端粒酶hTR和hTERT在人成釉细胞瘤中的表达

目的 探讨端粒酶hTR、hTERT基因表达在人成釉细胞瘤(ameloblastoma，AB)和牙源性角化囊肿(odontognic keratocysty，OKC)中的意义，探讨其在AB、OKC中的发生、发展及其生物学意义。方法 采用mRNA原位杂交方法对口腔颌骨内54例AB、16例OKC及7例口腔正常粘膜，进行了hTR、hTERT mRNA的检测。结果94．4％(51／54)AB有h1、R、hTERTmRNA的表达，81．2％(13／16)、87．5％(14／16)OKC及2／7和1／7正常口腔粘膜分别有hTR、hTERTmRNA表达，3组相比差异有显著性。hTR与hTERT在AB中表达具有相关一致性。端粒酶表达与AB不同组织学类型、病损发生部位、单房与多房无关，在AB外周细胞及星网状多边形细胞中有表达，有角化退变样细胞及颗粒样细胞缺乏表达。结论 hTR、hTERT活化在AB和OKC的发生、发展中起重要作用，有可能成为判断AB预后的可靠指标。     

人成牙本质细胞样细胞的原代培养

目的：培养人原代牙本质细胞。方法：取引产的8月龄死胎，剥离乳磨牙胚牙乳头，组织块法培养。然后采用滤纸片法挑取了3个与成牙本质细胞形态相似的细胞克隆，扩大培养。对培养细胞从形态学、矿化结节、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、人牙本质基质蛋白-1（human dentin matrix protein-1,hDMP-1）和人牙本质涎磷蛋白（human dentin sialophosphoprotein,hDSPP）在mRNA水平上的表达等方面进行鉴定。结果：有一个克隆来源的细胞呈梭形、有单侧较长细胞突起，未见核极化，同时它们具矿化功能，表达人成牙本质细胞特异性标志hDMP-1、hDSPPmRNA。结论：该培养细胞为人成牙本质细胞样细胞，为进一步的有关研究奠定了基础。     

人成牙本质细胞的分离和鉴定

目的:分离并鉴定完整的成熟人成牙本质细胞。方法:收集人健康恒牙,采用胶原酶和蛋白酶联合消化法分离出成牙本质细胞,并对分离出的细胞进行细胞形态学和免疫组织化学鉴定。结果:实验分离出的细胞为柱状或立方状,有较长的细胞突起,具有典型的成牙本质细胞形态,免疫组化染色显示细胞表达Ⅰ型胶原、DMP1和DSP蛋白。结论:本研究分离得到了完整的成熟人成牙本质细胞,为后期研究成牙本质细胞的分化、功能及特点奠定基础。     

波形蛋白标记观察人恒前磨牙成牙本质细胞突的分布

目的 :利用免疫酶组化染色技术 ,对人恒前磨牙成牙本质细胞突内的波形蛋白进行定位研究。方法 :将牙齿拔除后立即磨成薄片 ,10 0ml/L中性福尔马林液固定 72h ,10 0ml/L硝酸脱钙。石蜡包埋 ,制取6 μm厚的组织切片。采用SABC法进行免疫组化染色。 结果 :阳性染色的波形蛋白结构在牙本质小管内呈连续较直的长条状。在冠部至釉牙本质界 ,在根部达牙本质小管末端。其分布趋势是从牙本质内层到外层逐渐减少 ,阳性表达程度逐渐减弱。结论 :成牙本质细胞突贯通牙本质全层达牙本质小管末端。     

成牙本质细胞的基本特征及其研究进展

成牙本质细胞作为牙髓细胞的主要成分，具有在牙发育期间和成熟牙内生成牙本质的功能。目前的研究多基于牙髓细胞的二维体外培养，随着对牙髓组织研究的不断深入，牙髓细胞体外三维立体模型的建立将是未来研究的热点。作者回顾了近年来对成牙本质细胞的研究情况，主要阐述了成牙本质细胞的形态、超微结构、功能、蛋白表达的特征及其研究进展和今后的研究方向。     

永生化成牙本质细胞表达牙本质基质蛋白的实验研究

目的　探讨永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT-hOd-l表达牙本质基质蛋白的情况。方法　矿化液培养hTERT-hOd-l细胞5周,检测骨钙素(OC)分泌量和碱性磷酸酶(ALP)活性。采用免疫组织化学、RT-PCR和原位杂交方法检测Ⅰ型胶原、骨涎蛋白(BSP)、牙本质基质蛋白1 (DMP1)以及成牙本质细胞标志物牙本质涎磷蛋白(DSPP) 和牙本质涎蛋白(DSP)在细胞中的表达。结果　在矿化液诱导下,hTERT-hOd-l细胞ALP活性和OC分泌量升高。 hTERT-hOd-l细胞在mRNA水平上表达BSP、DMP1和DSPP,在蛋白质水平上表达DSP和Ⅰ型胶原。结论　hTERT- hOd-l细胞在体外表达牙本质基质蛋白,具有矿化的潜能。     

