PCR-酶标板杂交比色法检测结核分枝杆菌

目前在传染性疾病中 ,结核病仍然是主要致病和死亡原因之一 ,威胁公众健康。随着HIV蔓延 ,多重耐药菌株产生 ,以及世界人口流动增强 ,其发病率有上升趋势〔1〕。MTB检测方法很多 ,其中以PCR方法较为灵敏。常规凝胶电泳检测PCR产物结果主观性强 ,存在溴化乙啶污染及非特异条带影响 ,膜相杂交检测虽然可提高特异性 ,但操作繁琐。本研究采用酶标板杂交比色法检测PCR产物 ,并取得了满意结果。1　材料与方法1 1　痰标本　 1 2 6例活动性肺结核患者 ,各取晨痰 1ml,其中涂片阳性 2 7例 ,涂片阴性 99例。活动性肺结核患者根据病史、临床表现…     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌及其耐药基因的突变

目的探讨PCR-反向斑点杂交技术用于检测结核分枝杆菌及其耐药基因突变的效果,了解绍兴地区结核分枝杆菌耐药基因的突变情况。方法根据结核分枝杆菌基因特征,运用反向斑点杂交技术构建特异性的PCR反应体系,并用10株非结核分枝杆菌、3株其他菌株（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌）和1株H37Rv结核分枝杆菌对该反应体系进行验证,同时用该体系对来源于绍兴市立医院的125份抗酸杆菌涂片阳性痰液样本及150株结核分枝杆菌进行5种耐药突变基因（rpoB、katG、inhA、embB、rpsL）的检测。结果构建的PCR-反向斑点杂交体系用于10株非结核分枝杆菌、3株其他菌株的检测结果均为阴性,H37Rv标准株可检出,但未检出耐药突变位点。275份结核分枝杆菌样本中对4种抗结核药物均敏感的菌株有201份（73．1％）,单药耐药20份（7．3％）,耐多药54份（19．6％）;共检出133个耐药突变位点,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的耐药突变位点数分别为41个、51个、30个、11个;前5位突变位点为315M、43M、S531L、15M和H526Y。结论绍兴地区耐药结核分枝杆菌以耐多药为主。构建的PCR．反向斑点杂交体系用于检测结核分枝杆菌特异性强、灵敏度高,可快速检测结核分枝杆菌的耐药基因。     

结核分枝杆菌耐药性的研究

目的通过对锦州市传染病医院临床痰标本结核分枝杆菌耐药率的分析,了解锦州地区结核分枝杆菌的耐药状况指导合理用药。方法取锦州市传染病医院2012年7月-2013年7月抗酸杆菌培养阳性的菌株500株,采用绝对浓度法进行4种抗结核药物的敏感性试验。结果在500株结核分枝杆菌中,278株对4种抗结核药物皆敏感,222株至少对一种药物敏感,结核菌的总耐药率为44．4％（222／500）。仅对一种抗结核药物耐药的菌株56株,总的耐单药率为11．2％。结论锦州市地区结核分枝杆菌对4种一线抗结核药物的耐药情况严重,应当引起相关医疗部门重视。     

PCR-SSCP银染法检测结核分枝杆菌rpsL基因突变

目的 探讨结核分枝杆菌对链霉素（SM）的耐药分子机制,建立快速、准确的SM耐药性检测方法。方法 应用PCR－SSCP银染分析技术,检测87例结核分枝杆菌临床分离株链霉素耐药性及rpsL基因变异情况,以结核分枝杆菌H37Rv标准株做对照。结果 25株对SM敏感的临床分离株rpsL基因未见异常,62株耐SM的临床分离析中48株rpsL基因SSCP分析结果异常。结论 rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,PCR－SSCP技术可以快速、准确地检测结核分枝杆菌对SM的耐药性。     

许昌市363株结核分枝杆菌耐药性和菌型分析

目的 分析河南省许昌市363株结核分枝杆菌对9种抗结核药物的耐药和菌型分析,为结核病防治工作提供参考依据。方法 收集2016 - 2017年许昌市结防机构分离培养的363株结核分枝杆菌分离株,采用比例法进行9种抗结核药物（INH、RFP、SM、EMB、OFX、KM、CPM、PTO、PAS）敏感试验和菌群鉴定试验。耐药率的比较采用χ2检验。结果 363株结核分枝杆菌总耐药率、单耐药率和耐多药率分别为24.24%（88/363）,11.85%（42/363）,7.44%（27/363）;获得性耐药率明显高于初始耐药率,两者差异有统计学意义（χ2 = 38.496,P＜0.001 ）;9种药物耐药顺位为SM 14.33%（52/363）＞INH 12.12%（44/363）＞RFP 10.47%（38/363）＞OFX 4.96%（18/363）＞EMB 3.03%（11/363）＞CPM 1.93%（7/363）＞PAS 0.83%（3/363）＞KM 0.55%（2/363）＞PTO 0.28%（1/363）;共出现了11种耐多药谱类型;结核病分枝杆菌以人结核分枝杆菌为主,人结核分枝杆菌耐药率（30.71%,82/267）高于牛结核分枝杆菌（6.25%,6/96）,两者差异有统计学意义（χ2 = 23.007,P＜0.001）。结论 许昌市结核病总耐药率低于全国耐药水平,而耐多药率高于全国水平。复治患者耐药率仍然比较高,因此耐药结核病防治工作成为今后许昌市结核病防治工作的重点。     

