阿霉素热化疗对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨阿霉素(ADM)加热化疗对人肝癌细胞HHCC及HepG2的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法:以体外培养的人肝癌细胞HHCC和HepG2为研究对象,采用水浴加温法,观察单纯热疗,ADM化疗和热化疗对细胞增殖和凋亡的影响。MTT法确定阿霉素的工作浓度并检测细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:热化疗组细胞的抑制率显著高于单纯热疗、单纯化疗组[HHCC细胞:(65.77±2.54)%vs(23.18±0.81)%、(38.35±2.23)%,P<0.05。HepG2细胞:(74.25±1.53)%vs(1 7.1 2±2.8 6)%、(30.35±5.90)%,P<0.05]。热化疗组细胞凋亡率显著高于单纯热疗组、单纯化疗组[HHCC细胞:(76.1±2.33)%vs(23.83±1.76)%、(45.57±2.81)%,P<0.05。HepG2细胞:(76.9±2.79)%vs(19.7±7.63)%、(37.43±1.88)%,P<0.05]。结论:加热能增强ADM对HHCC及HepG2的增殖抑制和诱导凋亡作用。     

阿霉素热化疗对肝癌细胞及其耐药株凋亡的影响与机制

目的探讨阿霉素(ADM)加热化疗对人肝癌细胞BEL7402(以下简称BEL7402细胞)及其耐药株BEL7402/ADM细胞(以下简称BEL7402/ADM细胞)的凋亡诱导作用。方法以体外培养的人肝癌细胞BEL7402和BEL7402/ADM细胞为研究对象,采用水浴加温法,观察单纯热疗、单纯ADM化疗与热化疗对细胞凋亡的影响。用AnnexinV-FITC和PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡;采用流式细胞技术检测加热对BEL7402细胞和BEL7402/ADM细胞胞内ADM浓度和细胞膜上P糖蛋白(P-gp),多药耐药性相关蛋白(MRP)的影响。结果热化疗组细胞凋亡率(%)显著高于单纯热疗、单纯ADM化疗组的同种细胞[BEL7402细胞:(79.21±0.54)vs(16.67±1.03),(48.91±0.05),P均<0.05;BEL7402/ADM细胞:(75.42±0.16)vs(14.79±0.61),(23.78±0.04),P均<0.05]。热化疗组细胞内ADM浓度显著高于单纯化疗组的同种细胞(P<0.05)。热化疗组和单纯热疗组细胞膜上P-gp、MRP的表达率显著低于单纯化疗组的同种细胞(P<0.05)。结论加热可能通过抑制细胞膜上P-gp、MRP的表达,从而提高BEL7402细胞及BEL7402/ADM细胞对ADM诱导凋亡作用的敏感性。     

奥沙利铂联合热疗抑制人大肠癌细胞LOVO体外增殖作用的研究

目的探讨奥沙利铂联合热疗体外抑制人大肠癌细胞增殖的效果，以确定联合方案是否具有协同效应。方法使用MTT法测定单独或联合应用奥沙利铂与热疗对人大肠癌LOVO细胞体外增殖的抑制作用，使用流式细胞仪检测不同方案对LOVO细胞凋亡率的影响。根据Veleriote法判断热化疗联合的作用效果；透射电镜观察细胞形态。结果与奥沙利铂化疗或单纯热疗相比，奥沙利铂与43℃热疗联合后对LOVO细胞增殖有显著的抑制作用（P〈0．01），24h时流式细胞仪检测LOVO细胞的凋亡情况发现，热疗组、化疗组和热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高（P〈0．01）。结论奥沙利铂与热疗联合对LOVO细胞的增殖抑制具有明显的协同作用，这可能与细胞凋亡的增多有关。     

