流式细胞术联合实时荧光定量聚合酶链反应动态检测急性髓系白血病微小残留病和WT1基因表达水平

目的 探讨流式细胞术（FCM）联合实时荧光定量聚合酶链反应（RQ-PCR）动态检测急性髓系白血病（AML）患者微小残留病（MRD）和WT1基因表达水平的临床意义.方法 采用FCM联合RQ-PCR检测42例AML住院患者（除外M3）化疗前后349份骨髓标本的MRD值及WT1基因表达量.结果 化疗前AML患者的WT1基因表达水平与疗效无关（x2=0.166 3,P＞0.5）,首次诱导化疗后形态学完全缓解（CR）患者34例,其中MRD高水平11例,复发率达63.6 ％（7/11）,低水平23例,复发率21.7％（5/23）,两组之间复发率差异有统计学意义（x2=5.729,P＜ 0.025）.WT1基因高水平表达8例,复发率达87.5 ％（7/8）,低水平26例,复发率23.1％（6/26）,两组之间复发率差异有统计学意义（x2=10.749,P＜0.005）.WT1基因的表达水平在CR后下降（t=4.669,P＜0.001）.CR后WT1与MRD均为低水平表达者的复发率[15.0％（3/20）]明显低于其中有一项为高水平表达者的复发率[64.3％（9/14）],两组之间差异有统计学意义（P＜0.05）.且CR后WT1基因及MRD表达量呈正相关（r=0.835,P＜ 0.001）.结论 FCM联合RQ-PCR动态检测AML患者的MRD及WT1基因的表达水平可以作为AML患者MRD的监测指标,同时提高了MRD检测的阳性率,为临床开展个体化治疗及分层治疗提供一定的实验室依据.     

WT1基因在白血病患者中的表达及临床意义

 目的 探讨WT1基因在白血病患者中的表达及其临床意义。方法 运用RT-PCR方法检测 WT1基因在50例白血病患者中的表达。结果 急性髓细胞白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）WT1表达阳性率分别为77.3 %（17／22）和54.5 %（6／11）。慢性粒细胞白血病（CML）慢性期WT1表达均阴性,急变期55.6 %（5／9）表达阳性。WT1阳性患者化疗缓解率低于阴性患者（分别为31.3 %和69.2 %,P <0.05）。结论 WT1在白血病患者中高表达,可作为临床评估预后、检测微小残留病（MRD）的标志。     

WT1基因 rs16754位点多态性与急性髓系白血病预后关系的 Meta 分析

目的：采用 Meta 分析总结 WT1基因 rs16754位点多态性与急性髓系白血病（AML）预后的关系。方法以英文检索词“WT1”“polymorphism”“Leukemia,Myeloid,Acute”检索 PubMed 数据库,同时以中文检索词“WT1”“多态性”“急性髓系白血病”检索中国知网、万方数据库和中国生物医学文摘数据库,时限截至2015年12月1日。结果共纳入11篇英文文献,样本量共计2789例。 Meta 分析结果显示, WT1基因 rs16754位点多态性与 AML 患者化疗完全缓解情况无相关性（RR＝1.02,95% CI 0.99～1.06, P＝0.20）,与总体生存（OS）（HR＝0.68,95% CI 0.45～1.02,P＝0.06）、5年 OS（RR＝1.10,95% CI 0.90～1.34,P＝0.37）及无复发生存期（RFS）（HR＝0.80,95% CI 0.54～1.19,P＝0.27）也无相关性。结论 WT1基因 rs16754位点多态性与 AML 预后各指标无相关性。     

