运用组织工程学原理构建许旺细胞三维培养体系

目的 探讨普通重力和模拟微重力条件下构建许旺细胞三维培养体系的方法。方法 对聚羟基乙酸细丝支架进行化学改性处理后再以层粘连蛋白进行生物学修饰;分别在普通重力和模拟微重力条件下把原代许旺细胞悬液接种在支架材料上,观察许旺细胞的粘附生长情况。结果 两种重力条件下许旺细胞在聚羟基乙酸支架表面都能良好贴壁生长,培养2d时细胞生长稳定、密度适中;模拟微重力条件下许旺细胞在支架表面的分布更均匀。结论 普通重力和模拟微重力环境都适宜构建许旺细胞的三维培养体系,模拟微重力环境可能为有利。     

许旺细胞在人工神经支架材料上三维培养的体外活性研究

目的　探讨许旺细胞在组织工程支架材料上体外三维培养的生长活性。　方法　对聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝支架进行生物学修饰 ,把原代培养的许旺细胞悬液接种在支架材料上 ,用MTT法、单细胞凝胶电泳法及显微分光光度和显微图像联合法测定许旺细胞的生长活性。　结果　聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝支架上的许旺细胞各项活性指标与正常培养的许旺细胞比较 ,差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,实验组许旺细胞DNA无损伤。　结论　聚羟基乙酸和聚乳酸的共聚物细丝适于构建具有许旺细胞活性的组织工程化人工神经。     

许旺细胞在支架材料中的三维生长与迁移的研究

目的 研究许旺细胞在聚乳酸(PLA)无纺纤维布及聚羟基乙酸(PLGA)纤维丝上的粘附、三维生长及迁移情况。方法 将许旺细胞／ECM凝胶悬液与PLA无纺纤维布及经胶原、多聚赖氨酸和ECM预处理的PLGA纤维丝复合培养，相差和激光扫描共聚焦显微镜观察许旺细胞在纤维丝中的三维生长和迁移。结果 许旺细胞／ECM悬液，与PLA无纺纤维布复合，随着凝胶的形成，大部份许旺细胞滞留在纤维网孔中，多数细胞和纤维丝贴附，形成多层排列的类似Beungner带状的许旺细胞柱。许旺细胞能贴附在PLGA纤维丝上生长并沿纤维丝移行，ECM凝胶能显著增加贴附和移行细胞数量。结论 ECM凝胶能促进许旺细胞在支架中的黏附、生长与迁移，是构建组织工程化人工神经的良好整合材料。     

聚乳酸管与不同数量高分子材料丝构建人工神经体外研究

目的 探讨不同数量的高分子材料丝对许旺细胞活性的影响。方法 以粘附有许旺细胞的不同数量的高分子材料细丝加入聚乳酸管中，在体外用免疫组化染色和细胞端粒酶活性测定等观察许旺细胞活力情况。结果 在直径为1.8mm，厚度为0.3mm的聚乳酸管中放入480根直径约10μm的高分子材料细丝时许旺细胞活力比放入240根、960根和不放丝组好。结论 在直径为1.8mm厚度为0.3mm的PLA管中加入粘附有许旺细胞的高分子材料细丝构建人工神经时以加入480根丝为最好。     

用组织工程方法桥接周围神经缺损的实验研究

目的 寻找修复周围神经缺损的新的有效替代材料。方法 将体外培养扩增的许旺细胞接种在生物可吸收材料聚羟基乙酸纤维支架上培养２周,形成一种新的神经桥接物,并对其进行了观察和动物移植试验。结果 发现接种的许旺细胞可在聚羟基乙酸纤维上良好吸附、迁移形成一种新型的、非管状的、具有三维纵向细胞排列和导层粘蛋白通道的组织工程化神经桥接物,用其修复近交的Ｗｉｓｔａｒ大鼠１５ｍｍ坐骨神经缺损时,取得了接近自体神经移     

新型聚β-羟基丁酯作为血管组织工程支架材料的实验研究

目的：探讨经改性处理后的可降解生物材料聚β-羟基丁酯(PHB)作为血管组织工程支架材料与血管平滑肌细胞的细胞相容性。方法：采用体外培养的免血管平滑肌细胞接种在经胶原包埋处理后的管型PHB支架材料上，用相差显微镜和扫描电镜观察细胞的粘附和生长情况，并行HE染色观察。结果：免血管平滑肌细胞在改性后的管型PHB支架材料上粘附生长良好，扫描电镜下可见细胞生长融合成片状，HE染色示细胞在PHB材料上生长良好。结论：改性后的聚β-羟基丁酯材料与兔血管平滑肌细胞有较好的生物相容性。     

