MK-801对耐苯妥英钠和卡马西平癫(癎)大鼠模型脑表达P-糖蛋白的影响

癫(癎)是神经科仅次于脑血管意外的常见疾病,其中大约有30%的患者对多种抗癫(癎)药物表现耐药,癫(癎)发作得不到有效控制,被称之为难治性癫(癎).难治性癫(癎)患者对药物产生耐药的机制还不明确.研究表明癫(癎)病灶内高度表达P-糖蛋白(P-glycoprotein,PGP)[1],PGP是一种多药转运蛋白,能够分解ATP获能从而逆浓度梯度将抗癫(癎)药物转运出脑组织,减少了癫(癎)病灶内的药物浓度,降低了药物的疗效,上述机制可能参与了难治性癫(癎)患者对多种抗癫(癎)药物产生耐药.     

MK-801对耐苯妥英钠和卡马西平癫(癎)大鼠模型脑表达P-糖蛋白的影响

癫(癎)是神经科仅次于脑血管意外的常见疾病,其中大约有30%的患者对多种抗癫(癎)药物表现耐药,癫(癎)发作得不到有效控制,被称之为难治性癫(癎).难治性癫(癎)患者对药物产生耐药的机制还不明确.研究表明癫(癎)病灶内高度表达P-糖蛋白(P-glycoprotein,PGP)[1],PGP是一种多药转运蛋白,能够分解ATP获能从而逆浓度梯度将抗癫(癎)药物转运出脑组织,减少了癫(癎)病灶内的药物浓度,降低了药物的疗效,上述机制可能参与了难治性癫(癎)患者对多种抗癫(癎)药物产生耐药.     

维拉帕米对耐苯妥英钠和卡马西平癫(癎)模型大鼠电生理和行为的影响

目的 观察P-糖蛋白(PGP)拮抗剂维拉帕米对耐苯妥英钠(PHT)和卡马西平(CBZ)癫(癎)大鼠电生理指标和行为学的影响.方法 建立慢性杏仁核点燃癫(癎)大鼠模型,筛选出耐药组和治疗有效组,给予维拉帕米,观察其对各组大鼠后放电阈值(after discharge threshold,ADT)、后放电时程(after discharge duration,ADD)等电生理指标和行为学的影响.结果 相对于耐药对照组,耐药组大鼠在预先给予维拉帕米后,使用抗癫(癎)药物后ADT[(238.0±32.2)μA]明显高于耐药对照组[(177.0±23.3)μA,P＜0.05];ADD时程明显缩短,Racine行为分级明显下降(P＜0.05).结论 维拉帕米可以协助抗癫(癎)药物(AEDs)改善耐药大鼠的电生理活动,降低点燃后发作分级,提示有效抑制PGP有助于改善多药转运体高表达导致的癫(癎)耐药.     

microRNA-146a对癫(癎)大鼠脑内P-糖蛋白表达的影响

目的 观察microRNA-146a(miR-146a)对癫(癎)大鼠脑内P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠随机分为3组:miR-146a给药(miR-146a)组(n=8),经立体定向侧脑室注射给药;正常对照组(n=8)和癫(癎)组(n=8)给予相同体积的0.9％氯...     

大鼠难治性癫(癎)模型的建立和P-糖蛋白表达规律的探讨

P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是多药物耐药基因编码的能量依赖性药物外排泵,近来发现其于难治性癫(癎)(refractory epilepsy,RE)致(癎)灶呈现过度表达[1],提示P-gp可能促进癫(癎)耐药.由于临床处理因素可控性差,本实验旨在建立RE动物模型,研究癫(癎)持续状态(status epilepticus,SE)和抗癫(癎)药对P-gp表达的影响,探讨P-gp的表达规律和癫(癎)耐药机制.     

