白头翁联合恩度体外抗血管生成作用

目的:探讨白头翁醇提物联合恩度体外对血管内皮细胞增殖、迁移、小管形成的作用。方法:以人结肠癌Lovo细胞为对照,采用MTT法观察中药白头翁联合恩度对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外增殖的影响;利用transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察中药白头翁联合恩度对HUVEC体外迁移、成血管能力的影响。结果:白头翁醇提物2-8μg/ml在体外具有抑制HUVEC增殖的作用,联合恩度10μg/ml时具有协同作用(细胞存活率在37.6%-22.5%),与浓度呈负相关(r=-0.850,P=0.032),此浓度范围内对人结肠癌Lovo细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制,具有明显差异细胞毒作用(P=0.000)。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用12h后具有抑制HUVEC迁移的作用,与浓度呈负相关(r=-0.919,P=0.000)。白头翁醇提物2-8μg/ml联合恩度10μg/ml作用24h后内皮细胞小管数目减少,不能相互连接成网状结构,而且管腔不完整,与对照组相比有显著性差异,与浓度呈负相关(r=-0.908,P=0.000)。结论:小剂量白头翁在体外具有抑制血管生成作用,联合恩度具有协同效应。     

白头翁醇提物抑制血管生成的体外实验研究

目的 探讨白头翁醇提物对体外血管生成的抑制作用及其可能机制。方法 采用MTT法观察白头翁醇提物对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和人肠癌LoVo细胞增殖的影响;通过Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验观察白头翁醇提物对HUVEC迁移、形成血管能力的影响;采用流式细胞仪检测白头翁醇提物对HUVEC的凋亡率及细胞周期的影响。结果 2～8μg／ml的白头翁醇提物作用48h对HUVEC的增殖抑制率为21.6％～72.0％,对LoVo细胞的增殖抑制率为13.2％～22.9％;体外小管形成实验发现,2～8μg／ml白头翁醇提物作用24h,HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0001）。经2～8μg／ml白头翁醇提物处理12h,HUVEC迁移数明显少于对照组（P＜0001）。2、4、8μg／ml白头翁醇提物作用于HUVEC细胞48h后,其凋亡率分别为952％、1864％和2007％,对照组为6.25％。8μg／ml白头翁醇提物作用于HUVEC细胞24h后,细胞周期停滞在G2／M期。结论 白头翁醇提物在体外能有效抑制血管生成,其机制可能与抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,抑制HUVEC有丝分裂有关。     

中药独活及其单体蛇床子素体外抗血管生成的实验研究

目的：探讨独活醇提物及其单体蛇床子素对体外血管生成的抑制作用及其可能的机制.方法：采用MTT法观察中药独活醇提物及蛇床子素对人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell.HUVEC）和人肠癌LoVo细胞增殖的影响,Transwell小室趋化实验、体外小管形成实验以及流式细胞术,观察并比较独活醇提物及蛇床子素对HUVEC迁移、小管形成、凋亡及周期的影响.结果：3.75-30μg/ml的独活醇提物及蛇床子素作用48h时对HUVEC的细胞增殖抑制率分别在5.16％-10.15％和22.64％-65.56％之间,对LoVo细胞增殖抑制率分别在2.86％-7.29％和5.15％-24.39％之间.体外小管及小管迁移实验显示,3.75-30μg/ml的蛇床子素作用24h时HUVEC小管形成数目减少,且管腔不完整.3.75-30μg/ml的独活醇提物和蛇床子素处理12h对HUVEC迁移抑制率分别在-2.16％至8.00％和13.70％至63.04％之间.3.75-30μg/ml的独活醇提物和蛇床子素诱导HUVEC细胞凋亡率分别在6.1％-14.4％和18.8％-89.5％之间.独活醇提物和蛇床子素作用HUVEC 24h后,使内皮细胞周期主要阻滞在G0-G1期,蛇床子素对细胞周期影响强于独活醇提物.结论：蛇床子素在体外抑制血管生成作用强于独活醇提物,说明蛇床子素可能是独活醇提物中发挥抗血管生成作用的主要成分,其作用机制可能与抑制HUVEC增殖、迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,阻滞HUVEC细胞周期有关.     