（125）I联合ADM对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响

目的研究放射性粒子125I联合化疗药物多柔比星（阿霉素,ADM）对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法按2×2析因设计将乳腺癌敏感株MCF-7细胞随机分成A、B、C、D 4组,A组：空白对照组;B组：单纯125I粒子组;C组：单纯ADM组;D组：125I粒子＋ADM组。采用流式细胞术检测各组干预后的细胞周期分布及细胞凋亡率。结果 （1）单纯125I粒子近距离低剂量率持续照射后将MCF-7细胞阻滞于G2~M期1。25I联合ADM将MCF-7细胞周期主要集中在G0~G1期,同时伴有较大比例的细胞凋亡。（2）各组细胞的早期凋亡率分别为：A组（0.99±0.05）%、B组（19.22±4.92）%、C组（16.57±4.73）%、D组（3.16±1.08）%;各组晚期凋亡及坏死率为：A组（0.32±0.18）%、B组（3.16±1.39）%、C组（3.24±0.75）%、D组（28.99±7.96）%,D组晚期凋亡及死亡率明显提高。结论 125I放射性粒子能有效诱导乳腺癌细胞凋亡,与化疗药物ADM联合作用除诱导细胞凋亡,还可导致大量细胞死亡,具有协同、增效的作用。     

热疗联合阿霉素和TRAIL对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:观察热疗（hyperthermia,HT）联合亚浓度阿霉素(adriamycin,ADM)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL）对肝癌HepG2细胞凋亡的影响,以确定联合方案是否具有协同作用。方法:采用CCK8法检测细胞的活性;Hoechst 33258染色实验检测细胞的形态变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡;Western blot实验检测细胞内蛋白的表达水平。结果:HT联合ADM和TRAIL可明显抑制肝癌HepG2细胞的活性（P＜0.05）,促进细胞染色质浓缩、核碎裂。流式细胞检测结果表明,HT联合ADM和TRAIL可促进细胞的早期凋亡（P＜0.001）和晚期凋亡（P＜0.01）。Western blot实验进一步证明,HT联合ADM和TRAIL通过上调DR4、DR5、caspase-3和caspase-8蛋白的表达来促进细胞的凋亡（P＜0.05）。结论:HT联合ADM和TRAIL具有协同作用,可明显增加细胞凋亡的敏感性,促进肝癌细胞的凋亡。     

热化疗对ARH-77细胞株增殖抑制、凋亡及Bcl-2表达影响的研究

[目的]观察热疗联合阿霉素对人多发性骨髓瘤细胞株ARH-77的体外增殖抑制、凋亡及Bcl-2表达的影响.[方法]采用MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40℃、41℃及42℃,作用于ARH-77细胞.采用绘制肿瘤细胞生长曲线、MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及Bcl-2表达.[结果]阿霉素IC50为8.16 μg/ml,以此为实验的工作浓度.单纯热疗组60min对ARH-77细胞有抑制作用(P＜0.01),并随温度增高而增强.单纯阿霉素化疗组对ARH-77细胞也有抑制作用.各热化疗组对ARH-77均有明显的抑制作用(P＜0.01).热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间差异有统计学意义(P＜0.01);Bcl-2蛋白表达下降,各组之间也有显著性差异(P＜0.01).[结论]热疗联合阿霉素能增强对ARH-77细胞的体外抑制作用,提高肿瘤细胞的凋亡率,下调Bcl-2蛋白的表达,为热化疗的临床应用提供实验室依据.     

热疗联合足叶乙甙对K562 体外抑制效应及bcl-2 的表达

 目的 观察热疗联合足叶乙甙增强对K562的体外增殖的抑制作用及对其凋亡、bcl-2表达的影响。方法 采用MTT法测定确定VP16的工作浓度，以该浓度进行化疗或与热疗的联合，选择温度40℃、42℃，体外作用于K562。48小时及作用前均采用台盼蓝拒染法检测肿瘤细胞的存活率；MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用；流式细胞仪检测作用后肿瘤细胞的凋亡及bcl-2的表达。观察热疗联合足叶乙甙的抗肿瘤作用。结果 以作用48小时IC50的值作为实验的工作浓度。单纯40℃、42℃热疗60分钟在48小时对K562细胞系有抑制作用（P〈0．01），并随温度增高而增强；单纯化疗对K562细胞系也有明显抑制作用（P〈0．01）；热化疗组在40℃、42℃温度下，对K562均有显著的抑制作用（P〈0．01），随着温度的增高而增强。热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率均较对照组显著升高，各组之间均有显著性差异（P〈0．01）；bcl-2蛋白的表达下降，各组之间也有显著性差异（P〈0．01）。结论 热疗联合足叶乙甙能增强对K562细胞的体外抑制作用；热化疗联合应用可以提高肿瘤细胞的凋亡率，下调bcl-2的表达。     