679株结核分枝杆菌药敏结果分析

目的:了解衢州地区结核分枝杆菌耐药情况,指导临床医生合理选择抗结核药物和制定个性化的治疗方案。方法:采用比例法对694株痰培养阳性菌株进行一线抗结核药物异烟肼(INH)、利福平(REF)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)和二线药物卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFX)的耐药性检测,利用鉴别培养基对分枝杆菌进行初步菌种鉴定。结果:679株结核分枝杆菌药敏的总耐药率21%,耐多药率5.2%,六种抗结核药物的耐药情况分别是异烟肼12.67%,链霉素10.46%、氧氟沙星7.95%、利福平6.19%、乙胺丁醇2.36%、卡那霉素2.06%.复治病人的总耐药率、耐多药率和单药耐药率明显高于初治病人。结论:应加强肺结核初治病人的规范化治疗,加大对复治结核病人的治疗和管理,预防耐药病人尤其是耐多药病人的产生和传播。     

丽水市结核分枝杆菌5种耐药基因突变分析

目的:了解丽水市结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG、embB、rpsL和gyrA突变特点。方法:采用PCR-DNA直接测序法,对47株结核菌分离株5个耐药相关基因主要耐药位点突变进行分析。结果:药敏试验共获得耐药结核菌18株,总耐药率为38.30%;序列分析13株存在一个或多个突变位点,未发现碱基的插入或缺失,突变率为27.66%,二者吻合率72.22%。结论:丽水市结核杆菌趋向于耐多种药物,与多个基因突变相关。点突变是本地区结核菌产生耐药性的主要形式。     

用PCR-限制性长度多态性鉴定结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌

目的通过PCR和限制性长度多态性分析,建立鉴定分枝杆菌的PCR-限制性长度多态性分析方法 ,为早期诊断结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)病提供新的工具。方法设计分枝杆菌属特异性通用引物,用MspⅠ对PCR产物进行限制性酶切,对酶切结果进行聚类分析,建立鉴定分枝杆菌的PRA方法。结果本实验所设计的一对引物具有良好的通用性和特异性,PRA法鉴定98株分枝杆菌的结果与传统鉴定法完全一致,其灵敏度、特异度和准确度均为100%,方法学评价指标结果达到诊断性实验的要求。结论 PRA法快速灵敏,可直接检测标本中的分枝杆菌而无需培养增菌,其成本低廉、结果准确,不会因耐药突变而影响结果判断。     

宁波市不同年龄段结核分枝杆菌耐药性研究

目的分析不同年龄组结核分枝杆菌耐药情况,探讨当前结核病耐药性发展趋势。方法根据年龄将1 118例肺结核患者分为青年组(18~39岁),中年组(40~59岁)和老年组(≥60岁);采用WHO/IUATLD规定的1%比例法进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)、乙胺丁醇(E)4种抗结核药物的耐药性测定。结果青年组、中年组、老年组初始耐药率分别为30.6%、32.2%、23.3%,获得性耐药率分别为72.2%、63.3%、36.1%,各组间差异均无显著性(P>0.05)。青年组与老年组初始耐药频度从高到低依次为S、H、R、E,中年组为H、S、R、E。中年组耐R最高为9.4%。中、老年组获得性耐药顺序均为H、R、S、E,青年组为H、S、R、E。青年组耐R最高为44.3%。初始及获得性耐多药率均以中年组最高,分别为6.5%和38.3%。结论不同年龄组初始及获得性耐药均有所不同,须加强不同年龄组耐药率的监测,完善现行的结核病防治策略。     