重楼醇提物体外抑制血管生成作用研究

目的：探讨重楼醇提物对体外血管生成的抑制作用及其可能的机制。方法：采用MTT法观察重楼醇提物对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）、人肠癌LOVO细胞增殖的影响。利用transwell小室趋化实验、体外管腔形成实验观察重楼醇提物对HUVEC迁移、成血管能力的影响。结果：重楼醇提物在（15—60）μg／ml浓度范围内，内皮细胞抑制率在24．2％-82．1％之间，具有抑制血管内皮细胞增殖作用；体外管腔形成实验发现，（15—60）μg／ml的重楼醇提物管腔形成数目减少，且管腔不完整，与对照组相比有显著性差异（P分别为0．0000011、0．0000417、0．0008752）。经（15—60）μg／m1的重楼醇提物处理后内皮细胞迁移数明显少于对照组（P分别为0．0000005、0．0000033、0．009993）。而在该浓度范围内，对人肠癌LOVO细胞无明显细胞毒作用（细胞抑制率在12．1％-13．9％之间）。（15—60）μg／ml的重楼醇提物可诱导内皮细胞凋亡，抑制内皮细胞DNA的合成，且呈剂量依赖性（相关系数分别为0．929、-0．922，P为0．036、0．039）。结论：重楼醇提物在体外能有效抑制血管生成。其机制可能与抑制内皮细胞增生、迁移和管腔形成，诱导内皮细胞凋亡，抑制内皮细胞DNA的合成有关。     

重组人血管内皮抑素对血管新生的影响研究

目的 探讨重组人血管内皮抑素（Endostar,恩度）对血管内皮细胞趋化、迁移、粘附、增殖及小管形成等与血管新生相关生物学行为的影响。方法 以原代培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为细胞模型,通过Boyden小室荧光定量分析、划痕试验、HUVEC荧光定量粘附分析、CFSE染色流式细胞术、CCK-8定量检测、小管形成试验和Matrigel栓试验研究恩度对HUVEC与血管新生相关的生物学行为的影响。结果 恩度在5～50 000ng／ml范围内可抑制血管内皮生长因子诱导HUVEC的迁移运动,且浓度为50ng／ml和500ng／ml时效果最明显;恩度在5～50 000ng／ml间可呈剂量依赖的方式抑制HUVEC向损伤部位的迁移。与0ng／ml相比,50、500和5000ng／ml 恩度处理的HUVEC的粘附率、增殖率及HUVEC形成网状小管结构的数量、面积和长度均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）; Matrigel栓实验结果显示,恩度在50～5000ng／ml间对SCID小鼠体内血管新生有明显的抑制作用。结论 恩度在细胞水平能抑制HUVEC与血管新生相关的生物学行为,包括HUVEC的趋化、迁移、粘附、增殖和小管形成;在动物水平能抑制SCID小鼠体内的血管新生,据此推断恩度能抑制血管新生。     

长春瑞滨及联合热疗抗血管生成作用的实验

目的探讨长春瑞滨及联合热疗对血管生成的抑制作用。方法以人肺癌A549细胞为对照,采用MTT法观察长春瑞滨及联合热疗对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的影响;通过Transwell趋化实验、小管形成实验及流式细胞术观察长春瑞滨对HUVEC迁移、小管形成及细胞凋亡的影响;利用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）模型,观察长春瑞滨对体内CAM新生血管的影响。结果小剂量（0.1～1 ng/ml）长春瑞滨对HUVEC和A549增殖抑制具有差异细胞毒性（P=0.000）。0.1～1 ng/ml 长春瑞滨呈剂量依赖性抑制HUVEC增殖（r=0.993,P=0.000）,联合热疗具有抑制HUVEC增殖的叠加或协同效应。小剂量长春瑞滨能够抑制HUVEC迁移和小管形成,诱导HUVEC凋亡,遏制CAM新生血管形成。结论小剂量长春瑞滨具有抗血管生成作用,联合热疗具有协同或叠加效应。     

石见穿有效部位对血管内皮细胞生物学行为的影响

目的:探讨石见穿氯仿及乙酸乙酯部位在体外对血管内皮细胞生物学行为的影响。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)至3-6代,采用MTT实验、Transwell小室迁移实验、体外小管形成实验观察石见穿氯仿及乙酸乙酯部位对HUVECs体外增殖、迁移、小管形成能力的影响。结果:3.125-25μg/ml的石见穿氯仿部位及乙酸乙酯部位作用于HUVEC 48h,增殖抑制率分别为17.36%-53.08%、9.53%-31.36%,而作用于人肺癌细胞A549增殖抑制率分别为7.10%-31.18%、2.24%-21.69%,两者相比有明显差异细胞毒作用(P=0.001)。3.125-25μg/ml的石见穿氯仿及乙酸乙酯部位作用HUVECs 12h后,迁移抑制率分别为5.39%-57.38%、1.92%-37.37%。3.75-25μg/ml石见穿氯仿部位作用24h时HUVEC小管形成数目减少且管腔不完整,相同浓度石见穿乙酸乙酯部位抑制作用较弱。结论:石见穿氯仿部位抑制内皮细胞增殖、迁移和小管形成作用明显优于乙酸乙酯部位,为石见穿发挥抗血管生成的主要作用部位。     

