杨树花粉变应原的提取及纯化

本文通过对杨树花粉变应原的纯化过程,作为治疗花粉症的各种花粉变应原的纯化方法推行探索。杨树花粉经过脱脂、提取、分离和葡聚糖G—25柱层析纯化,经紫外吸收光谱进行分组,冷冻干燥贮存,各组分经过免疫双扩散和临床33例杨树花粉粗浸出液皮内试验为阳性的病人对照证明有活性的组分,然后进行聚丙烯酰胺电泳证实为一纯品,同时以正常人血清对照测得分子量约为6.7万左右。     

家蚕蚕蛹变应原的鉴定、分离与纯化

目的鉴定、分离和纯化大造(Dazao)品系家蚕(Bombyxmori)的蚕蛹粗提液中的变应原蛋白质组分,为家蚕变应原的蛋白质组学和功能基因组学深入研究奠定基础。方法采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-blotting,鉴定了家蚕蚕蛹粗浸液中变应原蛋白质分子,并通过阴离子交换和凝胶过滤层析分别对家蚕蚕蛹变应原蛋白质进行初步纯化。结果在家蚕蚕蛹粗浸液中含有表观分子量分别为80000及30000的蚕蛹变应原;从家蚕蛹全虫粗提液中初步分离到分子量为30000的蛹变应原蛋白组分。结论分离得到的家蚕蚕蛹变应原蛋白组分可用于系统研究家蚕过敏原蛋白分子的蛋白质组学和功能基因组学。     

纯化花粉变应原免疫治疗的疗效观察

目的:观察纯化花粉(黄蒿、葎草、藜草花粉)变应原特异性免疫治疗(SIT)的疗效.方法:采取凝胶过滤方法分别提纯上述花粉变应原.采取随机、对照方法将102例确诊为季节性黄蒿、葎草、藜草花粉过敏性哮喘患者分为观察组(A组)及对照组(B组),应用纯化花粉变应原(PPA)及粗花粉变应原(CPA)分别对两组患者进行季节前SIT,疗程3 mo.临床疗效判断标准为显效、好转及无效.临床不良反应观察包括局部或全身皮疹、哮喘加重等.实验观察指标为两组SIT前后的皮肤试验(ID)风团直径、特异性IgE(sIgE)、A值均值.结果进行组内和组间比较.结果:A组SIT总有效率90%(47/52),B组78%(39/50),前者明显高于后者(P<0.05);A组仅3例轻度副反应,B组有13例(26%)出现副反应;A组及B组SIT后ID风团直径、sIgE, A值均值都较SIT前明显下降(P<0.01);A组SIT后上述指标下降程度较B组更明显(P<0.05).结论:PPA及CPA的SIT疗效均较满意,但用PPA进行SIT的安全性和疗效更好.     

紫杉醇的提取与纯化技术

对紫杉醇的提取与纯化技术包括溶剂萃取法、色谱法、膜分离法、超临界流体萃取法、离子交换树脂法、键合物解离法、化学反应法及药理作用靶点法的研究进展进行了较全面的介绍。     

新疆黄花蒿花粉变应原的分离及纯化

新疆黄花蒿变应原是治疗花粉症重要变应原之一,本文对新疆黄花蒿花粉变应原的分离及纯化方法进行研究。植物花粉是产生季节性变应性疾病的主要原因,通常由花粉引起过敏性鼻炎及哮喘,严重者产生全身过敏性反应,而黄花蒿是我区产生此类过敏性疾病的一种重要致病原。对杨树花粉变应原已进行了分离和纯化,花粉变应原为能诱发IgE免疫反应,并引起Ⅰ型变态反应的抗原性物质,经红外吸收光谱和聚丙烯     

人脑垂体激素的提取与纯化

目的 :从人脑垂体中获得纯化催乳素 ( PRL) ,生长激素 ( GH) ,促卵泡激素 ( FSH) ,促黄体生成激素 ( LH)和促甲状腺激素 ( TSH) ,应用于医学实验研究。方法 :以冷冻人脑垂体为原料经离子交换层析、凝胶过滤和亲和层析等方法可获得达国际标准品水平的激素纯品。结果 :最高放射免疫活性分别可达 PRL36.2 /k IU/g,FSH3333k IU/g,LH1 5842 k IU/g,TSH1 1 .49k IU/g,GH2 .42 k IU/g。结论 :利用此方法提取与纯化人脑垂体激素简便、可行且纯化程度高     

