中药有效成分对肿瘤恶病质脂耗竭的抑制作用

为探索抑制毒激素-L所诱导的恶病质脂耗竭的有效药物,将中药有效成分次黄嘌吟、尿囊素、腺嘌吟、大叶茜草素及欧琴素—乙等分别与毒激素-L和从大鼠获得的脂细胞一起孵育,并与单纯中药组和单纯毒激素-L组相比较。结果5种中药成分和毒激素-L组的游离脂肪酸的含量明显低于单纯毒激素-L组(P<0.01),提示5种中药成分均可抑制毒激素-L所诱导的脂解反应。而单纯中药组与正常对照组无差异(P>0.05),提示该5种中药成分对正常脂解反应无影响。     

杨梅素联合围脂滴蛋白对脂肪细胞脂解的影响

目的 研究杨梅素（Myric）与围脂滴蛋白（PLIN1）联合作用对3T3-L1 脂肪细胞脂解的影响。 方法 常规培养及诱导分化3T3-L1 前脂肪细胞,筛选出Myric 最佳干预浓度和时间。Myric 联合sh-RNA 干 扰载体对已诱导分化成熟的3T3-L1 脂肪细胞进行联合干预,实验共分为四组：联合干预组（Myric+sh-RNA）、 转染组（sh-RNA）、杨梅素组（Myric）和空白组。采用油红O 进行脂滴染色,观察脂滴形态;采用酶学方法 检测细胞中三酰甘油（TG）和甘油含量,了解细胞脂解情况;采用Western blot 检测脂肪细胞中PLIN1A、三 酰甘油脂肪酶（ATGL）和激素敏感性脂肪酶（HSL）的表达量。结果 以浓度为100 μmol/L 的Myric 干预 72 h 时,细胞内TG 含量最低,甘油含量最高,脂解效果最佳,与其他浓度和干预24 h 比较,差异有统计学意义 （P <0.05）。联合干预后,与Myric 组和sh-RNA 组比较,Myric+sh-RNA 组细胞内TG 含量下降,甘油含量升 高,脂滴形态变小,数量减少,差异有统计学意义（P <0.05）。同时,Myric+sh-RNA 组PLIN1A 蛋白表达量降低, ATGL 和HSL 蛋白表达量升高,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 Myric 联合PLIN1 可以更有效降低PLIN1 表达量,提高ATGL 与HSL 的表达量,从而提高脂解效率。     

猪苓多糖对毒激素-L诱导的恶病质样表现的抑制作用

为探讨猪苓多糖对毒激素-L诱导的恶病质样表现的抑制作用,将实验大鼠分为正常对照组、猪苓多糖组、毒激素-L组和毒激素-L 猪苓多糖组,观察各组大鼠脂解反应和摄食情况,并测定血清中糖、蛋白质和微量元素含量。结果显示,毒激素-L可显著诱导脂解反应,抑制大鼠的摄入行为,并降低血糖、血锌及升高血铜水平,而猪苓多糖能显著抑制毒激素-L的此种作用(P<0.01)。     

长期激素替代治疗对绝经后妇女身体成分和体脂分布的影响

探讨长期激素替代治疗对绝经后妇女身体成分和体脂分布的影响。方法：３６例健康意大利绝经后妇女分成两组：ＨＲＴ组,１８例,ＨＲＴ组,１８例．。ＨＲＴ组妇女每月经皮给予雌二醇和口服安宫黄体酮,连续１２ｄ。治疗时间３－１０年,平均３．９年,身体测量包括身高,体重,胸围,臂围、腰围与臂围比率。     