重组人血管内皮抑制素对鼻咽癌HNE-1细胞株体外血管生成拟态的抑制作用

目的：研究重组人血管内皮抑制素（rh-Endostatin，Endostar，恩度）对人鼻咽低分化鳞癌HNE-1细胞的增殖、迁移及体外血管生成拟态的影响。方法：用不同浓度恩度（0～50μg／m1）处理HNE-1细胞，MTT法检测HNE-1细胞增殖活性的变化；创伤修复实验检测细胞迁移能力的变化。在Matrigel上接种HNE-1细胞，观察HNE-1细胞能否形成血管网状结构及其特点；体外管状形成抑制试验检测恩度对HNE-1细胞管道形成能力的影响。结果：恩度（1-50μg／m1）组的OD值与对照组比较无明显统计学差异（P〉0．05），但可以显著降低HNE-1细胞的迁移速度（P〈0．01），且与浓度呈负相关（r=-0．983，P〈0．01）。HNE-1细胞在Matrigel上培养能形成血管网状样结构，并能与内皮细胞连接共同构成马赛克样血管网状结构；恩度能抑制HNE。1细胞体外管道形成（P〈0．01），其管状结构数量与恩度浓度呈负相关（r=-0．978，P〈0．01）。结论：HNE-1细胞具有血管生成拟态及与内皮细胞共同形成马赛克血管的能力，恩度能够抑制HNE-1细胞的迁移和体外血管生成拟态形成。     

奥沙利铂联合热疗对血管生成的抑制作用

目的探讨奥沙利铂(L-OHP)联合热疗在体内外对血管生成的抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTY)法观察L-OHP联合热疗对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和人结肠癌LOVO细胞增殖的影响;采用transwell实验观察L-OHP联合热疗对HUVEC迁移的影响;采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型观察L-OHP对CAM新生血管的抑制作用。结果0.5～16μs/ml L-OHP均具有抑制HUVEC增殖的作用,细胞存活率为80.1%～42.5%,其增殖速度与L-OHP浓度呈负相关(r=-0.943, P=0.005);在此浓度范围内,L-OHP对LOVO细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC的抑制。0.5、1和16μg/ml L-OHP与热疗对HUVEC增殖的抑制具有协同作用,2、4和8μg/ml L-OHP与热疗具有相加作用。0.25～2μg/ml L-OHP具有抑制HUVEC迁移的作用,细胞迁移抑制率为18.7%～53.0%。1、4μg/ml L-OHP对CAM新生血管具有明显的抑制作用,抑制率分别为70.0%和100.0%。结论小剂量L-OHP在体内外具有抑制血管生成的作用,联合热疗对抑制HUVEC增殖具有协同或相加效应。     

熊果酸对体外血管形成的抑制作用

目的：探讨熊果酸对体外血管形成的抑制作用。方法：用MTT法、细胞迁移及小管实验观察熊果酸对培养血管内皮细胞（VEC）增殖、迁移和小管形成的影响。结果：熊果酸质量浓度为62．5－500μg/mL时，对VEC增殖呈剂量依赖性抑制；质量浓量为125μg/mL时，对VEC迁移及小管形成均有抑制作用（P＜0．05）；质量浓度为500μg/mL时，对VEC迁移及小管形成均有较强的抑制作用（P＜0．01）。结论：熊果酸对体外血管形成具有抑制作用。     

白头翁醇提物抗荷瘤鼠肿瘤血管生成作用的实验研究

目的：研究白头翁醇提物对昆明小鼠H22肝癌细胞皮下移植瘤的抗血管生成作用。方法：建立鼠H22肝癌细胞小鼠皮下移植瘤模型,给予不同剂量白头翁醇提物灌胃治疗,连续用药10天后,观察用药后肿瘤的大小,计算瘤重抑制率并测定肿瘤微血管密度（MVD）。结果：20g/kg白头翁醇提物对小鼠H22细胞皮E移植瘤作用后瘤重显著低于对照组（P=0.01）。10g/kg、20g/kg白头翁醇提物对小鼠H22细胞皮下移植瘤治疗后的微血管计数均显著低于对照组（P值分别为0.037、0.01）。结论：白头翁醇提物对荷瘤鼠H22肝癌移植瘤具有抗肿瘤作用,其作用机理可能与抗肿瘤血管生成作用有关。     

