巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

目的 利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytufisin.方法 化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的 蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响.结果 经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的 产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40%;经小鼠白血病模型治疗实验发现:给予Polytufisin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d.结论 所得到的Polymftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用.     

巨噬细胞激活剂Polytuftsin在毕赤酵母中的表达及其活性检测

 目的　利用毕赤酵母表达系统分泌表达巨噬细胞激活剂Polytuftsin。方法　化学法将编码Polytuftsin蛋白的重组质粒转入毕赤酵母菌中,甲醇诱导阳性转化子分泌表达Polytuftsin目的蛋白;分别于体内外水平上检测纯化后的Polytuftsin对巨噬细胞功能的影响。结果　经SDS-PAGE、PCR法验证该Polytuftsin重组蛋白是正确的目的产物,相对分子质量约为20×103;该重组蛋白能够体外刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α因子;提高巨噬细胞杀死L1210白血病细胞的能力,最大杀伤率达到40 %;经小鼠白血病模型治疗实验发现：给予Polytuftsin后小鼠出瘤时间延迟,小鼠生存期延长,平均达到21 d。结论　所得到的Polytuftsin重组蛋白可激活巨噬细胞,发挥抗肿瘤作用。     

应用毕赤酵母系统表达人Fascin蛋白

背景与目的:应用酵母表达系统表达人的重要肿瘤分子标志物fascin蛋白。材料与方法:利用分子克隆技术将fascin基因完整编码区克隆至毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌表达载体pPIC9中,获得重组质粒pPIC9-fascin;以限制性内切酶MssⅠ进行线性化并转化毕赤酵母GS115菌株,用PCR方法筛选出阳性整合克隆;对阳性克隆进行0.5甲醇诱导表达重组蛋白,银染及Western blot检测培养上清中fascin重组蛋白的表达情况。结果:毕赤酵母能够分泌表达约69kD的fascin重组蛋白,表达量为40μg/L。结论:毕赤酵母可以分泌表达fascin蛋白,但由于分泌表达量较低,尚达不到工程化要求。     

毕赤酵母表达重组人内皮抑素对小鼠肺腺癌LA795生长和转移的抑制作用

背景与目的：肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的生成,内皮抑素能抑制肿瘤的血管生成。本研究旨在观察毕巴斯德酵母（pichia.pastoris.GS115)分泌表达的重组人内皮抑素（recombinant human endostatin,rhES)对小鼠肺腺癌LA795生长和转换的抑制作用。方法：挑取一株高效分泌表达rhES的毕赤巴斯德酵母菌株,利用甲醇进行大量诱导表达;用肝素亲和层析的方法纯化目的蛋白;将接种LA795肺腺癌细胞的T739小鼠随机分成两组,分别给予rhES和PBS皮下注射,每日1次,连续14天;观察两组小鼠肿瘤生长情况,测量肿瘤体积大小,并观察两组小鼠肿瘤肺部转移情况。结果：经甲醇诱导的毕赤巴斯德酵母菌株高效分泌表达了rhES;动物实验研究发现rhES能显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长,rhES治疗组肿瘤大小与对照组比较具有显著性差异（P＜0．001）,抑瘤率达到66．4％,并且有效抑制了肿瘤的肺部转移。结论：利用毕赤酵母作为宿主分泌表达的rhES具有良好的生物学活性,可显著抑制小鼠肺腺癌LA795的生长和转移。     

携带flk1的重组减毒沙门氏菌的构建及其抗肿瘤血管生成的研究

目的:观察携带鼠血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,flk1)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌诱导的flk1特异性免疫应答及抗肿瘤血管生成作用.方法:构建真核表达载体pcDNA3.1-flk1,并将其转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207中,体外感染小鼠巨噬细胞,用Western印迹对表达产物进行鉴定,将重组菌口服免疫小鼠,分析免疫后小鼠体内的特异性CTL应答.采用藻酸盐微囊实验观察其对体内肿瘤血管生成的影响.结果:免疫印迹试验表明携带pcD-NA3.1-flk1表达载体的重组菌感染的小鼠巨噬细胞能表达flk1蛋白,免疫小鼠脾淋巴细胞产生针对flk1的特异性CTL活性.重组疫苗菌的免疫能够明显抑制小鼠体内肿瘤血管的形成.结论:携带flk1的重组减毒沙门氏菌经口服免疫,诱导小鼠产生抗flk1的特异性免疫反应,且能明显产生抗肿瘤血管生成作用.     

Participation of T-lymphocytes in the curative effect of a novel synthetic polyamine analogue, N,N'-bis[3-(ethylamino)propyl]-1,7-heptanediamine, against L1210 leukemia in vivo

We have recently established that combination therapy with N,N'-bis[3-(ethylamino)propyl]-1,7-heptanediamine (BEPH), a synthetic polyamine analogue, and N,N'-bis-2,3-butadieneyl-putrescine, a polyamine oxidase inhibitor, eradicated L1210 leukemia in mice and induced resistance to a subsequent L1210 challenge. We now demonstrate that BEPH treatment alone, given on a more frequent schedule (5 mg/kg, day 3, 4, 5) or at a higher dose (10 mg/kg, day 3, 4), cures 100% of L1210 leukemic mice. These treated animals were subsequently immune to a second challenge with L1210 tumor cells. However, mice cured with BEPH did not reject P388 leukemic cells, although their mean survival time was slightly prolonged. In an in vivo tumor neutralization assay, splenocytes from cured mice and L1210 cells were injected into naive mice; 80% did not develop L1210 leukemia. Coculturing lymphocytes from cured mice with L1210 cells in vitro generated a potent tumor-specific cytolytic response against L1210 target cells, whereas lymphocytes from naive mice did not generate any significant cytolytic activity. Both the in vitro and in vivo activities were completely eliminated by pretreating the splenic lymphocyte population with anti-Thy-1.2 monoclonal antibodies and complement, indicating T-cells as the effector population. In T-cell-deficient nude mice BEPH treatment was not curative, increasing survival time by approximately 2-fold. We conclude from these studies that T-cell-mediated immunity plays a pivotal role in the mechanism by which synthetic polyamine analogues, such as BEPH, prevent neoplastic growth.