日本血吸虫理组BCG—Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和CAg的动态观察

目的：检测日本血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的血清IgG及其亚类和CAg反应。方法：10^6CFU疫苗皮下和静脉注射免疫BALB／C鼠，分别于免疫后0、4、8、10、14、16周各剖杀4只，收集血清，常规ELISA法检测IgG及其亚类和CAg。结果：皮下注射组IgG在免疫后14周，IgGl在免疫后14－16周，IgG2a在免疫后4周和IgG2b在免疫后16周达最高水平，未能测到CAg；静脉注射组IgG在免疫后10周，IgGl和IgG2a在免疫后8周以及IgG2b在免疫后16周达最高水平，CAg在免疫后10周升高。结论：日本血吸虫重组BCG－Sj2GST疫苗能诱导宿主产生高水平的IgG、IgG2a和IgG2b，静脉注射的免疫效果优于皮下注射。     

日本血吸虫重组BCG-sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG抗体反应的动态观察

目的：检测日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠不同时间后的IgG抗体。方法：将10^6CFU疫苗采用皮下和静脉注射分别免疫BABL/C鼠,分别于免疫后0、4、8、10、14和16周各剖杀4只,收集血清,常规ELISA法检测IgG抗体,同时设PBS皮下注射对照组。结果：皮下注射组和静脉注射组IgG抗体水平都于免疫后4周显著增加,免疫后10周达最高水平,并持续在较高水平至免疫后16周。疫苗免疫后10周静脉注射组的抗体水平显著高于皮下注射组。结论：日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗静脉注射免疫效果优于皮下注射。     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究

为检测血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态变化和免疫保护力,采用106CFU疫苗皮下1次和3次接种小鼠,接种后8周用日本血吸虫尾蚴攻击感染。感染后6周剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,同时设有BCG对照组。结果发现实验组免疫后血清IgG抗体迅速升高并持续于高水平;减虫率分别为39.74%和39.74%,减卵率分别为62.86%和55.62%,与对照组相比均有非常显著的差异（P<0.01）。而免疫3次和免疫1次小鼠血清IgG抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗皮下注射1次即能诱导小鼠较高水平的IgG抗体和免疫保护力,是一种比较理想的新型疫苗,值得进一步研究。     

血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠肝脏虫卵

目的检测血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗对小鼠肝虫卵肉芽肿细胞内TNF-mRNA表达的影响.方法用106CFU疫苗皮下注射和腹腔注射分别免疫BALB/C鼠,免疫后8W用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染,感染后6W剖杀小鼠,分离肝脏,运用原位杂交技术检测TNF-αmRNA表达.结果疫苗免疫,尾蚴攻击后小鼠肝虫卵肉芽肿细胞内TNF-α mRNA表达显著加强.结论血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗能促进宿主Thl反应,加强宿主抗血吸虫感染的保护性免疫力.     

日本血吸虫重组BCG—Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态观察及免疫保护力的研究

为检测血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗免疫小鼠血清IgG动态变化和免疫保护力，采用10^6CFU疫苗皮下1次和3次接种小鼠，接种后8周用日本血吸虫尾蚴感染。感染后6周剖杀小鼠，计算减虫率和减卵率，同时设有BCG对照组。结果发现：实验组免疫后血清IgG抗体迅速升高并持续高于水平；减虫率分别为39.74%和39.74%，减卵率分别为62.86%和55.62%，与对照组相比均有非常显著的差异（P＜0.01）。而免疫3次和免疫1次小鼠血清IgG抗体水平及减虫率、减卵率均无显著差异。血吸虫重组BCG－Sj26GST疫苗皮下注射1次即能诱导小鼠较高水平的IgG抗体和免疫保护力，是一种比较理想的新型疫苗，值得进一步研究。     

细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgE的动态观察

目的:动态观察细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗免疫小鼠后IgG及其亚类和IgG的变化.方法:将疫苗分别采用鼻腔内接种和口服灌胃免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠,眼球取血,常规ELISA测定血清中IgG及其亚类和IgG水平,同时设有PBS对照.结果:鼻腔内接种组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2～18周升高,分别在免疫后10、4和6周达最高水平;血清IgG1、IgG3和IgE水平均在免疫后2～18周降低,分别在免疫后8、12和10～12周达最低水平.口服免疫组的血清IgG、IgG2a和IgG2b水平均在免疫后2～18周增加,分别在免疫后14、8和8周达峰值;血清IgG1、IgG3和IgE水平均在免疫后2～18周下降,分别在免疫后8、6和16～18周达最低水平.结论:细粒棘球绦虫重组BCG-Eg95疫苗在免疫早期即可诱导小鼠产生一个TH1型保护性免疫反应.     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗诱导小鼠脾细胞IL-6变化的研究

