胎儿及成人皮肤创面愈合过程中PDGF和EGF表达的对比性研究

目的 探讨人胎儿和成人皮肤及其创面愈合过程中PDGF和EGF的表达及意义。方法 利用已建立的人胎儿无瘢痕愈合动物模型，获取相应标本，结合临床所取成人皮肤标本，采用免疫组化染色方法，观察PDGF，EGF的表达情况。结果 ①正常胎儿皮肤中未见明显的PDGF阳性染色；创伤后12h、1d的胎儿表皮及真皮浅层可见PDGF的弱阳性表达；创伤后3d、1周的胎儿皮肤中PDGF的表达呈阴性；正常成人皮肤可在成纤维细胞，巨噬细胞及毛细血管见到阳性表达；创伤后表达加强；②正常胎儿皮肤表皮全层和毛囊，皮脂腺及汗腺细胞可见EGF的阳性表达；创伤后的胎儿皮肤中EGF的表达未见到明显变化；正常成人皮肤可见表皮基底层有中度阳性表达，毛囊，汗腺细胞也可见到轻度表达，创伤后表达有所减弱。结论 生长因子在胎儿和成人皮肤创面愈合过程中的差异表达可能是胎儿无瘢痕愈合的重要原因之一。     

人创面愈合过程中同源异形框基因的表达及意义

目的 探讨人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中，几种同源异形框基因的表达及在胎儿无瘢痕愈合中的作用。方法 采用原位杂交方法，对正常成人和胎儿皮肤及创面愈合过程中PRX—2、H0XBl3、H0X2．2和H0X2．3的表达进行观察。结果 (1)在正常胎儿和成人皮肤中可见PRX—2阳性表达，以前阳性程度为强。分布部位有所不同，在正常胎儿皮肤中，阳性表达主要见于真皮乳头层毛干部周围细胞，表皮中也可见阳性表达；而在正常成人皮肤中，表皮基底层细胞呈弱阳性表达，真皮组织中未见阳性表达。胎儿皮肤创伤后，接近切口的组织中阳性表达明显增强，而成人皮肤创伤后，阳性表达未见明显变化，仍局限于表皮基底层细胞；(2)在正常胎儿及成人皮肤均可见H0XBl3阳性表达，真皮部分主要集中在毛囊细胞，表皮部分主要集中在基底层细胞，创伤后其表达明显减弱，尤其是胎儿皮肤；(3)在正常胎儿皮肤中H0X2．2和H0X2．3阳性表达主要见于表皮全层，表皮基底层阳性表达比较强，真皮中可见弱阳性表达，创伤后近切口的组织中，表达增强。在正常成人皮肤及其创面，未见到阳性表达。结论 同源异形框基因作为与发育生物学密切相关的基因，在人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中的表达有所不同，这可能是二创面愈合差异的根本原因。     

碱性成纤维细胞生长因子拮抗转化生长因子—β1对人α1（I）胶原基因的启动激活

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对人α1 ( )胶原基因启动子活性的影响 ,以及与转化生长因子 - β1 (TGF- β1 )之间的相互作用 ,为防治增生性瘢痕提供依据。　方法　正常皮肤及瘢痕成纤维细胞原代、传代培养。采用 Fu GENE转染试剂 ,分别瞬间转染含人α1 ( )胶原基因 5'端序列 - 2 .5 kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体 ph COL2 .5至正常皮肤及瘢痕成纤维细胞。 ELISA法测定 b FGF及 TGF- β1 作用 2 4小时后 ,转染ph COL2 .5的两种成纤维细胞的报告基因 CAT表达量。　结果　b FGF能抑制转染 ph COL2 .5重组体的正常皮肤及瘢痕成纤维细胞 CAT表达量 ,且能拮抗 TGF-β1 对转染 ph COL2 .5重组体的两种成纤维细胞 CAT表达的上调作用。与对照组相比有统计学意义 (P<0 .0 5)。　结论　正常皮肤及瘢痕成纤维细胞中 ,b FGF均能抑制人 α1 ( )胶原基因的启动转录 ,且能拮抗 TGF-β1 对人α1 ( )胶原基因启动活性的上调作用 ,b FGF抗纤维机制有望为增生性瘢痕的防治提供新思路     

