第二代杂交捕获法和聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒的比较

目的:比较两种常用的人乳头瘤病毒(HPV)的检测方法。方法:第二代杂交捕获法(HCⅡ)和聚合酶链反应(PCR)检测妇女宫颈分泌物中的高危型HPV。结果:103例宫颈病变患者中,PCR和HCⅡ检测HPV的阳性率分别为41.7％和39.9％。两种检验方法具有相关性(P<0.05)。结论:PCR和HCⅡ具有较好的一致性。     

表面刮取法在聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒中的应用

我所在应用 PCR检测 HPV DNA的初期 ,发现采用文献惯用棉拭子法取材的实验结果有不支持临床诊断的现象 ,经反复摸索采用表面刮取法取材进行PCR检测 HPV DNA的特异片段 ,获得较满意的效果 ,现报告如下。1　临床资料1.1　病例来源 :2 58例均为我所性病门诊 1997年 7～12月的患者 ,根据卫生部防疫司制定的尖锐湿疣 CA,诊断标准 ,临床诊断为尖锐湿疣 ,但皮损不典型 ,其中男 2 14例 ,女 4 4例 ,年龄 2 0～ 50岁。1.2　实验方法1.2 .1　醋酸白试验 :用 5%的冰醋酸溶液涂在疣体表面 ,5分钟后观察结果 ,发白为阳性。1.2 .2　棉拭子法取材 :…     

聚合酶链反应-微孔板杂交技术检测人乳头瘤病毒

目的　建立HPV诊断及分型技术。方法　用HPV通用型引物和型特异性探针作PCR 微孔板杂交检测法(PCR ELISA)。结果　特异性探针只与HPV阳性标本显色 ,A值为 0 32 7± 0 0 2 9;阴性标本均不显色 ,A值为 0 0 0 3± 0 0 0 1,与性传播性疾病相关的病原微生物 (淋球菌、解脲支原体、沙眼衣原体、人巨细胞病毒、单纯疱疹病毒 )均不显色。该法能检出 3 6个HeLa细胞含HPV 18型 144个拷贝 ,A值 0 2 37～ 0 2 0 6 ;空白对照A值为 0 0 0 5～ 0 0 15。结论　PCR ELISA方法快速、敏感、特异且可用自动化酶标仪多量标本检测 ,适合临床实验使用。     

应用聚合酶链反应检测宫颈分泌物人乳头瘤病毒

聚合酶链反应(PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV),研究比较多。本实验主要检测宫颈分泌物人乳头瘤病毒6、11、16、18、33型,因其各型所致疾病互有交叉,故挑选一段针对HPV,各型共同的DNA序列,用PCR技术检出该核酸片段。在宫颈炎、阴道炎、尖锐湿疣病人中阳性率达31.25％(20/64)。说明人乳头瘤病毒对已婚育妇女普遍易感。检测HPV对宫颈炎、阴道炎、尖锐湿疣等妇科疾病的诊断治疗及宫颈癌的防治具有重要意义。     

应用聚合酶链反应方法检测宫颈癌患者的人乳头瘤病毒

目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）在宫颈癌的发生中的作用。方法采用聚合酶链反应（PCR）-核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中HPV-DNA,对来源于子宫颈癌患者的石蜡包埋组织标本进行四种常见生殖道人乳头瘤病毒（HPV）（HPV6、11、16、18）的检测和分型。结果在宫颈癌活检组织中HPV-16,18型39.1%,与正常妇女宫颈组织阳性率均为2.2%比较,差异均具有统计学意义。尖锐湿疣主要是HPV-Ⅰ（6,11型）感染,阳性率为69.2%,HPV-Ⅱ仅占4.2%。结论宫颈癌主要与HPV16及18型感染有关。     

聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒应用的探讨

人乳头瘤病毒(Human papillomavirus HPV)是一种小的双链DNA病毒，可感染人的皮肤和粘膜上皮细胞，产生乳头瘤样变。人类生殖道HPV感染较为常见，研究表明，HPV的某些类型与某些癌基因与宫颈癌的发生有较密切的关系，而且HPV感染所致的生殖道尖锐湿疣是常见的性传播疾病，近年来发病率有增长的趋势。现就我们应用聚合酶链反应初检．HPV感染的结果报告如下。     

