骨髓增生异常综合征与再生障碍性贫血患者骨髓细胞免疫表型比较分析

目的探讨骨髓细胞免疫表型对骨髓增生异常综合征(MDS)与再生障碍性贫血(AA)的临床鉴别诊断价值。方法采用单克隆抗体-生物素-亲和素酶标法对本院4年内初诊未治疗的23例AA患者、19例MDS患者及50例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓细胞免疫表型进行检测,统计分析CD3、CD5、CD10、CD13、CD19和CD33抗原在三种疾病中表达差异。结果 AA患者骨髓细胞CD3和CD5抗原表达率明显高于对照组和MDS组(P<0.05),CD10、CD13和CD33抗原表达在AA组与对照组间无差异(P>0.05)。MDS患者骨髓细胞CD13和CD33抗原表达率均明显比对照组和AA组高(P<0.05),CD19表达低于AA组和对照组,CD3抗原表达在MDS组与对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论骨髓细胞免疫表型对于AA与MDS的鉴别有一定参考价值。     

穿龙薯蓣皂苷对障碍再生性贫血小鼠骨髓T细胞亚群的影响*

[目的]观察穿龙薯蓣皂苷治疗再生障碍性贫血(简称再障)小鼠的疗效及骨髓CD3+、CD4+、CD8+的表达。[方法]建立再障小鼠模型,各组分别喂饲生理盐水、穿龙薯蓣皂苷、环孢菌素A、雷公藤多苷,连续给药14 d,取骨髓单个核细胞培养24h后,应用流式细胞术检测CD3+、CD4+、CD8+的表达水平。[结果]模型组CD3+和CD4+表达明显低于正常组(P<0.05),CD8+表达高于正常组(P<0.05),各治疗组与模型组相比均有明显差异(P<0.05),穿龙薯蓣皂苷中、高剂量组与正常组相比差异无统计学意义(P>0.05),与两阳性对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。CD4+/CD8+比值:模型组低于正常组(P<0.05),中剂量组与模型组相比有明显差异(P<0.05),其余各治疗组与模型组相比均无明显差异(P>0.05)。[结论]薯蓣皂苷能调节提高再障小鼠骨髓CD3+、CD4+的表达,抑制小鼠骨髓CD8+的表达,促进CD4+/CD8+比值的恢复,从而抑制骨髓T细胞的异常激活,促进骨髓造血功能的恢复。     

骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）治疗再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）模型鼠的可行性。方法建立免疫介导AA小鼠模型。输入体外增殖培养的BALB/c小鼠骨髓MSC,作为MSC组,15只;用未治疗的AA模型小鼠作为第一对照组（模型组）,15只;正常BALB/c小鼠作为第二对照组（正常组）,10只。把MSC输注到实验组小鼠体内,分别于第1周、第2周、第3周、第4周观察各组小鼠的存活率、血常规、骨髓形态学变化等各项指标。结果模型组小鼠,3只于第2周内死亡,7只于第3周内死亡,2只于第4周内死亡,28d存活率20.0%;MSC组,4只于第3周内死亡,28d存活率73.3%,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。AA小鼠模型组与MSC组在8d时外周血象明显下降,14d时模型组外周血象仍明显降低,而MSC组开始回升,至28d血象基本恢复正常。骨髓行形态学检查显示模型组骨髓增生明显减低,有核细胞数明显减少,由大量脂肪细胞填充骨髓,而MSC组骨髓增生活跃,脂肪细胞较少。结论骨髓间充质干细胞可以提高再生障碍性贫血小鼠存活率,改善骨髓造血功能,对再生障碍性贫血模型鼠有治疗作用。     

再生障碍性贫血动物模型研究进展

再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA),是一组造血组织功能衰竭综合征,其发病机制与造血干细胞损伤、造血微环境受损、免疫功能异常特别是 T 细胞功能亢进和细胞毒性 T 淋巴细胞直接杀伤骨髓造血干细胞以及淋巴因子介导的造血干细胞过度凋亡引起的骨髓造血细胞减少和功能衰竭有关.从病因方面AA可分为先天性和后天性...     