COA: siRNA靶向PPARγ基因重组腺病毒穿梭载体对激素诱导兔骨髓间充质干细胞成脂分化的抑制作用

背景：激素是诱发股骨头坏死（osteonecrosis of the femoral head,ONFH)的重要原因之一,可导致骨细胞内脂肪沉积而变性坏死从而抑制成骨分化及骨的形成。过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)是一种成脂转录因子,ONFH的发生与PPARγ在骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）的高表达有密切关系。BMSCs具有分化为成骨细胞与脂肪细胞的潜能,BMSCs内PPARγ高表达,则BMSCs分化为脂肪细胞。因此,通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）调控PPARγ的表达可抑制BMSCs的脂肪分化,保持MSCs的成骨分化特性。 方法：取新西兰大白兔骨髓,制备兔BMSCs,并随机分6组。S1、S2、S3：干扰1、2、3组,Con：感染无关siRNA组,M：模型组,N：正常组。10-7mol/L地塞米松诱导和siRNA病毒载体感染细胞,倒置显微镜观察BMSCs的形态及生长情况,在第1d、3d、5d、7d时,检测各组BMSCs内PPARγ、osteocalcin和Runx2 mRNA及蛋白的表达。14d时,检测细胞内甘油三酯( triglyceride,TG )含量、细胞培养液中骨钙素(osteocalcin,OC)分泌量和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性。21d,苏丹Ⅲ染色BMSCs,并在显微镜下作脂肪细胞计数。 结果：M组和Con组中PPARγ mRNA及其蛋白表达、TG含量和脂肪细胞计数均明显高于N组(P <0.05),而Osteocalcin和Runx2 mRNA及其蛋白表达、培养液中OC含量和细胞内ALP活性明显低于N组(P <0.05)。S1、S2、S3组中PPARγ mRNA及其蛋白表达显著低于M组和Con组(P <0.05),接近N组 (P>0.05),其中S2组的干扰作用最强。 结论：siRNA靶向PPARγ基因腺病毒穿梭载体能够有效抑制激素诱导的BMSCs成脂分化,维持BMSCs成骨分化。     

脂蟾毒配基、华蟾酥毒基、蟾毒灵配伍对BEL-7402人肝癌细胞的抑制作用

目的:研究蟾酥中脂蟾毒配基、华蟾酥毒基和蟾毒灵三种成分单体及配伍对BEL-7402人肝癌细胞的抑制作用。方法:采用MTT法测定蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基单体不同浓度和时间点,三种成分两两配伍以及三种成分配伍对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用。结果:蟾毒灵对BEL-7402人肝癌细胞增殖的抑制作用最强,其次是华蟾酥毒基,脂蟾毒配基的作用最弱;脂蟾毒配基不能增强华蟾酥毒基、蟾毒灵的作用,且有抑制作用的趋势;华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用与单独使用的抑制作用无明显区别。结论:欲发挥三种成分的抗肿瘤作用,应该单独使用,或者华蟾酥毒基与蟾毒灵混合使用。     

脂蟾毒配基对人宫颈癌Hela裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的观察脂蟾毒配基对人宫颈癌Hela裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法于给药前、给药期间(15d)及停药期间(6d)每3d测量肿瘤的长径及短径,并计算近似瘤体积,停药第6天取瘤称重并进行病理学观察。结果①高剂量脂蟾毒配基(15mg/kg)有较强的急性神经毒性。②脂蟾毒配基对荷瘤鼠体重无明显影响。③高剂量脂蟾毒配基(15mg/kg)对人宫颈癌Hela裸鼠移植瘤生长有明显的抑制作用,停药后没有明显的后续抑制作用,15mg/kg的脂蟾毒配基与5mg/kg平阳霉素对肿瘤增长的抑瘤强度相当。④脂蟾毒配基未发现明显的近期毒性。结论脂蟾毒配基对裸鼠的Hela宫颈癌移植瘤有明显的抑瘤作用,脂蟾毒配基是中药蟾酥抗癌的重要成分,但也发现该化合物有明显的急性神经毒性,进一步开发需要慎重。     

60Co—γ射线辐射灭菌对肖金丹中蟾酥成分的影响

本文对60Co-r射线辐射灭菌前后,肖金丹中蟾酥成份脂蟾毒配基(R)、华蟾毒精(C)、蟾毒灵(B)的含量进行了定性定量分析。辐射样品吸收剂量为10KGY。辐照后样品组中R、C、B的含量与对照组配对比较,无显著性差异。     

Fetuin-a对3T3-L1脂肪细胞增殖和脂解的影响

目的观察胎球蛋白-a(fetuin-a)对体外培养的3T3-L1脂肪细胞增殖和脂解的影响。方法体外培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,以MTT法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖状况;采用甘油检测试剂盒测定释放到上清液的甘油含量作为脂解率的指标;采用Western blotting检测细胞内磷酸化激素敏感脂肪酶(hormone sensitive lipase,HSL)和脂肪甘油三酯脂肪酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)的蛋白表达。结果不同浓度的fetuin-a在干预3T3-L1前脂肪细胞后明显促进细胞增殖,且呈剂量依赖性(P<0.05)。Fetuin-a能够抑制成熟脂肪细胞的脂肪分解,降低磷酸化的HSL及ATGL蛋白表达,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 Fetuin-a通过促进3T3-L1前脂肪细胞增殖及抑制成熟脂肪细胞的脂解参与肥胖的发生。     

