鬼臼乙叉苷对人鼻咽癌细胞CNE2的细胞毒作用和对DNA的断裂作用

作用噻唑蓝还原(MTT)法测定了鬼臼乙叉苷(鬼臼乙叉甙，VP-16)对人体鼻咽癌细胞CNE2的毒性作用，在药物浓度为2．5，5．0，10．0，20．0，40．0，80．0和160．0ug／ml的条件下，连续4次实验，VP-16对CNE2细胞的生长抑制率分别为3．3±3．7％，15．2±3％，36．1±10％，54±17％，68．4％±13％，76．7士9％和84．2±8％其半数抑制浓度(IC50)为17．0ug／ml。CNE2细胞分别在含有20．0，100．0和200．0ug／ml VP-16的培养液中孵育24h，细胞的DNA发生了断裂。DNA断裂量随药物浓度的增加而增加。将CNE2细胞放入含200．0ug/ml VP-16的培养液中孵育6h，12h和24h，发现备时间点的DNA均发生了断裂。断裂程度随时间的增长而增加，未经药物处理的对照细胞的DNA未见断裂现象。经用50．0，100．0，200．0和400．0ug／ml VP-16处理的CNE2细胞的拓扑异构酶Ⅱ能诱导超螺旋pBR322质粒DNA断裂成线状DNA，断裂程度与药物的浓度相平行。     

维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响

目的 探讨维康醇对DNA拓扑异构酶活性的影响.方法 以质粒pBR322超螺旋DNA为底物,采用凝胶电泳分别检测维康醇对拓扑异构醇Ⅰ (Topo Ⅰ)和拓扑异构醇Ⅱ(TopoⅡ)介导的pBR322 DNA解旋反应的影响.结果 维康醇对TopoⅠ介导的pBR322解旋反应无明显的抑制作用,而对TopoⅡ的活性有明显的抑制作用.结论 维康醇的直接作用靶点可能是DNATopoⅡ,该药可能成为新的TopoⅡ抑制剂.     

鬼臼乙叉甙治疗恶性滋养细胞肿瘤的临床报告

鬼臼乙叉甙(Etoposide,Vp-16)是鬼臼毒素的半合成衍生物,通过使蛋白交联DNA链的断裂而产生抗瘤作用。我院1995年3月至1996年12月使用Vp-16口服软胶囊治疗17例恶性滋养细胞肿瘤患者,现报道如下。 1 材料与方法 本组17例患者中侵蚀性葡萄胎10例(Ⅰ期8例、Ⅲ期2例),绒癌7例(Ⅰ期4例、Ⅲ期3例),治疗以早期患者为主(70.58％),平均年龄28.6岁,     

芦笋提取物对DNA拓扑异构酶Ⅱ活性作用的研究

通过体外ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ介导ＤＮＡ裂解实验观察了芦笋提取物对该酶活性的影响。从小鼠白血病Ｌ１２１０细胞中提取ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ，以ｐＢＲ（３２２）ＤＮＡ为底物，将１μｇＤＮＡ与０．２Ｕ拓扑异构酶Ⅱ温孵，当分别加入芦笋提取物２２０、２２、２．２μｇ／ｍｌ３个终浓度时，裂解能力可提高到原来的５倍，说明该药的直接作用靶点是ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ，而不是直接裂解ＤＮＡ。     

黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞生长的抑制作用

目的 研究黄芩苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞的抑制作用及可能机制。方法 用倒置显微镜观察细胞形态学改变和计数法测定生长曲线;用MTT比色法检测给药后鼻咽癌细胞的增殖抑制情况;采用流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测凋亡。结果 黄芩苷作用后,癌细胞生长延缓并萎缩,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显;黄芩苷对CNE-2Z细胞的增殖和生长有显著的抑制作用并呈明显的时间-剂量依赖关系;流式细胞仪和荧光双染法结果提示黄芩苷可诱导CNE-2Z细胞凋亡。结论 黄芩苷能抑制CNE-2Z细胞的增殖效应,其机制可能与诱导细胞凋亡和引起细胞周期阻滞于G2/M期有关。     

薯蓣皂苷对K562细胞的细胞毒作用及对DNA影响的研究

目的研究薯蓣皂苷的细胞毒作用和对遗传物质DNA损伤效应。方法利用MTT法测定薯蓣皂苷对白血病细胞株(K562细胞)的体外抑制作用,用彗星实验法检测薯蓣皂苷元对K562细胞的DNA损伤。结果薯蓣皂苷对K562细胞的生长有抑制作用,有量效关系。薯蓣皂苷可以导致K562细胞DNA发生断裂,随薯蓣皂苷的浓度梯度增大(1～500μg/ml),细胞的拖尾率、DNA尾部百分率、尾长、尾矩和Olive尾矩增加。结论薯蓣皂苷元对K562细胞的生长具有抑制作用,并会引起DNA断裂,可能会引起细胞DNA损伤,或者诱导细胞凋亡。     