环胞菌素A治疗再生障碍性贫血对骨髓细胞凋亡的影响

目的探讨环胞菌素A(CsA)治疗对再生障碍性贫血(再障)患者骨髓单个核细胞Fas(CD95)抗原表达及调亡的影响作用.方法应用流式细胞仪测定24例再障患者CsA治疗前后骨髓单个核细胞(MNC)Fas表达率及凋亡率,其中急性再障7例,慢性再障17例;同时以20例正常人作对照.结果应用CsA治疗再障3个月时的总有效率58.3%.再障患者Fas表达率及凋亡率均高于正常对照(P＜0.05);急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障,但差异无显著性(P＜0.05).用CsA治疗后,再障患者骨髓单个核细胞凋亡率明显低于治疗前(P＜0.05).结论CsA治疗可降低再障患者骨髓MNC的凋亡率,骨髓MNC的Fas表达率和凋亡率增高与再障发病有关.     

当归多糖干预再生障碍性贫血模型小鼠线粒体功能异常机制研究

目的:研究当归多糖(ASP)对再生障碍性贫血(AA)模型小鼠线粒体功能异常的作用机制。方法:AA小鼠随机分为对照组、再障组和治疗组,再障组与治疗组通过~(60)Coγ、腹腔注射环磷酰胺和氯霉素造模后,分别用生理盐水或ASP喂养2周。透射电子显微镜观察骨髓的线粒体超微结构。从骨髓细胞中分离出Lin~-Sca-1~+c-Kit~+(LSK)细胞,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),并进行活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、细胞色素氧化酶(COX)和单胺氧化酶(MAO)的相关检测。结果:与对照组比较,再障组和治疗组骨髓的单个核细胞、BFU-Es和CFU-Es、LSK细胞中的线粒体数量减少,MMP降低。应用ASP干预后,骨髓的单个核细胞、BFU-Es和CFU-Es等数值相比再障组显著增加。ASP可以纠正LSK线粒体数量下降的趋势,ASP纠正AA模型小鼠异常的MAO和COX水平,并通过降低ROS和MDA,纠正异常的膜电位而改善线粒体的功能(P0.05或P0.01)。结论:ASP可能通过上调线粒体膜电位、改善线粒体膜稳定性,纠正AA干细胞的过度凋亡。     

再生障碍性贫血患者造血祖细胞及免疫机制的研究

目的探讨再生障碍性贫血(再障)的发病机制。方法采用甲基纤维素及胶原半固体培养法对56例再障骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K进行培养;采用APAAP法及双抗体夹心酶联免疫吸附法(EL ISA)对再障患者外周血T细胞亚群、血清sIL-2R进行检测。结果再障患者CFU-GM、CFU-E、BFU-E及CFU-M K、BFU-M K集落数均低于对照组,且严重型再障集落数减少程度与慢性再障相近;再障患者CD 3亚群细胞无变化,CD 4亚群细胞减低,CD 8亚群细胞增高,CD 4/CD 8降低,重型再障患者血清sIL-2R中水平高于正常对照组与慢性再障。结论骨髓造血祖细胞数量减少是再障发病的重要因素,其减少程度与再障的病情有关;细胞免疫功能异常及造血负调控因子可能在再障发病中起一定的作用。     

Panaxdiol Saponins Component Promotes Hematopoiesis and Modulates T Lymphocyte Dysregulation in Aplastic Anemia Model Mice

Objective: To investigate the potential efficacy of panaxadiol saponins component (PDS-C) in the treatment of aplastic anemia (AA) model mice. Methods: Totally 70 mice were divided into 7 groups as follows: normal, model, low-, medium-, high-dose PDS-C (20, 40, 80 mg/kg, namely L-, M-, H-PDS-C), cyclosporine (40 mg/kg), and andriol (25 mg/kg) groups, respectively. An immune-mediated AA mouse model was established in BALB/c mice by exposing to 5.0 Gy total body irradiation at 1.0 Gy/min, and injecting with lymphocytes from DBA mice. On day 4 after establishment of AA model, all drugs were intragastrically administered daily for 15 days, respectively, while the mice in the normal and model groups were administered with saline solution. After treatment, the peripheral blood counts, bone marrow pathological examination, colony forming assay of bone marrow culture, T lymphocyte subpopulation analysis, as well as T-bet, GATA-3 and FoxP3 proteins were detected by flow cytometry and Western blot. Results: The peripheral blood of white blood cell (WBC), platelet, neutrophil counts and hemoglobin (Hb) concentration were significantly decreased in the model group compared with the normal group (all P<0.01). In response to 3 dose PDS-C treatment, the WBC, platelet, neutrophil counts were significantly increased at a dose-dependent manner compared with the model group (all P<0.01). The myelosuppression status of AA was significantly reduced in M-, H-PDS-C groups, and hematopoietic cell quantity of bone marrow was more abundant than the model group. The colony numbers of myeloid, erythroid and megakaryocytic progenitor cells in the model group were less than those of the normal mice in bone marrow culture, while, PDS-C therapy enhanced proliferation of hematopoietic progenitor cells by significantly increasing colony numbers (all P<0.01). Furthermore, PDS-C therapy increased peripheral blood CD3+ and CD3+CD4+ cells and reduced CD3+CD8+ cells (P<0.05 or P<0.01). Meanwhile, PDS-C treatment at medium- and high doses groups also increased CD4+CD25+FoxP3+ cells, downregulated T-bet protein expression, and upregulated GATA-3 and FoxP3 protein expressions in spleen cells (P<0.05). Conclusion: PDS-C possesses dual activities, promoting proliferation hematopoietic progenitor cells and modulating T lymphocyte immune functions in the treatment of AA model mice.     