嘉兴市肺结核病耐药监测

目的　了解嘉兴市肺结核病人耐药状况。方法　对痰涂片阳性的新发初治肺结核病人和复治病人进行痰结核分枝杆菌培养 ,阳性菌株采用比例法进行 4种抗结核药物耐药性测试。结果　 118例痰培养阳性肺结核病人总耐药率为 14 41% ,其中初始耐药率 10 10 % ,获得性耐药率为 3 6 84%。对 4种抗结核物的耐药率依次为异烟肼 10 17%、链霉素 5 93 %、利福平 5 0 8%、乙胺丁醇 0 85 %。结论　应用现行短程化疗方案进行全程规则治疗 ,总治愈率 88 14 % ,对抗结核药敏感病例治愈率 91 0 9% ,耐药病例治愈率 70 5 9% ,耐多药病例治愈率仅为 5 0 0 0 %。     

结核分枝杆菌耐多药情况分析

目的：评估上海市近年来耐多药结核病（MDR—TB）发生情况。方法：对本市2749株结核分枝杆菌耐药性测定结果进行分析。结果：共查出234株耐多药菌株，其中新发病。组156株（6．8％），复治病人组35株（18．9％），外地病人组43株（15．8％）。234株耐多药菌株中，耐2药133株（56．8％），耐3药66株（28．2％），耐4药35株（15．0％）。耐2药菌株中，以HR耐药为主，占27．8％。耐3药菌株中，以HRS耐药为主，占66．7％。复治病人和外地病人组的耐多药率显著高于新发病人组，P＜0．01。结论：必须加强对复治病人和外地病人的管理和治疗。     

2012-2015年长沙地区肺结核患者结核分枝杆菌耐药状况分析

摘要:目的 了解长沙地区结核分枝杆菌耐药情况。方法 分析某院2012年1月至2015年10月分离的6 198株结核分枝杆菌对9种抗结核药物的耐药情况。结果 6 198株结核分枝杆菌复合群菌株耐药率顺位前5位依次为INH(14.18％)、RFP(13.57%)、SM(12.31％)、EMB(3.87%)、OFLX(2.60%);总耐药率为20.56%,耐多药占9.31%,多耐药占4.52%,广泛耐药占0.45%;除2012年20岁以下年龄组女性耐药结核菌的检出率略高于男性外,其余年份各年龄组男性均高于女性;复治患者的耐药率(24.76%)高于初治患者(19.49%),两者差异有统计学意义(χ2=176.21,P<0.001）;结论 院结核分枝杆菌耐药率总体低于全国第五次结核病流行病学调查结果,但耐多药率高于全国水平,耐药状况仍然严峻。     

鄞州区结核分枝杆菌耐药性研究

目的了解鄞州区肺结核患者结核分枝杆菌的耐药水平,为本区的结核病诊治提供参考依据。方法对鄞州区疾病预防控制中心2008—2009年收集的结核分枝杆菌用WHO推荐的比例法进行异烟肼(H)、利福平(R)、链霉素(S)和乙胺丁醇(E)的耐药性检测。结果 299例初复治患者的痰培养分离的结核分枝杆菌,总耐药率为30.77%,初始耐药率和获得性耐药率分别为27.48%和54.05%;耐多药率为6.69%,其中初始和获得性耐多药率分别为4.20%和24.32%。4种抗结核药物的耐药率由高到低分别为异烟肼(19.40%)、链霉素(16.05%)、利福平(9.36%)和乙胺丁醇(6.02%)。不同性别、年龄、户籍的耐药率差异无统计学意义。结论鄞州区结核病耐药形势依然严峻,应继续加强结核病的防治工作。     

衢州市2010年371株结核分支杆菌耐药状况分析

目的：了解衢州市2010年结核分枝杆菌的耐药状况,为结核病的临床诊治和控制提供参考依据。方法：采用WHO推荐的药敏比例法对371株临床分离的结核分支杆菌进行药物敏感性试验。结果：总耐药率为24%,耐多药率为6.7%;对异烟肼与链霉素的耐药率较高,分别为15.4%、11.9%。结论：衢州市结核杆菌的耐药趋势仍然严峻,相关卫生部门应引起重视。     

嘉兴市２７７株结核分枝杆菌耐药性监测分析

摘要：目的　了解结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药性,初步评价嘉兴市近年来结核病的耐药趋势。
方法　对嘉兴市第一医院２００９－２０１１年期间的结核病患者培养阳性菌株进行菌群鉴定及采用比例法对４种
一线抗结核药物异烟肼（Ｈ）、利福平（Ｒ）、链霉素（Ｓ）、乙胺丁醇（Ｅ） 进行药物敏感性测定,用ＳＰＳＳ
１７．０统计软件进行χ
２ 检验,分析结果。结果　本研究共纳入结核分枝杆菌２７７株,总耐药率为２７．０８％,
耐多药率为１１．１９％;初治患者和复治患者耐药率分别为１７．６２％和５６．７２％,耐多药率６．１９％和２６．８７％,
两者差异均有统计学意义（χ
２＝４．９６,犘＝０．０２６;χ
２＝２１．８５,犘＜０．０１）。结论　嘉兴市结核分枝杆菌的
耐药情况依然严峻,尤其复治患者,在制定结核病防控策略时应给予充分重视,加强对复治肺结核患者高
质量的全程监督短程化疗。
关键词：结核分枝杆菌;耐药性;分析
中图分类号：Ｒ３７８．９１＋１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９ ６６３９ （２０１４）０６ ０５５０ ０３     