艾氏腹水癌腹水对刀豆素A诱导胸腺细胞增殖反应的影响

本文究研了艾氏腹水癌腹水对刀豆素A诱导的胸腺细胞增殖反应的影响,发现腹水中至少存在两种对胸腺细胞增殖反应起相反作用的因子,一种为活化因子,来源于宿主的粘附细胞,能明显提高胸腺细胞对刀豆素A的反应,作用迅速,发生于细胞接受有丝分裂原刺激之前;另一种为抑制因子,来源于肿瘤细胞。     

氯化钴诱导低氧对3T3-L1脂肪细胞脂连蛋白表达的影响

目的研究体外模拟低氧对小鼠3T3-L1脂肪细胞脂连蛋白（ADPN）表达的影响。方法体外培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞,将其诱导分化成为成熟的脂肪细胞,油红O染色鉴定脂肪细胞分化程度和脂质积聚情况。氯化钴（CoCl2）化学模拟脂肪细胞低氧环境,采用实时PCR（Real-TimePCR）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和ADPNmRNA的表达,蛋白质印迹法（Westernblotting）检测低氧诱导因子-1α（HIF-1α）的蛋白表达;酶联免疫吸附测定（ELISA）分析细胞培养上清液中ADPN蛋白的分泌水平。结果在CoCl,诱导3T3-L1脂肪细胞低氧的条件下,细胞内HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平均显著上调;细胞内ADPNmRNA表达和细胞培养上清液中ADPN蛋白的分泌水平均显著下降;HIF-1αmRNA与ADPNmRNA的表达水平呈显著负相关（r=-0．854,P〈0．001）。结论CoCl2诱导低氧能够下调3T3-L1脂肪细胞ADPN的表达,该作用可能与脂肪细胞代谢功能障碍和胰岛素抵抗有关。     

菌体比生长速率及不同培养基成分变化对解脂假丝酵母中RNA累积的影响

为了研究解脂假丝酵母ATCC 20408菌株比生长速率和培养基中氨基酸成分对酵母RNA累积的影响。采用分批和连续培养的方法,解脂假丝酵母分别在发酵培养基、YPD培养基、糖蜜培养基以及不含玉米浆的成纤维细胞培养基（FM）中进行培养。结果表明,在分批培养的不同生长期,菌体细胞内RNA累积量有明显区别;在对数生长期时,RNA含量达干重的11.8%(g-RNA/g-DCW);稳定期时,RNA含量仅为6.9%。连续培养时,酵母RNA比生长速率越大,酵母RNA积累量越高,当细胞比生长速率为0.5 h^-1时,RNA含量可达15.6%,糖的转化率为42.8%。在不含玉米浆的FM培养基中加入不同的氨基酸组分进行有氧分批培养时,添加混合氨基酸或蛋白胨组分均可提高酵母细胞RNA的含量。本研究首次报道了高比生长速率和混合氨基酸组分对解脂假丝酵母细胞RNA的积累具有明显的促进作用,而比生长速率对酵母RNA的累积影响更大。     

普伐他汀对激素性股骨头坏死兔脂联素表达的影响

目的 研究普伐他汀对激素性股骨头坏死兔脂联素表达的影响.方法 24只实验大白兔随机分为3组,每组各8只.治疗组:激素注射造模成功后,普伐他汀药物灌胃治疗;模型组:激素注射造模后予蒸馏水灌胃处理;对照组:蒸馏水灌胃处理.治疗结束后观察3组兔股骨头组织学变化和血清、股骨头坏死区脂联素的表达情况.结果 与模型组比较,治疗组毛细血管数、管径及骨陷窝空缺百分比均有显著改善(P<0.05);与模型组和对照组比较,治疗组血清及股骨头坏死部分脂联素的表达水平明显升高(P<0.05).结论 普伐他汀可有效治疗兔激素性股骨头坏死,上调脂联素的表达水平.     