实时荧光聚合酶链反应技术与第2代杂交捕获法检测高危亚型人乳头瘤病毒的比较

目的 比较实时荧光聚合酶链反应技术(实时PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)16、18型与第二代杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测13种HPV高危亚型.方法 采用实时PCR与HC-Ⅱ分别检测宫颈脱落细胞标本中的HPV16、18型和13种HPV高危亚型,并进行测序分析.结果 HPV16、18型实时PCR总的检出率为24%,13种HPV高危亚型HC-Ⅱ总的检出率为46.6%;高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)组实时PCR和HC-Ⅱ的检出率均较低度鳞状上皮细胞内病变(LSIL)组要高,分别为54%与21%、84.3%与65.6%.HPV16、18型在HPV高危亚型中的总检出率为51%.有2例宫颈炎组标本HC-Ⅱ检测阴性而实时PCR检测阳性,测序结果与实时PCR一致.结论 实时PCR法检测HPV16、18较HC-Ⅱ灵敏度高,但检测的HPV亚型少,相比之下HC-Ⅱ更适合于临床上HPV高危亚型的筛查检测.     

两种人乳头瘤病毒分型检测方法的比较

目的 通过比较PCR联合地高辛标记探针杂交法与实时荧光定量PCR法检测宫颈液标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价PCR联合地高辛标记探针杂交法的临床应用价值. 方法 将4型HPV(16、51、54和56)探针3′端加尾地高辛标记,检测标记探针的灵敏度和特异性.收集63例第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)阳性和18例HC-Ⅱ阴性的宫颈液标本,采用HPV通用引物MY11/09对所有标本L1区基因序列进行PCR扩增,利用地高辛标记探针杂交法对PCR产物进行检测分型;同时利用实时荧光定量PCR对这81例标本进行检测,将两者的检测结果进行比较. 结果 地高辛标记探针杂交法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型40例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,分别占HC-Ⅱ阳性标本的63.5%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;实时荧光定量PCR法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型39例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,占HC-Ⅱ阳性标本的61.9%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;重复性检测显示两种方法检测4型HPV感染的变异系数(CV)为0～1.45%和0～1.50%,检测标本中4型感染的符合率为97.5% ～100%. 结论 PCR联合地高辛标记探针杂交法具有较好的灵敏度和特异性, 可能对于临床HPV分型检测有应用价值.     

两种人乳头瘤病毒分型检测方法的比较

目的通过比较PCR联合地高辛标记探针杂交法与实时荧光定量PCR法检测宫颈液标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价PCR联合地高辛标记探针杂交法的临床应用价值。方法将4型HPV(16、51、54和56)探针3′端加尾地高辛标记,检测标记探针的灵敏度和特异性。收集63例第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)阳性和18例HC-Ⅱ阴性的宫颈液标本,采用HPV通用引物MY11/09对所有标本L1区基因序列进行PCR扩增,利用地高辛标记探针杂交法对PCR产物进行检测分型;同时利用实时荧光定量PCR对这81例标本进行检测,将两者的检测结果进行比较。结果地高辛标记探针杂交法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型40例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,分别占HC-Ⅱ阳性标本的63.5%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;实时荧光定量PCR法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型39例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,占HC-Ⅱ阳性标本的61.9%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;重复性检测显示两种方法检测4型HPV感染的变异系数(CV)为0~1.45%和0~1.50%,检测标本中4型感染的符合率为97.5%~100%。结论PCR联合地高辛标记探针杂交法具有较好的灵敏度和特异性,可能对于临床HPV分型检测有应用价值。     

实时荧光聚合酶链反应检测宫颈人乳头瘤病毒在宫颈癌筛查中的应用

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染已被证明是宫颈癌的直接病因[1],Woodman等[2]研究发现其归因危险性达到90%以上.有研究证明,高危型HPV检测筛查宫颈病变的敏感性为90%～95%[3-9],因此,宫颈HPV检测已成为宫颈癌筛查及治疗后随访的重要内容.本研究评估了实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法用于筛查宫颈病变的临床应用价值,以期为今后的临床应用提供参考.     

