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax表达明显升高（P〈0.01）;与顺铂组相比,U-Ⅱ则能够抑制A549细胞的凋亡,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达（P〈0.01）。结论：U-Ⅱ可通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达从而抑制肺腺癌A549细胞凋亡。     

沙参麦冬汤通过调节EGFR/MEK/ERK信号通路对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响

摘要：目的:探讨沙参麦冬汤（ROD）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡和自噬的影响,并分析其潜在机制。方法:制备ROD含药血清,体外培养人NSCLC细胞株A549,MTT法检测不同浓度的ROD含药血清对A549细胞活力的影响,筛选合适的干预浓度;将A549细胞随机分为空白组、阿法替尼组、20%ROD组、20%ROD+EGFR激活剂NSC 228155组;给予相应的干预后,采用细胞集落形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞凋亡情况,GFP-LC3转染检测细胞自噬情况,蛋白质印迹（Western blot）检测细胞增殖、凋亡、自噬和表皮生长因子受体（EGFR）/丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外调节蛋白激酶（ERK）通路相关蛋白表达。结果:ROD含药血清可抑制A549细胞增殖,且20%ROD含药血清对A549细胞活力的抑制作用最显著（P＜0.05）。20%ROD含药血清可显著减少细胞集落数,升高细胞凋亡率,增加GFP-LC3斑点数,并降低Ki-67、p62蛋白水平和p-EGFR/EGFR、p-MEK/MEK和p-ERK/ERK比值,升高Cleaved Caspase-3/Caspase-3和LC3II/LC3I比值（P＜0.05）;EGFR抑制剂Afatinib对A549细胞增殖、凋亡、自噬和EGFR/MEK/ERK通路的作用与ROD含药血清相似;使用NSC 228155激活EGFR/MEK/ERK通路可显著减弱ROD含药血清对A549细胞凋亡和自噬的诱导作用以及对细胞增殖的抑制作用（P＜0.05）。结论:ROD含药血清可有效抑制A549细胞增殖,并诱导细胞凋亡、自噬,其作用机制可能与抑制EGFR/MEK/ERK通路有关。     

A型流感病毒对肺巨噬细胞自噬的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素组、空白组,干预12 h后,分别用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检测细胞自噬情况;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达。结果麻杏石甘汤含药血清能不同程度抑制流感病毒诱导的细胞自噬标志蛋白LC3的膜聚集,抑制细胞内自噬小体和自噬溶酶体的增加,以及LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且呈现一定的量效关系。结论麻杏石甘汤可能通过抑制A型流感病毒诱导的细胞自噬,最终调控A型流感病毒的致病作用。     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

自噬在胶质瘤U251细胞125I粒子内放疗中的作用

目的 探讨自噬在胶质瘤U251细胞125I粒子内放疗中的作用.方法 用MTT检测不同照射时间及剂量下125I粒子对U251细胞增殖活性的影响.通过透射电镜和Western blot检测LC3来观察不同照射时间及剂量下125I粒子对U251细胞自噬发生的影响.通过3-MA抑制自噬后检测125I粒子对U251细胞增殖活性的影响,证实自噬在U251细胞125I粒子内放疗中的作用.结果 125I粒子照射U251细胞后细胞活性明显下降并呈现时间和剂量相关性.电镜检测和LC3-Ⅱ蛋白印迹显示内放疗照射后U251细胞自噬明显增加.3-MA抑制自噬后125I粒子内放疗对U251细胞的抑制作用显著增强.结论 125I粒子内放疗后U251细胞自噬明显增加,抑制自噬后125I粒子内放疗对U251细胞的抑制作用显著增强.白噬在胶质瘤U251细胞125I粒子内放疗中保护了肿瘤细胞.     