普伐他汀对兔激素性股骨头坏死脂联素表达的影响

目的:研究普伐他汀对兔激素性股骨头坏死脂联素表达的影响。方法:24只实验大白兔随机分为3组,每组各8只。治疗组:激素注射造模成功后,普伐他汀药物灌胃治疗;模型组:激素注射造模后予以生理盐水灌胃处理;对照组:生理盐水灌胃处理。治疗结束后观察3组兔股骨头组织学变化和血清、股骨头坏死区脂联素的表达情况。结果:与模型组比较,治疗组毛细血管数、管径及骨陷窝空缺百分比均有显著改善(P<0.05);与模型组和对照组比较,治疗组血清及股骨头坏死部分脂联素的表达水平明显升高(P<0.05)。结论: 普伐他汀可有效治疗兔激素性股骨头坏死,上调脂联素的表达水平。     

靶向 PPARγRNA 干扰对激素诱导家兔骨髓基质细胞成脂分化的影响

目的:观察靶向过氧化物酶体增殖子活化受体-γ(PPARγ)RNA干扰抑制激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的作用.方法:选用家兔第2代骨髓基质细胞.随机分为6组:模型组(M组:给予10-7 mol/L地塞米松),干扰1、2、3组(S1组、S2组、S3组:分别给予siRNA 1、2、3腺病毒1 × 106 U和10-7 mol/L地塞米松),感染无关siRNA gl(C组:给予siRNA4腺病毒1×106 U和10-7 mol/L地塞米松),对照组(N组:不给予siRNA腺病毒和地塞米松).苏丹Ⅲ染色.光镜下进行脂肪细胞计数,并采用RT-PCR方法检测细胞内PPARγ Mrna的表达.结果:处理并培养细胞3 d,S1组、S2组、S3组细胞内PPARγ,Mrna表达水平低于M组、C组(P<0.05),且与N组比较差异无统计学意义(P>0.05).处理细胞14 d后.S1组、S2组、S3组中分化为脂肪细胞的数量少于M组和C组(P<0.05),且与N组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:siRNA能够有效阻断激素诱导的骨髓基质细胞中PPARγ/Mrna表达及其成脂分化.     

脂氧素通过Nrf2信号通路对LPS诱导脐静脉内皮细胞氧化应激的抑制作用

目的研究脂氧素对脂多糖(LPS)刺激的脐静脉内皮细胞引起的氧化应激的抑制作用及其机制。方法以LPS10μg/ml诱导脐静脉内皮细胞氧化应激,以不同浓度脂氧素(lipoxin A4,LXA4)进行干预,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;细胞免疫荧光检测转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)转位变化;RT-PCR检测Nrf2及其下游抗氧化酶mRNA的表达;化学显色法测定脐静脉内皮细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX,GPX)活性。结果细胞内ROS测定显示,脂氧素能够有效地降低脐静脉内皮细胞内由LPS刺激引起的ROS升高;细胞免疫荧光结果显示,LPS组Nrf2主要在胞质中表达。而加入脂氧素干预后胞核可见较强的Nrf2的表达;其中加入200nmol/L脂氧素作用后胞核中的Nrf2的表达明显增强。RT-PCR结果显示,LPS组Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)、SOD、GPX mRNA表达水平明显降低,加入脂氧素干预后Nrf2、HO-1、SOD、GPX mRNA表达水平均增加。化学显示法结果显示,LPS组脐静脉内皮细胞的SOD、GSH-PX的活性明显降低,使用100nmol/L和200nmol/L脂氧素干预后均能明显减少细胞的氧化损伤。结论脂氧素通过活化转录因子Nrf2来促进多种抗氧化酶的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤。     

脂氧素A4对TNF-α诱导的内皮细胞炎症反应的影响

目的:探讨脂氧素A4(LXA4)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMECs)炎症相关因子的影响,并初步探讨其可能的机制.方法:实验分为对照组、TNF-α单独刺激组和不同浓度LXA4 (5 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL)预处理组.实时荧光定量PCR检测HPMECs单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)、E-选择素(E-selectin)、白介素-6(IL-6)mRNA表达水平;细胞免疫化学方法定位检测核因子-κ B/p65(NF-κ B/p65);蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞核内和细胞总蛋白中NF-κB/p65的水平.结果:LXA4可以抑制TNF-α诱导的HPMECs MCP-1、E-selectin、IL-6 mRNA表达的上调;LXA4可以抑制TNF-α引起的HPMECs p65由细胞质向细胞核的转位.结论:LXA4可能通过抑制NF-κB细胞信号通路而抑制血管内皮细胞炎症相关因子的表达,发挥抗炎作用.     

