烯脂酰辅酶A水合酶短链1对胆管癌细胞Warburg效应的影响

【摘要】 目的 研究烯脂酰辅酶A水合酶短链1（Enoyl coenzyme A hydratase short chain 1，ECHS1）对胆管癌细胞Warburg效应的影响以及对人胆管癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法 本研究分为实验组及对照组，实验组：干扰ECHS1基因；对照组：ECHS1未干扰；采用酶标仪测定ECHS1对胆管癌QBC939糖酵解代谢的影响；采用免疫组化法检测糖酵解代谢关键酶PKM2表达水平变化，分析ECHS1对胆管癌Warburg效应的影响；同时将构建的含siECHS1 siRNA的质粒转染人胆管癌细胞QBC939，建立裸鼠皮下移植瘤模型。观察siRNA干扰ECHS1表达对胆管癌细胞QBC939裸鼠移植瘤生长的影响。结果 酶标仪测定显示，实验组胆管癌细胞QBC939对葡萄糖的吸收较对照组明显减少，实验组胆管癌细胞QBC939乳酸生成降低，差异均有统计学意义（P＜005）；免疫组化法检测结果表明，较对照组而言，干扰ECHS1可降低实验组胆管癌QBC939细胞中PKM2的表达，差异有统计学意义（P＜005）。抑制ECHS1表达可减小实验组裸鼠皮下肿瘤大小(P＜005)。结论 ECHS1通过调控PKM2蛋白表达影响胆管癌QBC939细胞Warburg效应，同时抑制胆管癌的增殖。     

p16和p53基因及顺铂联用对胆管癌细胞系QBC939的生长抑制作用

目的：探索p16基因和p53基因及p16基因和顺铂（CDDP）联合应用对体内外胆管癌细胞系生长的抑制作用。方法：将重组体腺病毒p16（Ad-p16）和Ad-p53及Ad-p16和CDDP联合作用于人胆管癌细胞系QBC939，观察和分析其对体内外胆管癌细胞生长抑制作用及其机制，结果：Ad-p16在QBC939细胞中表达能抑制QBC939细胞的生长，与p53、CDDP联合应用能明显抑制QBC939细胞的生长，p16和p53基因诱导癌细胞发生G1期阻滞和细胞凋亡，CDDP能诱导癌细胞发生G2期阻滞和细胞凋亡；裸鼠皮下移植瘤模型瘤体内注射Ad-p16及腹腔内注射CDDP均能抑制QBC939肿瘤的生长，两者联合应用具有协同作用。结论：p16基因和p53基因及CDDP联合应用具有协同作用。     

低浓度乙醇预防胆管癌术后复发的可行性研究

目的探讨低浓度乙醇预防胆管癌术后复发的可行性.方法以不同浓度乙醇直接作用于培养的胆管癌细胞系QBC939细胞,MTT法筛选抑制肿瘤细胞增殖的乙醇浓度.经不同浓度乙醇预处理15min的QBC939细胞,接种于裸鼠皮下,通过裸鼠种植瘤模型筛选乙醇抑制肿瘤细胞体内生长的安全浓度.将筛选出的安全浓度乙醇蒸馏水溶液注射于大鼠腹腔,观察其对动物生命体征及腹腔脏器的影响.结果乙醇对胆管癌细胞系QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50)为1.8%-2.2%,0.5%以上浓度的乙醇即可显著抑制肿瘤细胞生长;15%乙醇预处理过的肿瘤细胞接种于裸鼠皮下,15d后未见肿瘤结节生长;15%浓度乙醇蒸馏水溶液10ml注射大鼠腹腔后未见其对动物生命体征及腹腔脏器造成显著影响.结论低浓度乙醇可有效抑制胆管癌细胞生长,对动物生命体征及腹腔脏器安全,具有术中浸泡腹腔预防胆管癌术后复发的潜在应用价值.     

逆转录病毒介导IFN-γ基因对胆管癌细胞株的影响

目的：研究人ＩＦＮ－γ基因对胆管癌细胞株免疫原性的影响。方法：构建携带人ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＩＦＮ－γ,导入人胆管癌细胞系ＱＢＣ９３９,运用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法分析ＭＨＣ Ｉ类分子的表达,体外混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养（ＭＬＴＲ）和淋巴细胞杀伤试验研究导入ＩＦＮ－γ基因的ＱＢＣ９３９细胞免疫原性的变化。结果：Ｇ４１８阳性ＱＢＣ９３９－ＩＦＮ－γ细胞分泌ＩＦＮ－γ活性     

microRNA-21对裸鼠人胆管癌细胞移植瘤EMT的影响

目的 观察microRNA-21 ( miR-21 )对裸鼠人胆管癌细胞移植瘤生长及上皮间质转化( EMT)进程的影响. 方法在两组裸鼠侧腹部皮下注射对数生长期的胆管癌细胞QBC939和稳定表达miR-21的QBC939-miR-21细胞,建立裸鼠移植瘤模型. 采用Western blot、免疫组化及实时定量RT-PCR法检测EMT的上皮细胞标志物 E-钙粘蛋白( E-cadher-in)和间质标志物N-钙粘蛋白( N-cadherin)、波形蛋白( Vim-entin)的表达. 结果 QBC939-miR-21 组移植瘤体积大于QBC939组( P<0. 05 ) ,且E-cadherin相对表达量降低, Vim-entin、N-cadherin相对表达量增加. 结论 miR-21促进了裸鼠胆管癌细胞移植瘤生长和 EMT 进程,为进一步研究 miR-21在胆管癌中的功能及作用机制奠定了基础.     