目的：研究日本血吸虫重组BCG－Si26GST疫苗对小鼠脾细胞IL－6的影响,方法：实验1采用该疫苗皮下免疫小鼠,免疫后8周用日本血吸虫尾缦进行攻击感染,感染后6周剖杀小鼠,同时设有PBS对照组,实验2用该疫苗皮下和静脉注射分免疫小鼠,于免疫后,0,4,8,10,14和16周各剖杀4只,分离脾脏,用Si26或PHA刺激脾细胞,用ELISA法检测5 清液中IL－6含量,结果：疫苗免疫尾缦攻击后,IL－6水平无明显变化;动态观察发现IL－6于疫苗免疫后8－10周达最高水平,结论：IL－6可能与日本血吸虫重组BCG－Si26GST疫苗诱导的保护性免疫力无关。     

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导的保护力观察

目的:探讨多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)混合重组BCC-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用.方法:将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果:混合疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和lgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低.结论:多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE在疫苗诱导的保护力中起重要作用.     

细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的动态观察

目的:动态观察细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)重组双歧杆菌(Bb)-Eg95-EgA31疫苗免疫小鼠后Th1/Th2型免疫应答的变化.方法:将5×108克隆形成单位(CFU)和5×105CFU疫苗分别采用口服灌胃和鼻腔内接种免疫BALB/c鼠,在免疫后2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各剖杀4只小鼠,收集血清,用ELISA法测定血清IgG及其亚类和IgE水平;无菌取脾,用ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平.结果:口服免疫组小鼠血清IgG、IgG2a 、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后8～10周、2～20周、2～20周、4～8周、6～12周和10周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～16周、2～12周、2～6周和4～12周显著升高;鼻腔内接种组小鼠血清IgG、IgG2a 、IgG2b、IgG1、IgG3和IgE水平分别在免疫后4～10周、4～20周、2～20周、2～12周、4～12周和10～12周显著升高,脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-12、TNF-α和IL-10水平分别在免疫后2～8周、2～12周、2～8周和6～16周显著升高.结论:细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗可诱导小鼠产生1个Th1/Th2混合型免疫应答.口服免疫和鼻腔内接种是两种较好的免疫途径,且前者优于后者.     

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗诱导小鼠的免疫保护力观察

目的 探讨多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫鼠后对Em原头节攻击感染的保护性作用.方法 将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫BALB/c小鼠,免疫后8周用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染,感染后18周剖杀小鼠,计算减蚴率,测定血清中IgG及其亚类和IgE水平;分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4 和CD8 T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有空载体、BCG和PBS对照.结果 疫苗接种组的减蚴率为45.29%～76.47%,血清IgG、IgG2a、IgG2b和IgE水平明显升高,IgG1和IgG3显著降低;疫苗接种组的脾CD4 T细胞亚群显著增加,CD8 T细胞亚群无明显变化,CD4 /CD8 亚群比值明显升高.结论 多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗鼻腔内接种是一种较好的途径,IgG、IgG2a、IgG2b和IgE以及CD4 T细胞亚群在疫苗诱导的保护力中起重要作用.     

重庆医科大学学报2001年全年总目录

论 著人体周血树突状细胞的体外培养扩增李用国 罗云萍 梁增伟 等 ………………………………(1)日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠后IgG抗体反应的动态观察李文桂 石佑恩 韩家俊 ………………………………(4)实验性脑缺血再灌流后Bak和Bad基因在脑内的表达刘颖菊 蒋远明 薛春生 等 ………………………………(7)自发性高血压大鼠细胞凋亡相关基因蛋白的研究李法琦 陈运贞 ……………………………… (10)鸭乙型肝炎病毒表面抗原的纯化及应用唐 霓 黄爱龙 郭树华 等 ………………………………(14)输入供体血对大鼠移植胰腺白介素-2和…     

重组Calpain蛋白诱导抗体产生及检测日本血吸虫感染的研究

目的 研究在大肠杆菌中表达的日本血吸虫Calpain蛋白的免疫原性及其在日本血吸虫病诊断上的应用。方 法用重组Calpain蛋白免疫BALB／c小鼠，ELISA法测定特异性IgG抗体的动态变化及其IgG亚型(IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3)产生特征；同时用重组Calpain蛋白作为诊断抗原，粪检血吸虫病阳性患者血清作为一抗，肝吸虫阳性患者血清作为考核交叉反应血清。结果 重组Calpain抗原免疫小鼠后，产生了一个极高的抗Calpain特异性抗体，免疫4周IgG类抗体达到高峰，与对照组鼠相比较免疫鼠血清中IgG1，IgG2a，IgG2b特异性抗体也显著上升；Calpain重组抗原血清检测日本血吸虫和粪检的符合率为100％，粪检阳性EPG低的个体抗Calpain抗体滴度高，EPG高的患者抗Calpain抗体滴度反而低，与肝吸虫的交叉反应率为37％。结论 日本血吸虫Calpain是一个具有免疫原性的蛋白，能够激发宿主产生高水平的免疫球蛋白，能够敏感地测定日本血吸虫的感染，提示Calpain可以发展成为日本血吸虫病的诊断抗原和日本血吸虫疫苗候选分子。     

