VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞的抑制作用及机制

目的:研究VES对Her-2、p53共表达乳腺癌细胞株MDA-MB-453细胞的增殖、凋亡的影响、通过检测Her-2、p53探讨VES抑制乳腺癌细胞生长的机制。方法:应用MTT法检测VES对MDA-MB-453细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测Her-2基因mRNA和Her-2、p53蛋白表达水平。结果:VES能抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20μg/ml VES处理组在48h后受到明显抑制,抑制率达52.25%;经VES处理后细胞出现凋亡,5μg/ml处理48h后,凋亡率为39.52%;药物干预组使肿瘤细胞大量阻滞于G1期(P<0.01);RT-PCR和免疫细胞化学法结果表明,VES能抑制Her-2基因mRNA的转录水平,从而抑制其蛋白的表达,也能降低p53蛋白的表达。结论:VES可诱导Her-2、p53共表达乳腺癌MDA-MB-53细胞凋亡,抑制增殖。其机制可能是通过抑制Her-2基因mRNA及蛋白的表达和通过抑制突变型p53蛋白的表达使细胞停滞于G1有关。     

维生素E琥珀酸酯联合紫杉醇对Her-2过表达乳腺癌细胞的诱导凋亡研究

背景与目的:维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)是天然维生素E的酯化衍生物,研究已证实其可诱导乳腺癌、前列腺癌、舌癌及肾癌等恶性肿瘤凋亡,却对正常细胞组织没有毒性作用.本实验以VES、紫杉醇单独及联合作用于Her-2过表达乳腺癌细胞,检测各组药物对乳腺癌细胞的诱导凋亡率.方法:免疫细胞化学法检测MDA-MB-453细胞Her-2蛋白表达水平.以VES、紫杉醇单独作用于MDA-MB-453细胞24、48 h,用TUNEL法检测细胞凋亡率,以浓度为10、20 mg/L的VES与浓度为50和100 nmol/L的紫杉醇组合,作用于MDA-MB-453细胞24、48 h,用TUNEL法检测不同组合的细胞凋亡率,比较各种组合对Her-2过表达乳腺癌细胞的诱导凋亡作用.结果:MDA-MB-453细胞Her-2表达率95%CI:63.32%～69.60%;YES与紫杉醇对MDA-MB-453细胞均有诱导凋亡作用,并成剂量和时间依赖关系,其中10mg/L VES联合100 nmol/L紫杉醇作用于MDA-MB-453细胞48 h对其的诱导凋亡作用最强.结论:VES和紫杉醇对MDA-MB-453细胞均有诱导凋亡作用,两药联合时诱导凋亡作用增强.     

维生素E琥珀酸酯诱导HER-2过表达乳腺癌细胞凋亡机制的研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对HER-2过表达乳腺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法测定VES对乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞增殖的抑制作用，应用Western blot法筛选HER-2过表达乳腺癌细胞系，同时检测VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中的表达水平，划痕实验与侵袭实验观察VES对乳腺癌细胞体外迁移能力的影响，流式细胞术检测VES对乳腺癌细胞凋亡的作用。结果:VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-453细胞中的表达明显高于在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达，VES作用于HER-2低表达乳腺癌细胞使其迁移及侵袭能力明显增强，却能够抑制HER-2高表达乳腺癌细胞的迁移及侵袭。VES以直接杀伤方式作用MDA-MB-231细胞，而对MDA-MB-453则以诱导细胞凋亡方式杀伤，VES使HER-2高表达乳腺癌MDA-MB-453细胞发生G1/G0期阻滞。结论:VES促进乳腺癌细胞凋亡是通过影响多条信号传导途径完成的，VES作用于不同HER-2表达乳腺癌细胞其迁移及侵袭能力明显不同，其机制与细胞表面蛋白表达有关。     

VES对MDA-MB-453细胞PI3K/Akt信号通路的影响

目的：检测维生素E琥珀酸酯（vitamin E succinate,VES）对MDA-MB-453乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路中PI3K及Akt表达的影响。方法：不同浓度VES作用于人乳腺癌细胞MDA-MB-453（Her-2过表达株）24h和48h,VES的浓度分别为5、10和20μg/ml。RT-PCR法检测VES作用前后PI3K及Akt的mR-NA表达变化。结果：VES对MDA-MB-453乳腺癌细胞PI3 K/Akt信号通路中PI3 K有抑制作用（P〈0.05）,并呈时间-剂量依赖关系;而对Akt无明显的抑制作用（P〉0.05）。结论：VES可能是通过作用于PI3K/Akt信号通路而发挥其对MDA-MB-453乳腺癌细胞的抑制及凋亡作用。     

小分子RNA干扰 MTA1基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物活性及相关蛋白表达的影响

目的:采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中转移相关基因(metastasis-associated gene 1,MTA1)的表达,并观察其对15-脂氧合酶-2(15-lipoxygenase-2,15-LOX-2)、p53及bcl-2表达的影响.方法:将shRNA-MTA1载体质粒稳定转染MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制情况,FCM法检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR和Western印迹法检测MTAl、15-LOX-2、p53及bcl-2 mRNA和蛋白表达情况.结果:shRNA-MTA1能明显降低MTA1基因在MDA-MB-231细胞中的表达量;抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,并使细胞被阻滞在G1期,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).转染shRNA-MTA1可使MDA-MB-231细胞中15-LOX-2和p53 mRNA及蛋白的表达明显增强(P<0.01),而 MTA1和bcl-2 mRNA表达明显减弱(P <0.01).结论:MTA1基因可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用可能与上调细胞中15-LOX-2和p53的表达,下调bcl-2的表达有关.     

RNAi干扰AP-2α对人乳腺癌细胞HER2表达及细胞增殖的影响

目的探讨RNAi干扰转录因子AP-2α对乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER2表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制MDA-MB-453细胞中AP-2α的表达,采用半定量RT-PCR和Western blot法,检测其对HER2表达的影响,采用MTT法测定细胞增殖情况。结果siRNA抑制AP-2α表达后,HER2 mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较MDA-MB-453细胞生长明显受抑制（P〈0.01）。结论AP-2αsiRNA可以下调乳腺癌细胞MDA-MB-453中HER2 mRNA及其蛋白的表达水平,抑制MDA-MB-453细胞的生长,提示AP-2α基因在乳腺癌细胞的发生、发展中具有重要作用,AP-2α可能是HER2过量表达乳腺癌的治疗靶点。     

VES诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡及其与Fas及TGF-β1表达的相关性分析

目的：研究维生素E琥珀酸酯（VES）诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,以及Fas和TGF-β1表达的变化。方法：MTT法和Annexin V法分别用于检测不同浓度VES处理人乳腺癌MDA-MB-453细胞后生长情况和细胞凋亡情况,流式细胞术检测凋亡率;免疫组化比较凋亡前后Fas及TGF-β1表达变化。结果：不同浓度VES处理的细胞在不同时间均受到不同程度的抑制,随VES剂量的增加,抑制作用增强。其中20 mg/LVES处理组在24 h后受到明显抑制,第4天抑制率即接近100%;10 mg/L VES处理组7 d后细胞生长被抑制89.87%。经VES处理后,Fas及TGF-β1表达率差异有统计学意义,P〈0.001。结论：VES可诱导HER-2高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡,其机制可能与Fas和TGF-β1上调有关。     

雌激素受体β1上调p21基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的将雌激素受体(ER)β1真核表达质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对p21基因表达和细胞增殖能力的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化;分别用实时聚合酶连锁反应(RT-PCR)、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、p21mRNA和蛋白表达的变化;细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。统计分析采用t检验和单因素方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、p21mRNA和p21蛋白水平明显增强(P0.010),细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率从1.4%升至6.14%(t=-7.960,P=0.001)。结论 ERβ1可以通过上调p21基因抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。     

MTDH基因下调抑制人乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖同黏附和迁移的研究

  目的  探讨MTDH基因对乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。  方法  采用RNA干扰技术, 下调乳腺癌MDA-MB-453细胞MTDH基因的表达.RT-PCR和免疫细胞化学技术检测MTDH下调效果.通过细胞增殖实验、黏附实验和迁移实验分别检测MTDH基因表达下调后细胞增殖、黏附和迁移能力的变化。  结果  MTDH-siRNA的转染效率达到90%, 转染48 11后实验组细胞MTDH的mRNA和蛋白质表达较对照组分别降低了45.8%和47.5%。MTDH表达下调后, 细胞增殖受到明显抑制, 48 h和72 h抑制率分别为41.5%和49.0%;细胞黏附力下降, 30min和60 imn黏附率较对照组分别降低42.0%和49.7%;细胞迁移能力显著降低, 迁移率下降33.3%。  结论  下调MTDH基因表达可明显抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞的增殖、黏附和迁移能力, 提示其在乳腺癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用。      

Celecoxib下调NF-kB信号通路促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的体外研究

背景与目的:Celecoxib可以抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡,但具体的作用机制尚不明确.本研究探讨Celecoxib是否通过阻断NF-kB信号途径诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡.方法:RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达.MTT法检测Celecoxib、PGE2与Celecoxib联合应用对MDA-MB-231细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期、凋亡的变化.Westernblot法检测0、40、80、120 μmol/L Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h后细胞中Caspase-3、p65蛋白的表达变化.结果:RT-PCR检测显示MDA-MB-231细胞中COX-2 mRNA的表达随着Celecoxib浓度的增加而逐渐降低.Celecoxib能够显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖(P<0.05),但Celecoxib联合PGE2与单独应用Celecoxib对细胞增殖的影响差异无统计学意义(P>0.05).流式细胞术结果显示Celecoxib可使MDA-MB-231细胞阻滞在G0/G1期,并可诱发细胞凋亡.Western blot检测发现Celecoxib作用MDA-MB-231细胞24 h,随着Celecoxib浓度的增加,Caspase-3蛋白表达增加,P65蛋白表达下调.结论:Celecoxib可以通过下调P65蛋白的表达从而阻断NF-kB信号途径,抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进其凋亡.     

Effect of interference of MTA1 by shRNA on the biological behaviors and expression of related proteins in breast cancer MDA-MB-231 cells北大核心

Objective: To silence the expression of metastasis-associated gene 1 (MTA1) in breast cancer cell line MDA-MB-231 by using short hairpin small interfering RNA (shRNA) and observe its effects on expression of 15-lipoxygenase 2 (15-LOX-2), p53 and bcl-2 proteins. Methods: The shRNA-MTA1 plasmid was stably transfected into MDA-MB-231 cells and the cell proliferation was evaluated using MTT assay. The cell cycle distribution and apoptosis were analyzed using flow cytometry. The mRNA and protein expression levels of MTA1, 15-LOX-2, p53 and bcl-2 were determined using RT-PCR and Western blotting, respectively. Results: shRNA-MTA1 significantly suppressed the expression of MTA1 gene in MDA-MB-231 cells, inhibited the proliferation, induced apoptosis, and arrested the cells in G1 phase. The difference was significant compared with control group (P < 0.01). Expression levels of 15-LOX-2 and p53 were significantly up-regulated but MTA1 and bcl-2 were significantly down-regulated in MDA-MB-231 cells in shRNA-MTA1 group compared with the blank control group and negative control group (P <0.01). Conclusion: Silencing MTA1 gene inhibited the proliferation and induced the apoptosis of MDA-MB-231 cells. This effect may be related with up-regulation of the expression of 15-LOX-2 and p53 and down-regulation of bcl-2.     

Ad-p53诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡作用

目的：观察重组人p53腺病毒（ p53-expressing adenovirus,Ad-p53）对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞生长、细胞周期、凋亡和p53表达的影响。方法：流式细胞仪检测Ad-p53作用于MDA-MB-231细胞72h后细胞凋亡率和细胞周期变化,Western blot法检测MDA-MB-231细胞p53蛋白表达。结果：经Ad-p53处理72h后倒置显微镜下MDA-MB-231细胞形态发生明显的变化。流式细胞术检测结果显示, Ad-p53作用MDA-MB-231后其细胞凋亡率与对照组相比明显增加,G0/G1期细胞比例逐渐升高,S期、G2/M期细胞比例相应减少（ P＜0.05）。Western blot证实了外源野生型p53基因能在MDA-MB-231细胞表达增加。结论：Ad-p53可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的生长,促进其凋亡,其机制可能是通过阻滞细胞周期以及野生型p53蛋白表达增加实现的。     

miR-6775-3p在乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：微小RNA（microRNA,miRNA）与肿瘤的发生、发展过程密切相关。探讨miR-6775-3p在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法：通过实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测4种乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453、MDA-MB-468和BT-549中miR-6775-3p的表达水平,选取miR-6775-3p表达水平最低的乳腺癌细胞系过表达miR-6775-3p后,采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法检测细胞的增殖情况,同时采用transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。通过RTFQ-PCR和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测miR-6775-3p过表达的乳腺癌细胞系中细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4（cyclin-dependent protein kinase 4,CDK4）和CDK6,以及侵袭转移标志物基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）17和MMP24 mRNA以及蛋白的表达变化。结果：RTFQ-PCR结果显示,乳腺癌细胞系MDA-MB-453中miR-6775-3p的表达最低,在MDA-MB-453细胞中转染miR-6775-3p mimics后,miR-6775-3p的表达水平明显升高（P<0.001）。CCK-8实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的增殖能力明显降低（P<0.01）。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,MDA-MB-453细胞过表达miR-6775-3p后,细胞的迁移（P<0.001）和侵袭能力（P<0.01）明显降低。RTFQ-PCR和Western blot实验结果显示,CDK4、CDK6及MMP17、MMP24的mRNA表达和蛋白水平均显著降低（P<0.01）。结论：miR-6775-3p可能抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