格尔德霉素在体内外增强人乳腺癌对阿霉素的敏感度

目的 探讨新型抗肿瘤药物格尔德霉素（GA）联合阿霉素（ADM）治疗乳腺癌的机制。方法 通过Western blot确定GA处理后AKT及HSP70表达变化,然后体外分别以GA/阿霉素（ADM）以及联合处理人乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡,在裸鼠模型体内检测GA联合ADM治疗后肿瘤大小变化并采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡变化。结果 GA处理MCF-7细胞后AKT明显下降,HSP70无明显改变,GA联合ADM后,MCF-7细胞的增殖受到明显抑制,生存率为（51.90±6.80）% （P＜0.01),凋亡明显增加,凋亡率为（42.97±4.10）% （P＜0.05)。在裸鼠模型内肿瘤生长受到明显抑制,实验终点抑瘤率为（68.00±9.40）% （P＜0.05),联合治疗明显增加瘤内肿瘤细胞的凋亡,凋亡率为（14.70±3.30）% （P＜0.01)。结论 GA联合ADM能够显著增加ADM的治疗疗效,有望成为治疗乳腺癌的新型化疗联合方案。     

三维与二维培养肝癌HepG2细胞的药物敏感性及生物学特性比较

目的：观察肝癌HepG2细胞株在不同培养模式下的生物学性质、耐药性。方法：采用琼脂糖预铺底法建立体外三维细胞模型,通过倒置显微镜、扫描电镜等方法证实三维细胞模型的成功建立;采用透射电镜、流式细胞术等技术方法,比较二维培养及三维培养细胞中细胞间连接、细胞周期、细胞凋亡的差异;采用MTT法获得不同培养模式下药物5-FU、DDP作用的细胞抑制率。结果：三维培养HepG2细胞第7天可形成直径160μm左右的多细胞球,悬浮生长;二维培养的HepG2细胞贴壁生长。三维培养与二维培养相比,存在细胞周期阻滞：G1期细胞增多[（59.23±1.28）%vs（39.45±1.21）%],G2期细胞减少[（12.47±0.14）%vs（36.15±1.09）%],早期自发凋亡细胞比例减少[（1.62±0.50）%vs（6.29±1.61）%],具有统计学差异（P〈0.05）;S期细胞比例变化不大[（28.30±0.93）%vs（24.40±0.96）%,P〉0.05],晚期自发凋亡坏死细胞比例变化不大[（0.65±0.17）%vs（0.66±0.29）%,P〉0.05]。二维培养细胞间连接少见,三维培养细胞连接结构丰富,可见桥粒连接、中间连接及紧密连接结构;三维培养下5-FU、DDP药物的细胞抑制率明显降低（与二维培养相比）。结论：经倒置显微镜和扫描电镜观察证实肝癌HepG2细胞体外三维培养模型成功建立,在三维培养条件下HepG2细胞对5-FU、DDP表现出多细胞耐药;与二维培养相比,三维培养的细胞间的相互作用有明显增强,且多细胞球生物学特性主要表现为细胞周期阻滞和早期凋亡减少,推测其可能与多细胞耐药有关。     