microRNA-146a对癫■大鼠脑内P-糖蛋白表达的影响

目的观察microRNA-146a(miR-146a)对癫■大鼠脑内P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为3组:miR-146a给药(miR-146a)组(n=8),经立体定向侧脑室注射给药;正常对照组(n=8)和癫■组(n=8)给予相同体积的0.9%氯化钠溶液。癫■组和miR-146a组采用戊四氮腹腔注射建立癫■模型,大鼠点燃后的惊厥行为按照Racine标准进行观察评分。采用免疫荧光组化、RT-PCR和Western blot方法检测比较3组大鼠脑内P-gp表达。结果免疫荧光组化显示,3组大鼠皮质均可见P-gp阳性细胞表达。癫■组皮质P-gp阳性细胞数显著高于正常对照组(P0.01);miR-146a组显著低于癫■组(P0.01)。PCR检测显示,癫■组P-gp mRNA表达水平显著高于正常对照组(P0.004 4);miR-146a组皮质P-gp mRNA表达水平低于癫■组(P0.041 7)。Western blot示3组大鼠皮质GAPDH谱带浓度基本相似,P-gp谱带浓度由高至低依次为癫■组、miR-146a组和正常对照组;癫■组皮质P-gp蛋白相对表达比值显著高于正常对照组和miR-146a组(均P0.01)。结论 miR-146a可以下调P-gp在癫■大鼠脑内的表达,在癫■治疗上可能具有潜在的应用价值。     

大鼠马桑内酯点燃癫癎模型P-糖蛋白和多药耐药相关蛋白1的表达

耐药性癫癎约占癫癎患者的30%,耐药癫癎动物模型是研究其耐药机制和探讨治疗方法的重要工具.马桑内酯(coriaria lactone,CL)是从植物马桑中提取的一种致癎物质,对动物反复肌注阈下剂量的CL可以建立化学点燃模型,并具有一定的耐药性[1].P-糖蛋白(P-glycorprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)是近年在耐药性癫癎患者脑组织中发现的两种与耐药性产生相关的膜蛋白[2,3].我们通过建立大鼠CL点燃模型,观察其对卡马西平(carbamazopine,CBZ)、丙戊酸钠(valproate,VPA)及托吡酯(topiramate,TMP)等抗癫癎药物(AED)的治疗反应和大鼠脑部P-gp和MRP1的表达,探讨该模型的耐药性及其可能机制.     

左乙拉西坦和托吡酯对癫(疒间)大鼠脑P-糖蛋白表达的影响

目的研究左乙拉西坦(LEV)和托吡酯(TPM)对癫大鼠脑P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法将海人酸1.5μg(3μl)注射至SD大鼠海马制作癫模型(癫组),对照组大鼠海马注射3μl生理盐水(NS)。将癫组(18只)和对照组(15只)大鼠分别随机分为LEV、TPM和NS亚组(每亚组6只、5只),各亚组大鼠予相应药物(LEV50mg/kg、TPM40mg/kg、等体积NS)灌胃,每天1次,共30d。采用免疫组化EnVi-sion染色法检测大鼠颞叶、海马P-gp表达水平,采用LeicaQwin图像分析系统中平均整合灰度(MIB)值对P-gp表达水平进行半定量分析。结果癫各亚组大鼠颞叶和海马P-gp表达水平(MIB值)均显著高于其相应对照亚组(P<0.05～0.001);对照亚组中,LEV和TPM组与NS亚组间P-gp表达水平比较,差异无统计学意义;在癫组中,TPM亚组P-gp表达水平显著高于NS亚组(1550.3±371.9vs1049.7±282.8,P=0.004);而LEV亚组与NS亚组差异无统计学意义(1285.1±340.3vs1049.7±282.8,P=0.172)。结论癫发作可诱导...     

大鼠难治性癫模型的建立和P-糖蛋白表达规律的探讨

P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是多药物耐药基因编码的能量依赖性药物外排泵,近来发现其于难治性癫(refractory epi-lepsy,RE)致灶呈现过度表达[1],提示P-gp可能促进癫耐药。由于临床处理因素可控性差,本实验旨在建立RE动物模型,研究癫持续状态(status epilepticus,SE)和抗癫药对P-gp表达的影响,探讨P-gp的表达规律和癫耐药机制。1材料和方法1.1实验动物及分组:雄性Wistar大鼠(250g±10g),随机分成模型组及其对照组、药物治疗组及其生理盐水腹腔注射对照组。1.2大鼠RE模型的制作:立体定位仪引导,于左侧CA3(AP,5.5mm;ML,4.5mm;DV,…     