腺病毒介导的p16对胆管癌细胞的生长抑制作用

目的 研究p16基因对胆管癌细胞的作用。方法 将重组体腺病毒p16转移到人胆管癌细胞QBC939,对p16基因的表达、细胞的生长抑制及机制进行分析。结果 用Ad-LacZ进行重组体腺病毒转导效率的检测,发现当MOI为100以上时,重组体朱病毒可使90%以上的培养的人胆管癌QBC939细胞被转导,用RT-PCR方法检测,在胆管癌QTBC939细胞系中p16呈低表达,重组体腺病毒能介导外源基因p16在胆管癌QBC939细胞系中高效表达,重组体朱病毒介导的p16在QBC939细胞中表达,能抑制QBC939细胞的生长和集落形成。流式细胞计数和细胞DNALadder,证实p16能诱导QBC939细胞发生凋亡并导致其发生G1期阻滞。结论 p16基因通过诱导肿瘤细胞凋亡及G1期阻滞在肿瘤的基因治疗方面发挥作用。     

反义bcl-2的表达诱导癌细胞凋亡致敏树突状细胞的免疫应答

目的 观察树突状细胞（DCs)对反义bcl-2的逆转录病毒表达载体诱导的凋亡胆管癌细胞获取抗原后，抗肿瘤免疫应答及对胆管癌细胞的特异性免疫杀伤效果。方法 用粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）加白介素－4（IL－4）从人外周血分化，诱导DCs，反义bcl-2的逆转录病毒表达载体在体外诱导培养的人胆管癌细胞凋亡，将DCs，T淋巴细胞和凋亡胆管癌细胞区培养，同时设计不同类型肿瘤细胞（坏死胆管癌细胞及培养胆管癌细胞）作对照，7d后，分离，富集DCs，T淋巴细胞进行免疫应答及肿瘤细胞杀伤试验。结果 DCs高表达共刺激分子B7和CD1a，表面具有典型不规则突起，反义bcl-2表达诱导癌细胞凋亡形成的凋亡小体被DCs捕捉，吞噬，负载抗原的DCs可以有效提呈胆管癌细胞抗原，有强烈的免疫应答，刺激的细胞毒T淋巴细胞（CTLs)特异性地杀伤胆管癌细胞。结论 反义bcl-2的逆转录病毒表达载体诱导癌细胞凋亡可以致敏rhGM-CSF加rhIL-4从人外周血单核细胞诱导，扩增出的DCs并产生显著的杀伤胆管癌细胞的免疫反应，可望成为特异性免疫治疗肿瘤的一条新途径。     

野生型P73β转染对胆管癌细胞的生物学影响

目的 应用野生型P73β转染胆管癌QBC939细胞,探讨P73β基因转染对胆管癌细胞生长的抑制机制.方法 应用野生型P73β转染胆管癌QBC939细胞,并以未作处理的QBC939细胞作为空白对照.用RT-PCR及Westem blotting检测细胞中P21、Cyclin D1及Cdk2表达量的变化.使用四甲基偶氮唑盐法(MTT)和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化.结果 转染了野生型P73β重组质粒的胆管癌QBC939细胞,P21相对表达量增高,Cdk2相对表达量明显减少,胆管癌细胞增殖率受到抑制.结论 野生型P73 β基因转染后对胆管癌细胞的生长有抑制作用,P73β基因可通过增加P21基因的表达,抑制Cdk2基因的表达,进而作用于S期的细胞,使细胞周期停滞,从而抑制胆管癌细胞增殖.     

TRAIL受体在胆管癌组织中的表达及意义

目的 :探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)的受体在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达及其临床意义。 方法 :应用原位杂交组织化学法检测TRAIL受体mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)中的表达。 结果 :DR4mRNA、DR5mRNA在人胆管癌组织、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)均呈阳性表达。只有 3例DcR1(3/5 2 )和 7例DcR2 (7/5 2 )在人胆管癌组织呈弱阳性表达。DcR1、DcR2 mRNA在癌旁胆管组织呈阳性表达 ,而在胆管癌细胞株 (QBC939)均不表达。 结论 :TRAIL死亡受体和诱捕受体在人胆管癌、癌旁胆管组织和胆管癌细胞株 (QBC939)的表达不同 ,这些受体表达的变化可能在调控人胆管癌凋亡中发挥重要作用。     

肝门部胆管癌神经侵犯裸鼠动物模型的建立

目的建立裸鼠肝门部胆管癌原位种植瘤神经侵犯模型。方法裸鼠全身麻醉后,逐层开腹,将胆管癌细胞系QBC939种植于裸鼠胆总管与门静脉组织间隙处,B超观察肿瘤生长情况,2周后处死裸鼠,肿瘤组织行病理学和S100免疫组化染色,观察神经侵犯情况。结果 B超显示肿瘤成功种植于肝门部,原位种植成瘤率为100%(10/10);肿瘤细胞呈侵袭性生长,腹膜后淋巴结肿大,肿瘤组织内神经侵犯率达80%。结论裸鼠肝门部胆管癌原位移植瘤及神经侵犯模型的建立,为研究胆管癌的神经侵犯机理以及探讨胆管癌防治策略提供了理想的工具。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …