灵芝孢子油对肺腺癌癌性胸水中原代肿瘤细胞的抗肿瘤作用

目的:研究灵芝孢子油对肺腺癌的癌性胸水中原代肿瘤细胞的抗癌作用。方法:体外培养肺腺癌细胞系A549,用CCK-8法检测灵芝孢子油对A549细胞的体外抗肿瘤作用。收集12例经病理确诊的肺腺癌患者的癌性胸水分离原代肿瘤细胞,用CCK-8法检测灵芝孢子油及临床常用化疗药物对原代肿瘤细胞的药物敏感性;流式细胞仪检测灵芝孢子油对原代肿瘤细胞的凋亡诱导作用,RT-PCR检测灵芝孢子油对凋亡相关蛋白基因bax及bc l-2 mRNA表达的影响。结果:灵芝孢子油对5例癌性胸水中原代肿瘤细胞的IC50平均值为0.28±0.04μl/m l,与对A549细胞的IC500.46±0.08μl/m l无显著差异(P>0.05)。在各测试药物浓度(TDC)下,灵芝孢子油、多西紫杉醇、顺铂和健择对原代肿瘤细胞的抑制率分别为48.7%±3.3%,31.6%±14.1%,30.2%±11.6%,51.4%±5.6%,灵芝孢子油与这些化疗药物的抗肿瘤作用无显著差异(P>0.05)。灵芝孢子油显著促进原代肿瘤细胞凋亡,对原代肿瘤细胞中凋亡相关蛋白bax mRNA有明显上调作用,对bc l-2 mRNA有明显下调作用。结论:灵芝孢子油对肺腺癌的癌性胸水原代肿瘤细胞有较好的抗癌作用。     

Celecoxib对放射所致DNA损伤修复与凋亡的影响

目的探讨选择性COX-2抑制剂celecoxib影响肺腺癌A549细胞凋亡及DNA损伤修复的放疗增敏机制。方法 A549细胞分为对照组(相同体积的DMSO)、药物组(celecoxib)、照射组(6MV X射线6 Gy)、联合组(celecoxib+6Gy X射线(药物作用24 h后))。CCK-8法检测celecoxib对肺腺癌A549细胞的IC50。RT-PCR、Western blot法检测细胞DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 Celecoxib抑制A549细胞增殖作用呈剂量和时间依赖性,48 h的IC50值为58.74μmol/L。联合组DNA-PKcs、Ku80基因mRNA及蛋白表达量明显低于对照组、药物组、照射组(P<0.01)。联合组细胞凋亡率明显高于对照组、药物组和照射组(P<0.01)。结论 Celecoxib通过抑制放射所致DNA损伤修复及促进凋亡,从而达到放疗增敏作用。     

二甲双胍对人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的调控

背景与目的:二甲双胍作为一种胰岛素增敏剂被用于Ⅱ型糖尿病的一线治疗。近来的临床研究发现二甲双胍可降低糖尿病患者的肿瘤发生率,提示它可能具有抗肿瘤的作用。本研究观察二甲双胍对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法:二甲双胍干预人肺腺癌A549细胞48h后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,实时PCR法检测p53、Bcl-2和Bax mRNA的转录情况。结果:经二甲双胍干预48h后,人肺腺癌A549细胞的增殖受到明显抑制,且该抑制作用呈药物浓度依赖性增加。当二甲双胍浓度为0.5、2和8mmol/L时对细胞生长的抑制率分别为(29±5)%、(68±3)%和(84.1±2.6)%。流式细胞术检测提示中、高浓度(2、8mmol/L)二甲双胍可促进A549细胞凋亡;其中,药物作用48h后,8mmol/L组细胞的早期凋亡率为(2.1±0.5)%,中、晚期凋亡率为(9±4)%,均显著高于对照组。二甲双胍干预后细胞凋亡相关基因p53、Bcl-2和BaxmRNA表达均上调,且Bcl-2/Bax比值下调。结论:二甲双胍能显著抑制人肺腺癌A549细胞增殖,促进细胞凋亡增加;其机制可能与上调细胞凋亡相关基因p53的表达及Bcl-2/Bax比值下降有关。     

顺维甲酸体外诱导肺腺癌细胞A549凋亡的研究

目的:探讨9-顺维甲酸(9-cis-RA)对人肺腺癌细胞A549的诱导凋亡作用。方法:体外培养肺腺癌细胞株A549,用MTT法观察9-cis-RA对细胞的生长抑制作用,采用电镜、流式细胞仪等方法检测9-cis-RA对细胞的诱导凋亡作用。结果:9-cis-RA对A549细胞有生长抑制效应,抑制率随着9-cis-RA浓度、作用时间的增加而增加。9-cis-RA明显诱导A549细胞的凋亡,可观察到凋亡小体和凋亡峰,药物作用48h后,9-cis-RA浓度为5、10μmol/L的细胞凋亡率分别为7.2%和13.3%,细胞凋亡率呈现量效关系。结论:9-cis-RA可能通过诱导肺癌细胞凋亡抑制肺癌细胞增殖,发挥其抗癌作用。     

灵芝孢子油对人肝癌细胞株HepG2的影响及其机制的初步研究

目的探讨灵芝孢子油对人肝癌细胞株HepG2的影响及其机制。方法 CCK8法观察灵芝孢子油对HepG2细胞的增殖抑制作用;体外运动迁移实验观察细胞迁移能力的变化;流式细胞术观察细胞凋亡;RT-PCR技术检测VEGF,细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax及p53和Toll样受体mRNA水平的表达情况;免疫荧光观察细胞骨架的改变。结果灵芝孢子油对体外培养的肝癌HepG2细胞有抑制增殖作用,且具有剂量、时间相关性;灵芝孢子油能降低HepG2细胞迁移速度;HepG2细胞凋亡率随灵芝孢子油浓度增加而增加;VEGF、Bcl-2和Bax mRNA表达下调,p53的mRNA无显著变化;灵芝孢子油也能改变Toll样受体mRNA的表达情况;灵芝孢子油处理后,HepG2细胞骨架改变,伪足减少,并且出现典型的凋亡细胞形态。结论灵芝孢子油可抑制肝癌细胞株HepG2的增殖,诱导肝癌HepG2细胞凋亡,抑制其迁移能力,改变细胞表面Toll样受体表达,而这些可能与灵芝孢子油抗肿瘤的机制相关。     

康莱特注射液对吉非替尼诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡影响的实验研究

目的 探讨康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响。 方法 应用MTT法计算康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的半数抑制浓度（IC50）,检测康莱特注射液（5、10、20、40、80、100、160 μl／ml）、吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、20、40 μmol／L）以及康莱特注射液（80 μl／ml）联合吉非替尼（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol／L）作用于人肺腺癌A549细胞株24、48、72 h的增殖抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI 双标法检测康莱特注射液、吉非替尼及两药联合作用于A549细胞48 h后的凋亡率;免疫细胞化学法检测各药物处理组作用于A549细胞48 h后FAS、AKT2蛋白表达;RT-PCR技术检测各组FAS mRNA、AKT2 mRNA的表达水平。均设未加药的A549细胞为空白对照组。结果 康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的IC50为80 μl／ml。康莱特注射液联合吉非替尼作用于A549细胞的增殖抑制率高于两单药组和空白对照组,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。两者的联合作用在一定浓度范围内呈现出协同的抗瘤效果。流式细胞术检测显示,两药联合组的细胞凋亡率显著高于两单药组和空白对照组（P＜0.05）。免疫细胞化学和RT-PCR检测显示,与空白对照组比较,康莱特组和两药联合组FAS蛋白和mRNA的表达水平均升高（P＜0.05）,AKT2蛋白和mRNA表达水平均下调（P＜0.05）。结论 康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株有明显的促凋亡作用,康莱特注射液可能增加人肺腺癌A549细胞对于吉非替尼的敏感性。     

重组人血管内皮抑素对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的：探讨重组人血管内皮抑素（恩度）对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测恩度对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用,流式细胞仪检测肺腺癌A549细胞的凋亡率,比较各浓度药物对肺腺癌A549细胞的诱导凋亡作用。结果：恩度可以抑制肺腺癌A549细胞的生长,且呈时间剂量依赖性。恩度可以诱导肺腺癌A549细胞的凋亡,随浓度增加、作用时间的延长,凋亡率增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．001）。结论：恩度对肺腺癌A549细胞的生长具有明显的抑制作用,主要通过诱导肺腺癌A549细胞的凋亡引起。     

核心蛋白聚糖对肺腺癌细胞生长作用及其机制初探

背景与目的核心蛋白聚糖（decorin）是在微环境肿瘤外基质中存在的一些小分子蛋白聚糖,与肿瘤的发生、发展、生长密切相关。本研究初步探讨decorin对肺腺癌细胞生长的影响及机制。方法以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,利用MTT法检测不同浓度不同时间decorin对A549细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析decorin对A549细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR检测decorin干预后对自身肿瘤细胞的decorin mRNA表达的影响,Westernblot法检测decorin干预对P21蛋白表达的影响,ELISA法检测decorin对TGF-β蛋白表达的调节作用。结果Decorin在体外能明显抑制A549肿瘤细胞增殖,且这种增殖抑制作用呈剂量和时间依赖性。decorin在体外能明显诱导A549肿瘤细胞凋亡,该作用与剂量和时间有关。decorin在体外能明显上调自身decorin mRNA,下调TGF-β表达,上调P21表达,阻滞细胞周期于G1期。结论decorin在体外能够抑制肺腺癌A549肿瘤细胞生长,诱导其凋亡。其作用机制可能为通过上调自身decorin mRNA,下调TGF-β表达,上调P21表达,阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡等途径抑制A549肿瘤细胞生长。     

逆癌酮诱导人肺癌细胞凋亡的体外研究

目的:研究逆癌酮诱导A549人肺腺癌细胞系和PLA-801D人肺巨细胞癌细胞系凋亡及其抗癌作用机理.方法:应用体外细胞培养技术,以逆癌酮作用于肺癌细胞,绘制生长曲线,作克隆形成实验,观察其对细胞增殖的影响,并进行光镜和流式细胞术的观察和分析.结果:应用逆癌酮后细胞生长明显受抑,克隆形成能力降低,流式细胞分析表明,应用逆癌酮后,肺癌细胞凋亡指数显著增加(P＜0.01),细胞被阻滞于G0/G1期(P＜0.01),其bax、Fas的表达被上调;bcl-2的表达被下调(P＜0.01);c-myc、TGFβR 1的表达也被上调(P＜0.01).结论:逆癌酮对A549细胞和PLA-801D细胞有明显的细胞毒,并通过上调bax、Fas的表达,下调bcl-2的表达诱导细胞凋亡.     

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究’

目的：探讨microRNA-451（miR-451）逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制。方法：应用实时荧光定量PCR法（real～timefluorescentquantitativePCR,qRT—PCR）检测耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549／DDP细胞转染miR-451mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549／DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549／DDP细胞Akt、P—Akt（Ser473）、bcl-2和bax的表达变化。结果：miR-451在耐DDP细胞株A549／DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549（P〈0．05）,A549／DDP细胞转染miR-451mimic24h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高（P〈0．05）。在A549／DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应：相较于对照组,DDP对A549／DDP／miR-451细胞的半数抑制浓度（half inhibitioncon centration,IC50）减低（P〈0．05）,A549／DDP／miR-451细胞的增殖能力减弱,A549／DDP／miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多（P〈0．05）。Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451mimic的A549／DDP细胞P—Akt（Ser473）、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高。结论：miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调P—Akt（Ser473）、bcl-2蛋白表达而逆转A549／DDP细胞对DDP的耐药性。     

术前单疗程化疗对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响

目的探讨术前单疗程化疗对ⅢA期非小细胞肺癌细胞凋亡率、增殖指数及bcl-2、bax基因表达的影响。方法 2002年1月至2004年1月,对144例ⅢA期非小细胞肺癌进行随机对照试验,术前化疗组（试验组）和单纯手术组（对照组）各72例,前者于术前化疗1个疗程,化疗结束10-14 d后接受手术;对照组直接行手术治疗。手术切除的肺癌组织应用流氏细胞学方法测定细胞凋亡率、增殖指数及bcl-2、bax基因的表达。结果试验组和对照组细胞凋亡率、增殖指数及bcl-2、bax基因表达分别为（7.40±2.39%）、（4.93±2.13）%;（24.99±7.51）%、（31.72±7.43）%;4.70±1.16、6.51±1.09;5.57±0.96、4.65±0.91,两组比较均差异有显著性（P〈0.05）。结论术前单疗程化疗能提高ⅢA期NSCLC的肿瘤细胞凋亡率,降低肿瘤细胞增殖指数,并抑制bcl-2基因（抑制凋亡的基因）的表达,促进bax基因（促进凋亡的基因）的表达,并可能降低细胞生存能力,减少癌转移灶的发生。     

三七总皂甙对多发性骨髓瘤细胞的增殖抑制作用及机制的研究

目的：观察三七总皂甙（PNS）对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖抑制的作用;并观察三七总皂甙与阿霉素（adriamycin,ADM）联合,是否具有协同效应,为三七总皂甙应用于多发性骨髓瘤临床治疗提供一定的实验依据。方法：MTT法检测三七总皂甙对RPMI8226细胞增殖的影响;运用金氏公式分析三七总皂甙与ADM联合的协同效应;RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA水平的变化。结果：三七总皂甙可抑制RPMI8226细胞的增殖,并呈剂量依赖性,24h IC50值为213.42±2.21μg/ml;三七总皂甙与ADM联合,表现出协同效应;三七总皂甙与ADM联合处理MM细胞24h后,Bcl-2 mRNA表达较单独应用三七总皂甙或ADM前明显下调,而Bax表达则明显上调。结论：三七总皂甙可以抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,联合阿霉素,具有协同效应;其作用可能是通过下调Bcl-2,上调Bax在转录水平的表达而实现的。     

Wnt／β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的：探讨Wnt／β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法：体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549／DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549／DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinV／PI法和Hoechst33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默pcatenin的表达,检测A549／DDP细胞的Ic5。值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果：顺铂对A549／DDP细胞的IC50值为（28．984±1．404）μmol／L高于A549细胞的（5．888±0．338）umol／L,t=27．696,P〈0．001;20umol／L顺铂诱导A549／DDP细胞凋亡率为（21．75±0．96）％,显著低于A549细胞的（39．38±0．88）％,t=23．474,P〈0．001。A549／DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1．890±0．060,显著高于A549细胞的1．063±0．035,t=20．595,P〈0．001;在A549／DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1．107士0．061,明显高于A549细胞的0．503±0．025,t=15．814,P〈0．001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性（14．615±0．939）gmol／L,显著低于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（28．984±1．404）μmol／L,t=14．732,P〈0．001;RNAi技术沉默pcatenin蛋白细胞凋亡率为（37．57±0．64）％,显著高于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（21．75±0．96）％,t=23．699,P〈0．001;RNAi技术沉默伊catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0．527±0．065,显著低于A549／DDP组的1．027±0．025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1．033±0．040,F=116．944,P〈0．001。结论：抑制Wnt／β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。     

四硫化四砷抑制人胃癌SGC7901细胞增殖及其作用机制

目的：探讨四硫化四砷（As4S4）对人胃癌细胞系SGC7901增殖抑制作用及其作用机制.方法：MTT法检测四硫化四砷对体外培养SGC7901细胞的抑制作用,透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR法检测bcl-2和bax mRNA的表达,Western blot法检测bcl-2和bax蛋白的表达.结果：四硫化四砷具有体外抑制SGC7901细胞增殖的作用,能诱导细胞凋亡,细胞中bcl-2的表达降低,bax 的表达增强.结论：四硫化四砷具有抑制胃癌细胞系SGC7901细胞生长的作用,其机制可能与诱导细胞凋亡和调节bcl-2与bax表达有关.     

乙酰胆碱联合长春新碱对人类肺腺癌细胞株A549生长及凋亡的影响

 目的　探讨乙酰胆碱联合长春新碱（VCR）对肺腺癌细胞生长及化疗的影响,检测其是否通过影响bcl-2及p53发挥作用。方法　将乙酰胆碱单独或与VCR（浓度为IC50）联合作用于肺腺癌细胞株A549,测定其对A549细胞的抑制率。用免疫组织化学法及Western blot法测定乙酰胆碱联合VCR对bcl-2及p53蛋白表达的影响。结果　0.1、1、10 μmol／L的乙酰胆碱对A549细胞的抑制率分别为（0.050±0.032） %、（0.101±0.021） %、（0.169±0.015） %;0.1、1、10 μmol／L的乙酰胆碱分别与0.2 μg／ml VCR联合,对肿瘤细胞的抑制率分别为（0.529±0.023） %、（0.545±0.011） %、（0.589±0.015） %,与VCR组比较差异均有统计学意义（q'值分别为1.09、1.37、1.83,均P＜0.05）,0.1～10 μmol／L的乙酰胆碱单独作用于A549细胞表现出浓度依赖性的抑制作用,与VCR联合后显著提高A549对VCR的敏感性（P＜0.05）; 此外,联合用药后各组bcl-2及p53蛋白表达均降低（P＜0.05）。结论　乙酰胆碱单独及联合VCR均能抑制A549细胞的生长,其机制可能是乙酰胆碱与VCR协同或相加作用影响了bcl-2及p53蛋白的表达。     

恶性胸腔积液不同热化疗灌注模式的疗效比较

目的：探讨最佳胸腔热化疗灌注模式。方法：49例合并恶性胸腔积液的肺癌患者接受了胸腔热化疗灌注,依治疗模式分为手术组（手术切除病变,术后连续灌注）,循环灌注组（胸腔闭式引流术,术后循环灌注）和非循环灌注组（胸腔穿刺术,术后保留灌注后持续引流）。比较不同组别的治疗效果。结果：手术组18例胸腔积液全部得到控制,循环灌注组及非循环灌注组中各有1例（1/8）,7例（7/23）未控,治疗所需时间分别为（5.56±1.01）天,（8.8±2.32）天和（9.86±5.88）天。结论：胸腔内热化疗灌注的治疗模式以手术切除病变后连续循环灌注为佳。     

胸膜粘连术控制肺癌伴恶性胸水的疗效观察

目的：观察50%葡萄糖联合顺铂行胸腔内注射治疗肺癌伴胸水的疗效。方法：65例患者均采用胸腔闭式引流术,注入50%高渗葡萄糖、利多卡因、顺铂,每周1次。结果：随访3个月65例总有效率为95.34%,其中胸水消失40例（61.54%）,胸水明显减少22例（33.84%）。结论：胸腔内注射50%葡萄糖联合顺铂治疗肺癌伴胸水简单易行、疗效满意。