P-糖蛋白对卡马西平和苯妥英钠通过大鼠血脑屏障影响的研究

目的观察P糖蛋白(Pglycoprotein,PGP)拮抗剂维拉帕米对卡马西平和苯妥英钠通过大鼠血脑屏障的影响,探讨PGP在难治性癫癎多药耐药机制中的作用。方法在健康大鼠大脑皮质内安置微透析探针,腹腔注射卡马西平(20mg/kg)和苯妥英钠(50mg/kg),在给药后不同时间点收集透析液,并用高效液相技术检测其中的药物浓度,通过微透析探针局部给予维拉帕米,观察后者能否提高大鼠皮质脑细胞外液中抗癫药物的浓度。结果维拉帕米升高了脑细胞外液中卡马西平[60min:(1.74±0.28)μg/ml,90min:(1.87±0.31)μg/ml]和苯妥英钠[30min:(1.08±0.30)μg/ml;60min:(1.54±0.22)μg/ml;150min:(0.91±0.19)μg/ml]的药物浓度,前者在给药后60～90min显著增高(P<0.05),后者在给药后30～150min显著增高(P<0.05)。结论PGP限制卡马西平和苯妥英钠顺利通过血脑屏障,降低脑皮质细胞外液抗癫癎药物浓度,难治性癫时PGP表达增加可能是引起患者对抗癫癎药物产生多药耐药的原因。     

p38MAPK对耐苯妥英钠和卡马西平癫痫模型大鼠电生理和行为的影响

目的 观察p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)信号通路抑制剂SB202190对耐苯妥英钠和卡马西平大鼠电生理指标和行为学的影响.方法 建立慢性杏仁核点燃癫痫模型,筛选出耐药大鼠,通过侧脑室注射SB202190,对照组注射生理盐水.观察其对各组大鼠后放电阈值(after discharge threshold,ADT)和行为学的影响.结果 相对于对照组,耐药组大鼠在给予SB202190后,ADT明显高于对照组(P＜0.05);Racine行为分级明显下降(P＜0.05).结论 阻断p38MAPK信号通路可以协助AEDs改善耐药大鼠的电生理活动,降低点燃后发作分级,提示p38MAPK信号通路参与了难治性癫痫的耐药.     

喹啉对癫(癎)大鼠海马神经元连接蛋白36表达的影响

目的:探讨喹啉对癫癎大鼠海马神经元连接蛋白36(Cx36)表达的影响.方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组、癫癎模型组、地西洋治疗组和喹治疗组,每组16只大鼠.采用氯化锂-匹罗卡品诱导制作癫癎大鼠模型,地西泮治疗组子以1mg/kg地西泮治疗,喹啉治疗组予以60mg/kg喹啉治疗.术后分别采用Racine评分和脑电图检查判断癫癎发作情况.分别用免疫荧光染色法、Western blot法检测各组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36的表达.结果:与正常对照组比较,癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著升高(均P<0.01).癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平比较差异无统计学意义.与癫癎模型组及地西泮治疗组比较,喹啉治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著降低(均P<0.01).结论:癫癎大鼠海马神经元Cx36表达水平升高,喹啉能抑制这一变化.     

塞来昔布对慢性颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制药塞来昔布对慢性颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达的影响,以及核因子-κBp65和P-糖蛋白与颞叶癫癎发病机制的关系,以为环氧合酶-2抑制药用于抗癫癎药物辅助治疗提供实验依据。方法采用大鼠海马CA3区微量注射海人酸的方法制备颞叶癫癎动物模型,免疫组织化学染色和Western blotting法观察塞来昔布治疗后大鼠海马核因子-κBp65和P-糖蛋白表达变化。结果与对照组相比较,颞叶癫癎大鼠海马核因子-κBp65、P-糖蛋白表达水平,以及核因子-κBp65核移位现象明显增加(均P<0.05);经塞来昔布治疗后,海马组织中核因子-κBp65、P-糖蛋白表达水平及核因子-κBp65核移位现象显著改善,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论核因子-κBp65和P-糖蛋白在颞叶癫癎慢性期表达上调、核因子-κBp65核移位现象增加,有可能是难治性癫癎发生与发展的分子生物学机制之一。环氧合酶-2抑制药塞来昔布通过降低慢性颞叶癫癎大鼠海马CA3区核因子-κBp65和P-糖蛋白表达水平,抑制核因子-κBp65核移位,最终降低炎性反应,逆转多药耐药而发挥抗癫癎作用。     

脑磁图癫(癎)灶和皮层功能区定位在癫(癎)外科的应用

目的 探讨脑磁图在癫(癎)外科术前评估中的应用价值.方法 回顾性分析216例手术治疗顽固性癫(癎)病例,术前应用脑磁图辅助定位皮层癫(癎)灶及重要皮质功能区范围,其中18例将脑磁图与神经导航系统结合.结果 本组216例患者,按照Engel癫(癎)疗效分级,Ⅰ级71.75%,Ⅱ级10.19%,Ⅲ级8.80%, Ⅳ级9.26%.脑磁图癫(癎)灶定位与术中皮质脑电图定位符合率87.9%.无一例出现手术后永久神经功能障碍.结论 脑磁图是无创确定癫(癎)灶和功能区皮质空间位置关系的重要工具,脑磁图结合神经导航术前和术中的皮质功能区定位方法应用可使癫(癎)外科实现微侵袭和精确手术.     