许旺细胞在聚羟基乙酸纤维上三维定向培养

目的 为制备组织工程化的神经桥接物。方法 将体外扩增的许旺细胞（ＳＣｓ）接种在纵向排列的、可吸收材料ＰＧＡ纤维支架上，并对这种立体培养的细胞进行光镜、电镜和免疫组化观察，结果 发现许旺细胞可与聚羟基乙酸（ＰＧＡ）纤维良好吸附。并在其上边分裂边迁移从而形成了类似Ｂｕｅｎｇｎｅｒ带的纵向排列的细胞链，且其间含有一定的间隙，同时细胞大量分泌的层粘蛋白（ＬＮ）沉积在纤维表面形成了纵向的、类似变性神经的结构     

修饰后的聚羟基乙酸和聚乳酸共聚物支架与人胚雪旺细胞联合培养的实验研究

目的：探索人体组织工程神经构建的方法。方法：应用鼠尾胶和层粘蛋白包埋纤维状的聚羟基乙酸和聚乳酸共聚物支架与人胚雪旺细胞培养2周，观察细胞在支架上的吸附迁移和生长情况，结果：人雪旺细胞能在共聚物纤维上迁移包裹，雪旺细胞均匀分布于以鼠尾胶和层粘蛋白共同包埋后的纤维之间及吸附在纤维表面，且基质分泌旺盛，结论：人胚雪细胞在修饰后的polyglytin纤维上得到大量扩增，形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性。     

化学萃取同种异体神经种植许旺细胞的体外实验

目的：通过自体许旺细胞与化学萃取同种去细胞异体神经桥接物体外结合培养的研究，寻找一种在结构功能上与自体神经相似而抗原性少或无的物质来修复较长距离的神经缺损。方法：使用近交系F344乳鼠和双差速贴壁及Arab-C抑制成纤维细胞生长的细胞培养方法来获得大量纯度的许旺细胞。成年SD大鼠作为异体神经来源，利用化学萃取去除其中细胞成分降低其抗原性，制备去细胞神经桥接物，再把前者通过微注射方法注入到后者内部继续培养观察细胞生长情况。用抗S-100标记许旺细胞计算纯度，用HE染色、电镜观察神经萃取及细胞种植其内后生长情况。结果：许旺细胞培养纯度达92%以上。Triton-X-100及脱氧胆酸钠具有完全萃取掉神经纤维中的许旺细胞及髓鞘，萃取后所得到的桥接物适合于许旺细胞体外生长，并且细胞在其内有迁移排成行的特性。结论：通过化学萃取方法所得到的异体去细胞神经桥接物种植自体许旺细胞后可能为一种理想的神经缺损修复材料。     

Ⅰ型胶原在PLGA-[ASP-PEG]表面修饰对兔骨髓基质干细胞生物力学的影响

目的探讨Ⅰ型胶原修饰聚乳酸-羟基乙酸/天冬氨酸-聚乙醇(PLGA-[ASP-PEG])支架材料对骨髓基质干细胞(BMSCs)在其表面粘附、增殖及成骨分化的影响。方法采用化学方法将Ⅰ型胶原接枝到PLGA-[ASP-PEG]表面,同时在材料表面物理涂层胶原溶液。将改性PLGA-[ASP-PEG]复合兔BMSCs培养,检测BMSCs粘附、增殖性能的变化及成骨标志物碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、Ⅰ型胶原、核心结合因子al等的表达情况。结果X射线光电子能谱法证实Ⅰ型胶原成功接枝到PLGA-[ASP-PEG]表面。经化学接枝-物理涂层技术改性后PLGA-[ASP-PEG]膜表面的Ⅰ型胶原含量大大提高,明显高于经单纯化学接枝或单纯物理涂层技术改性后膜表面的胶原含量,且远高于二者之和。改性PLGA-[ASP-PEG]表面BMSCs的粘附、增殖能力显著提高,其成骨标志物的表达均显著高于对照组,差异有显著性意义(P＜0．05)。结论Ⅰ型胶原能显著改善PLGA-[ASP-PEG]的细胞生物相容性,为组织工程支架材料的优化提供了一种新途径。     