β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞生长的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞,分别将 β-榄香烯（浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml）,顺铂（浓度梯度为1.5、3、6、9、12μg/ml） ,单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h后用CCK-8法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测β-榄香烯组细胞24h凋亡率。选取合适的药物浓度（β-榄香烯125μg/ml,顺铂3μg/ml） ,进行联合用药,加药24h、48h用CCK-8法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果：CCK-8法检测显示β-榄香烯和顺铂单独用药24h、48h后,除顺铂1.5μg/ml外,其它实验组对宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组（P〈0.05）,在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药（P〈0.01）。结论：β-榄香烯、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药,β-榄香烯和顺铂可协同（CDI〈1）促进SiHa细胞凋亡。     

ING4诱导甲状腺癌SW579细胞S早期阻滞的机制研究

目的:检测ING4对甲状腺癌SW579细胞周期的影响及其机制。方法:利用软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖,并利用PI染色和Cldu/Idu双染检测细胞周期变化。Westernblot技术检测周期相关蛋白的变化。结果:ING4可以明显抑制SW579细胞增殖,并且导致其S早期阻滞。ING4处理后细胞p53表达明显升高,同时phospho-S345-Chk1和phospho-T68-Chk2等细胞周期相关蛋白表达水平升高。结论:ING4可导致SW579细胞出现S早期阻滞,p53表达明显升高,细胞周期相关蛋白表达水平升高,但是三者关系有待进一步研究。     

重组人血管内皮抑素联合NP方案治疗晚期非小细胞肺癌

目的：比较重组人血管内皮抑素（Endostar,YH-16,恩度）联合NP方案和单纯化疗治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的临床疗效及不良反应。方法：56例经细胞学或病理学确诊的晚期NSCLC患者,随机分为两组：单纯NP方案组（对照组）29例,长春瑞宾（NVB）25mg/m2,d1、5,顺铂（DDP）30mg/m2,d2-4,21d为一个周期;恩度＋NP方案组（试验组）27例,化疗方案同对照组,恩度在治疗周期的第1-14日,每天给药一次,每次7.5mg/m2。2-4周期治疗结束后对近期临床疗效、不良反应进行评价。结果：对照组有效率为20.69%,临床受益率62.07%;试验组有效率为37.04%,临床受益率74.07%,两组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。试验组白细胞减少、胃肠道反应、肝功能损伤等不良反应发生率与对照组无明显差异。结论：恩度＋NP方案能明显提高晚期NSCLC的有效率,且安全性较好。     

恩度联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床研究

目的：观察恩度（重组人血管内皮抑素）联合含铂化疗方案治疗晚期非小细胞肺癌的近期疗效和安全性,并与单纯含铂化疗方案比较。方法：依照入选标准,选择60例晚期NSCLC住院患者,分恩度联合化疗组28例和单纯化疗组32例,观察有效率（RR）、疾病控制率（DCR）、生活质量改善情况及不良反应。结果：恩度联合化疗组和单纯化疗组的有效率分别为28.57%和28.13%,无统计学差异（P〉0.05）;疾病控制率分别为96.43%和93.75%,无统计学差异（P〉0.05）。治疗后两组ECOG评分均较治疗前明显降低,具有统计学差异（P〈0.05）,但两组间比较,无统计学差异（P〉0.05）。恩度联合化疗组的临床症状缓解率较单纯化疗组高：咳嗽缓解率分别为80%和71.43%、气短缓解率分别为78.57%和75%、咯血缓解率分别为90%和81.82%、疼痛缓解率分别为75%和71.43%,但无统计学差异（P〉0.05）。两组的主要不良反应均为恶心/呕吐、疲乏及骨髓抑制,骨髓抑制以白细胞、中性粒细胞减少为主,患者均可耐受,两组间不良反应发生率均无统计学差异（P〉0.05）。结论：恩度与含铂化疗联合应用,未改善近期疗效,未增加不良反应,但具有提高生活质量的趋势,值得临床进一步研究。