Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的:探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法:将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-PTEN)感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术(FCM)检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果:Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论:重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用

目的探讨康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法胃癌细胞SGC-7901接受不同浓度康艾注射液,然后采用MTT法测定各组胃癌细胞SGC-7901的增殖情况,Boyden chamber侵袭小室测定各组胃癌细胞SGC-7901侵袭能力,划痕实验测定各组胃癌细胞SGC-7901迁移能力。结果康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制与药物浓度有关(P<0.05),浓度越大,抑制能力越强;康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901侵袭、迁移的抑制与药物浓度有关(P<0.05),浓度越大,抑制能力越强。结论康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭、迁移均有抑制作用,且具有剂量依赖性。     

腺病毒介导的ING4联合化疗药物增强对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用

目的:探讨腺病毒介导的ING4基因(Ad-ING4)与化疗药物联合应用增强对胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制效果.方法:用Ad-ING4感染胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR法检测ING4基因在胃癌细胞中的转录,用Ad-ING4分别联合化疗药物氟尿嘧啶(fluorouracil 5-FU)和顺铂(cisplatin DDP)处理培养的胃癌细胞株SGC-7901,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率.结果:Ad-ING4感染SGC-7901细胞后,RT-PCR结果提示有目的基因的转录.MTT 结果显示,100 MOI Ad-ING4与25μg /ml 5-FU联合应用后120小时,SGC-7901细胞增殖抑制率达(94±0.50)%,显著高于单用Ad-ING4组的(65.05±2.03)%和 5-FU组的(62.54±0.73)%(均P<0.05); 100 MOI Ad-ING4与6.25μg /ml DDP联合应用后120小时,SGC-7901细胞增殖抑制率达(97.54±0.54)%,显著高于单用Ad-ING4组的(65.05±2.03)%和DDP组的(55.14±1.21)%(均 P<0.05).流式细胞术检测结果显示,Ad-ING4与5-FU或DDP联合应用明显导致细胞S期减少、G2/M期阻滞;Ad-ING4联合5-FU组细胞凋亡率为(16.2±1.18) %,显著高于单用Ad-ING4组的(8.17±0.85)% 和5-FU组的(7.4±0.89) %(均 P<0.05);Ad-ING4联合DDP组细胞凋亡率为(14.17±1.77)%,显著高于单用Ad-ING4组的(8.17±0.85)%和DDP组的(5.93±0.87)% (均P<0.05).结论:Ad-ING4与5-FU或DDP联合应用能显著提高对胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用.     

野生型p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用

目的　探讨p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用 ,为胃癌发生的分子基础和基因治疗提供理论依据。方法　采用亚克隆技术将p16克隆入真核表达载体pCI中 ,用Lipofectamine ,将p16基因转染入胃癌细胞株 ,观察p16基因的表达对胃癌细胞株生长的影响。结果　p16基因克隆入真核表达载体 ,转染胃癌细胞后 ,可抑制胃癌细胞的生长。经Dotblot和Westernblot杂交证实 ,在mRNA和蛋白质水平均有外源性p16基因的表达。结论　野生型p16基因导入p16基因功能缺失的细胞 ,能恢复其抑制癌细胞生长的功能。     

野生型p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用

目的 探讨p16基因对胃癌细胞生长的抑制作用。为胃癌发生的分子基础和基因治疗提供理论依据。方法 采用亚克隆技术将p16克隆入真核表达载体pCI中，用Lipofectamine，将p16基因转染入胃癌细胞株，观察p16基因的表达对胃癌细胞株生长的影响。结果 p16基因克隆入真核表达载体。转染胃癌细胞后，可抑制胃癌细胞的生长。经Dot blot和Westernblot杂交证实。在mRNA和蛋白质水平均有外源性p16基因的表达。结论 野生型p16基因导入p16基因功能缺失的细胞，能恢复其抑制癌细胞生长的功能。     