WT1基因与急性髓系白血病的预后及主动特异性免疫治疗的研究进展

WT1基因位于人类染色体11p13，在80%的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia，AML）患者中高表达，是AML预后不良的分子标志，可作为AML预后评估和微小残留病变（minimal residual disease，MRD）监测的有效指标。由于WT1在AML中均有异常高表达，故认为是一种AML抗原，可作为特异性免疫治疗的新靶点。一些小规模的临床试验证实以WT1为靶点的免疫治疗是有效的、安全的，这些免疫治疗可作为那些有高危复发风险及初始标准化疗失败的AML患者的辅助治疗。本文就近几年WT1与AML的预后及有关以WT1为靶点的主动特异性免疫治疗的研究进展予以综述。     

血浆miR-193a-5p在急性髓系白血病诊疗评估中的价值

目的：探讨血浆miR-193a-5p在急性髓系白血病（AML）诊断和病程监测中的价值。方法选取2015年7月至11月山西医科大学第二医院血液科住院的AML患者,其中初发患者30例,完全缓解（CR）患者9例,复发患者6例,按简单随机抽样方法随机选取15名健康人作为健康对照。收集患者和健康人EDTA抗凝的外周血标本,分离血浆,提取RNA,应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测血浆miR-193a-5p的表达水平。结果 AML患者组血浆miR-193a-5p相对表达水平[0.4656（0.1031～5.0002）]低于健康对照组[0.7661（0.0521～3.1344）]（U＝122,P＝0.0187）。AML初发组和复发组患者血浆miR-193a-5p表达水平比CR组和健康对照组低（均P＜0.05）,CR组和健康对照组之间表达水平差异无统计学意义（U＝56,P＝0.5119）。AML患者血浆miR-193a-5p表达水平与患者年龄、性别、骨髓原始细胞比例、外周血白细胞计数、血小板计数、CD34+细胞比例等均无相关性（均P＞0.05）。结论血浆miR-193a-5p在AML患者中表达水平降低,可作为AML诊断及疗效评估的新型无创指标。     

硫氧还蛋白还原酶在髓系白血病中的表达及其意义

 目的　探讨硫氧还蛋白还原酶（TrxR）mRNA和蛋白表达与髓系白血病的关系。方法　收集急性髓系白血病（AML）组20例及慢性髓系白血病（CML）组20例骨髓标本,并选取20名健康人骨髓作为健康对照组,选取人类非小细胞肺癌A549细胞作为阳性对照组。应用实时荧光定量PCR法检测TrxR的mRNA表达,应用Western blot法检测TrxR的蛋白表达水平。结果　AML组、CML组、阳性对照组和健康对照组中TrxR mRNA相对定量表达[中位数（四分位距）]分别为6.751（13.459）、4.321（11.389）、18.477（2.089）、1.045（0.467）;AML患者初发／复发组与完全缓解（CR）组分别为17.814±3.979、4.860±1.550;CML患者初发组与治疗组分别为19.552（5.758）、3.459（2.047）。AML组、CML组、阳性对照组较健康对照组TrxR mRNA的表达水平升高（H＝43.978,P＜0.001）;AML患者初发／复发组、CR组、阳性对照组较健康对照组TrxR mRNA表达水平升高（F＝246.793,P＜0.001）,初发／复发组与阳性对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）,初发／复发组较CR组、CR组较健康对照组TrxR mRNA表达均升高（均P＜0.05）;CML患者初发组、治疗组、阳性对照组较健康对照组TrxR mRNA表达升高（H＝38.222,P＜0.001）,初发组与阳性对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）,但初发组较治疗组、治疗组较健康对照组TrxR表达均增高（均P＜0.05）;AML患者初发／复发组与CML患者初发组TrxR表达差异无统计学意义（P＞0.05）。AML组、CML组、阳性对照组和健康对照组中TrxR的蛋白表达量分别为0.679、0.606、0.877和0.095。结论　TrxR在髓系白血病患者中基因和蛋白表达水平均上调,正常造血干细胞中低表达的TrxR在髓系白血病中高表达,治疗后TrxR表达降低,其可作为髓系白血病诊断、疗效及预后判断的指标之一。     