槲皮素提高肝癌HepG2细胞热化疗疗效的实验研究

  目的 研究热休克对人肝癌HepG2细胞耐药性的影响，合用槲皮素（Qu）能否提高肝癌细胞热化疗的疗效。方法 42 ℃恒温水浴法热休克传代人肝癌细胞系HepG2细胞90 min。MTT检测半数抑制浓度（IC50），求得耐药倍数、增敏倍数。荧光染色检测凋亡率。流式细胞术检测HSP70和P-gp表达率。结果 Qu能诱导HepG2细胞凋亡。HepG2细胞热休克诱导后4 h对ADM耐药性升高2.78倍（P＜ 0.05），HSP70阳性细胞数升高，4 h达到11.47 ％，升高近1倍（P ＜0.01），P-gp阳性细胞数12 h达到96.31 ％，升高近2倍（P ＜0.01）。热休克前应用Qu能有效抑制热休克诱导HSP70和P-gp的过量表达，抑制细胞对ADM耐药性的产生，起增敏作用（P ＜0.05），呈浓度依赖性。结论 槲皮素可阻断热休克诱导HepG2细胞HSP70和P-gp的过表达，抑制耐药性的产生，起到热化疗的增敏作用，可成为肿瘤耐药逆转剂。     

Pin1对内质网应激下肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨内质网应激下HepG2细胞中Pin1蛋白的表达情况及其对细胞增殖和凋亡的影响。方法 衣霉素（TM）分别作用于正常肝细胞THLE3和肝癌细胞HepG2（THLE3细胞TM组和HepG2细胞TM组）、全反式维甲酸（ATRA）单独作用于HepG2细胞（ATRA组）、TM和ATRA共同作用于HepG2细胞（TM+ATRA组）及DMSO处理的对照组细胞。48 h后,Western blot检测Bip和Pin1蛋白的表达水平,CCK-8试剂检测细胞的增殖情况,流式细胞术分析细胞的凋亡情况。结果 TM处理的THLE3和HepG2细胞中Bip蛋白表达增加,说明TM有效诱导细胞发生内质网应激;与DMSO组相比,THLE3细胞TM组中Pin1的蛋白水平随着TM浓度的升高而降低（P<0.001）。HepG2细胞TM+ATRA组中Pin1蛋白水平随着TM浓度的升高而降低（P<0.01）。HepG2细胞TM组细胞增殖抑制率仅（29.33±4.73）%,明显低于THLE3细胞TM组（（60.33±2.08）%）（P<0.001）,但HepG2细胞TM+ATRA组细胞增殖抑制率显著提高至（60.33±6.03）%。与DMSO组相比,THLE3细胞TM组凋亡率显著升高（（22.25±0.78）% vs.（3.57±0.31）%,P<0.01）。与DMSO组（5.10±1.00）%相比,HepG2细胞ATRA组凋亡率只有（10.03±0.49）%（P<0.05）,但TM+ATRA组凋亡率显著增加至（23.70±0.75）%（P<0.01）。结论 HepG2细胞通过维持Pin1蛋白水平抵制ERS诱导的细胞凋亡,降低Pin1蛋白水平能够抑制细胞增殖、促进细胞凋亡。     

Brivanib 对 HepG2细胞的抑制作用及机制

目的：探讨 Brivanib 对人 HepG2肝癌细胞的增殖抑制作用及其机制。方法：MTS 法检测 Brivanib 对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同浓度 Brivanib 处理后 HepG2细胞的凋亡率,Western blot 检测凋亡相关蛋白 Bcl -2、Bax 的表达情况,免疫荧光观察 Brivanib 处理后 HepG2细胞内源性 LC3表达情况, Western blot 检测自噬关键蛋白 LC - I 向 LC - II 的转换及 p62的表达。结果：与空白对照组相比,Brivanib 对HepG2肝癌细胞的增殖抑制率随剂量增加和时间延长而增加,呈剂量和时间依赖性。不同浓度 Brivanib 作用72h 后 HepG2细胞的凋亡率分别为（13.06±4.06）%、（20.89±1.83）%、（44.29±2.56）%,其诱导凋亡与下调 Bax、上调 Bcl -2表达相关。2.5μmol/ L Brivanib 处理 HepG2细胞48h 后内源性 LC3表达增加。Western blot 分析表明,LC3- I 向 LC3- II 转换增加,p62表达降低。结论：Brivanib 抑制 HepG2人肝癌细胞增殖,诱导凋亡和自噬活化。     