siRNA靶向沉默hyrdC基因对胃癌细胞SGC-7901生长作用的研究

目的:观察RNA干扰靶向沉默hyrdC基因对胃癌SGC-7901细胞生长的影响.方法:将已成功构建的携带hyrdC基因以及沉默hyrdC基因的重组腺病毒Ad-hyrdC、Ad-shyrdC分别转染胃癌SGC-7901细胞,台盼蓝细胞计数和MTT法观察各组胃癌细胞生长情况,将胃癌细胞接种裸鼠皮下构建裸鼠荷瘤模型观察各组胃癌瘤体的生长情况.结果:Ad-shyrdC组细胞生长明显慢于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,差异有统计学意义,P=0.02;Ad-shyrdC组细胞的MTT值明显低于Ad-hyrdC、Ad-null和正常对照组,P=0.03;Ad-shyrdC组胃癌瘤体生长率较Ad-hyrdC、Ad-null组以及正常对照组明显减慢,P=0.02.结论:hyrdC基因具有促进胃癌细胞生长的功能,而沉默hyrdC基因可抑制胃癌细胞的生长,hyrdC基因有望成为胃癌基因治疗领域的新靶点.     

Ad-PTEN增强LY294002对人胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用

目的在体外实验中,利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad—PTEN）和P13K的小分子抑制剂LY294002联合抑制P13K／AKT信号通路,观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制。方法15251细胞按处理方式不同分为4组：DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组（LY294002＋Ad—PTEN组）。在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad—PTEN病毒后,提取总蛋白,用Westernblotting检测PTEN表达状态及P13K、AKT表达情况;用MTT法检测Ad—PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinV法检测细胞凋亡,观察导人LY294002和转染Ad—PTEN后U251增殖能力的改变;用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad—PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响;Westernblotting检测P13K／AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化。结果Westernblotting显示：与DMSO组和空载病毒组相比,LY294002组P13K、AKT蛋白表达水平明显降低,联合组（LY294002＋Ad—PTEN）的WEN蛋白明显上调,而P13K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著。联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0／G1期;联合组凋亡率比其他三组明显增加;自培养第2天起,联合组细胞增殖速率呈下降趋势。联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组。Westernblotting结果证明位于P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平显著下调。结论小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中P13K、AKT蛋白的表达,联合转染Ad—PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平,对P13K、AKT的抑制更为显著。在体外实验中,联合Ad—PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力,并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力,两者联合使用具有正向协同作用。联合Ad—PTEN和LY294002对U251的生长与侵袭的抑制作用与P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平下调有关。联合腺病毒转染技术和小分子抑制剂调控P13K／AKT信号通路是治疗胶质瘤的新途径。     

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的　观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法　采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果　显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。     

腺病毒介导的p53基因对喉癌细胞生长的抑制作用

目的探索ｐ５３基因在喉癌基因治疗方面的可行性。方法以人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２为实验对象,将载有人野生型ｐ５３ｃＤＮＡ并含巨细胞病毒（ＣＭＶ）启动子的重组腺病毒（Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３）感染Ｈｅｐ－２细胞及肿瘤组织,体内外实验观察Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３对Ｈｅｐ－２细胞生长的影响。结果当Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３在１００ＭＯＩ效靶比时,全部Ｈｅｐ－２细胞得到转染。感染２天后ｐ５３蛋白表达达到高峰,Ｈｅｐ－２生长受到明显的抑制。Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３感染Ｈｅｐ－２细胞在裸鼠中失去致瘤性。瘤内注射Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３后,荷瘤裸鼠的肿瘤体积明显减小。结论Ａｄ５ＣＭＶ－ｐ５３转导野生型ｐ５３基因可能是一种有效的喉癌基因治疗途径。     

