正交实验优选赤芍提取工艺研究

目的:优选乙醇提取赤芍工艺.方法:采用正交实验方法,以芍药苷为指标成分,以乙醇浓度、溶剂量、提取时间、提取次数为考察因素,各设置3个水平,对赤芍乙醇提取工艺进行优化.结果:芍药苷的最佳提取工艺条件为:700 ml/L乙醇,8倍量水,提取3次,每次1.5 h.结论:不同条件对赤芍提取物中芍药苷含量有影响.     

用大孔吸附树脂分离川芎总提物

川芎以乙醇回流提取减压浓缩，过大孔吸附树脂柱，先用水洗，再用３０％乙醇洗脱，收集３０％乙醇洗脱液，减压浓缩是种芎总提物，其中川芎嗪和阿魏酸含量约占本品的２５％－２９％以上，收率０．６％。     

膜分离与大孔树脂吸附技术在赤芍总苷提取与分离中的应用

目的 提取分离赤芍药材中的赤芍总苷。方法 使用膜分离及大孔树脂吸附方法,提取、分离、纯化赤芍总苷。结果 提取得到的赤芍总苷,其总苷含量以芍药苷计迭85％以上;其中芍药苷含量可达75％。结论 采用膜分离及大孔树脂吸附技术,提取分离、纯化赤芍总苷,方法可行。      

HPLC法测定不同溶剂提取的赤芍中芍药苷的含量

赤芍为常用中药，其来源为毛茛科植物芍药（Paeonia Lactiflora Pall）．或川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）．的干燥根，具有清热凉血，散瘀止痛的功效。赤芍含有芍药苷、芍药内酯苷等成分，其中芍药苷是主要有效成分之一。为有效地控制其质量，保证疗效，《中国药典》2005版赤芍含量测定项下采用甲醇作为溶剂提取，但是甲醇具有刺激性且毒性较大。为此，本文采用稀乙醇提取，根据药典方法使用甲醇提取为实验对照，测定比较不同溶剂提取对赤芍中芍药苷含量的影响，寻求更加安全的溶剂提取。现将实验结果报道如下。     

赤芍中芍药苷和白芍苷纯化工艺研究

目的对我国不同产地赤芍药材中芍药苷和白芍苷含量差异进行分析,探讨分离制备芍药苷和白芍苷单体的工艺路线。方法采用高效薄层色谱法对我国6个不同产地赤芍药材中芍药苷和白芍苷含量差异进行快速检测;以湖南赤芍为研究对象,采用AB-8型大孔树脂与硅胶为吸附填料,分别以25%乙醇和氯仿/丙酮系统为洗脱溶剂,分离纯化芍药苷和白芍苷单体成分,再用HPLC法进行检测。结果本法制备的芍药苷和白芍苷纯度均≥98%,产率分别为1.3%和0.4%,目标组分转移率分别为52.2%和38.5%。结论该分离纯化方法可靠,所得成品质量好、纯度高,适合工业化生产;湖南赤芍中白芍苷相对含量显著高于其他产地原料,适合产业化开发。     

连翘的精制提取和检测方法的探讨

目的:为提高双黄连粉针剂中连翘苷的含量,探索提取连翘苷并定量检测连翘苷的新法,进行了该项实验。方法:将粉碎的连翘分别加8倍、6倍、4倍量75%乙醇,回流提取4h、2h、1h,合并提取液,回流乙醇浓缩后上X—5大孔树脂柱,以去离子水洗脱至无色,再用30%乙醇继续冲洗至无色,再用40%乙醇洗脱,收集40%流分,浓缩后以高效液相色谱法测定连翘苷含量。结果:用本法提取连翘,浓缩膏中连翘苷含量达到27.2%,而用水提流沉法含量只能达到0.3%。结论:1本法提取连翘,可提高成品中连翘苷的含量;2提取过程中所用乙醇可回收。成本低;3用高效液相色谱法测定连翘苷的含量,准确,易行,重现性好。可作为质量检验的定量方法。     