肝癌缺氧诱导因子-lα异常表达与靶向干预的临床价值研究

分析肝癌组织缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达特征及沉默HIF-1α对癌细胞增殖的影响。方法:以免疫组化法分析自身配对的肝癌及癌周组织中HIF-1α表达。HepG2细胞转染靶向HIF-1α的miRNA干扰质粒,RT-PCR、Western blot检测HIF-1α基因及蛋白水平变化;酶联免疫吸附法检测培养液血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（ANG）-2表达;阿霉素预处理后,以Annexin V-FLUOS/PI双染法分析HepG2细胞凋亡率,并检测细胞周期改变。结果:肝癌及周围组织HIF-1α呈棕黄色颗粒状表达,定位于胞浆和胞核,其特征是癌旁组织全数表达高于癌灶组织（80.0%,χ2=22.35,P<0.001）,癌灶组织HIF-1α表达与肿瘤大小相关。HepG2细胞转染靶向HIF-1α miRNA干扰质粒后72 h,HIF-1α在转录水平下降87%,蛋白水平下降56%;培养液中VEGF和ANG-2表达水平分别减少54%和36%;HepG2细胞凋亡率为（22.46±0.61）%,G1期和S期比率分别为（61.49±1.12）%和（22.40±0.58）%;联合阿霉素后HepG2细胞凋亡率为（36.99±0.88）%,G1期和S期比率分别为（65.68±0.91）%和（19.47±1.34）%。结论:肝癌组织HIF-1α过表达与肝癌发展相关,沉默HIF-1α可有效调控下游血管生成相关基因表达,抑制癌细胞增殖,改善化疗药物敏感性。      

花椒提取物诱导肝癌细胞凋亡作用和分子机制研究

目的：研究花椒提取物ZBME诱导的肝癌细胞凋亡作用及其分子机制。方法：体外培养肝癌细胞HepG2细胞株。分为对照组（生理盐水）和ZBME处理组。不同浓度的ZBME处理体外培养肝癌细胞,通过相差倒置显微镜观察对照组和处理组细胞失巢凋亡和生长抑制。免疫印迹（ Western blotting）方法检测ZBME对细胞内抗凋亡蛋白Mcl-1、Survivin和Bcl-xL以及促凋亡蛋白Bax表达调控,基于Annexin V-PI双染的流式细胞分析统计 ZBME 诱导的细胞凋亡率。结果：在相差显微镜下,可以观察到 ZBME 能够显著诱导HepG2肝癌细胞株发生细胞凋亡和生长抑制。MTT检测细胞相对活性结果显示ZBME能诱导HepG2细胞增殖抑制。8μg/ml ZBME处理细胞48h增殖抑制率约40%（P﹤0.05）。Annexin V-PI染色表明ZBME能诱导细胞显著凋亡,8μg/ml ZBME 处理细胞48h凋亡诱导率约90%（P﹤0.05）。结论：ZBME能够诱导肝癌细胞凋亡和增殖抑制。ZBME抗癌作用可能通过下调致癌蛋白Mcl-1、Survivin和Bcl-xL以及上调抑癌蛋白Bax实现。     