体外扩增CIK细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901

目的：观察CIK细胞增殖情况,了解扩增后的最佳应用时机,并观察体外对SGC-7901的杀伤作用。方法：健康人外周血单核细胞（PBMC）在体外条件下经过多种细胞因子的共同刺激诱导成CIK细胞,计数培养不同时间的CIK细胞,用流式细胞术检测CIK细胞的表型特征。用MTT法检测杀伤活性,对比CIK细胞与5-FU对SGC-7901的杀伤作用,并观察了两者联合应用的效果。结果：CIK细胞随体外培养时间的延长,数量及杀伤活性均增加。体外培养20d增殖124倍,CD3^＋、CD56^＋双阳性细胞的比例达66．1％,其后两者数量增长缓慢;体外实验显示CIK细胞对胃癌SGC-7901细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤效率为73．13％,其杀伤作用优于5-FU,P〈0．05。二者联合应用杀伤作用降低。结论：CIK细胞具有较强的抗胃癌细胞活性;体外培养15～20d时应用较为合适;联合应用时5-FU可降低CIK细胞的杀伤效率。     

胃癌中PTEN突变在其蛋白异常表达中的作用

背景与目的：胃癌组织中PTEN蛋白表达缺失率较高，本文旨在探讨胃癌组织中PTEN基因突变在其蛋白异常表达中的作用。方法：应用PCR—SSCP—DNA测序和免疫组织化学技术检测53例胃癌组织中PTEN基因突变及其蛋白表达水平的改变。结果：53例胃癌组织中共检测到5例PTEN基因突变，突变率仅为9．4％，低于PTEN蛋白表达缺失率（34．0％）。此5例突变阳性胃癌组织中的PTEN蛋白表达情况为4例阴性、1例弱阳性。结论：基因突变是胃癌组织中PTEN蛋白异常表达的原因之一，突变以外的其他异常改变可能在这一过程中发挥了更为重要的作用。     

胃癌组织中Survivin、PTEN的表达及其临床相关性

目的：探讨胃癌组织中Survivin、PTEN的表达及其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组化（Elivision^TM plus法）检测35例胃癌及12例浅表性胃炎组织中Survivin、PTEN的表达。结果：胃癌组织中Survivin阳性率为77．1％（27／35）,显著高于浅表性胃炎组16．7％（2／12）（P〈n01）;PTEN阳性率为34．3％（12／35）,显著低于浅表性胃炎组91．7％（11／12）（P〈0．01）;Survivin表达与组织分化程度、TNM分期密切相关（P〈0．01）;PTEN表达水平与组织分化程度、TNM分期密切相关（P〈0．01）。Survivin和PTEN二者表达呈显著负相关（P〈0．01）。结论：Survivin在胃癌中高表达,与组织分化程度、TNM分期呈正相关;PTEN在胃癌中表达下调,与组织分化程度、TNM分期呈负相关。联合检测Survivin和PTEN有助于判断胃癌预后,可能是临床评价胃癌恶性程度的重要指标。     

PTEN基因甲基化与胃癌临床病理特征的关系

目的研究胃癌组织中抑癌基因第10号染色体缺失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）表达异常与胃癌临床病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR方法（MSP）检测45例胃癌及癌旁正常组织PTEN甲基化的表达情况。结果40．0％（18／45）的胃癌组织和2．2％（1／45）的癌旁正常组织PTEN基因发生甲基化,胃癌组织甲基化率显著增高（P〈0．05）;低分化腺癌甲基化率为60．0％（15／25）,高中分化腺癌甲基化率为15．0％（3／20）,二者差异具有统计学意义（P〈0．05）;发生淋巴结转移的24例胃癌组织中,13例PTEN基因发生甲基化,发生淋巴结转移的胃癌组织PTEN甲基化率明显高于无淋巴结转移胃癌组织（P〈0．05）。结论PTEN基因甲基化与胃癌的发生密切相关,PTEN基因甲基化在胃癌的发病过程中起重要作用。     