WT1基因水平监测对造血干细胞移植后正常核型急性髓系白血病患者预后的意义

目的探讨WT1基因水平监测对造血干细胞移植(HSCT)后正常核型急性髓系白血病(AML)患者预后的意义。方法回顾性分析2009年7月至2017年3月于苏州大学附属第一医院接受HSCT的115例正常核型AML患者临床资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)动态检测骨髓WT1基因表达水平。根据患者移植前WT1基因相对表达水平中位数,将115例患者分为两组(<中位数组和≥中位数组)进行生存分析。结果115例患者男性52例,女性63例,年龄(39±10)岁。初诊时中位白细胞计数20.45×10^9/L[(0.5~355.9)×10^9/L],骨髓中原幼细胞比例为0.60±0.28,WT1基因中位相对表达水平为87×10^4。中位随访时间24个月(3~79个月)。115例患者中19例患者复发,对缓解组(96例)及复发组分别进行随访,在移植后1、3、6、12个月进行骨髓穿刺监测WT1基因水平,发现复发组的WT1基因相对表达水平高于缓解组,其中移植后6个月[缓解组(187±50)×10^4,复发组(871±211)×10^4,t=2.519,P=0.014]、12个月[缓解组(51±9)×10^4,复发组(1 797±312)×10^4,t=4.000,P<0.05]的WT1基因相对表达水平差异有统计学意义。WT1基因相对表达水平<87×10^4组2年总生存(OS)率、无进展生存(PFS)率均高于WT1相对表达水平≥87×10^4组,复发率低于WT1相对表达水平≥87×10^4组,两组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。多因素分析显示,患者移植后12个月的WT1基因水平是影响OS(HR=4.12,P=0.046)及PFS(HR=5.95,P=0.001)的独立因素。19例复发患者中位复发时间11个月(1~60个月)。复发患者在WT1基因相对表达水平明显增高时均首先减停免疫抑制剂,其中6例患者对干预无效,余13例患者中仅5例对干预有效。结论正常核型AML患者移植前的WT1基因表达水平与预后呈负相关。移植后12个月的WT1基因表达水平是影响患者生存的独立因素。复发患者的WT1基因表达水平较高,可对复发患者进行临床干预,较为有效。     

乙酰肝素酶Arg307Lys多态性与成年人急性白血病发病风险的关系

 目的　探讨乙酰肝素酶（HPSE）Arg307Lys 多态性与成年人急性白血病发病风险的关系。方法　按照1∶1配对病例对照研究方法,选择中国北方地区100例急性髓系白血病（AML）和25例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者为病例组,100名中国北方地区健康人为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测观察对象外周血HPSE Arg307Lys基因多态性。结果　成年ALL病例组和对照组Lys／Lys、Arg／Lys、Arg／Arg基因型分布频率分别为80 %、16 %、4 %和75 %、23 %、2 %,两组比较差异无统计学意义（χ2＝0.07,P＝0.79;χ2＝0.08,P＝0.78）。AML病例组Lys／Lys、Arg／Lys、Arg／Arg基因型频率分别为85 %、14 %、1 %,与对照组比较差异无统计学意义（χ2＝3.03,P＝0.08;χ2＝3.15,P＝0.08）。携带HPSE Arg307Lys突变基因（AA／AA+AG）的个体不增加AML及ALL的发病风险（AML：χ2＝3.13,P＝0.07,OR＝1.89,95 %CI 0.93～3.83;ALL：χ2＝0.27,P＝0.60,OR＝1.33,95 %CI 0.45～3.90）。结论　HPSE Arg307Lys与中国北方地区急性白血病的发生可能无关。     

WT1基因在急性白血病中的表达及其临床意义

 【摘要】　目的　探讨急性白血病（AL）患者体内WT1基因的表达情况及其临床意义。方法　采用荧光定量聚合酶链反应对急性髓系、淋巴细胞白血病66例患者WT1基因进行检测,并比较髓系各亚型之间的基因表达量差异,观察基因表达水平与病程及预后之间的相关性,同时分析造血干细胞移植患者的病程与WT1基因表达之间的关系。结果　66例患者中,87.5 %（14／16）的急性淋巴细胞白血病及76.0 %（38／50）的急性髓系白血病患者WT1基因表达阳性;髓系各亚型中,M3的表达水平低于其他各亚型（与M1、M2、M4、M5相比,P值分别为0.040、0.007、0.006、0.010）。WT1基因的表达水平与疾病状态密切相关,完全缓解组表达水平明显低于未缓解组（P＝0.018）及复发组（P＝0.003）,其滴度的再次升高可提前1.5个月预测复发。WT1基因与造血干细胞移植患者的预后相关,WT1基因转阴的患者较持续表达及一度下降后再次上升的患者预后好。结论　WT1基因在AL患者中的表达可代表微小残留病灶,急性髓系白血病各亚型中M3表达水平相对较低,WT1表达水平与临床病程及预后密切相关。     

伴NPM1基因突变的成年人急性髓系白血病临床研究

 目的　探讨我国成年伴NPM1基因突变的急性髓系白血病患者（NPMc+AML）的临床特点,初步探讨定期定性检测该突变在早期判断AML复发中的意义。方法　采用聚合酶链反应（PCR）-毛细管电泳法对95例成年初治AML患者检测NPMl突变情况,并选取其中5例完全缓解患者定期检测该突变。结果　95例成年AML患者NPM1突变发生率为29.5 %（28／95）; ≥40岁患者突变发生率[40.0 %（22／55）]明显高于＜40岁患者[15.0 %（6／40）]（χ2＝6.963,P＝0.012）;正常核型AML患者突变发生率[51.1 %（24／47）]明显高于异常核型患者[8.3 %（4／48）]（χ2＝20.860,P＝0.000）。AML患者发生NPM1突变以M5[72.7 %（16／22）]、M2[36.3 %（8／22）]常见,在具有重现性染色体异常的AML中,未发现该突变。NPMc+AML患者白细胞、血小板计数及乳酸脱氢酶水平均明显高于NPMc-AML组（t值分别为4.132、4.603、4.069,均P＜0.05）。NPMc+AML患者完全缓解率、无复发生存率及总生存率均明显高于NPMc-AML患者（χ2值分别为10.448、4.146、4.384,均P＜0.05）。定期检测的患者血液学复发前1.5～2.0个月重新出现NPM1基因突变。结论　NPM1基因突变在成年AML患者中,尤其是正常核型AML患者中有较高的发生率,临床表现为患者年龄偏大,白细胞计数、血小板计数、乳酸脱氢酶均较高,NPM1基因突变是成年AML患者预后良好的指标。定期定性监测该突变可早期判断AML复发。     

Wilms' tumor gene 1 (WT1) expression in childhood acute lymphoblastic leukemia: a wide range of WT1 expression levels, its impact on prognosis and minimal residual disease monitoring.

Wilms' tumor gene 1 (WT1) is overexpressed in the majority (70-90%) of acute leukemias and has been identified as an independent adverse prognostic factor, a convenient minimal residual disease (MRD) marker and potential therapeutic target in acute leukemia. We examined WT1 expression patterns in childhood acute lymphoblastic leukemia (ALL), where its clinical implication remains unclear. Using a real-time quantitative PCR designed according to Europe Against Cancer Program recommendations, we evaluated WT1 expression in 125 consecutively enrolled patients with childhood ALL (106 BCP-ALL, 19 T-ALL) and compared it with physiologic WT1 expression in normal and regenerating bone marrow (BM). In childhood B-cell precursor (BCP)-ALL, we detected a wide range of WT1 levels (5 logs) with a median WT1 expression close to that of normal BM. WT1 expression in childhood T-ALL was significantly higher than in BCP-ALL (P<0.001). Patients with MLL-AF4 translocation showed high WT1 overexpression (P<0.01) compared to patients with other or no chromosomal aberrations. Older children (> or =10 years) expressed higher WT1 levels than children under 10 years of age (P<0.001), while there was no difference in WT1 expression in patients with peripheral blood leukocyte count (WBC) > or =50 x 10(9)/l and lower. Analysis of relapsed cases (14/125) indicated that an abnormal increase or decrease in WT1 expression was associated with a significantly increased risk of relapse (P=0.0006), and this prognostic impact of WT1 was independent of other main risk factors (P=0.0012). In summary, our study suggests that WT1 expression in childhood ALL is very variable and much lower than in AML or adult ALL. WT1, thus, will not be a useful marker for MRD detection in childhood ALL, however, it does represent a potential independent risk factor in childhood ALL. Interestingly, a proportion of childhood ALL patients express WT1 at levels below the normal physiological BM WT1 expression, and this reduced WT1 expression appears to be associated with a higher risk of relapse.     

白血病患者WT1基因表达及其临床意义

本文探讨ＷＴ１基因在各种白血病中的表达及其临床意义。应用逆转录酶链反应法测定Ｋ５６２细胞株,２３例白血患者,其中ＡＭＬ１２例,ＡＬＬ３例,ＣＭＬ７例,ＣＬＬ１例;２例恶性淋巴瘤患者骨髓或外周血及１０例正常人外周血ＷＴ１基因表达。     

Prognostic impact of RT-PCR-based quantification of WT1 gene expression during MRD monitoring of acute myeloid leukemia.

In search for general PCR targets for minimal residual disease (MRD) studies in acute myeloid leukemia (AML), Wilms' tumor gene 1 (WT1) expression was assessed by real-time RT-PCR relative to the control gene ABL in 569 archived samples of AML patients (pts). Pts were analyzed at diagnosis (n=116) and during follow-up (n=105, median 4 times, range 2--17). Median follow-up time was 258 days (range 16--1578 days). In 66 pts, the WT1 expression was analyzed in comparison to a second PCR marker or to multiparameter flow cytometry. Quantitative WT1 levels correlated to the clinical course or a second marker in 83-96% of the cases. Prognostic significance of WT1 levels was analyzed at diagnosis and three intervals: (1) days 16--60, (2) days 61--120, and (3) days 121--180 after start of chemotherapy. Higher levels of WT1 expression were associated with shorter overall survival (OS) and event-free survival (EFS) within intervals 2 and 3 but not at diagnosis or interval 1. In addition, within these intervals, WT1/ABL levels 相似文献   

TEL/AML1 positivity in childhood ALL: average or better prognosis? Czech Paediatric Haematology Working Group.

The presence of TEL/AML1 fusion gene in childhood acute lymphoblastic leukaemia (ALL) defines a subgroup of patients with better than average outcome. However, the prognostic significance of this aberration has recently been disputed by the Berlin-Frankfurt-Münster (BFM) study group due to its relatively high incidence found in relapsed patients (19.6% and 21.9%, in two cohorts). In contrast, only four out of 45 (8.9%) unselected relapsed patients (all of whom had been treated according to BFM protocols) in the Czech Republic carry this fusion. From March 1995 to June 1998, 41 out of 190 (21.6%) newly diagnosed children with ALL were TEL/AML1-positive. There is a statistically significant difference between the incidence of TEL/AML1 fusion at diagnosis and at relapse within our group (P = 0.035). Interim analysis of the minimal residual disease (MRD) detection shows heterogeneity within the group of newly diagnosed TEL/AML1-positive leukaemias--10 out of 24 patients tested at the end of induction therapy had detectable levels of MRD. However, only one of these patients reached relapse-predictive level (10(-3)) of MRD. In conclusion, we corroborate low frequency of TEL/AML1 positivity among relapsed patients with ALL among Czech children who are treated by the BFM protocols. Moreover, we demonstrate different patterns of bone marrow clean-up in TEL/AML1-positive patients.