新合成的紫草萘醌类衍生物TEISHNZ的细胞毒作用和诱导人鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨一种新的人工半合成紫草萘醌类衍生物(2,3,11-三乙巯基-6-异己萘茜,简称TE ISHNZ)。在体外对8种人癌细胞的细胞毒作用及诱导人鼻咽癌细胞(CNE2)细胞凋亡的作用。方法应用噻唑蓝(M TT)比色法检测TE ISHNZ对8种人癌细胞的增殖抑制作用,以半数抑制浓度(IC50)为指标进行评价。应用流式细胞术(FCM)检测TE ISHNZ诱导CNE2细胞凋亡的作用及其对细胞周期的影响。结果TE ISHNZ在0.78~25μg/mL质量浓度下,对8种人癌细胞均有明显的增殖抑制作用;对CNE2细胞、人肺腺癌细胞(GLC-82)、人肝癌细胞(B e l-7402)、人白血病细胞(K 562)、人宫颈癌细胞(H eL a)、人胃腺癌细胞(M GC-803)、人乳腺癌细胞(M DA 453)和人口腔癌细胞(KB)的IC50分别为3.96、2.48、5.13、1.92、4.54、5.88、1.35和3.44μg/mL,IC50值均在6μg/mL以下。FCM检测结果显示,以TE ISHNZ(1.56、3.12和6.25μg/mL)处理CNE2细胞48 h后,在FCM的DNA直方图上可见亚二倍体(亚G1峰);细胞凋亡率依次为3.9%、10.8%和28.1%,而对照组的细胞凋亡率为2.2%;TE ISHNZ对CNE2细胞的诱导凋亡作用呈浓度依赖性;细胞周期分析显示CNE2细胞被阻滞于G2/M期。用6.25μg/mL TE ISHNZ处理CNE2细胞12、24、36和48 h后亦可见细胞凋亡,细胞凋亡率分别为4.5%、27.2%、48.2%和24.9%,而对照组的凋亡率为1.0%。CNE2细胞被TE ISHNZ处理的前36 h,其凋亡率随着作用时间的延长而增加,被阻于S和G2/M期;作用48 h时,被阻于G2/M期。结论TE ISHNZ对多种人癌细胞有明显的细胞毒作用,且能诱导CNE2细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于S期和(或)G2/M期。     

丹参提取物对肝癌HepG2细胞DNA去甲基化作用研究

目的 探讨丹参提取物丹参酮ⅡA对肝癌HepG2细胞DNA甲基转移酶1基因(DNMTI)表达的抑制作用.方法 采用MTT法检测丹参酮ⅡA、5-脱氧杂氮胞苷(5-Aza-cdR)对HepG2细胞的增殖抑制作用,根据回归方程求出半数抑制浓度(IC50).以IC50含药量的丹参酮ⅡA处理肝癌HepG2细胞.并以5-Aza-cdR处理作阳性对照,处理72 h后用RT-PCR技术检潮肝癌HepG2细胞DNMT1 mBNA表达水平.结果 经丹参酮ⅡA处理后肝癌HepG2细胞DNMT1 mRNA表达水平明显下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).但5-Aza-cdR组下降更显著,丹参酮ⅡA组与5-Aza-cdR组比较盖异有统计学意义(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA能抑制肝癌HepG2细胞DNTM1 mRNA表达,作用弱于5-Asa-cdR,DNA去甲基化作用可能是丹参酮抗肿瘤作用机制之一.     

粉防己碱对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡作用的研究

目的：探讨粉防己碱（Tet）对人鼻咽癌细胞株CNE增殖抑制和凋亡的影响。方法：将人鼻咽癌细胞株CNE分为不同浓度Tet处理组,并设立对照组。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE体外生长的抑制作用;采用透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术、流式细胞术Annenxin V/PI EGFP观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡的影响;采用逆转录-多聚酶链反应技术（RT-PCR）观察Tet对人鼻咽癌细胞株CNE凋亡相关基因mRNA表达的影响。结果：Tet呈浓度依赖性抑制癌细胞体外生长（P〈0.05）。Tet处理细胞72 h后,电镜下可见细胞缩小,核裂解,凋亡小体形成;随着Tet浓度的提高,各Tet处理组DNA凝胶电泳梯形条带和细胞凋亡率渐趋明显。与对照组相比较,Bcl-2 mRNA的表达渐减弱,Bax基因mRNA表达渐增强（P〈0.05）。结论：Tet可抑制癌细胞生长,促进癌细胞凋亡,其抗癌作用机制可能与下调Bcl-2基因表达和上调Bax基因表达有密切联系。     