胃息肉中PTEN基因编码产物的变化

目的：探讨胃息肉和胃腺癌中抑癌基因PTEN编码产物的变化。方法：选取中国医科大学附属一院内镜中心活检标本和肿瘤外科术后大体标本,其中炎性息肉、增生性息肉、腺瘤型息肉、胃腺癌,每组60例,SP免疫组化检测PTEN基因编码产物的表达。结果：PTEN蛋白质表达在正常胃黏膜为100%,在炎性息肉、增生性息肉、腺瘤型息肉PTEN蛋白质的表达分别为98.3%,91.6%,78.3%;在胃腺癌中PTEN蛋白质的表达为61.6%。炎性息肉、增生性息肉和腺瘤型息肉之间差异有统计学意义（P〈0.05）,腺瘤型息肉与胃腺癌之间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：在炎症性息肉、增生性和腺瘤型息肉以及胃腺癌中,PTEN蛋白呈下调性表达。     

PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的 通过增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与PTEN融合蛋白真核表达载体的构建和表达,观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响。方法 （1）以RT—PCR方法扩增人的PTEN基因,经T—A亚克隆筛选后连入真核表达载体pEGFP—N1,构建融合蛋白表达载体。采用阳离子聚合物转染试剂,将重组质粒DNA瞬时转染至SHG-44细胞,检测融合蛋白的表达。（2）G418筛选出稳定转染的细胞（SHG-44-Z）,并扩增培养,通过细胞形态学、生长曲线观察PTEN基因对细胞形态和增殖的影响,免疫组织化学法检测对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。结果 （1）重组质粒阳性克隆的测序结果与GenBank报告序列一致。瞬时转染的SHG-44细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光,流式细胞仪可检测到荧光表达量为17．8％,免疫细胞化学法检测到外源PTEN蛋白表达。证实pEGFP—PTEN融合蛋白表达载体构建成功,并在胶质瘤细胞得以正确表达。（2）转染组SHG-44-Z细胞株的生长增殖受到明显抑制,第7天细胞计数为未转染组细胞数的27．8％,且GFAP表达上调。结论携带绿色荧光蛋白的PTEN基因真核表达载体的构建,为进一步研究PTEN的作用机理及抑癌效应奠定了基础。     

PTEN 表达与胃癌预后因素分析

目的：探讨胃癌组织中PTEN（张力蛋白和辅助蛋白同源、第10号染色体丢失的磷酸酶基因）和MMP-2（基质金属蛋白酶-2）蛋白表达与患者预后的关系。方法：用免疫组织化学S—P法检测64例胃癌组织PTEN和MMP-2蛋白表达，并对随访的33例胃癌患者进行单因素及多因素生存分析，选用Cox比例风险模型进行多因素生存分析。结果：PTEN蛋白在胃癌组织表达缺失率为21．98％，其表达缺失与淋巴结转移正相关，与患者生存期负相关（P〈0．05），Cox回归多因素生存分析显示PTEN蛋白表达缺失的患者生存的相对危险度是PTEN表达阳性的0．273倍（P〈0．05）；MMP-2蛋白在胃癌组织表达阳性率为68．75％，其高表达与癌细胞浸润深度、淋巴结转移呈正相关，与生存期呈负相关（P〈0．05）。另外，根治手术与患者的生存期呈正相关（P〈0．05），非根治术患者生存的相对危险度是根治术患者的1．104倍（P〈0．05）。结论：PTEN蛋白可作为胃癌患者预后的独立预测因子，PTEN蛋白表达缺失的胃癌患者预后不良。     

人NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞恶性表型的逆转作用

目的:探讨NHE1反义基因转染对SGC-7901胃癌细胞恶性表型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法:将构建好的人NHE1反义基因真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中,观察NHE1反义基因转染后SGC-7901胃癌细胞的细胞形态学、NHE1蛋白表达、体外生长增殖特性、双层软琼脂集落形成能力的变化。结果:NHE1反义基因转染的SGC-7901胃癌细胞形态恶性程度降低,NHE1蛋白表达明显减少,双层软琼脂集落形成能力、体外生长增殖能力降低,接触抑制恢复,细胞凋亡率增加。结论:NHE1反义基因转染能使SGC-7901胃癌细胞的NHE1蛋白表达明显下调并逆转其恶性表型,提示NHE1基因可成为肿瘤治疗的新靶点,具有一定的临床应用前景。