AB-8型大孔吸附树脂纯化复方桂枝茯苓丸中桃仁、赤芍提取物工艺

目的 优选复方桂枝茯苓丸中桃仁、赤芍提取物的大孔树脂纯化工艺.方法 以苦杏仁苷和芍药苷的吸附洗脱率为指标,采用单因素试验考察上样液质量浓度、径高比、洗脱剂等对桂枝茯苓丸中桃仁、赤芍提取物大孔树脂纯化工艺的影响.结果 优选的纯化工艺为:上样液质量浓度200 mg/mL,树脂柱径高比1:9,树脂体积与上样量比0.77∶1,加4 BV水洗除杂,用体积分数30％乙醇洗脱,收集洗脱液6 BV.结论 该纯化工艺合理稳定,可推广于大生产应用.     

复方积雪草颗粒提取工艺研究

目的 研究复方积雪草颗粒最佳提取工艺。方法 采用正交试验法进行优选，HPLC法测定积雪草苷、黄芪甲苷的含量。结果 乙醇浓度、溶媒量、提取时间、提取次数对积雪草苷、黄芪甲苷提取率均有显著影响。结论最佳提取工艺为药材10倍量50％乙醇，提取2次，每次3h。     

何首乌中有效成分二苯乙烯苷的研究进展

何首乌为蓼科植物何首乌(polygonummultiflorum thunb.)的干燥块根,现代研究证明何首乌中含有多种化学成分,具有多种药理作用。2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)为何首乌中的主要水溶性成分,其含量常作为何首乌药材及制剂质量控制的指标。近年来,发现二苯乙烯苷有很多药理作用,有关二苯乙烯苷的研究日渐增多,笔者查阅了近年来国内外的相关文献,现将有关何首乌中二苯乙烯苷的提取分离、含量测定、药代动力学及药理学研究近况综述如下。1提取分离用95%乙醇对何首乌进行热抽提,减压浓缩得醇浸膏,用乙醚冷浸萃取,再…     

银杏叶提取物的生产工艺条件研究

银杏叶以65％乙醇回流提取，减压浓缩，ZTC澄清剂沉降，酸性吸附，酸水和酸性25％乙醇洗涤，70％乙醇洗脱，喷雾干燥，加入由沉降残渣中分离的银杏总内酯，可以得到质量合格而稳定的银杏叶提取物（GBE），其黄酮和内酯含量分别达到26％和6％以上。     

赤芍总苷诱导扁平苔藓中T细胞免疫和凋亡机制的研究

目的：观察扁平苔藓(OLP)患者赤芍总苷(TPG)治疗前后 T 细胞免疫表达水平的变化,探讨影响细胞凋亡的机制。方法应用 TPG 局部治疗20例 OLP 患者,观察其治疗后的临床效果;且在治疗前后,较系统地对 TPG 诱导细胞凋亡情况进行比较;探讨 OLP 中的细胞凋亡情况及 CD4+、CD8+ T 细胞和 CD4+/CD8+比例的变化,分析 TPG 诱导 OLP 患者中的 T 细胞免疫与细胞凋亡的关系。结果TPG 治疗扁平苔藓临床疗效明显,治疗后患者 OLP 病变组织处网纹面积减小,糜烂面大小减少,患者疼痛指数明显降低。治疗后 CD4+和 CD8+表达较治疗前显著下降。结论TPG 的治疗可能是通过固有层中诱导炎性T 细胞的凋亡,T 细胞免疫受到调节,从而减轻 OLP 炎症的发生和发展,起到治疗 OLP 的作用。     