聚乳酸-聚羟基乙酸神经导管和骨髓间充质干细胞构建组织工程神经

[目的]用聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(poly lactide-co-glycolide acid,PLGA)为原料制备新型神经导管,同时对兔骨髓间充质干细胞与PLGA构建组织工程神经的可行性进行观察.[方法]以聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物和壳寡糖为原料,采用静电纺丝工艺制备中空的PLGA神经导管.通过扫描电镜观察材料的微观结构,排水法测定材料的孔隙率.将兔的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养后与导管共培养,扫描电镜观察细胞在材料上的生长粘附情况,MTT方法检测细胞在材料上的增殖活性.[结果]PLGA神经导管管壁具有疏松多孔结构,管壁纤维直径为18 μm左右,孔隙率为85.4%±1.6%,MTT结果显示导管无细胞毒性.兔骨髓间充质干细胞在导管表面生长良好.[结论]PLGA神经导管具有良好的孔隙率,生物相容性好,是构建组织工程神经的良好材料.     

兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯(PHB)的细胞相容性实验研究

目的：探索血管平滑肌细胞和新型可降解材料聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性，为组织工程血管的构建寻找理想的支架材料。方法：将组织块法体上培养与兔血管平滑肌细胞种植在PHB膜片和PHB三维微孔支架上，在相差显微镜下观察细胞的粘附和生长情况。用MTT法测定细胞粘附率和细胞增殖指数，复合培养7天后进行扫描电镜观察并用流式细胞仪（FCM）的测定细胞周期，DNA指数。结果：兔血管平滑肌细胞在PHB膜片上粘附率为77％，细胞增殖符合细胞的生长曲线，在PHB三维微孔支架上生长情况良好，并被证实为二倍体细胞。结论：兔血管平滑肌细胞和聚羟基丁酯（PHB）的细胞相容性较好，但细胞与材料间的粘附有待进一步改善。     

背根神经节与医用可降解材料聚乙醇酸纤维联合培养的实验研究

目的 探索医用可降解材料聚乙醇酸纤维与周围神经组织的生物相容性,观察许旺细胞在聚乙醇酸纤维上迁移、包裹的细胞行为。方法 取新生大鼠背根神经节与医用可降解材料聚乙醇酸纤维联合培养２周,免疫细胞化学染色等形态学观察其变化。结果 许旺细胞能在聚乙醇酸个迁移包裹,并引导神经轴索向远方延伸。结论 许旺细胞和神经轴索可贴附在聚乙醇酸纤维上生长迁移,提示聚乙醇酸纤维和周围神经组织具有良好的生物相容性。     

不同浓度壳聚糖涂层PLGA材料与许旺细胞相容性研究

目的：研究不同浓度壳聚糖涂层聚乳酸／羟基乙酸共聚物（PLGA）材料与许旺细胞（sc）的生物相容性,为构建适合神经再生的导管支架提供研究基础。方法：采用双酶法培养扩增sc,用质量百分比浓度分别为1％,3％,5％,7％的壳聚糖涂层于PLGA材料。将SC与材料浸提液联合培养,并设立对照作比较,观察细胞生长增殖情况,分别在1,3,5,7天取材MTT法检测细胞相对增殖率。将sC接种在各组材料上,用相差显微镜和扫描电镜观察细胞在材料上粘附和生长情况。结果：材料浸提液对sc生长及细胞形态无明显影响,浓度为1％和3％壳聚糖涂层PLGA材料浸提液在第5天和第7天细胞相对增殖率要高于以5％和7％壳聚糖涂层。sc在壳聚糖涂层PLGA材料上粘附紧密,生长增殖良好。结论：壳聚糖涂层PLGA材料与sc生物相容性良好,采用质量浓度为1％～3％壳聚糖涂层有利于sc粘附增殖,较适合构建神经导管组织工程材料。     

冻干骨和PLGA材料表面软骨细胞增殖的形态学观察比较

目的了解两种材料表面软骨细胞的增殖特性预测形成组织工程化关节软骨的可能性。方法获取幼兔关节软骨细胞,种植于两种材料表面,培养观察细胞生长情况。结果冻干骨和聚羟基乙酸聚乳酸共聚物(PLGA)材料表面细胞均有粘附增殖及基质分泌,但后者明显优于前者。结论冻干骨表面粘合PLGA材料种植软骨细胞有可能形成组织工程化关节软骨。     