小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用

目的观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响,探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法MTT法测定小檗碱对CNE-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测小檗碱对CNE-2细胞凋亡和周期的影响;透射电镜观察CNE-2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化;Westernblotting法检测小檗碱对CNE-2细胞的细胞周期相关蛋白(cyclin)B1、CDK1、cdc25c表达的影响;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)和3H-亮氨酸(3H-Leu)标记前体掺入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响;利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤作用。结果小檗碱能抑制CNE-2细胞生长,48h的半数抑制浓度(IC50)为(49.5±5.8)μmol/L,72h的IC50为(13.3±2.0)μmol/L;小檗碱能抑制CNE-2细胞DNA和蛋白质合成;小檗碱能诱导CNE-2细胞凋亡,细胞经过25.0μmol/L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48.9±10.4)%;50.0μmol/L小檗碱能诱导CNE-2细胞G2/M期阻滞,并且下调细胞周期相关蛋白B1、CDK1、cdc25c表达;小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,30mg/kg剂量组的肿瘤体积中位数为317.9mm3,明显低于对照组(P<0.05)。结论小檗碱体内外均能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与其诱导细胞周期阻滞和凋亡,下调相关细胞周期蛋白有关。     

维生素E琥珀酸酯对人鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡影响的实验研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)在体外对人鼻咽癌CNE2细胞的生长抑制作用.方法:以5,10,20,40 mg/L浓度的VES作用于人鼻咽癌CNE2细胞,使用光镜、透射电镜、MTT法、流式细胞仪观察和检测作用24,48,72 h后细胞形态、增殖、凋亡及细胞周期分布情况.结果:...     

As2O3对人子宫内膜癌细胞HEC-1-B皮下移植瘤抗肿瘤作用

目的 检测不同浓度As2O3对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞裸鼠皮下移植瘤的抗肿瘤作用及对瘤细胞内磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)表达的影响,进一步探讨As2O3的抗肿瘤机制.方法 建立人子宫内膜癌HEC-1-B细胞皮下移植瘤模型,随机分为实验组,即As2O3低剂量(1.0 mg/kg)、中剂量(2.5 mg/kg)、高剂量(5.0 mg/kg)剂量组,生理盐水(NS)组及顺铂组(5 mg/kg),腹腔内注射给药,连续8 d.观察用药前后裸鼠体质量改变.剥取瘤组织,计算药物的抑瘤率.检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规.透射电镜观察细胞变化,流式细胞仪检测细胞凋亡周期和细胞凋亡率,免疫组化法检测p-ERK的表达.结果 不同浓度As2O3和顺铂均有不同程度抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡的作用,其中As2O3低剂量组的抑瘤率为34.3%,p-ERK的表达率为37.5%,该组在亚G1期出现典型的凋亡峰,且As2O3低剂量组与NS组比较,凋亡率、瘤质量差异均有显著意义(F=27.20、33.92,q=9.19、13.34,P<0.05).As2O3低剂量组与顺铂组相比,无明显血液及肝肾毒性.结论 低剂量As2O3组能明显抑制肿瘤细胞HEC-1-B生长,且毒副作用轻,可能与阻滞细胞周期,抑制p-ERK表达有关.     

芦荟大黄素对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用

目的:是研究芦荟大黄素对胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用.方法:空白对照组加培养基、阴性对照组加2‰DMSO、阳性对照组加5-氟尿嘧啶、芦荟大黄素组(终浓度分别为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL);孵育12、24、48h;采用MTT法观察增殖抑制作用.结果:芦荟大黄素在25μg/mL～100μg/mL浓度范围内作用12h,对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖没有明显的抑制作用,作用24h和48h时能起到显著的抑制作用(P《0.05).结论:芦荟大黄素能明显抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖.     

大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910生长的抑制作用

目的：观察大蒜素对卵巢癌细胞株HO8910的抑制作用。方法;用不同时间不同剂量大蒜素作用于HO8910,通过肿瘤细胞药敏试验。观察肿瘤细胞存活率,并通过透射电镜观察一定剂量的大蒜素作用于HO8910一定时间后,肿瘤细胞形态的改变。结果：50-100μg/ml大蒜素可显抑制肿瘤细胞的生长。且在作用2h时即出现显的抑制,随着作用时间的延长,抑制作用愈明显,72h害到高峰,透射电镜结果显示：50μg/ml的大蒜素作用HO891024h。细胞肿胀。细胞膜破碎,胞浆脱落。细胞核裸露;小剂量（25μg/ml)则HO8910呈现细胞凋亡样改变;细胞胞浆呈空泡,染色质边集,核仁固缩,胞质呈片状脱落。结论：大蒜素可显抑制HO8910的生长,且有明显的时间及剂量效应,大剂量的大蒜素对HO8910细胞呈直接杀伤作用。而小剂量则诱导细胞凋亡。     