FQ2在日本血吸虫DNA疫苗诱导免疫机制的研究

目的 探讨佐剂FQ2与日本血吸虫DNA26Kda疫苗共同作用下小鼠的免疫状态。方法 选取4～6周龄BALB/C小鼠52只，分成生理盐水组、FQ2组（A）、Sj26GST组（B）和FQ2＋Sj26GST组（C）等4组，于第0、2、6周各免疫1次，接种后4周以日本血吸虫尾蚴攻击感染，感染后6W剖杀小鼠，分析脾脏T淋巴细胞CD4^＋和CD8^＋细胞率，测定血清中特异性IgG水平。结果 B组和C组均可诱导CD8^＋淋巴细胞的增殖。C组升高更为显著，CD4^＋/CD8^＋比率倒置，也均可于4周后诱导小鼠产生高滴度的IgG抗体，二组间差异无显著（P〉0．05）。结论 FQ2对Sj26GST DNA疫苗有明显的增效作用，推测增效作用主要由细胞免疫所介导。     

日本血吸虫重组SjTsp2/Sj29 ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究

目的探讨日本血吸虫重组Tsp2/Sj29 ku表膜蛋白疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷( IPTG)诱导表达,制备纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫苗组、硫氧还蛋白组和空白对照组,前两组各10只,空白对照组9只。蛋白疫苗组,第一次免疫每鼠经背部皮下多点注射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50μg SjTsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白,第12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏不完全佐剂乳化的50μg该重组蛋白。硫氧还蛋白组的免疫方法同蛋白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白,免疫方法同前。末次免疫后第10天,每鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(30±2)条。于感染45 d后剖杀全部实验小鼠,计算减虫率和减卵率。眼眶取血,分离血清,间接性ELISA法检测IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM抗体亚型,同时检测血清细胞因子γ干扰素( IFN-γ)、白介素4( IL-4)水平。结果 pet32a/SjTsp2/Sj29 ku菌经IPTG诱导可大量表达,经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较,减虫率和减卵率显著升高( P<0.05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之间比较,减虫率和减卵率差异均无统计学意义( P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组(P<0.05),而IgG3和IgM较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白疫苗组小鼠血清IFN-γ、IL-4细胞因子显著高于空白对照组( P<0.01)。结论日本血吸虫 Tsp2/Sj29 ku重组表膜蛋白疫苗对小鼠抗感染有一定的保护性;该重组蛋白免疫引起的是 Th1/Th2混合型免疫反应。     

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫在不同处理小鼠诱导免疫应答的观察

[目的]研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用.[方法]免疫小鼠分两大组进行实验Ⅰ组小鼠有预感染,实验Ⅱ组小鼠没有预感染.将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的重组质粒pLXSN-Fer1经左后腿肌肉注射BALB/c小鼠,共免疫2次,间隔2周.末次免疫后5周以血吸虫尾蚴攻击感染,6周后剖杀小鼠,计数成虫负荷及肝组织虫卵数.设空载质粒免疫组为对照组.[结果]免疫小鼠后在实验Ⅰ组主要诱生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ组主要诱生IgG2a和IgG2b;实验组产生较高水平的IgA和IFN-γ应答.pLXSN-Fer1免疫小鼠获得一定程度的减虫率(26.47%,34.08%)和减卵率(40.02%,36.83%).[结论]日本血吸虫卵黄铁蛋白在两种不同处理小鼠均能产生一定程度的保护作用,有可能成为有价值的疫苗候选分子,值得进一步深入研究.     

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察

目的:动态观察多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化.方法:将疫苗采用鼻腔内接种免疫BALB/C鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4 和CD8 T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照.结果:疫苗接种组的脾CD4 和CD8 T细胞亚群分别在免疫后2～12周和2～18周升高,分别在免疫后6和10周达最高水平.结论:CD4 T细胞亚群数目在多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em 14-3-3疫苗免疫早期(2～6周)显著增加.     