补肾生血解毒方对免疫介导的再生障碍性贫血小鼠淋巴细胞分化及血液学参数的影响

目的探讨补肾生血解毒方对免疫介导的再生障碍性贫血(AA)小鼠淋巴细胞分化及血液学参数的影响。方法以~(60)Co-γ射线照射结合异源免疫细胞尾静脉注射致小鼠骨髓造血抑制模型,阳性对照药物免疫抑制剂环孢素A、中药补肾生血解毒方干预治疗,连续给药28 d。分别于第7、14、21、28天用血细胞计数仪检测外周血中血液学参数的变化;给药结束后用流式细胞仪检测小鼠外周血细胞中T细胞、B细胞、自然杀伤细胞(NK)比率的改变。结果与模型组相比,环孢素A组与补肾生血解毒方组在第21、28天,小鼠外周血中红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)数量均升高(P0.05),差异有统计学意义。与模型组相比,补肾生血解毒方组大鼠外周血中CD3~+CD4~+细胞比率增多(P0.01),CD3~-CD19~+细胞和CD3~-NK1.1~+细胞比率降低(P0.01),差异有统计学意义。结论补肾生血解毒方能够通过调控AA小鼠淋巴细胞分化修复骨髓造血功能,达到治疗AA的目的。     

rhBMP-2对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血恢复的促进作用

探究了人重组骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)对再障小鼠的治疗作用。采用5-FU联合白消安建立小鼠再障模型,通过干预rhBMP-2进行治疗。考察了各实验组小鼠白细胞数、骨髓单核细胞数、体重、存活率、脾系数、粒系-巨系细胞集落(CFU-GM)数以及骨髓单核细胞中CD34⁺细胞比例,进行股骨、脾脏HE切片分析。结果表明,相较于再障对照组,rhBMP-2治疗组小鼠的白细胞数、存活率、CFU-GM集落数及骨髓单核细胞数显著提高,并且骨髓单核细胞中的CD34⁺细胞含量也提高,显著改善脾脏功能和缓解骨髓抑制,证实rhBMP-2能够促进再障小鼠造血损伤的修复。     

再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞中细胞周期蛋白D的表达及意义

目的 观察再生障碍性贫血患者骨髓单个核细胞中细胞周期蛋白D(CyclinD)不同亚型的表达，以探讨其发病机制。方法 抽取再生障碍性贫血患者及正常对照组骨髓标本，用淋巴细胞分离液分离出骨髓单个核细胞，按Trizol-氯仿-异丙醇一步法提取细胞总RNA，用RT-PCR方法检测Cyclin D不同亚型(D1、D2、D3)的表达。结果 Cyclin D1在两组标本中都没有表达，而Cyclin D2、Cyclin D3有表达，且再生障碍性贫血患者的表达率及表达水平都显著低于正常对照组。结论 再障患者骨髓单个核细胞中Cyclin D的表达显著降低可能是再障造血抑制、骨髓衰竭的原因之一。     

扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响

目的:观察扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响.方法:BALB/c小鼠40只随机分为正常组、模型对照组、环孢霉素A对照组、扶正养营颗粒实验组,记数外周血象、骨髓有核细胞,测定骨髓造血组织容量及bcl-2表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,环孢霉素A组、扶正养营颗粒组外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:扶正养营颗粒可能是通过上调拮抗凋亡因子bcl-2的表达,改善骨髓增殖,发挥其治疗再生障碍性贫血的作用.     