消瘢醑对瘢痕疙瘩成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响

目的　研究复方中药制剂消瘢醑对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞 (Keloidfibroblast,KFB)I、III型胶原蛋白的影响。　方法　 6例瘢痕疙瘩成纤维细胞为实验组 ,6例正常皮肤成纤维细胞 (Normalfibroblast,NFB)为对照组 ,采用成纤维细胞体外培养、ABC免疫细胞化学染色技术及积分光密度 (IOD)分析 ,观察在 10 μg ml消瘢醑浓度作用下 ,瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞I、III型胶原蛋白的表达。　结果　瘢痕疙瘩成纤维细胞I、III型胶原阳性染色表达强度均显著高于正常皮肤成纤维细胞 (11113 1± 130 4 9vs 35 19 6± 2 36 0与 1115 7 7± 130 0 3vs 2 6 2 6 5± 4 2 6 3,t值分别为 14 4 2和 13 4 7,P值分别为 0 0 0 0 0 3和 0 0 0 0 0 4 )。 10 μg ml浓度的消瘢醑作用 4 8小时后 :1.瘢痕疙瘩成纤维细胞I、III型胶原阳性染色表达强度均显著高于正常皮肤成纤维细胞 (76 75 4± 82 5 5vs 2 30 5 2± 32 0 4与 10 5 95 2± 1311 5vs 2 4 34 8± 35 6 9,t值分别为 13 37和 12 6 6 ,P值分别为0 0 0 0 0 4和 0 0 0 0 0 5 ) ;2 .瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞呈阳性表达的I、III型胶原染色强度明显下降 ,与未经药物处理的相应空白对照相比具有显著性差异 (76 75 4± 82 5 5vs 11113 1± 130 4 9与     

用基因芯片研究不同皮肤组织创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达

目的 探讨人胎儿及成人皮肤创面愈合过程中同源异形框基因的差异表达.方法 采用包含有14000个靶基因cDNA克隆的基因芯片技术,对正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族的表达进行对比观察.结果 正常成人和胎儿及其创面愈合过程中同源异形框基因族呈现差异表达,其中以PRX-2、HOXB13、HOXB6和HOXB7的差异表达为显著.结论 同源异形框基因的差异表达表明正常成人和胎儿皮肤的发育生物学状态存在差异,可能是胎儿和成人皮肤不同创面愈合方式的根本原因.     

增生性瘢痕中血管内皮细胞生物学功能的研究

目的 探讨增生性瘢痕中血管内皮细胞的生物学功能及其与瘢痕形成的关系。方法 取人增生性瘢痕组织和正常皮肤组织，进行组织学观察。分离和纯化2种标本中的血管内皮细胞，应用酶联免疫吸附测定法分别检测单个血管内皮细胞中转化生长因子β1，（TGF-β1）、成纤维细胞生长因子2（FGF2）、血小板源性生长因子（PDGF）、内皮素1（ET-1）和血管内皮生长因子（VEGF）的水平。结果光学显微镜下可见正常皮肤微血管数目较少；增生性瘢痕微血管数目增多，血管狭长扭曲甚至闭塞。透射电镜可见增生性瘢痕中毛细血管管腔狭窄，有内皮细胞脱落。增生性瘢痕中血管内皮细胞分泌TGF-β1、PDGF、ET-1、VEGF、FGF2的水平分别为（60±8）、（30±4）、（0．12±0．03）、（52±5）、（18．1±1．2）μg／个细胞，明显低于正常皮肤（P〈0．05）。结论 增生性瘢痕中血管内皮细胞生物学功能减退，可能与瘢痕中胶原的大量产生和缺氧有关。     

人胚胎无瘢痕愈合模型的建立及组织学初步观察

创面愈合后瘢痕形成一直是困扰整形外科医师的临床难题 ,孕中期胎儿皮肤创面愈合后无瘢痕形成 ,成为人们期望的理想愈合方式[1 ] ,我们将孕中期人胎儿皮肤异种移植至裸鼠的皮下 ,建立人胎儿无瘢痕愈合的模型 ,并对其愈合过程进行了组织学观察 ,以期为人胎儿无瘢痕愈合机制的研究提供一定依据。1　材料和方法1 1　材料1 1 1　动物　雌性的成年裸鼠 (ＢＡＬＢ ｃ) 4 0只 ,6～ 7周龄 ,体重 (2 0± 1)ｇ,由上海医药工业研究院动物房提供。裸鼠随机分成 8组 ,无菌饲料饲养于 2 3℃无菌环境中。1 1 2　人胎儿皮肤　孕龄为 2 0～ 2 4周的正常健康孕…     

胎儿和成人皮肤中bFGF,c-fos和c-myc基因转录和翻译的变化及其与创面无瘢愈合的关系

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和癌基因c-fos、c-myc在胎儿和成人皮肤细胞内转录和翻译的变化规律及其对胎儿伤口无瘢愈合的影响.方法16例被测标本中包括不同胎龄的胎儿皮肤和成人皮肤组织各8例.用逆转录-多聚酶链反应方法(RT-PCR)检测这三种基因在不同的组织细胞内的表达变化规律,用免疫组化方法和常规病理技术确定这三种蛋白在胎儿和成人皮肤组织中的定位和表达量.结果在胎儿皮肤组织中,bFGF和c-myc两种基因都有表达,而c-fos基因的mRNA含量很低;随着胎儿的生长发育,三种基因的翻译水平逐渐增大,bFGF蛋白主要分布于表皮细胞和血管内皮细胞的胞浆和胞外基质中,而C-fos和C-myc的阳性颗粒主要存在于表皮基底层细胞中.在成人皮肤组织中,与胎儿相比,这三种基因的mRNA量都明显升高,蛋白水平也显著增大,而三种蛋白的分布没有明显变化.结论在成人皮肤组织内,bFGF、c-fos和c-myc三种基因转录和翻译的增强可能与伤口愈合形成瘢痕相关,而胎儿皮肤中这三种基因的mRNA和蛋白含量的降低可能是胎儿创面无瘢愈合的机制之一.     

白介素1β对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表皮生长因子、表皮生长因子受体及转移生长因子βR1的影响

目的　研究白介素 1β(interleukin 1,IL 1β)对正常皮肤、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩中的成纤维细胞的表皮生长因子 (EGF)、表皮生长因子受体 (EGFR)、转移生长因子 βR1(TGFβR1)的作用。方法　将体外培养 5代之内的 6例瘢痕疙瘩、6例增生性瘢痕及 6例正常皮肤的成纤维细胞分别置于含IL 1β( 2 0 0U/ml)的 10 %胎牛血清DMEM培养液中 ,孵育 3d ,免疫细胞化学染色显示EGF、EGFR、TGFβR1。结果　正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩各组中成纤维细胞的EGF相对含量分别为 162 .0 0±2 0 .79;15 1.0 0± 2 6.45 ;147.5 0± 2 3 .61。EGFR含量分别为 148.3 4± 13 .72 ;13 6.67± 17.5 2 ;13 1.67±11.71。TGFβRI 含量 113 .5 2± 17.62 ;10 6.71± 2 1.43 ;10 7.5 4± 2 3 .5 2。三者成纤维细胞EGF、EGFR和TGFβRI 含量差异无显著性 (P >0 .0 5 )。加入IL 1β后 ,成纤维细胞EGF、EGFR和TGFβRI 相对含量 :正常皮肤为 2 2 4.0 0± 3 1.5 9、178.67± 2 7.86和 80 .3 4± 11.75 ;增生性瘢痕为 12 8.75± 18.3 1、10 5 .82± 2 1.61和 10 9.83± 2 5 .79;瘢痕疙瘩 113 .0 1± 2 4.71、93 .3 4± 3 0 .71和 118.75± 19.2 7。正常皮肤成纤维细胞EGF和EGFR相对含量明显高于增生性瘢痕和瘢痕疙瘩 (P <0 .0 5 ) ,正常皮肤     

胎儿和成人皮肤组织中TGF-β1,2,3因子蛋白含量的变化及其与创面无瘢愈合的关系

目的观察转化生长因子β三种异构体(TGF-β1、2和3)和α-平滑肌肌动蛋白(α-ASMA)在胎儿和成人皮肤组织中的表达特征以及与胎儿创面无瘢愈合的关系.方法12例被测标本中包括不同胎龄的胎儿皮肤6例,其对应的成人皮肤组织6例.用免疫组化方法和常规病理技术确定这四种蛋白在胎儿和成人皮肤组织中的定位及表达量的变化规律.结果TGF-β1、2、3细胞因子的阳性信号主要见于表皮基底层细胞、汗腺和毛囊细胞的胞浆和胞外基质中,α-ASMA蛋白则定位于肌动成纤维细胞内.在胎儿生长发育过程中,TGF-β1、2、3和α-ASMA等蛋白在皮肤组织中的阳性细胞率逐渐升高,在成人皮肤组织中,四种蛋白的含量更加明显增大.在胎儿发育的不同时期,这四种蛋白在皮肤组织内的含量变化规律相近似.结论在成人皮肤组织内,TGF-β1和α-ASMA两种蛋白含量的升高可能与伤口愈合形成瘢痕相关,而胎儿皮肤中这两种蛋白含量的降低可能与胎儿创面无瘢愈合密切相关,而TGF-β2、3在其中所起的作用尚需进一步深入研究.     

胎儿皮肤免疫细胞CD68、CD3的表达与无瘢痕愈合的关系

目的探讨人胎儿皮肤、正常成人皮肤及增生性瘢痕(HS)组织免疫细胞CD68、CD3与无瘢痕愈合的关系。方法选择笔者单位引产的16~33周胎龄的10例胎儿皮肤、7例正常成人皮肤以及18例HS标本,用免疫组织化学的方法分别检测其巨噬细胞、T淋巴细胞的表面标志CD68、CD3的表达。结果胎儿皮肤中CD68[(5±6)个/400倍视野]显著少于成人[(23±4)个/400倍视野,P<0.01],成人皮肤中CD68又显著少于HS[(38±16)个/400倍视野,P<0·01].随胎龄增加,CD68逐渐增多,在24~28周胎龄时迅速上升,28周以后上升缓慢。发育各期胎儿皮肤中均未见CD3;成人皮肤中可见少量CD3[(24±8)个/400倍视野],主要分布于表皮基底层;HS组织中CD3较多[(69±25)个/400倍视野],常聚集成片状,主要分布于真皮乳头层,在小血管周围呈袖套状分布,数量和染色强度大于成人皮肤(P<0.01).结论胎儿皮肤中CD68数量少可能与无瘢痕愈合存在一定的关系;同时胎儿皮肤无瘢痕愈合可能与胎儿皮肤中缺乏CD3有关。     

Ontogeny of expression of basic fibroblast growth factor and its receptors in human fetal skin

The wounds in skin of early gestational fetus healwithout scar formation by a process resemblingregeneration rather than repair.1The ability torepair congenital anomalies in uterus such as cleft lipwith scarless healing will revolutionize the field ofreconstructive plastic surgery. Furthermore, if thebiological properties of scarless fetal healing aredetermined, these characteristics mightbe replicated inthe adult environment with tremendous clinicalbenefits. This non-scarring phenomenon is ge…     

胎儿、成人正常皮肤EGFR与FGFR-2表达的研究

目的：观察胎儿与成人正常皮肤中的表皮细胞因子受体（EGFR）与成纤维细胞生长因子受体（FGFR）在细胞膜上表达的差异，探讨胎儿无瘢痕形成的分子机制。方法：对妇产科意外流产的不同妊娠期胎儿和整形外科手术过程中作为供皮区的成人正常皮肤标本，应用免疫组织化学技术观察EGFR与FGFR－2的变化。结果：妊娠台儿的皮肤内EGFR和FGFR－2染色阳性的表皮细胞较多，贯穿于全层上皮，而真皮中成纤维细胞呈阳性标记的极少，随胎龄的增加，两受体的表达增加，成年人正常皮肤中EGFR多集中在表皮细胞的基底层，两种生长因子受体抗体阳性染色的细胞明显多于胎儿皮肤，结论：胎儿和成年人的皮肤中，EGFR染色与FGFR－2表达的差异，可能是造成胎儿无瘢痕愈合的重要因素之一。     

Exogenous transforming growth factor-beta amplifies its own expression and induces scar formation in a model of human fetal skin repair.

OBJECTIVE: Fetal skin wounds heal without scarring. To determine the role of TGF-beta 1 in fetal wound healing, mRNA expression of TGF-beta 1 was analyzed in human fetal and adult skin wounds. METHODS: Human fetal skin transplanted to a subcutaneous location on an adult athymic mouse that was subsequently wounded heals without scar, whereas human adult skin heals with scar formation in that location. In situ hybridization for TGF-beta 1 mRNA expression and species-specific immunohistochemistry for fibroblasts, macrophages, and neutrophils were performed in human adult wounds, fetal wounds, and fetal wounds treated with a TGF-beta 1 slow release disk. RESULTS: Transforming growth factor-beta 1 mRNA expression was induced by wounding adult skin. No TGF-beta 1 mRNA upregulation was detected in human fetal skin after wounding. However, when exogenous TGF-beta 1 was added to human fetal skin, induction of TGF-beta 1 mRNA expression in human fetal fibroblasts occurred, an adult-like inflammatory response was detected, and the skin healed with scar formation. CONCLUSIONS: Transforming growth factor-beta 1 is an important modulator in scar formation. Anti-TGF-beta 1 strategies may promote scarless healing in adult wounds.     