可降解材料对外周神经的毒性作用研究

目的 研究聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖等可降解材料对正常外周神经有无毒性作用，为研制组织工程化神经筛选相容性好的支架材料。方法 取15只SD大鼠，随机分成3组，打开坐骨神经外膜后，分别将聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖植入神经束之间。术后7周取材，观察坐骨神经组织结构的变化以及材料在神经组织内引起的异物反应。结果各组的神经干内均有纤维结缔组织轻度增生，但神经束的形态结构无明显变化；各种材料周围均有纤维假膜形成，假膜内有淋巴细胞和巨噬细胞浸润，而包裹壳聚糖的假膜最厚，细胞浸润最明显。结论 聚乳酸、聚羟基乙酸和壳聚糖对外周神经均无毒性，可作为组织工程化神经的支架材料，但壳聚糖引起的异物反应较聚乳酸和聚羟基乙酸明显。     

人工神经预构的研究进展

目的介绍人工神经预构的物理材料、化学基质及生物种子细胞等方面的进展。方法广泛查阅近年相关研究文献，并重点讨论人工神经预构在物理材料、化学基质及生物种子细胞等方面的成果和目前存在的问题。结果聚乳酸、聚羟基乙酸的聚合物及其复合物、透明质酸和戊二醛的聚合物、聚氯乙酸、聚丙烯的聚合物，均是生物相容性良好且可降解的人工神经材料；人工神经管的多腔化和神经管道上孔隙率的设计有益于神经再生；激活的雪旺细胞是人工神经良好的种子细胞；合适的化学基质如层粘蛋白和藻胶可促进神经的再生。结论只有在神经再生的机制和人工神经的物理材料、化学基质和生物种子细胞等方面的研究均取得突破性进展时，理想的人工神经才有可能最终构制成功。     

软骨细胞体外培养支架材料研究进展

软骨组织损伤后自身修复能力有限,组织工程构建对软骨缺损的修复意义重大,为功能软骨的修复提供了新希望,而软骨细胞体外培养支架的研究是重要一环.运用于骨组织工程的人工合成支架材料来源广、可批量生产、可控降解速度,力学强度好、易于塑形;天然支架材料亲水性强,细胞粘附性、生物相容性好;人工合成材料复合天然材料取各自所长,克服各自缺陷,支架性能提高.通过对材料表面进行修饰,可改善细胞与支架材料的相互作用.通过模拟细胞生长微环境,制备仿生材料,可提高材料的亲水性、对细胞的粘附性,促进细胞的分化增殖.纳米材料的出现为细胞体外培养支架的研究提供了新选择.该文就软骨细胞体外培养支架材料近年的一些新进展作一综述,并预测今后研究的主要方向.     

软骨细胞—支架复合物修复兔耳廓软骨缺损

目的在有免疫力的动物兔体内探索组织工程化软骨对软骨缺损的修复能力。方法软骨细胞种于经不同物质修饰的聚羟基乙酸支架体外培养后修复兔耳廓软骨缺损,与对照组比较,并从大体及组织学进行评价。结果软骨细胞种于经不同物质修饰的聚羟基乙酸支架体外培养后回植到兔耳廓软骨缺损部位,软骨缺损得到修复,但与正常软骨交界处为纤维组织。注射软骨细胞悬液、以聚羟基乙酸支架修复及空白对照组软骨缺损均未修复。结论软骨细胞种于经不同物质修饰的聚羟基乙酸支架体外培养后在有免疫力的动物兔体内可修复耳廓软骨缺损,但存在着界面愈合问题。     

新型多孔PLGA/HA复合支架体外细胞相容性的实验研究

目的研究新型多孔聚乳酸乙醇酸/羟基磷灰石(PLGA/HA)支架材料的体外细胞相容性。方法采用贴壁法对兔骨髓基质细胞(BMSCs)进行体外矿化诱导培养,扩增后与实验A组(含5%HA的PLGA/HA),实验B组(含10%HA的PLGA/HA)及对照C组(仅含PLGA)分别进行体外复合培养;并通过定性及定量法检测BMSCs在材料表面的粘附能力、增殖活力,验证细胞材料复合体的成骨活性。比较分析各组之间的差异。结果兔BMSCs在每组材料的表面均能生长,经体外诱导后在支架材料的表面形成钙结节,A、B组细胞的粘附及增殖能力均强于C组(P<0.05),A、B组之间无差异。结论兔BMSCs与新型多孔PLGA/HA支架材料有良好的相容性。