苯诱发再生障碍性贫血小鼠骨髓病理改变及血液细胞的变化

目的：观察苯诱发再生障碍性贫血（再障）模型小鼠骨髓组织的病理改变及血液细胞的变化。方法：清洁级Balb/c小鼠40只,随机分为正常对照组及再障模型组。正常对照组注射玉米油4ml/kg;再障模型组注射苯油混合液（给苯剂量1ml/kg体重）,造模14d后取材。结果：与正常对照组比较,再障模型组小鼠骨髓有核细胞及血细胞数目明显减少,骨髓组织病理学观察显示造血细胞减少,非造血细胞增加。结论：苯试剂可造成再障小鼠骨髓组织损伤及血液细胞减少。     

骨形态发生蛋白诱导髓外造血的实验研究

目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)诱导髓外造血以拯救骨髓造血衰竭的作用。方法:采用60Co-γ+氯霉素(CH)+环磷酰胺(CY)的方法诱导小鼠致死性再生障碍性贫血模型,实验组于诱导再障前6d肌肉内植入重组人-BMP-4(rh-BMP-4),对照组小鼠肌肉内植入琼脂。观察血象、病理形态等变化以及两组再障小鼠的死亡率。同时,给正常小鼠大腿肌肉内植入rh-BMP-4,动态观察植入后局部的形态变化、形成骨及骨髓的形态特点,脾集落形成单位(CFU-S)以及基质细胞干细胞生长因子(SCF)的表达。结果:正常小鼠在BMP肌肉内植入1周内,在BMP周围有大量间质细胞增殖,2周后才出现软骨化骨和骨小结形成,其骨髓基质细胞的SCF表达明显高于自体骨髓;BMP植入组的再障小鼠,不仅血象与对照组相比有明显改善,而且死亡率也明显下降,有46.7%存活超过3个月,其血象完全恢复正常,骨髓和脾脏的组织形态学改变也恢复正常。对照小鼠除1只存活超过3个月外(占6.7%),其余均死于急性再生障碍性贫血。结论:肌肉内植入BMP-4可诱导髓外造血,其机制可能与BMP-4诱导成年自体肌肉内存在的干细胞向造血分化有关,这一结果将为干细胞治疗提供了一条新的思路。     

Expression of CD28 and CTLA4 on T Cells in Bone Morrow of Immune-mediated Aplastic Anemia Mice

Summary： To investigate the expression and significance of CD28 and CTLA4 on T cells in bone marrow of aplastic anemia （AA） mice, in vitro bone marrow mononuclear cells （BMMNCs） were activated through being incubated with PHA （15 μg/mL）. The expression of CD28 and CTLA4 on T cells incubated with or without PHA was detected by two-color flow cytometry. The expression of CD28 and CTLA4 was significantly increased after PHA stimulation. In the AA mice. the expression of CD28 with or without PHA stimulation was both higher than that in the normal mice （both P〈0.01）, but the expression of CTLA4 with or without PHA stimulation showed no significant difference in comparison to that in the normal mice （both P〉0.05）. In the AA mice, there were more activation and activated potential of T cells than the normal, and the abnormal expression of CD28 and CTLA4 may participate in immunological disorder mediated by T cells.     

CD133 在骨髓增生异常综合征患者中的表达及临床意义

摘要：目的探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓中CD133的表达及其临床意义。方法应用流式细胞仪采用直接
免疫荧光标记法,分别测定31例难治性贫血伴幼稚细胞增多（RAEB）、10例难治性血细胞减少伴多系发育异常（RCMD）
以及11例再生障碍性贫血患者骨髓中CD133+细胞和CD34+/CD38-细胞比例,对比分析CD133及CD34/CD38在不同亚型
MDS中的表达及临床意义。结果在RAEB型MDS患者骨髓有核细胞中,CD133阳性细胞平均占6.75%,RCMD患者平
均占1.41%,而再生障碍性贫血对照组占2.70%,RAEB组显著高于其他两组（P<0.05）;再障对照组与RCMD组之间无显
著性差异（P>0.05）;CD34+/CD38-细胞比例在3组中均小于1%,统计学上无显著性差异（P>0.05）。结论CD133在MDS
的进展类型RAEB患者骨髓细胞中高表达,CD133有助于RAEB分型诊断;而CD34+/CD38-标记在MDS分型诊断中并无
价值。     