葎草花粉变应原的纯化及免疫特性分析

目的 纯化葎草花粉变应原并分析其免疫学活性.方法 粗制葎草花粉提取液经Sephadex G-75Sephacryl S-200HR层析柱纯化,分段收集各组份.SDS-PAGE检测各组分蛋白相对分子质量,ELISA抑制实验及免疫印迹实验分析各组分蛋白质对特异性IgG和IgE的抑制率及与患者血清的反应率.结果 浓缩粗制葎草花粉提取液经SephadexG-75层析柱纯化,得到两个峰,第一峰富含蛋白质,第二峰含有大量色素,蛋白含量甚微,弃之;收集第一峰及其谷段洗脱液(P液),经Sephacryl S-200HR层析柱纯化,分离出4个组份,即第一峰(P1)、谷段(V)、第二峰(P2)和末段(E).电泳结果显示纯化后的蓓草花粉含20多种蛋白质条带,相对分子质量区带为5.0×103～97.4×103,P1段主要是相对分子质量为43×103～97.4×103的蛋白质,P2段和V段主要是相对分子质量为5.0X103～43×103的蛋白质,E段主要是相对分子质量为5.0×103以下的蛋白质;ELISA抑制实验结果显示P1、V、P2、E对sIgG抑制率分别为68%、70%、95%,5%,对sIgE抑制率分别为25%、64%、71%、11%;免疫印迹实验结果显示P1、V、P2、E与患者血清sIgG的反应率分别为65.63%、78.13%、87.50%、6.25%,与患者血清sIgE的反应率分别为25.00%、71.88%、84.38%、15.63%.结论 葎草花粉舍20多种蛋白质成分,相对分子质量在5×103～43×103之间的蛋白质变应原性和免疫原性均较强,为主要变应原;相对分子质量在43×103～94.7×103的蛋白质免疫原性强而变应原性弱,为次要变应原.     

粉尘螨Der f2变应原的分离纯化及其特征

目的 用粉尘螨（Dermatophagoides farinae）代谢培养基浸液（Dff）分离纯化粉尘螨2类变应原（Der f2）。方法 Sephadex G-100层析、DEAE离子交换层析、PAGE等方法分离纯化Der f2,并对Der f2作SDS-PAGE测定和热稳定性测定。结果 从Dff分离纯化得到较纯Der f2,经SDS-PAGE测定其相对分子质量为14000,并经100℃加热15min后,仍保留50%～83.3%生物学活性。结论 从Dff中分离纯化的变应原,其物化性质符合Der f2特征。     

链霉菌的培养与链霉亲和素的纯化

报道链霉菌的两种合成培养基和一种链霉亲和素（Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，ＳＡ）的纯化方法。在该两种合成培养基中，亲和素链霉菌（Ｓ．ａｕｉｄｉｎｉｉ）均能旺盛生长，获得了Ｓ．ａｕｉｄｉｎｉｉ的典型形态和菌落特征，ＳＡ的收获量也较高。在纯化过程中采用ＤＥＡＥ５２层析柱所得到ＳＡ的最高产量为１５．２μｌ，该纯化方法简单，易于操作和常规使用。     

链霉菌的培养与链霉亲和素的纯化

报道链霉菌的两种合成培养基和一种链霉亲和素的纯化方法，在该两种合成培养基中，亲和素链霉菌均能旺盛生长，获得了Ｓ．ａｖｉｄｉｎｉｉ的典型形态和菌落形征，ＳＡ的收获量也较高。在纯化过程中采用ＤＥＡＥ５２层析柱所得到ＳＡ的最高产量为１５．２μｇ／ｍｌ该纯化方法简单，易于操作和常规使用。     

青霉菌变应原的初步分离,提纯及其活性的探讨

产黄青霉粗提液系由我科实验室制备,经用考马氏亮蓝G250法测定蛋白含量为44～48mg/ml 此粗提液经聚丙烯酰胺凝胶电泳出现3条蛋白带.即P_1、P_2a、P_2b,与标准蛋白比较,分子量约为94 000,43 000及25 000。Sephadex G 200凝胶层析结果呈现两个峰带.经连续收集样品.并按电泳结果分装为3管,即T_1 T_2,T_3,以3管样品对青霉菌致哮喘患者作皮内试验,证实T_2具有最强的生物活性.由于P_2是产黄青霉中T_2的主要部分.从而提出P_2a是产黄青霉中变应原性最强的蛋白成分。     

Ⅱ型胶原微量提取与纯化

Ⅱ型胶原是关节软骨中主要细胞外间质之一,多种风湿性疾病的发生与Ⅱ型胶原异常有关。现已知类风湿关节炎发病与Ⅱ型胶原自身免疫反应有关,用Ⅱ型胶原免疫某些动物可诱导出多关节炎。然而口服Ⅱ型胶原可通过诱导免疫耐受来治疗类风湿关节炎,因此Ⅱ型胶原的提取是研究Ⅱ型胶原的重要步骤。虽然Ⅱ型胶原在人体含量较多,但临床取材可获得的数量有限,为此我们探讨了Ⅱ型胶原的微量提取和纯化方法。1　Ⅱ型胶原的提取与纯化方法　　真空干燥,4℃,获得Ⅱ型胶原(平均每2.5克关节软骨可获Ⅱ型胶原10ｍｇ)2　Ⅱ型胶原鉴定2.1　紫外分光光度计鉴定提取…     