永生化人成牙本质细胞样细胞系体内矿化特征

目的 研究永生化人成牙本质细胞样细胞系hTERT-hOd-1体内的矿化特征。方法 将细胞和三维支架复合后移植至小鼠背部皮下，采用X线和组织学方法观察复合物生长情况。结果 X线显示复合物阻射像的密度和面积随时间而增加。组织学观察复合物在小鼠体内培养12周可形成矿化组织，部分似牙本质，其中含有牙本质小管样结构。结论 hTERT-hOd-1在体内培养中具矿化能力，可用于牙本质形成和组织工程的研究。     

人牙髓细胞向成牙本质细胞分化的蛋白质组学研究

目的 采用蛋白质组学方法分析人牙髓细胞向成牙本质细胞分化过程中细胞蛋白表达谱的改变,揭示特征蛋白在分化过程中所起的作用.方法对人牙髓细胞进行矿化诱导,提取诱导前后细胞总蛋白,双向电泳分离蛋白质,DeCyder V6.0软件确定差异蛋白点,质谱鉴定差异蛋白质.结果双向电泳确认46个差异蛋白质斑点,质谱鉴定20个蛋白斑点,差异蛋白质涉及细胞周期调节、能量代谢、信号传导等细胞生物学过程.结论蛋白质组学技术可高通量筛选与人牙髓细胞向成牙本质细胞分化相关的功能蛋白.     

外胚间充质干细胞永生化的实验研究

目的：探讨端粒酶催化亚基(hTERT）在外肌间充质十细胞永生化中的作用。方法：质粒pClneo—hTERT转染外胚问充质干细胞，经G418筛选后获得抗性克降。免疫细胞化学法及图像分析检测hTERT的表达，累计生长曲线检测细胞增殖能力。结果：转染后获3个抗性克隆。转染第3代细胞hTERT染色呈强阳性，转染后第15代细胞hTERT活性较正常培养的第15代细胞明显增强、转染细胞增殖能力有不同程度的增加，其中克隆2越过衰老期，寿命延长。结论：外源性hTERT介入可重建外胚间充质干细胞的端粒酶活性，使细胞延长寿命，得以永生。     

肿瘤坏死因子受体相关分子6在成牙本质细胞中表达的研究

目的 :研究肿瘤坏死因子受体相关分子 6(TRAF6)是否在成牙本质细胞中表达。方法 :通过westernblot、免疫组化染色研究TRAF6蛋白在成牙本质样细胞系MDPC 2 3中的表达。结果 :Westernblot结果显示MD PC 2 3细胞总蛋白中有大小约 60Kda的TRAF6蛋白条带 ;免疫组化法表明TRAF6在MDPC 2 3细胞浆呈阳性表达。结论 :本实验从蛋白水平证实了成牙本质样细胞MDPC 2 3表达TRAF6,提示TRAF6可能是一种新发现的影响成牙本质细胞分化的胞内信号转导分子     

Effects of aFGF,bFGF, TGFβ1 and IGF-I on odontoblast differentiation in vitro

In this work, we investigated the effects of aFGF and bFGF alone or combined with TGFβ1 or IGF-I on odontoblast differentiation. Trypsin-isolated dental papillae from day 17 mandibular first molar were cultured in semisolid-agar medium for 6 d. Our results demonstrated that aFGF, bFGF or combinations of these promoted cell polarization at the periphery of the dental Papillae. Moreover, simultaneous addition of aFGF and TGFβ1 to dental Papillae cultures induced both polarization and functional differentiation of odontoblast-like cells, as well as extracellular matrix deposition. Combination of aFGF or bFGF with IGF-I caused cell polarization at the surface of dental papillae, but matrix secretion was restricted to a few explants. In the presence of bFGF and TGFβ1, the explants had pronounced cell elongations but no matrix deposition. These results indicate that aFGF or bFGF is not able to induce odontoblast differentiation alone. However, both aFGF and bFGF can act synergistically with TGFβ1 and IGF-I to strengthen their inductive effects and promote gradients of cytological and functional changes in odontoblast-like cells.     

舌鳞癌中hTERT与PTEN表达的相关性研究

目的:探讨舌鳞状细胞癌组织中hTERT与PTEN蛋白表达的相关关系,为治疗原发性舌鳞癌提供理论依据.方法:采用免疫组织化学技术及原位杂交技术,对原发性舌鳞癌组织、癌旁组织(正常组织)中hTERT和PTEN蛋白表达进行检测.利用计算机图像分析技术,将二者中hTERT和PTEN蛋白水平进行半定量分析.在此基础上,应用有关统计学方法,评价hTERT与PTEN之间是否存在相关性及其相关程度.结果:舌鳞癌中hTERT和PTEN蛋白的阳性检出率分别为74.5%(37/50)和39.1%(20/50).且随着肿瘤恶性程度的增加,hTERT的表达升高,PTEN的表达下降,二者之间存在相关性(P<0.01).结论:抑癌基因PTEN在舌鳞状细胞癌中对hTERT活化的可能存在抑制作用,PTEN的缺失可能引起hTERT表达水平增高从而导致舌癌的发生.