新疆宫颈癌与人乳头瘤病毒（HPV）感染关系的初步研究

本文用核酸杂交法对以维吾尔族为主的宫颈癌及非癌宫颈组织进行了HPV-DNA相关序列的检查。标本有宫颈癌33例、宫颈糜烂1例和正常宫颈1例。在33例宫颈癌中维吾尔旅有25例,其余8例包括汉、蒙古、回和柯尔克孜等四个民族。结果是在维吾尔族病例宫颈癌组织中HPV-DNA相关序列检出率达80％,以HPV_16型为主,核酸多呈整合状态存在。上述结果表明,HPV在新疆某些地区内的人群中感染及传播的情况可能比较普遍。但要进一步阐明HPV与宫颈癌的病因学关系,尚需做更多的工作。     

共同引物PCR/RFLP方法对直肠癌组织中人乳头瘤病毒的检测及分型

为探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与直肠癌的关系，应用共同引物聚合酶链式反应扩增ＨＰＶ高保守区Ｌ１区序列，扩增产物经限制性内切酶ＤｄｅＩ，ＸｂａＩ，ＡｃｃＩ，ＰｓｔＩ酶切后，进行限制性片段长度多态性分析（ＲＦＬＰ），可对ＨＰＶ６，１１，１６，１８等常见的型别进行快速检测及鉴定。用该法对１１２例直肠癌和６３例正常直肠粘膜组织中ＨＰＶ进行检测。结果：直肠癌ＨＰＶ检出率（１８．７５％）与正常直肠粘膜（７．９３％）差异无显著性（Ｐ＞０．０５），但直肠癌ＨＰＶ１６检出率（１６．０７％）高于正常直肠粘膜（１．５８％），差异有高度显著性（Ｐ＜０．０１），表明ＨＰＶ１６可能与直肠癌的发生有密切关系，是直肠癌的高危致癌因素。该检测系统敏感性高，可检出每个二倍体细胞内０．１拷贝的ＨＰＶ１６ＤＮＡ，操作简便，适用于大批量标本ＨＰＶ的筛检，值得推广应用     

单管多重PCR鉴定HPV基因型方法的建立和临床评价

目的建立单管多重PCR鉴定低危和高危乳突瘤病毒（HPV）的方法以及用临床标本对该方法进行评价。方法设计HPV基因型特异的引物,在一个PCR反应管中PCR扩增来自上皮细胞提取的DNA,然后用毛细管电泳对PCR产物进行分离,根据扩增产物的大小确定相应的HPV基因型。对不同病理期的1094份临床宫颈标本和对照进行了分析。结果一共鉴定了16个HPV基因型,即HPV16,58,52,51,56,31,18,39,66,59,6,33,30,35,45和11。该方法具有高度的灵敏性和可重复性。同对照相比,未知重要意义的非典型鳞状细胞（ASCUS）、低级别表皮内损伤（LSILs）、高级别的表皮内损伤（HSILs）标本HPV检出阳性率分别为60．5％、77．1％和82．2％,而对照为14．4％,其中在HSILs标本HPV16和HPV58检出率最高,并与细胞恶性程度呈正相关。结论单管多重PCR鉴定HPV的方法是稳定的,且可以用于HPV的流行病学的调查。     

用光敏生物素标记HPV16,18DNA探针检测宫颈癌组织核酸相关序列

本文采用光敏生物素法标记人乳头瘤病毒(HPV)16,18型DNA探针,进行斑点杂交检测宫颈癌组织中HPV16、18DNA相关序列。检测结果为,18例宫项癌组织中5例HPV16杂交阳性(27.78%);14例HPV18杂交阳性(77.8%)。这表明宫颈癌的发生和HPV感染密切相关。     

用~(32)P标记的人乳头瘤病毒DNA检测宫颈病变组织DNA中病毒序列

使用Southern blot杂交方法对33例宫颈病变标本进行了检测,发现在26例宫颈癌中,6例存在HPV16DNA同源序列,占23％。HPV18同源序列占7.6％(2/26)。HPVX1同源序列为11.5％(3/26)。HPV16相关序列为27％(7/26)。而在4例慢性宫颈炎中仅有1例含HPV16相关序列,1例尖锐湿疣中含HPV16相关序列。     