兰州地区结核分支杆菌耐药性分析

目的 分析兰州地区2005～2007年结核分支杆菌耐药情况,为结核病的防治提供科学依据.方法 利用比例法对215株菌株进行药物敏感性检测,用SPSS 11.0进行统计分析.结果 兰州地区结核分支杆菌总耐药率为47.51％,耐多药率4.75％,低于2001～2004年统计结果,原发性耐药占耐药菌株总数的55％,获得性耐药率为46.59％.结论 兰州地区结核病患者结核分枝杆菌耐药率有所下降,但结核病传染源的控制、结核病防治宣教及结核病短程化疗(DOTS)健康教育和促进工作都需进一步加强.     

青海地区结核分枝杆菌快速检测及耐药特征研究

目的探讨青海地区耐药结核分枝杆菌(MTB)的相关基因型特点,为开展耐药结核病快速诊断提供依据。方法选择2011年6月-2012年12月西宁市区、农村和农牧区结核病患者的MTB标本各300份,采用MTB微量最低抑菌浓度(MIC)法对耐药结核病进行快速诊断,同时用传统的罗氏药敏法作为对照,采用测序方法分析耐药MTB在不同人群中的分布率,了解青海地区MTB耐药的基因突变特征,基因突变分布和主要流行突变位点。结果西宁市区与农牧区单一耐药及多耐药MTB耐药率比较,牧区明显高于西宁市区和农村,差异有统计学意义(P<0.05);rpoB、katG、gyrA突变率西宁市区分别为52.83%、52.83%、37.74%,农村分别为70.97%、62.90%、45.16%,牧区分别为92.55%、86.17%、81.91%,牧区的基因突变率与西宁市区、农村比较,差异有统计学意义(P<0.05);利福平最常见的突变位点为drpoB(531)占43.66%,异烟肼最常见的突变位点为katG(315),占61.27%;氧氟沙星最常见的突变位点为gyrA占59.52%。结论对青海地区耐药结核分枝杆菌的耐药特征有了进一步了解,为临床医师治疗结核病合理选药提供了依据。     

2008-2010年结核分枝杆菌的耐药性分析

目的了解2008-2010年结核患者分离出的结核分枝杆菌对常用抗结核药物的耐药性变迁。方法采用罗氏培养系统进行结核分枝杆菌培养,药敏试验采用绝对浓度法,回顾性分析天津市海河医院分离的455株痰结核分枝杆菌的耐药性。结果 455株结核分枝杆菌对链霉素、左氧氟沙星、利福平、乙胺丁醇、异烟肼、阿米卡星、对氨基水杨酸的总耐药率分别为29.2%、24.6%、23.1%、18.2%、18.5%、13.4%、9.2%。结论结核分枝杆菌的耐药率仍然较高,规范、足量、联合用药,是减缓耐药率的主要途径。     

TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测痰结核分枝杆菌异烟肼耐药效果的评价

目的评价通过检测结核分枝杆菌katG基因突变以诊断异烟肼耐药并检测结核分枝杆菌的TaqMan-MGB荧光定量PCR方法。方法收集临床诊断为肺结核病的患者痰样本,用已建立的荧光PCR方法进行检测,与常规痰涂片抗酸染色、分枝杆菌培养和传统比例法药敏试验比较,评价检测结核分枝杆菌敏感性和特异性及异烟肼耐药的特异性和敏感性。统计学分析采用χ2检验,P值<0.05为差异有统计学意义。结果荧光定量PCR共检测186份痰液样本,敏感性为84.47%,特异性为100.00%。在确诊病人的痰液中阳性检出率84.47%,明显高于痰涂片40.99%(χ2=46.44,P<0.01),痰培养40.37%(χ2=47.89,P<0.01),且差异有统计学意义。其中荧光PCR在菌阳痰液中检出率94.44%,涂阴培阴的痰液中检出率75.28%。与常规药敏试验结果比较,培养阳性的61份痰样本的药敏符合率96.72%(59/61),敏感性33.33%(1/3),特异性100.00%(58/58)。结论 TaqMan-MGB荧光定量PCR的方法能特异、灵敏、快速诊断痰液中的结核分枝杆菌及其异烟肼耐药性。