癫癎大鼠脑内白细胞介素6的表达特征

有临床资料显示 ,有癫病史或癫发作的患者脑脊液和血浆白细胞介素 6 (IL 6 )浓度升高 ,动物实验也证明 ,在各种癫发作模型中脑内IL 6表达增加。我们试图通过研究红藻氨酸 (KA)诱导癫发作的动物模型相关脑区中IL 6的表达特征及其与c Fos表达的比较 ,进一步探讨IL 6在癫发作中的意义及其细胞学来源。材料和方法 :(1)选体重 180～ 2 2 0g的雄性Wistar大鼠 ,实验组 (n =4 2 )和对照组 (n =6 )大鼠分别注射KA(10mg/kg)或生理盐水 (NS ,10ml/kg) ,观察其行为改变。 (2 )给予KA后 15min、30min、1h、3h、6h、12h及 2 4h后分别取…     

脑磁图对难治性癫(癎)致(癎)区定位价值

目的 探讨脑磁图癫(癎)定位技术对难治性癫(癎)致(癎)区定位的价值.方法 回顾性分析难治性癫(癎)病人58例,术前行视频头皮脑电图、磁共振、脑磁图、颅内埋藏电极皮层脑电图等检查,综合评估确定致(癎)灶的位置.根据综合评估致(癎)区制定手术方案并实施,随访并判定疗效.根据脑磁图癫(癎)定位和综合评估致癎区吻合度分为3组,Ⅰ a组:完全吻合-两区域中心位置在1 cm以内,Ⅰ b组:基本吻合-两区域中心位置在1～3 cm;Ⅱ组:不吻合-两区域中心位置在3 cm以外或其他.统计分析各组间疗效的差异.结果 本组总有效率为77.6%(45/58),其中癫(癎)完全消失18例;Ⅰ a、Ⅰ b组手术疗效无明显差异,但Ⅰ组手术疗效明显优于Ⅱ组.结论 脑磁图癫(癎)定位是难治性癫(癎)术前评估的重要方法之一,当脑磁图癫(癎)定位和术前综合评估致(癎)区基本一致时,手术疗效相对较好.     

脑电刺激治疗难治性癫(癎)

脑电刺激治疗为不适合手术的难治性癫(癎)病人提供了一种选择,主要包括脑深部刺激、迷走神经刺激和闭合环路刺激.前两者主要通过调控丘脑-皮质通路来抑制皮质兴奋性,减少癫(癎)发作;后者通过早期预警触发刺激来抑制发作的传播扩散.本文就几种脑电刺激治疗的原理、方法、疗效和并发症等方面内容进行简要回顾总结.     

苯妥英钠、苯巴比妥钠诱导建立难治性癫(癎)动物模型

目的探索性应用苯妥英钠（PHT）、苯巴比妥钠（PB）诱导建立难治性癫痫动物模型，并研究其多药耐药机制。方法将60只大鼠随机分为实验组50只和对照组10只；实验组给予亚抽搐剂量戊四氮腹腔注射，其中45只大鼠确定点燃．将其随机分为给药组35只和未给药组10只。给药组应用较大剂量PHT、PB腹腔注射，其间注射小剂量戊四氮．根据Racine行为分级以及脑电图改变，从中筛选出耐PHT和PB的难治性癫痫动物模型。应用免疫组化法观察比较P糖蛋白（Pgp）在各组脑组织中的表达。结果12只大鼠制成难治性癫痫动物模型（耐药组），11只为药物有效组，12只死亡。耐药组大鼠脑组织Pgp表达较对照组、未给药组和药物有效组增强，差异有高度统计学意义（P〈0．01）。结论应用较大剂量PHT和PB诱导点燃大鼠制作难治性癫痫的动物模型．方法可行。该模型可以用于研究难治性癫痫脑内PgP的表达。PgP的高表达与难治性癫痫发生密切相关。