日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗诱导BALB/c鼠脾细胞增殖、亚群及细胞因子的动态变化

目的观察日本血吸虫重组Bb（pGEX-Sj32）疫苗诱导免疫鼠脾细胞免疫应答的动态变化,探讨该重组疫苗的免疫机制。
方法88只BALB/c鼠随机分为口服组和滴鼻组,口服组小鼠经口服单次接种106克隆形成单位（CFU）重组疫苗,滴鼻组小鼠经
滴鼻单次接种105 CFU重组疫苗;于免疫后0~20周内间隔2周每组随机剖杀4只小鼠,取脾并制备脾细胞悬液,分别经未刺激
（脾细胞悬液）、SjAWA刺激和ConA刺激培养。MTT法检测脾细胞增殖效率,流式细胞术检测脾CD4+T细胞和CD8+T细胞亚
群变化,双抗体夹心ELISA法检测培养上清液中TNF-α、IL-10 和IL-12 表达水平。结果与0 周相比,未刺激、SjAWA刺激和
ConA刺激时,口服组和滴鼻组脾细胞均分别在免疫后2~16周和2~18周发生极显著增殖（P<0.01）;两组CD4+T细胞亚群均于
免疫后2~12周显著升高（P<0.01）,CD8+T细胞亚群在观察期间升高不明显;不同培养条件下,口服组脾细胞因子TNF-α、IL-10
和IL-12水平均分别在免疫后2~14周、2~18周和2~14周升高,于8周、10周和6周达峰值;滴鼻组3者分别在免疫后2~14周、2~
18周和2~18周升高,于8周、10周和8周达峰值。结论日本血吸虫重组Bb（pGEX-32）疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。
     

活化剂HYP协同rSjc26GST的抗血吸虫性肉芽肿的效果及其机制的研究

目的探讨活化剂HYP协同rSjc26GST的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果及机制。方法采用活化剂HYP联用rSjc26GST、福氏佐剂(FCA)联用rSjc26GST、单用HYP和单用福氏佐剂分别免疫BALB／c小鼠，末次免疫后1周，免疫和对照组小鼠均用日本血吸虫尾蚴攻击感染，7周后测定其免疫效应，观察其抗血吸虫卵肉芽肿病变的效果。结果活化剂HYP联用rSjc26GST组的总虫卵数和成熟虫卵数减少率分别为55．37％和54．31％，均显著高于FCA联用rSjc26GST组的30．30％和38．07％；该两组肝内虫卵肉芽肿的直径及面积分别下降36．86％和35．25％及62．59％和60．44％；两组IgG和IgG1水平均明显升高。结论活化剂HYP协同rSjc26GST比FCA具有更好的抗肝内血吸虫卵肉芽肿病变的效果，其机制与体液免疫(IgG和IgG1)的增强密切相关。     

美洲大蠊重组BCG-Cr PI变应原的免疫原性

目的对表达美洲大蠊CrPI变应原的卡介苗（BCG）进行免疫原性评估,为BCG脱敏疫苗的研制提供实验基础。方法10^6CFU重组BCG．CrPI包下注射免疫BALB／C小鼠,分别于免疫0、2、4、6、8周收集血清。使用纯化的重组CrPI被ELISA板,ELISA检测CrPI特异性IgG及IgG1、IgG2a亚类。结果重组BCG—CrPI皮下注射免疫BALB／C小鼠2用后,血清CrPI特异性IgG显著高于对照组（P〈0．05）,实验组IgG1及IgG2a也显著高于对照组（P〈0．05）,IgG2a升高更明显。结论重组美洲大蠊BCG—CrPI具免疫原性,并且诱Th1优势免疫应答。     

日本血吸虫卵黄铁蛋白基因免疫在不同处理小鼠诱导免疫应答的观察

目的 研究日本血吸虫卵黄铁蛋白DNA免疫在两种处理小鼠诱导的免疫应答及其保护作用。方法 免疫小鼠分两大组进行：实验Ⅰ组小鼠有预感染,实验Ⅱ组小鼠没有预感染。将构建的携带日本血吸虫卵黄铁蛋白基因的组质粒pLXSN-Fer1经左后腿肌肉注射BALB／c小鼠,共免疫2次,间隔2周。末次免疫后5周以血吸虫尾蚴攻击感染,6周后剖杀小鼠,计数成虫负荷及肝组织虫卵数。设空载质粒免疫组为对照组。结果 免疫小鼠后在实验Ⅰ组主要生IgG1和IgG3,在实验Ⅱ组主要诱生IgG2a和IgG2b;实验组产生较高水平的IgA和IFN－γ应答。pLXSN-Fer1免疫小鼠获得一定程度的减虫率（26．47％,34．08％）和减卵率（40．02％,36．83％）。结论 日本血吸虫卵黄铁蛋白在两种不同处理小鼠均能产生一定程度的保护作用,有可能成为有价值的疫苗候选分子,值得进一步深入研究。