白花蛇舌草多糖的提取与纯化

笔者对白花蛇舌草水溶性部分的成分从有机化学和元素化学两方面进行研究 ,试图为白花蛇舌草的结构和药理研究提供参考。1　材料和方法材料　干燥白花蛇舌草 (广州产 ) ;试剂 (略 ) ;仪器　电子天平 ,真空泵 ,旋转蒸发器 ( RE- 5 2 C型 )、BRUKER IFS66V型红外光谱仪、WPG- 10 0型平面光栅摄谱仪和 GFU- 2 0 2型原子吸收分光光度计。方法　多糖提取　取干燥全草浸泡水中 1.5 h,水煎煮后抽滤提取 ,并收集提取液 3次 ,各次煮 1.5、 1.0、0 .5 h,将 3次提取液合并浓缩 ,并加入乙酸乙酯脱脂 ,取水相液 10 0 ml加 6倍量乙醇 (预冷 ) ,置冰…     

银杏萜内酯提取与纯化技术

银杏萜内酯的独特药理作用引起了国内外学者的关注,其提取纯化成为研究的重要内容.对银杏萜内酯的提取与纯化技术包括溶剂萃取法、柱提取法、溶剂萃取-柱提取法、超临界提取法及色谱或柱层析纯化法进行了介绍.     

小鼠H-2抗原的提取与纯化

为建立一种简易获取较大量纯化小鼠组织相容性抗原（Ｈ－２抗原）的方法，采用去污剂溶解小鼠脾细胞膜，单克隆抗体亲和层析法纯化获取小鼠Ｈ－２抗原。结果：电泳显示纯化物为４５ｋｄ（重链）和１２ｋｄ（轻链）两条带，且该纯化物具有明显的免疫学及生物学活性（效价１６４０）。结论：这种亲和层析法纯化的组织相容性抗原，可用于器官移植研究及组织相容性抗原的免疫功能研究。     

小鼠组织相容性抗原的提取与纯化

用９９＾ｍＴＣ－ＦＤＸ淋巴管显像剂，对雄性Ｆ３４４大鼠睾丸进行显民病理分析，Ｆ３４４大鼠尾静脉注射０．１ｍｌ显像剂，放射强度为１８．５ＭＢｑ，用单光子发射计算机断层仪（ＳＰＥＣＴ）分别观察不同时相睾丸显像情况。然后手术摘除大鼠睾丸，巨检取材作铁－－苏木素染色和ＨＥ染色，与显像情况对比分析。结果有１例大鼠左侧睾丸呈阳性显像病理学观察证实此睾丸有肿瘤，肿瘤类型为间质细胞瘤。铁－苏木素染色显示肿瘤细胞     

银杏花粉的部分纯化和变应原性、免疫原性分析

作者采用层析法对银杏花粉进行部分纯化。将各组分对40例变应性鼻炎或/和哮喘患者进行皮试,结合ELISA抑制试验测试其对特异性IgE和IgG的抑制率,阐明各组分具有不同的变应原活性和免疫原活性。为临床应用提出了初步意见。     

银杏花粉的部分纯化和变应原性,免疫原性分析

Pollens of Ginkgo biloba L. (G.b.l.p) have been found to be a kind of important allergen which causes pollinosis in Chengdu. The goal of this study is to purify G.b.l.p and to determine the allergenicity and immunogenicity of various fractions. Crude extract was purified by gel filtration with Sephadex G25, then G75. Two elution peaks were observed. On SDS-PAGE, the molecular weights of protein of the 1st peak and the valley were 30-42 kd and 13-18kd, respectively, and that of the 2nd peak was less than 13 kd. 40 patients with allergic rhinitis and/or asthma underwent the skin test with crude extract and various fractions of gel filtration; it revealed that the strongest allergenic activity existed in the 1st peak and there was mild allergenic activity in the 2nd peak. The in vitro allergenic activity and immunogenic activity of various fractions were examined by ELISA inhibition test. It was further confirmed that the allergenic activity and immunogenic activity of the 1st peak were the strongest, and those of the 2nd peak were the lowest. It is suggested that diagnosing reagents can be made satisfactorily by partial purification, i.e. discarding the inactive fractions, since allergenicity exists in various fragments. But fractions of allergen with high IgG immunogenicity should be selected to produce immunotherapy agents so as to enhance the production of blocking antibody and thus improve the therapeutic effect.