Raf激酶抑制蛋白对HepG2肝癌细胞生物学特性影响的研究

目的：Raf激酶抑制蛋白（RKIP）是磷脂酰乙醇胺结合蛋白家族的重要成员,近来的一些研究表明RKIP基因的蛋白产物在人类肝癌组织中表达显著下调。本研究旨在探讨RKIP基因对于肝癌细胞增殖状态,细胞周期,凋亡状态等生物学特性及浸润转移能力等恶性表型的影响,以初步阐明其功能意义。方法：将RKIP基因插入载体pcDNA3.1构建PC-RKIP真核表达载体。脂质体转染肝癌细胞系HepG2建立稳定转染细胞系（Hep-RKIP）,而后使用生长曲线法、平板克隆形成实验法、流式细胞仪,细胞迁徙实验法等方法分析稳定表达株相关生物学特性变化。同时设立空载体转染组和空白细胞组为对照。结果：与转染pcDNA3.1空载体及空白HepG2肝癌细胞相比,转染PC-RKIP载体的稳定表达细胞株生长有显著减慢,后两组之间亦无显著差异,平板克隆形成实验结果显示PC-RKIP转染组平均克隆形成率显著低于其它两组（P〈0.05）,细胞周期检测显示PC-RKIP转染组处于G0/G1期的细胞比例显著高于未处理的HepG2细胞和转染pcDNA3.1空载体的HepG2细胞（P〈0.05）,而处于G2-M期的细胞比例显著均低于其它两组（P〈0.05）,其它各期细胞比例均无显著差异。流式细胞仪法检测细胞凋亡结果显示PC-RKIP转染组调亡比例为6.4%左右,显著高于对照组（P〈0.05）。细胞迁徙实验结果提示PC-RKIP转染组穿膜率与其它两组相比显著降低（P〈0.05）。结论：RKIP基因可能具有抑制细胞生长增殖及分裂作用,同时可影响细胞周期及细胞凋亡,对肝癌细胞侵袭转移能力可能有一定抑制作用,对抑制细胞恶性表型有一定意义。     

反义抑制Survivin表达增强肝癌细胞系对阿霉素的敏感性

背景与目的:由于Survivin在大多数肿瘤细胞中过表达,而在正常成人终末分化组织中沉默,并参与了恶性肿瘤的发生、发展和化疗耐药,使其成为值得关注的抗癌治疗靶。反义寡核苷酸可用来封闭凋亡抑制基因Survivin,诱导肿瘤细胞凋亡或增强其化疗敏感性。本研究旨在探讨反义抑制Survivin表达对肝癌细胞系阿霉素敏感性的影响。方法:RT鄄PCR、Westernblot检测HepG2和HepG2/ADM细胞Survivin表达;MTT法评估HepG2和HepG2/ADM对反义复合物和阿霉素的敏感性;不同浓度的反义复合物分别转染HepG2和HepG2/ADM细胞,RT鄄PCR检测SurvivinmRNA表达;等辐射分析法评估不同浓度反义复合物和亚致死浓度阿霉素对HepG2和HepG2/ADM细胞的协同效应;流式细胞术检测激活型Caspase鄄3表达及凋亡率。结果:HepG2/ADM细胞SurvivinmRNA是HepG2细胞的15倍,蛋白水平是HepG2的18倍。两种细胞均显示对反义复合物敏感并呈浓度依赖关系,反义复合物对HepG2和HepG2/ADM细胞的IC50分别为317.90nmol/L和480.74nmol/L,在500nmol/L时抑制率达到71.10%和53.67%。ADM对HepG2和HepG2/ADM细胞的IC50分别为0.36μg/ml和2.12μg/ml,耐药指数为6。反义复合物剂量依赖性下调HepG2和HepG2/ADM细胞SurvivinmRNA表达,对HepG2和HepG2/ADM细胞的IC50分别为271.93nmol/和365.72nmol/L,400nmol/L时表达水平分别下调了69.12%和60.01%。反义复合物和低浓度ADM联合使HepG2细胞的敏感性增加了6倍,使HepG2/ADM细胞的敏感性增加了4倍。联合处理激活了HepG2/ADM细胞Caspase鄄3活性,诱导细胞凋亡,激活型Caspase鄄3和凋亡率随反义复合物浓度的增加而逐渐递增。结论:反义抑制Survivin表达增强肝癌细胞系对阿霉素的敏感性,反义寡核苷酸和阿霉素联合可能是耐阿霉素肝细胞癌临床治疗的一种合理策略。     