一氧化氮在成兔与胚胎兔创面愈合过程中含量的比较

目的 :分析胚胎无瘢痕愈合的潜在原因 ,研究NO(一氧化氮 )在成人型和胚胎型愈合过程中的差别。方法 :在已建立的胎兔创伤模型的基础上 ,用一氧化氮酶法试剂盒检测胚胎兔和成兔皮肤匀浆液中NO的含量 ,并对结果进行比较。结果 :①正常胎兔不同孕期皮肤中NO含量无差别。②正常胎兔皮肤中NO含量高于正常成兔皮肤中NO含量 (P <0 .0 1)。③创伤胎兔皮肤中NO含量高于正常胎兔皮肤中NO含量 (P <0 .0 1)。④创伤成兔皮肤中NO含量高于正常成兔皮肤中NO含量 (P <0 .0 1)。⑤创伤胎兔皮肤中NO含量高于创伤成兔皮肤中NO含量 (P <0 .0 1)。结论 :NO参与了胚胎和成年动物的创面愈合过程 ,并在两种愈合过程中存在差别     

Wound healing in a fetal,adult, and scar tissue model: A comparative study

Early gestation fetal wounds heal without scar formation. Understanding the mechanism of this scarless healing may lead to new therapeutic strategies for improving adult wound healing. The aims of this study were to develop a human fetal wound model in which fetal healing can be studied and to compare this model with a human adult and scar tissue model. A burn wound (10 × 2 mm) was made in human ex vivo fetal, adult, and scar tissue under controlled and standardized conditions. Subsequently, the skin samples were cultured for 7, 14, and 21 days. Cells in the skin samples maintained their viability during the 21‐day culture period. Already after 7 days, a significantly higher median percentage of wound closure was achieved in the fetal skin model vs. the adult and scar tissue model (74% vs. 28 and 29%, respectively, p<0.05). After 21 days of culture, only fetal wounds were completely reepithelialized. Fibroblasts migrated into the wounded dermis of all three wound models during culture, but more fibroblasts were present earlier in the wound area of the fetal skin model. The fast reepithelialization and prompt presence of many fibroblasts in the fetal model suggest that rapid healing might play a role in scarless healing.     

蛆虫分泌物对糖尿病大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子表达的影响及抗茵作用研究

目的 探讨蛆虫分泌物对糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠溃疡组织bFGF和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响及预防细菌感染的作用.方法 取3月龄雄性SD大鼠40只,体重300～350 g,制备DM大鼠溃疡创面模型.随机分为2组(n=20),实验组创面涂以丝光绿蝇蛆虫的分泌物,对照组不予处理.术后1～21 d观察创面大体情况,7、14、21 d分别记录两组溃疡面积;术后14 d取两组溃疡组织,制备组织切片,行HE染色观察;3、7、14 d取溃疡表面分泌物行常规细菌培养,检测细菌感染情况;术后7、14、21 d用免疫组织化学法处理切片,显微镜下对bFGF、CTGF阳性表达细胞进行计数分析.结果 实验组创面清洁,新鲜肉芽生长,无脓性分泌物,愈合情况良好,无金色葡萄球菌感染;对照组创面渗出、糜烂严重,创面不断加大加深,愈合情况不良,金色葡萄球菌感染率为60%.术后7、14、21 d实验组溃疡面积分别为(1.83±0.23)、(0.39±0.08)cm2和0,对照组分别为(2.18±0.67)、(3.57±0.53)、(3.94±0.67)cm2;两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).14 d组织学观察示实验组上皮组织新生,创缘炎性坏死物减少,纤维瘢痕形成;对照组大量炎性细胞浸润,坏死组织较多.术后7、14 d,实验组bFGF阳性表达数分别为23.76±3.34、52.76±4.84,对照组为18.88±2.16、46.04±4.00;实验组CTGF阳性表达数分别为18.76±3.24、46.52±4.07,对照组为12.52±3.03、40.52±3.96;两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)21 d,两组bFGF及CTGF阳性表达数差异无统计学意义(P＞0.05).结论 蛆虫分泌物能提高DM溃疡组织bFGF、CTGF的表达,有效促进创面愈合,预防组织细菌感染.