白藜芦醇对脂多糖诱导的人肺泡上皮细胞A549凋亡的保护作用机制

目的:探讨白藜芦醇对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的人肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡的影响。方法:用MTT法检测LPS对A549细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关信号通路蛋白的表达水平;实时荧光定量PCR和免疫荧光法分别在mRNA和蛋白水平检测其表达情况。结果:LPS能够以浓度梯度和时间梯度依赖的方式显著诱导肺癌细胞A549的凋亡,同时LPS能够升高细胞内活性氧的水平。Western blot结果表明LPS能够增加细胞内p53的表达水平并降低Bcl-2的表达。用白藜芦醇处理48h后,LPS所引起的细胞内活性氧水平升高的现象显著下降。Western blot结果表明白藜芦醇能够有效逆转LPS所引起的细胞内p53表达水平升高以及Bcl-2表达下降的情况。结论:白藜芦醇通过降低细胞内活性氧、p53水平以及升高Bcl-2水平对LPS所诱导的人肺泡上皮细胞A549凋亡起到保护作用。     

lncBRM对乳腺癌细胞生长的影响及作用机制

目的  探讨Brahma相关长链非编码RNA （long non-coding RNA for association with Brahma,lncBRM）对人乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-453）生长、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法 采用RT-PCR实验检测lncBRM在不同乳腺癌细胞（MCF-7、 ZR-75-30、BT474、MDA-MB-231和MDA-MB-453）和正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A中的表达;利用siRNA在MCF-7、MDA-MB-453细胞中敲低lncBRM,分别转染si-lncBRM质粒（si-lncBRM组）和空载质粒（si-Ctrl组）,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blot检测迁移相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达水平,并采用miRDB数据库预测lncBRM靶点。结果 lncBRM在不同乳腺癌细胞中的表达水平均高于正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A （P<0.01）。si-Ctrl组比较,敲低lncBRM可抑制MCF-7、MDA-MB-453细胞增殖能力（P<0.05）,提高细胞凋亡率（P<0.01）,细胞侵袭和迁移细胞数目较少（均P<0.01）;同时E-cadherin表达明显上调,而N-cadherin表达下调（均P<0.01）。miRDB数据库预测发现lncBRM和68个miRNAs存在结合位点,敲低lncBRM导致评分最高的前5个miRNA中的4个（miR-4646-5p、miR-204-3p、miR-204-5p和miR-6832-3p）表达上调。结论 lncBRM可能通过调控miRNAs的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移并诱导其凋亡。     

Potential role of p53 on metallothionein induction in human epithelial breast cancer cells

The expression and induction of metallothionein has been associated with protection against oxidative stress and apoptosis. This study examines the effect of tumour suppressor protein p53 on metallothionein expression following CdCl2 treatment in eight human epithelial breast cancer cell lines differing in p53 and oestrogen-receptor status. Cells were treated with 10 microM CdCl2 for 24 h and metallothionein protein levels were measured by cadmium binding assay. MCF7 cells which are p53-positive (p53+) and oestrogen-receptor-positive showed a large induction in metallothionein synthesis by 10.79+/-1.36-fold. Other breast cancer cell lines which are p53-negative (p53-) and oestrogen-receptor-negative or weakly oestrogen-receptor-positive showed a small induction ranging from 1.40+/-0.10 to 3.65+/-0.30-fold. RT-PCR analysis showed an induction of metallothionein mRNA in MCF7 cells by about 1.61+/-0.08-fold, while in HCC1806 cells (p53-, oestrogen-receptor-negative) by 1.11+/-0.13-fold, and in MDA-MB-231 (p53-, oestrogen-receptor-negative) by 1.25+/-0.06-fold. Metallothionein localisation was determined by immunohistochemical staining. Prior to metal treatment, metallothionein was localised mainly in the cytoplasm of MCF7 and MDA-MB-231 cells. After treatment with 10 microM CdCl2 for 24 h, MCF7 cells showed intense nuclear and cytoplasmic staining for metallothionein, while MDA-MB-231 cells showed staining in the cytoplasm with weak nuclear staining. Apoptosis induced by 10-40 microM CdCl2 at time points between 4 and 48 h was examined with TUNEL assay. In MCF7 cells, apoptosis increased with higher concentrations of CdCl2, it peaked at 6-8 h and appeared again at 48 h for all concentrations of CdCl2 tested. In MDA-MB-231 cells, apoptosis remained at low levels for 10-40 microM CdCl2 at all time points. Studies on cadmium uptake showed similar uptake and accumulation of cadmium at 8 and 24 h in all the cell lines. The data demonstrate that treatment of epithelial breast cancer cells with 10 microM CdCl2 for 24 h caused a greater induction of metallothionein protein and mRNA expression in p53+ and oestrogen-receptor-positive cells as compared to p53- and oestrogen-receptor-negative or weakly oestrogen-receptor-positive cells. This effect may be associated with the occurrence of apoptosis and suggests a role for p53 and oestrogen-receptor on the expression and induction of metallothionein in epithelial cells.