siRNA对胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子基因表达的作用

目的 研究siRNA对人胃腺癌细胞株SGC-7901血管内皮生长因子（VEGF）基因表达的影响。方法 利用体外合成带有T7启动子的VEGF基因DNA片段,转录针对VE F mRNA的siRNA．通过脂质体2000将合成的siRNA转染入SGC7901细胞,设置转染VEGF错义序列组、脂质体组、空白对照组作为对照．用MTT法检测细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT—PCR检测转染后VEGF mRNA表达水平的变化．ELISA法检测细胞培养液中VEGF蛋白分泌量的变化。结果 所设计的两个靶位点siRNA均能有效抑制胃腺癌细胞的生长,并使细胞周期阻滞于G0／G1期;VEGF mRNA的表达也受到有效抑制,明显减少;同时,对应的VEGF蛋白水平也显著降低,作为阴性对照的错义序列组siRNA则没有出现这种变化。结论 体外转录合成的siRNA可抑制胃腺癌SGC-7901细胞VEGF基因的表达。     

索拉菲尼对人肝癌细胞株HepG2抑制作用的研究

目的:探讨分子靶向药物索拉菲尼(Sorafenib)在体外对人肝癌细胞株HepG2的抑制作用.方法:采用MTT法检测Sorafenib对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率.结果:Sorafenib能明显抑制HepG2细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应;6μmol/L的Sorafenib理HepG2细胞72d,时,HepG2 细胞周期中的S期比例明显升高,G0-G1期、G2-M期比例明显下降,凋亡率明显上升(P<0.05,P<0.01).结论:Sorafenib对体外人肝癌HepG2细胞具有明显的抑制作用,主要表现为抑制其增殖和促进其凋亡.     

重组人生长激素对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期作用的实验研究

目的 :探讨重组人生长激素 (r- h GH )对人乳腺癌细胞株 MCF- 7(MCF- 7)增殖和分化的影响。方法 :以不同浓度 r- h GH分别加入处于对数生长期的 MCF- 7进行体外培养 ,4 8h后用流式细胞仪检测细胞周期的百分比构成变化 ,并与对照组进行比较。结果 :不同浓度的 r- h GH作用于 MCF- 7后 ,其细胞周期的 G0 ～ G1 期、S期、G2 ～ M期的细胞百分比变化 ,差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :r- h GH对 MCF- 7的细胞周期无明显影响 ,既无促进 MCF- 7细胞增殖作用 ,也无抑制 MCF- 7细胞的作用。     

甲孕酮对人卵巢癌3AO细胞C－erb B－2表达和形态学的影响

采用流式细胞和电镜技术，检测了甲孕酮处理前后人卵巢癌３ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达和形态学改变情况。结果表明甲孕酮可使部分３ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达下降；部分３ＡＯ细胞发生形态学改变，提示甲孕酮具有低调部分人卵巢癌３ＡＯ细胞Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达和诱导部分３ＡＯ细胞分化的作用。     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响

目的 研究bcl-2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响.方法 将NCI-H69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用Western-Blot法检测Bcl-2蛋白的表达. 采用直线加速器分别以不同剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)X线照射4组细胞.收集照射后的细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法测定细胞存活分数.结果 Western-Blot杂交显示反义寡核苷酸组无Bcl-2蛋白表达,相对正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组及空白对照组Bcl-2蛋白表达明显受到抑制(F=7.24～15.31,q=5.03～7.80,P＜0.01).细胞经X线照射后,反义寡核苷酸组细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异具有显著性(F=7.24～15.31,q=5.03～7.80,P＜0.01);正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组与空白对照组相比无统计学差异.4组细胞接受辐射后,反义寡核苷酸组在未照射和照射不同剂量后的存活分数均低于空白对照组,差异有统计学意义(F=11.04～45.56,q=5.10～14.75,P＜0.01),而正义寡核苷酸和无义寡核苷酸组与空白对照组比较则无统计学差异.结论 bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增强小细胞肺癌细胞NCI-H69对X线的敏感性.     

EFFECT OF SOMATOSTATIN ON THE CELL CYCLE OF HUMAN GALLBLADDER CANCER CELL

In the last decades, incidence rate of gallblad-der cancer was increasing in China, but the survivorrate was not satisfying even if the radical operationswere performed[1]. Since gallbladder cancer wasnon-sensitive to either chemotherapy or radiothera-py[2,3], many researches had been done to find somenew effective adjuvant approaches to improve the sur-vival of patient who suffered from this malignant dis-ease , especially the patients who lost the chance ofresection.Recent evidences showed t…