再生障碍性贫血造血细胞Fas抗原表达与T淋巴细胞功能的研究

目的 研究造血细胞凋亡与T淋巴细胞免疫在再生障碍性贫血(再障，Aplastic anemia，AA)发病机制中的作用及两者相关性。方法 采用流式细胞仪测定40例AA患者和15例非血液、免疫系统疾病对照者骨髓单个核细胞(BMMNC)的总CD34^ 、CD34^ Fas^ 、CD34^ Fas^-、CD3^ 、CD8^ 、CD3^ 、CD3^ CD25^ 标记值。结果 (1)与对照组比较，AA组总CD34^ 细胞％明显减少而其Fas表达率(以占总CD34^ 细胞％为计)明显增高。(2)AA组CD34^ 细胞％数与其Fas抗原表达率无明显负相关。(3)AA组T细胞％明显增多，且以CD8^ 细胞和CD3^ CD25^ 细胞增多为主。(4)AA组CD34^ 细胞％数与其T细胞活化状态无显著负相关。(5)AA组CD34^ 细胞Fas表达率与其T细胞活化状态无显著正相关。结论 AA骨髓存在着造血细胞数量减少和T淋巴细胞亚群数量、功能的异常，造血细胞数量减少还可能与Fas以外途径诱导的凋亡过度有关。骨髓造血细胞凋亡过度可能有活化T淋巴细胞免疫以外的途径诱导Fas途径或活化T淋巴细胞可以通过Fas之外的途径诱导造血细胞凋亡。     

Proliferation and apoptosis of bone marrow CD4<Superscript>+</Superscript> T cells in patients with aplastic anemia and impacts of the secreted cytokines on hematopoietic stem cells from umbilical cord blood

Recent studies indicate that immune-associated aplastic anemia(AA)resembles such autoimmune diseases as insulin-dependent diabetes and chronic autoimmune thyroiditis that belong to organ-specific autoimmune diseases.Many independent investigation groups have successfully isolated the pathopoiesis-associated T cell clone causing hematopoiesis failure with a CD4 phenotype from peripheral blood and bone marrow(BM)in AA patients.In the current study,BM CD4+ T cells were isolated from AA patients and healthy con...     

再生障碍性贫血和难治性贫血的临床观察

目的：探讨慢性再生障碍性贫血(CAA)和骨髓增生异常综合征—难治性贫血(MDS—RA)之间的差异和鉴别．方法：对61例CAA和21例MDS—RA患者的临床资料进行回顾性比较观察。结果：在MDS—RA组患者中骨髓幼稚前体细胞异常定位和网硬蛋白阳性率高于CAA组，骨髓碱性磷酸酶积分、CD16^ 和CD19^ 细胞数低于CAA组．结论：CAA和MDS—RA的鉴别诊断需结合临床表现和骨髓涂片、病理活检等综合考虑。     

AA病人血浆和骨髓瘦素及其受体表达与意义

目的探讨瘦素及其受体在再生障碍性贫血（AA）病人血浆和骨髓中的表达及其意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测38例AA病人（其中重型者8例、非重型者30例）及22例健康体检者血浆中瘦素及可溶性瘦素受体（sLR）的水平;应用PV-6000二步法检测32例AA病人（其中重型者14例、非重型者18例）及17例对照组骨髓组织中瘦素及其受体的表达。结果 AA病人血浆瘦素水平为（14.16±4.50）μg/L,显著高于对照组的（10.87±3.21）μg/L（t=3.008,P〈0.01）;AA病人血浆sLR水平为（16.85±4.89）μg/L,显著低于对照组的（20.67±6.18）μg（t=2.641,P〈0.05）。AA病人骨髓组织中瘦素表达水平为0.192±0.030,显著高于对照组的0.168±0.024（t=2.808,P〈0.01）;AA病人骨髓组织中瘦素受体表达水平为0.198±0.041,显著低于对照组的0.235±0.054（t=2.704,P〈0.05）。重型AA病人血浆及骨髓中瘦素水平高于非重型者,瘦素受体水平低于非重型者,但差异无显著性（P〉0.05）。结论 AA病人血浆及骨髓中瘦素水平升高,而受体水平下降;瘦素在AA的发生发展中有失利用现象存在。