microRNA-21促进人肺腺癌细胞A549对顺铂耐药性的研究

目的 研究microRNA-21(miR-21)对人肺腺癌细胞A549对于顺铂耐药性的影响及分子机制.方法 MTT法检测A549和顺铂耐药株A549/CDDP对于顺铂的敏感性,以及在A549细胞中过表达miR-21和在A549/CDDP细胞中抑制miR-21表达后对顺铂敏感性的影响;RT-PCR方法检测A549和A549/CDDP中miR-21表达情况;Western blotting检测PI3K/AKT,核因子-κB (NF-κB)信号通路的激活情况以及在过表达miR-21和抑制miR-21表达后细胞中AKT信号通路的活性变化情况.结果 相对于A549细胞,A549/CDDP对顺铂的敏感性有明显降低,而细胞中miR-21表达则明显增多.Western blotting结果表明:与A549细胞相比,A549/CDDP细胞PI3K/AKT通路被激活,NF-κB通路没有明显变化.过表达miR-21可以激活PI3K/AKT信号通路并提高A549细胞对顺铂的耐药性,相反地,抑制miR-21表达抑制了A549/CDDP细胞中的AKT通路的活化情况并降低了A549/CDDP细胞对顺铂的耐药性.结论 miR-21可以促进肺癌细胞A549对顺铂的耐药性,其机制与PI3K/AKT信号通路的激活有关.     

Twist1基因在A549与A549/DDP细胞中的表达及意义

目的　检测人Twist1 基因在A549 与A549/DDP 细胞株中的表达,探讨Twist1 与肺腺癌顺铂耐药的相关性。方法　通过细胞计数,观察不同浓度梯度顺铂干预24 h 后A549 细胞和A549/DDP 细胞的生长情况;用RIPA 裂解液裂解A549、A549/DDP 细胞,充分游离细胞总蛋白,用BCA 法检测总蛋白浓度,ELISA法检测Twist1 转录因子的浓度。结果　定义m 值（m=Twist1 转录因子浓度/ 总蛋白浓度）。浓度为0、10、20、30、40、50 mg/L的顺铂干预下,分别测得A549 与A549/DDP 的m 值为3.01/3.31、2.17/2.82、1.63/2.94、1.73/1.99、-/1.31、-/-,A549/DDP 细胞的m 值显著大于A549 细胞（P<0.05）。结论　Twist 1 基因在人顺铂耐药肺腺癌细胞中表达增高,提示Twist1 可能与肺腺癌顺铂耐药相关。     

Bcl-XL siRNA对肺腺癌细胞A549/DDP药物敏感性及凋亡的影响

目的：探讨小干扰RNA沉默Bcl-XL对肺腺癌耐药细胞株A549／DDP药物敏感性的影响及其凋亡机制。方法：将Bcl-XL siRNA质粒载体转染至A549／DDP细胞，MTT、流式细胞仪检测细胞药物敏感性的改变；丫啶橙／溴化乙锭（AO／EB）染色法检测细胞凋亡；RT-PCR检测Bcl-XL mRNA水平；Western-Blot检测Bcl—XL、caspase-3蛋白表达的变化。结果：分别用0．2、2、20、200μg／mL顺铂处理细胞48h，MTT显示转染Bcl-XL siRNA细胞组A570吸光度值较阴性siRNA细胞组和未转染对照组明显降低，细胞生长抑制率明显增高；用20μg/mL顺铂处理细胞48h，流式细胞仪检测，转染Bcl-XL siRNA组凋亡率较转染阴性siRNA组和未转染组增加；AO／EB染色显示转染Bcl-XL siRNA的细胞较转染阴性siRNA及未转染者凋亡率增加；转染Bcl-XL siRNA降低了Bcl-XL mRNA和蛋白水平，升高了caspase-3活性形式蛋白表达。结论：Bcl-XL siRNA特异性下调A549／DDP细胞Bcl-XL的表达，活化caspase-3蛋白，促进A549／DDP细胞凋亡，增强该肺腺瘤细胞对顺铂的敏感性。     

自噬对多发性骨髓瘤细胞增殖的影响

目的：探讨自噬（ autophagy）对正常培养多发性骨髓瘤（ Multiple myeloma,MM）细胞株增殖的影响。方法 MM细胞株U266在正常培养条件下分别加入雷帕霉素和3－甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）,以正常血清培养U266细胞及淋巴瘤Jurkat细胞株为对照组;分别检测细胞的增殖及凋亡水平;单丹磺酰尸胺（ monodansylcadaverine ,MDC）荧光染色法检测细胞自噬水平;逆转录PCR检测自噬相关基因mtor、Beclin1、Atg5在细胞内水平,蛋白质印迹法检测细胞内自噬相关蛋白轻链3I／Ⅱ（ LC3I／Ⅱ）含量。结果 U266细胞及Jurkat细胞内均存在自噬,但前者水平高于后者。雷帕霉素可诱导MM细胞发生自噬,3-MA对自噬有双重作用。雷帕霉素及3-MA下调细胞增殖水平。雷帕霉素及3-MA处理24 h可上调正常培养条件下U266细胞凋亡水平（1．7％±0．2％,19．1％±1．0％和16．8％±0．61％）。延长培养时间至72 h,雷帕霉素处理组凋亡水平无明显变化（16．9％±0．48％）。而3-MA处理组凋亡水平下降（9．0％±0．70％）。结论 MM细胞株内会存在一定水平的自噬,并通过实验证明其高于淋巴瘤Jurkat细胞株的自噬水平。在正常培养条件下加入了雷帕霉素及3-MA可抑制MM细胞的增殖,并可诱导细胞凋亡。     

Activation of ERK-p53 and ERK-mediated phosphorylation of Bcl-2 are involved in autophagic cell death induced by the c-Met inhibitor SU11274 in human lung cancer A549 cells

SU11274, a small molecule inhibitor of c-Met, was reported to induce apoptosis in human non-small-cell lung cancer (NSCLC) cells. However, SU11274-mediated autophagy in NSCLC cells has rarely been reported. The aim of this study was to elucidate the molecular mechanisms mediating SU11274-induced autophagy in NSCLC A549 cells. Here we reported that SU11274-induced autophagy was accompanied with an increase in the conversion of LC3-I to LC3-II and up-regulation of Beclin-1 expression. Subsequently, we also found that small interfering RNA against c-Met induced A549 cell autophagy while promotion of c-Met by hepatocyte growth factor (HGF) suppressed A549 cell autophagy. Inhibition of autophagy by 3-methyladenine (3-MA) suppressed SU11274-induced cell death, suggesting that SU11274-induced autophagy caused cell death. Further study showed that ERK and p53 were activated after SU11274 treatment. Interruption of ERK and p53 activities decreased SU11274-induced autophagy, and blocking of ERK by the specific inhibitor PD98059 suppressed SU11274-induced p53 activation. Moreover, ERK activation upregulated Beclin-1 expression through induction of Bcl-2 phosphorylation, but p53 did not induce Bcl-2 phosphorylation. In conclusion, inhibition of c-Met induced autophagic cell death, which was associated with ERK-p53 activation and ERK-mediated Bcl-2 phosphorylation in A549 cells.     

Mechanism of autophagy induction and role of autophagy in antagonizing mitomycin C-induced cell apoptosis in silibinin treated human melanoma A375-S2 cells

The aim of this study was to elucidate the molecular mechanisms mediating silibinin-induced autophagy in A375-S2 cells. In the present study it was found that silibinin-induced autophagy through increasing the conversion of LC3 I to LC3 II and up-regulating Beclin-1 expression, which was concomitant with p53 suppression and NF-κB activation. P53 inhibitor, pifithrin-α (PFT-α), increased autophagy and enhanced the expression of NF-κB. Moreover, inducing p53 accumulation with MG132 reduced autophagic ratio, and repressed the expression and activation of NF-κB expression. NF-κB inhibitor, pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC) suppressed autophagy. Autophagic specific inhibitor 3-methyladenine (3-MA) treatment reversed silibinin-induced p53 suppression as well as NF-κB activation, suggesting that there was a positive feedback loop between p53 inhibition-mediated NF-κB activation and autophagy. In addition, we also found that 3-MA efficiently abrogated silibinin's cyto-protective effect against mitomycin C-induced cell death, and reversed the suppressive efficacy of silibinin on p53 expression, suggesting that autophagy contributed to silibinin's cyto-protective effect against mitomycin C-induced cell death in A375-S2 cells.     

Autophagy preceded apoptosis in oridonin-treated human breast cancer MCF-7 cells

Recent studies have shown that MCF-7 cells undergo autophagy under some conditions, such as tamoxifen treatment and starvation. In this study, we investigated autophagy in MCF-7 cells under oridonin treatment and further examined the relationship between autophagy and apoptosis. After 3-MA (the specific inhibitor of autophagy) pre-culture, MCF-7 cells were exposed to oridonin, and the growth inhibitory ratio, morphologic changes, DNA fragmentation, proteins expression, autophagic ratio and apoptotic ratio were evaluated. Oridonin inhibited the proliferation of MCF-7 cells and induced autophagy in vitro. MDC (a specific dye for autophagosome) recruitment and typical apoptotic features, including apoptotic bodies, membrane blebbing as well as nuclear condensation, were induced by oridonin. Oridonin downregulated the phosphorylation of ERK, whereas those of JNK and P38 kinase were upregulated. In the condition of oridonin treatment, 3-MA significantly reduced the autophagic level, and the apoptotic cell ratio was also declined. Furthermore, combined treatment with oridonin and 3-MA upregulated ERK phosphorylation and downregulated JNK and P38 kinases phosphorylation compared with oridonin alone treatment groups, indicating that autophagy facilitated apoptosis in oridonin-induced MCF-7 cells. In addition, 3-MA application downregulated DNA ladder and Bax expression but upregulated Bcl-2 expression, compared with oridonin alone treatment. Taken together, oridonin simultaneously induced MCF-7 cells both apoptosis and autophagy, and in this settings, inhibition of autophagy induced lowered apoptotic level, therefore, autophagy participated in upregulation of apoptosis.     

苯乙双胍通过影响线粒体功能促进A549/DDP细胞凋亡

目的 探究苯乙双胍抑制 A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡的可能机制。方法 MTS法检测顺铂（顺铂 组）和苯乙双胍（苯乙双胍组）对 A549/DDP 细胞和 A549 细胞的细胞活力（24 h 和 48 h）的影响。苯乙双胍组以 2.5 mmol/L苯乙双胍处理,对照组采用PBS处理,MTS法检测苯乙双胍对A549/DDP细胞增殖的影响,克隆形成实验检测 苯乙双胍对 A549/DDP细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测苯乙双胍对 A549/DDP细胞凋亡和活性氧（ROS） 胞内线粒体质量（Mitotracker）、钙离子（Rhod-2）的影响,实时荧光定量PCR检测线粒体DNA（mtDNA）变化,三磷酸腺 苷（ATP）试剂盒检测 ATP的变化,Western blot检测苯乙双胍对线粒体氧化磷酸化复合物表达的影响。结果 与顺 铂组比较,苯乙双胍组A549/DDP细胞在24 h和48 h的细胞活力降低（P＜0.05）,而2组间A549细胞24 h和48 h活力 差异无统计学意义。顺铂处理48 h时A549/DDP细胞活力均高于A549细胞（P＜0.05）,而24 h间差异无统计学意义; 苯乙双胍处理的A549/DDP细胞活力低于A549细胞（P＜0.05）。与PBS组相比,苯乙双胍组A549/DDP细胞的24 h和 48 h 增殖率、集落形成数减低,而凋亡率升高,ROS 水平增高,Mitotracker、Rhod-2、mtDNA 及 ATP 水平降低（P＜ 0.05）,线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ中的NDUFB8蛋白、复合物Ⅱ中的SDHB蛋白和复合物Ⅳ中的MTCO1蛋白表达明 显降低（P＜0.05）。结论 （1）A549/DDP细胞较 A549细胞对苯乙双胍更为敏感,但对顺铂耐受性较 A549细胞强。 （2）苯乙双胍通过增加细胞内 ROS、减少线粒体质量、钙离子和 mtDNA、抑制线粒体氧化磷酸化复合物表达,减少 ATP生成,从而抑制A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡。     

大豆苷元对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖、迁移能力的影响及机制

目的探究大豆苷元(daidzein,Daid)对非小细胞性肺癌细胞株A549和H1299增殖、迁移能力的影响及可能机制。方法以A549和H1299为研究对象,CCK-8法检测Daid(0,5,10,25,50,100,200μmol·L^-1)抑制A549和H1299两种细胞的增殖情况。划痕和Transwell小室实验检测Daid对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测Cleaved Caspase-3和LC3Ⅱ/Ⅰ等的蛋白表达。结果与对照组相比,Daid在体外可明显抑制肺癌细胞的增殖,且抑制作用呈浓度依赖关系。Daid(100μmol·L^-1)可明显降低人肺癌细胞A549和H1299的迁移侵袭能力。Western blot结果显示,Daid(100μmol·L^-1)预处理后,两种肺癌细胞的Cleaved Caspase-3及LC3Ⅱ/Ⅰ表达升高。结论Daid可抑制人非小细胞肺癌A549和H1299细胞的增殖,使上述细胞的迁移侵袭能力明显下降,其机制可能与Daid诱导细胞凋亡及自噬有关。     

3-甲基腺嘌呤对急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞损伤的自噬影响研究

目的探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)对急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞自噬水平及损伤程度的影响。方法将50只Wistar大鼠随机分成5组(A~E组),在低氧氧舱环境下建立急进高原缺氧大鼠肠上皮细胞损伤模型,用3-MA进行处理,肉眼观察各组大鼠的行为学改变,HE染色分析大鼠肠组织的损伤程度,免疫组织化学检测自噬相关蛋白LC-3、Beclin-1的表达情况,RT-PCR方法检测LC-3、Beclin-1 mRNA的表达情况。结果 3-MA作用于缺氧大鼠肠上皮细胞后,肠组织的病理性损伤明显加重,自噬相关蛋白LC-3、Beclin-1及其相关mRNA表达也显著降低,细胞自噬水平下降。结论 3-MA可能通过降低细胞自噬水平加重急进高原缺氧肠上皮细胞损伤,细胞自噬可能是急进高原缺氧肠上皮细胞损伤过程中的重要保护因素之一。     

丙戊酸联合顺铂对体外人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨丙戊酸（VPA）联合顺铂（DDP）对人非小细胞肺癌细胞A549、NCI．H460增殖抑制及细胞凋亡的影响,以及两药联合影响肺癌细胞增殖的机制。方法3组不同质量浓度的VPA与DDP单药及联合作用于人非小细胞肺癌细胞A549、NCI—H460,培养24、48、72h后,观察细胞数量和形态的变化,用MTF法分析药物对细胞增殖的抑制率（IR）及联合用药对细胞增殖抑制率q值,Hoechst／PI双染检测细胞凋亡的数量变化,Westernblot观察联合用药对Bcl．2、Caspase．3、Caspase．8蛋白的表达变化。结果培养48h后,各用药组细胞数目减少十分明显,其中VPA＋DDP组较单独用药组减少更为显著,其细胞形态发生较大改变;MTF法及q值计算结果显示,对A549细胞,VPA的增殖抑制作用呈现明显的时间与浓度依赖性,在高质量浓度时（300mg·L-1）与DDP具有协同作用;对NCI—H460细胞,当VPA的质量浓度≤100mg·L-1时,未显示出明显的时间与浓度依赖性,所有浓度均未显示出VPA与DDP的协同作用。VPA联合DDP可以进一步促进A549与NCI—H460的细胞凋亡,导致两细胞中凋亡因子Bcl-2水平的明显下调。联合作用对A549细胞更为明显,可能与该细胞中抑凋亡因子Bcl-2低表达及促凋亡因子Caspase-3、Caspasel8高表达有关。结论VPA能增强DDP对人非小细胞肺癌细胞的增殖抑制作用,联合作用的协同性与药物浓度及细胞类型有关,不同类型细胞对药物敏感性的差异可能与细胞自身表达的凋亡因子的含量有关。     

A novel Diels–Alder adduct of mulberry leaves exerts anticancer effect through autophagy-mediated cell death

Guangsangon E (GSE) is a novel Diels–Alder adduct isolated from leaves of Morus alba L, a traditional Chinese medicine widely applied in respiratory diseases. It is reported that GSE has cytotoxic effect on cancer cells. In our research, we investigated its anticancer effect on respiratory cancer and revealed that GSE induces autophagy and apoptosis in lung and nasopharyngeal cancer cells. We first observed that GSE inhibits cell proliferation and induces apoptosis in A549 and CNE1 cells. Meanwhile, the upregulation of autophagosome marker LC3 and increased formation of GFP–LC3 puncta demonstrates the induction of autophagy in GSE-treated cells. Moreover, GSE increases the autophagy flux by enhancing lysosomal activity and the fusion of autophagosomes and lysosomes. Next, we investigated that endoplasmic reticulum (ER) stress is involved in autophagy induction by GSE. GSE activates the ER stress through reactive oxygen species (ROS) accumulation, which can be blocked by ROS scavenger NAC. Finally, inhibition of autophagy attenuates GSE-caused cell death, termed as “autophagy-mediated cell death.” Taken together, we revealed the molecular mechanism of GSE against respiratory cancer, which demonstrates great potential of GSE in the treatment of representative cancer.