赤芍总苷抗血栓作用的研究

目的探讨赤芍总苷(TPG)静脉给药抗血栓作用以及其作用机制。方法通过动静脉旁路血栓形成实验,观察TPG对血栓形成的抑制作用;建立电刺激致大鼠血栓模型,观察TPG抗血栓作用以及对血液流变学指标、凝血-纤溶系统的影响;TPG静脉注射给药5d后,测定其对小鼠凝血时间的影响;以体外法观察TPG对ADP诱导家兔血小板聚集的影响。结果TPG25、50、100mg/kg能明显抑制大鼠动-静脉旁路血栓的形成,抑制率分别为32.59%、34.33%、24.88%;TPG25、50、100mg/kg能明显延长电刺激大鼠动脉血栓形成所需的时间,所需时间分别为648.2s、651.1s、746.4s,与对照组(540.2s)比较,差异有统计学意义(P<0.05);降低血粘度,延长凝血酶原时间和部分凝血活酶时间,降低血纤维蛋白原浓度;有效延长小鼠的凝血时间;显著抑制ADP诱导的血小板聚集(抑制率分别为23.4%、37.2%、44.9%)。结论TPG具有较好的抗血栓作用,其作用机制与其能降低血粘度,延长大鼠凝血酶原时间、部分凝血活酶时间以及降低血纤维蛋白原浓度,抑制血小板聚集有着密切的关系。     

赤芍总苷抑制人黑色素瘤A375细胞株增殖作用的研究

目的观察赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞增殖的影响及其作用机制。方法黑色素瘤A375细胞,分别加入12.5、25、50、100、200 mg/L TPG,对照组加等量0.9%氯化钠注射液,孵育48 h。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法测定细胞生长抑制率,用RT-PCR、Western blot法分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)、P21、P27、P53 mRNA及其蛋白的表达水平。结果不同浓度(12.5、25、50、100、200 mg/L)TPG刺激后,对黑色素瘤细胞均具有明显的增殖抑制作用。100 mg/L TPG作用黑色素瘤细胞48 h,PCNA mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著下降,而P21、P27、P53的mRNA及其蛋白表达水平较对照组显著上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论TPG抑制黑色素瘤A375细胞增殖,与下调PCNA表达及上调P21、P27、P53表达有关。     

赤芍总苷联合卡铂对黑色素瘤细胞生长的抑制及相关机制研究

目的研究赤芍总苷(total paeonyglucosides,TPG)联合化疗药物卡铂(CBP)对人黑色素瘤A375细胞生长的抑制作用及相关机制。方法用TPG和CBP作用于体外培养的黑色素瘤细胞,SRB法检测药物对黑色素瘤细胞生长的作用,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测各组细胞PCNA、cyclin D、P21 mRNA的表达情况;Western blot法检测各组细胞PCNA、cyclin D、P21蛋白表达水平。结果 CBP处理组OD值较对照组明显降低,TPG联合CBP导致OD值进一步下降(P<0.01);CBP处理组黑色素瘤细胞PCNA和cyclin D mRNA和蛋白水平均较对照组显著降低(P<0.01),而P21 mRNA和蛋白水平则明显升高(P<0.01);TPG联合CBP作用于黑色素瘤细胞,PCNA和cyclin D mRNA和蛋白水平较CBP单独作用组下降更为明显;P21 mRNA和蛋白水平较CBP单独作用组升高更加显著。结论 TPG和CBP联合用药效果优于CBP单独用药,可进一步提高药物对肿瘤细胞的生长抑制,与降低PCNA和cyclin D表达、升高P21表达有关。     

赤芍总苷对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

OBJECTIVE: To study the protective effects of the total paeony glycoside (TPG) against global cerebral ischemia-reperfusion injury in gerbils. METHODS: Gerbils models of global cerebral ischemia-reperfusion injury were prepared by bilateral common carotid artery ligation for 12 min followed by 24-hour reperfusion. The effects of TGP on brain edema index, superoxide dismatase (SOD) activity and malonaldehyde (MDA) concentration of the cerebral tissue homogenate and pathology of the brain were examined 24 h after model establishment. RESULTS: Compared with the model group, TPG at the doses of 200 and 400 mg/kg could significantly relieve brain edema, enhance SOD activity and lower MDA concentration in the gerbils. Pathological examination showed that the gerbils with TPG treatment had milder injury of the cells in the hippocampal CA1 region. CONCLUSIONS: TPG has obvious protective effects against global cerebral ischemia-reperfusion injury.     