术前单疗程化疗对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨术前单疗程化疗对ⅢA期非小细胞肺癌细胞凋亡率、增殖指数及bcl-2、bax基因表达的影响。方法 2002年1月至2004年1月,对144例ⅢA期非小细胞肺癌进行随机对照试验,术前化疗组（试验组）和单纯手术组（对照组）各72例,前者于术前化疗1个疗程,化疗结束10-14 d后接受手术;对照组直接行手术治疗。手术切除的肺癌组织应用流氏细胞学方法测定细胞凋亡率、增殖指数及bcl-2、bax基因的表达。结果试验组和对照组细胞凋亡率、增殖指数及bcl-2、bax基因表达分别为（7.40±2.39%）、（4.93±2.13）%;（24.99±7.51）%、（31.72±7.43）%;4.70±1.16、6.51±1.09;5.57±0.96、4.65±0.91,两组比较均差异有显著性（P〈0.05）。结论术前单疗程化疗能提高ⅢA期NSCLC的肿瘤细胞凋亡率,降低肿瘤细胞增殖指数,并抑制bcl-2基因（抑制凋亡的基因）的表达,促进bax基因（促进凋亡的基因）的表达,并可能降低细胞生存能力,减少癌转移灶的发生。     

热疗增强诺维本对人肺癌细胞毒作用的实验研究

目的：研究诺维本（NVB）与热疗联合对人肺癌细胞系A549细胞体外增殖的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法测定细胞增殖，确定诺维本的工作浓度，并以该浓度进行化疗或与热疗联合，计算24h细胞生存率，根据Veleriote法判断热化疗联合24h的作用效果；24h流式细胞仪检测A549细胞的凋亡和周期情况。结果：以24h时IC10-IC20的药物浓度作为试验的工作浓度，确定NVB对细胞系的工作浓度为10μg／ml。42℃单独热疗和单独化疗均对该株细胞有抑制和杀伤作用（P〈0．05）；42℃热疗与药物联合抑制作用强于单独化疗组和单独热疗组（P〈0．01）；细胞周期分析发现42℃热疗降低了S期细胞比例；单独诺维本使细胞周期阻滞于G2／M期；与单独化疗组相比热化疗组的S期细胞比例减少，G2／M期细胞增多；对照组、热疗组、化疗组、热化疗组细胞凋亡率分别为1．5％、7．9％、13．9％、29．1％。结论：42℃温热可以明显增强化疗药诺维本的毒性，其作用机制可能与干扰细胞周期有关。     

淫羊藿苷、黄芩苷联合多柔比星抑制肝癌细胞APRIL表达和逆转肿瘤免疫逃逸

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(icarrin,ICA)、黄芩苷(baicali,BAI)联合化疗药多柔比星(doxorubicin,又称ADM)抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体(proliferation-inducing ligand,APRIL)的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖和逆转肿瘤细胞免疫逃逸的作用和机制。方法:MTT法检测25μg/ml ICA、200μg/ml BAI、2μg/ml ADM以及12.5μg/ml ICA 1μg/ml ADM、100μg/ml BAI 1μg/ml ADM等5个用药处理组与未用药对照组HepG2细胞的增殖活性;RT-PCR检测APRIL及其受体HSPG、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平;MTT法检测CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)对用药处理组和未用药对照组HepG2细胞的杀伤活性。结果:ICA、BAI以及ADM对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈时间依赖效应;ICA、ADM、ICA ADM、BAI ADM组作用96 h抑制率最高,分别为(29.30±6.62)%、(63.60±1.35)%、(99.03±0.10)%、(98.89±0.18)%(均P<0.01)。HepG2细胞高表达APRIL及其受体HSPGmRNA。ICA、BAI以及ADM下调HepG2细胞APRILmRNA以及凋亡相关蛋白bcl-2 mRNA的表达水平。ICA、BAI、ADM以及ICA ADM、BAI ADM能增加HepG2细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性,杀伤率由对照组的(30.00±4.50)%分别增加到(97.23±5.11)%、(93.12±9.88)%、(60.45±5.71)%、(43.87±8.2)%、(47.25±2.68)%(均P<0.01);且经CD3AK作用后,HepG2细胞bcl-2 mRNA的表达进一步下调。结论:ICA、BAI联合ADM抑制HepG2细胞APRIL、bcl-2 mRNA的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖;同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。