羟基红花黄色素A对激素诱导骨髓间充质干细胞成脂分化的干预作用

目的 探讨激素性股骨头缺血坏死的发病机制及羟基红花黄色素A(HYSA)防治该病的作用机制. 方法 30天龄SD大鼠18只,体重(150±20)g.6只用于骨髓间充质干细胞取材培养、鉴定、MTT试验;12只用于骨髓间充质干细胞取材培养、干预.大剂量激素诱导体外培养的骨髓间充质干细胞成脂分化,在诱导成脂的同时给予不同浓度H...     

骨痹通消颗粒对激素型股骨头坏死人骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的影响

目的 探究骨痹通消颗粒对激素性股骨头坏死人骨髓间充质干细胞（hBMMSC）成骨与成脂分化的影响。方法 取激素性股骨头坏死患者骨髓,体外进行hBMMSC的培养,通过细胞形态学观察、成骨及成脂分化潜能来鉴定hBMMSC。以完培组（基础培养基+10%的胎牛血清）作为对照,采用CCK-8法测定1%、2%、5%、8%、10%体积分数的骨痹通消含药血清A组作用24 h后对细胞增殖的影响。细胞在96孔板的培养过程中,每孔加入地塞米松溶液0.52 μl,以完培组（基础培养基+10%的胎牛血清）和损伤组（基础培养组+10%的胎牛血清+0.52 μl地塞米松溶液）作为对照,采用CCK-8法测定2%、5%、8%体积分数的骨痹通消含药血清B组对激素环境中细胞活力的影响。以无激素诱导细胞作为对照组（基础培养基+10%的胎牛血清）,将体外激素诱导的hBMMSC细胞分为模型组（基础培养基+10%的胎牛血清+10-5 mol/L地塞米松溶液）、实验组（基础培养基+5%的骨痹通消含药血清+ 10-5 mol/L地塞米松溶液）。茜素红染色试剂盒测定各组成骨分化后矿化结节的形成;油红O染色试剂盒测定各组成脂分化后脂滴的形成;RT-qPCR测定成脂相关标志基因PPARγ、C/EBP-α与Fabp4中mRNA的表达,Western blot检测成骨相关蛋白BMP-2、Runx2及β-catenin的蛋白表达含量。 结果 原代细胞培养7 d后,可见梭形、纺锤形或多角形的贴壁细胞。第三代细胞生长均匀,平行排列,透光率好。成骨诱导21 d,细胞发生改变,局部细胞聚集,并有矿化结节产生,茜素红染色呈阳性;成脂诱导21 d,脂滴与油红O染液结合变为红色,油红O染色呈阳性。与完培组比较,10%体积分数的含药血清A组细胞活力下降（P＜0.05）。与完培组比较,损伤组细胞活力下降（P＜0.05）;与损伤组比较,2%、5%、8%体积分数的含药血清B组细胞活力升高（P＜0.05）。与对照组比较,模型组染色面积降低（P＜0.05）;与模型组比较,实验组中矿化结节与沉积升高,染色范围也更广（P＜0.05）。与对照组比较,模型组细胞内脂质积累增多（P＜0.05）;与模型组比较,实验组较细胞内脂质积累降低（P＜0.05）。与对照组比较,模型组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4的表达量升高（P＜0.01）,与模型组比较,实验组PPARγ、C/EBP-α和Fabp4的表达量降低（P＜0.05）。与对照组比较,模型组BMP-2、Runx2及β-catenin蛋白表达含量升高（P＜0.01）,与模型组比较,实验组BMP-2、Runx2及β-catenin蛋白表达含量降低（P＜0.05）。 结论 骨痹通消颗粒能够促进激素性股骨头坏死hBMMSC的增殖及其向成骨分化的能力,抑制成脂分化,为临床上防治激素性股骨头坏死提供了理论基础。