赤芍总苷对沙土鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察赤芍总苷(TPG)对全脑缺血再灌注的保护作用。方法 采用结扎双侧颈总动脉12min再灌注24h建立沙土鼠全脑缺血再灌注模型,观察于造模24h后TPG对沙土鼠脑组织含水量、SOD与MDA及病理组织学的影响。结果 同模型组比较,TPG200、400mg/kg·b.w.组脑组织含水量明显低于模型组;模型组脑组织SOD活性明显降低,MDA含量明显提高,各给药组与模型对照组比较SOD明显升高,MDA含量显著下降;病理检查表明给药组的病理损伤较模型组轻。结论 赤芍总苷对全脑缺血再灌注损伤有明显的保护作用。     

赤芍总苷逆转黑色素瘤细胞株多药耐药的效果及机制研究

目的探讨赤芍总苷(TPG)对人黑色素瘤A375细胞多药耐药性(MDR)的逆转作用及其机制。方法采用不同剂量TPG(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L)处理体外培养的黑色素瘤A375细胞,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测药物对各组细胞的抑制率;反转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测细胞多药耐药基因1(MDR1)、生存素(Survivin)、拓扑异构酶Ⅱ同工酶(TOP2α)、多药耐药相关蛋白(MRP1)mRNA的表达情况;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞MDR1、Survivin、TOP2α、MRP1蛋白表达水平。结果TPG对人黑色素瘤细胞有明显的抑制作用;TPG组较对照组细胞MDR1、Survivin、TOP2α、MRP1 mRNA及蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 TPG可抑制黑色素瘤细胞生长,通过调节多药耐药因子的表达逆转MDR。     

赤芍总苷对D-氨基半乳糖胺所致小鼠肝损伤的保护作用

目的观察赤芍总苷对D-氨基半乳糖胺（D-GaIN）所致小鼠肝损伤的防治作用。方法NIH小鼠60只,随机分5组,分别为正常对照组,模型组,赤芍总苷高剂量组、低剂量组和联苯双脂组小鼠分别灌胃给药,1次／d,连续7d,末次给药1h后,除正常对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射D-GaIN 800mg／kg,16h后采血,检测血清ALT、AST活性及超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量,并观察肝组织病理学变化。结果赤芍总苷高剂量组能显著降低D-GaIN所致小鼠肝损伤血清ALT、AST活性,提高肝组织匀浆SOD活性,降低MDA,明显改善肝组织损伤的程度,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论赤芍总苷对D-GaIN诱导的小鼠肝损伤有保护作用,其作用机制可能与抗脂质过氧化有关。     

低浓度酒精对成年大鼠空间位置的记忆及海马CA1区BDNF表达的影响

目的探讨低浓度酒精摄取对成年大鼠空间位置记忆的影响,并通过免疫组织化学方法检测低浓度酒精摄取后海马CA1区脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。方法成年雄性SD大鼠给予连续3d Morris水迷宫训练,然后动物随机分为实验组和对照组。实验组动物给予5%(V/V)酒精为唯一饮料喂养,对照组动物以自来水代替酒精。在给与酒精喂养后的3,7,14,21,30d行Morris水迷宫行为观察。动物在水迷宫行为学观察后,取脑、冰冻切片,用ABC法行BDNF免疫组织化学反应,用Motic 3．2图像分析系统测定免疫反应阳性产物的平均灰度值。结果给予低浓度酒精喂养3d与7d后,动物找到平台的潜伏期[分别为(8．93±1．38)s,(9．66±1．04)s]与对照组[分别为(8．24±2．94)s,(10．07±O．71)s](P＞0．05),酒精喂养14,21,30d后,动物找到平台的潜伏期[分别为(9．19±1．81)s,(10．45±0．97)s,(12．37±1．81)s]明显短于对照组[分别为(17．14±3．66)s,(18．83±1．25)、s,(21．41±2．73)s],差异有显著性(P＜0．05)。BDNF的免疫组化反应显示低浓度酒精喂养3d时BDNF在海马CA1区的表达平均灰度值(145．3±14)与对照组(143．8±12)相比差异无显著性(P＞0．05)；而低浓度酒精喂养7d、14d与21d时,海马CA1区BDNF的表达平均灰度值(分别为125．6±17,127．4±15,130．7±14)明显低于对照组(分别为147．5±13,142．7±10,145．8±16)(平均灰度值与阳性产物的多少成反比)(P＜0．05)；酒精连续喂养30d后,海马CA1区BDNF的表达平均灰度值(146．2±11)接近于对照组(144．5±14),差异无显著性(P＞0．05)。结论短期内低浓度酒精摄取有助于成年大鼠空间位置记忆的保持,其机制可能与低浓度酒精摄取上调BDNF在海马CA1区的表达有关。     