用32P标记的人乳头瘤病毒DNA检测宫颈病变组织DNA中病毒序列

使用Southern blot杂交方法对33例宫颈病变标本进行了检测,发现在26例宫颈癌中,6例存在HPV16DNA同源序列,占23%。HPV18同源序列占7.6%(2/26)。HPVX1同源序列为11.5%(3/26)。HPV16相关序列为27%(7/26)。而在4例慢性宫颈炎中仅有1例含HPV16相关序列,1例尖锐湿疣中含HPV16相关序列。     

PCR结合核酸分子杂交放射自显影检测HPV16,18实验条件的研究

为建立一种快速、简便、高敏感性和特异性的检测消化道肿瘤组织中ＨＰＶ１６，１８ＤＮＡ序列的方法，用ＰＣＲ扩增ＨＰＶ１６早期区Ｅ６的１２０ｂｐ片段和扩增ＨＰＶ１８Ｅ６、Ｅ７区２６７ｂｐ片段，扩增产物与相应的５′－末端Ｐ３２标记的特异性寡核苷酸探针进行斑点杂交放射性自显影。探讨了影响ＰＣＲ和杂交的关键因素，从中选出较佳的反应条件：即ＰＣＲ退火温度及杂交温度均为５５℃，反应缓冲液镁离子浓度为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ，引物浓度各为５０ｐｍｏｌ／１００μｌ，探针浓度各为１．０ｐｍｏｌ／ｍｌ，杂交时间３ｈ，放射性自显影时间２４ｈ。在上述条件下，该方法可检出低至０．０１ｆｇ的ＨＰＶ１６或ＨＰＶ１８质粒ＤＮＡ，ＨＰＶ１６与ＨＰＶ１８之间无交叉反应，为进一步探讨ＨＰＶ与消化道肿瘤的关系奠定了基础。     

PCR微板杂交检测生殖器疱疹病毒感染

以 PCR扩增生殖器疱疹病毒 DNA,然后用特异性 DNA探针微孔板检测疱疹病毒扩增产物 ,同时用普通 PCR检测同样的标本。结果 4 3例病例组中 ,PCR微板杂交 35 (83% )例阳性 ,8例 (17% )阴性 ;普通 PCR37(86 % )例阳性 ,6 (14 % )例阴性 ,二者无显著性差异 ;对照组 PCR微板杂交 19例 2例阳性 ,17例阴性。同时 ,普通 PCR则有 5例阳性 ,14例阴性。PCR微板杂交具有快速、灵敏度高、特异性强、抗污染能力强的优点 ,适用于检测可疑 HSV感染 ,具有临床使用价值     

宫颈疾患中人乳头瘤病毒核酸的检测

应用HPV_(16,18,11)三个DNA探针,通过斑点杂交技术,对80例宫颈疾患和6例其它组织进行了检测和分析,结果显示HPV_(16、18)和HPV_(11)DNA序列在宫颈癌、宫颈不典型增生和慢性宫颈炎中的检出率分别为44％(22/50),8％(4/50),4％(2/50);15％(2/13),15％(2/13),15％(2/13)和19％(3/16),0％(0/16),13％(2/16);其中有3例标术HPV_(16,18)呈弱交叉杂交。而1例子宫肌瘤、1例阴道癌、1例宫颈息肉、2例膀胱癌和2例正常子宫颈组织中均未测出HPV DNA序列。结果提示:某些HPV类型(特别是HPV_(16))可能与宫颈癌的发生有关。     

PCR法检测宫颈癌细胞中人乳头瘤病毒

采用ＰＣＲ（聚合酶链反应）技术对宫颈癌细胞中ＨＰＶ（人乳头瘤病毒）和ＨＰＶ１６、１８型的感染状况分别进行了研究。在新鲜组织中，宫颈癌细胞内ＨＰＶ和ＨＰＶ１６、１８型的感染率分别达８０％和７５％。但石蜡标本中ＨＰＶ和ＨＰＶ１６、１８型的感染率则为３３．３％和２６．７％。说明宫颈癌细胞中ＨＰＶ的感染率极高，且主要系ＨＰＶ１６、１８型的感染。ＰＣＲ技术检测宫颈癌细胞中的ＨＰＶ方法简便快速，灵敏度高。可广泛用于流行病学调查和高危致癌ＨＰＶ感染妇女的追踪观察。对宫颈癌的早期发现和早期诊断有重要意义