Effect of tripterygium glycosides on pulmonary function in adjuvant arthritis rats

BackgroundTripterygium is a Chinese herb with immunosuppressive effects and an established history of use in the treatment of rheumatoid arthritis. Previous studies demonstrated that tripterygium glycosides (TPG) alleviated Freund’s complete adjuvant (FCA)-induced arthritis. Simultaneously, it has also been observed to impact the adjuvant arthritis (AA) associated with lung injury. In this study, we have investigated whether traditional Chinese medicine could attenuate lung injury induced by AA by observing the effects of TPG on the degree swelling, arthritis index (AI), lung index (LI), pulmonary function, cytokines, and the expression of regulatory T cells (Treg) and Foxp3 in AA rats.MethodsA total of 48 rats were separated into four groups: normal control (NC), model control (MC), methotrexate (MTX), and TPG groups (12 in each). Except for the rats of NC group, those in the others groups were intracutaneously injected in the right hind limb with 0.1 ml of FCA. The NC and MC groups were treated with physiological saline, and the MTX and TPG groups were treated with MTX and TPG, respectively. Thirty days after administration, the changes in swelling degree, AI, LI, pulmonary function, Treg levels, the ultrastructure of the lung tissue, and the expression of Foxp3 in the lung tissue were observed.ResultsCompared with NC group, the level of swelling degree, AI, LI, 1 second average expiratory flow (FEV₁/FVC %), the alveolar inflammation integration, tumor necrosis factor alpha (TNF-α), and endothelium-1 (ET-1) in the MC group had significantly increased (p < 0.01). However, the level of forced vital capacity (FVC), 25% vital capacity of the peak expiratory flow (FEF₂₅), 50% vital capacity of the peak expiratory flow (FEF₅₀), 75% vital capacity of the peak expiratory flow (FEF₇₅), maximum mid-expiratory flow (MMF), peak expiratory flow (PEF), interleukin-10 (IL-10), CD4⁺ CD25⁺ Treg, and Foxp3 had significantly decreased (p < 0.01). LI, the alveolitis score, and ET-1 were found to decrease with TPG treatment. However, the levels of FVC, FEF₂₅, FEF₅₀, FEF₇₅, MMF, PEF, IL-10 in serum, and CD4⁺ CD25⁺ Treg in peripheral blood had increased. The expressions of Foxp3 protein and mRNA in the lung tissue had also increased in the TPG group. Compared with the MTX group, the pulmonary function had enhanced, the structure of alveolar type II cells had improved, and the expression of the IL-10, Treg, and Foxp3 had elevated. However, the TNF-α and ET-1 levels had reduced as compared to the MTX group.ConclusionThe level of paw swelling and AI in the AA rats can be inhibited by TPG. The inflammatory response in lung tissue had also decreased, although there was significant improvement in the pulmonary function. The mechanism that would explain this observation is probably associated with the upregulation of the expression of IL-10, Treg, and Foxp3 and downregulation of the expression of TNF-α and ET-1.