SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:在TCGA及PROGgene在线数据库中分析SGPL1在神经胶质瘤临床肿瘤组织及正常神经组织中的表达差异,并分析其表达与神经胶质瘤预后生存的关系;在神经胶质瘤细胞系U251和U87中分别敲降和过表达SGPL1,通过RT-qPCR和Western blot实验分别检测SGPL1的mRNA和蛋白表达水平;用CCK-8法、细胞克隆形成实验检测SGPL1敲降和过表达后细胞增殖变化;通过流式细胞术和caspase3/7酶活性试剂检测分析细胞凋亡变化,Western blot实验检测caspase3、PARP及CyclinD1等凋亡相关蛋白的表达;ELISA检测细胞内S1P含量;RT-qPCR检测S1PR5的表达水平;RNA-seq分析SGPL1在神经胶质瘤细胞中调控的信号通路;Western blot实验检测SGPL1敲降和过表达后Phospho-p38-MAPK、Phospho-ERK、Phospho-STAT3及Phospho-NF-κB(p65)的表达变化。结果:TCGA及PROGgene在线数据库分析表明SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与神经胶质瘤患者的预后生存成负相关。在U251中敲降SGPL1后细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加;在U87细胞中过表达SGPL1后能显著促进细胞的增殖能力。SGPL1表达对S1P信号通路无明显影响;RNA-seq结果表明SGPL1在神经胶质瘤细胞内调控细胞增殖死亡信号通路,SGPL1敲降和过表达可影响p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号的变化。结论:SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与生存预后负相关。在神经胶质瘤细胞内SGPL1可调控p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号通路,其表达可影响神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡,可能是一个潜在的肿瘤标志物和治疗的分子靶点。     

NF-κB在幽门螺杆菌诱导胃癌发展及治疗中的作用研究进展

胃癌(gastric cancer, GC)是全球发病率第五位的肿瘤,2020年世界范围内胃癌死亡人数为768 793人,占总癌症死亡人数的7.7%。我国是胃癌的高发病率国家,总体生存率低,治疗预后差,对人民身体健康和国家经济发展造成重大影响。人类病原体幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)感染是导致胃癌发病的重要因素之一,其主要定植在胃上皮细胞,与多种胃部疾病相关,通过脂多糖、二磷酸腺苷庚糖或毒力因子诱导经典和替代核因子kappa B(NF-κB)信号通路。NF-κB是细胞内的重要转录因子,参与调控多种生理活动,通过调节炎性反应、细胞增殖、转移和侵袭、细胞凋亡等相关基因的表达影响胃癌的发生和发展。本文综述了NF-κB参与幽门螺杆菌诱导胃癌进程的相关机制并回顾了靶向NF-κB信号通路的天然产物,旨在为胃癌的发病机制和诊断治疗提供更多参考。     

Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨Rab11调控膀胱癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法:用Western blot方法检测膀胱癌BIU-87、T24、RT4、5637细胞系中Rab11的内源表达量。在BIU-87（Rab11低表达）和T24（Rab11高表达）细胞系中分别转染Rab11过表达质粒和Rab11 siRNA。用荧光素酶报告实验检测转染后细胞内的NF-κB信号通路的活性,通过Western blot技术分析与NF-κB信号通路相关蛋白p-IκB的变化情况。用NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系,通过Western blot检测细胞系中细胞周期相关因子cyclin D1和侵袭相关因子MMP9蛋白的变化。结果:转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系中NF-κB活性水平提高,p-IκB表达量显著提高;而敲除Rab11后NF-κB活性受到抑制,p-IκB的表达受到抑制,而p-IκB与NF-κB信号通路的活性呈正相关。NF-κB抑制剂Bay 11-7082阻遏了Rab11诱导cyclin D1和MMP9表达上调的过程。结论:Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭。     

miR-224-5p靶向调控KIF23通过NF-κB信号通路影响宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探索微小RNA-224-5p(miR-224-5p)对驱动蛋白超家族23(KIF23)的靶向关系及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用实时定量PCR(qPCR)检测正常宫颈细胞(H8)和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、MS751、HT-3)中miR-224-5p和KIF23 mRNA表达,选择miR-224-5p表达量最低的HeLa细胞开展后续研究。在HeLa细胞中转染si-KIF23或miR-224-5p,探讨敲减KIF23或过表达miR-224-5p对HeLa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blot)检测KIF23、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)和NF-κBp65蛋白水平;生物学信息预测和双荧光素酶报告基因实验分析miR-224-5p和KIF23之间的靶向关系;共转染si-KIF23和anti-miR-224-5p,观察miR-224-5p低表达对敲减KIF23诱导的HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和NF-κB信号通路活化的影响。结果:miR-224-5p在SiHa、HeLa、MS751、HT-3细胞中表达下调(P<0.05),KIF23 mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。敲减KIF23或过表达miR-224-5p显著降低HeLa细胞存活率、细胞迁移数和侵袭数,并显著抑制CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平(P<0.05)。另外,敲减KIF23显著降低细胞中NF-κBp65表达量(P<0.05)。miR-224-5p靶向调控KIF23表达。miR-224-5p低表达可以逆转敲减KIF23抑制HeLa增殖、迁移、侵袭及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达的作用,以及逆转敲减KIF23抑制NF-κB信号通路活化的作用。结论:miR-224-5p靶向调控KIF23并通过NF-κB信号通路抑制宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

NF-κB与结直肠癌

核因子κB（nuclear factor- κB, NF-κB）是一种重要的核转录因子,在调控细胞周期、凋亡和代谢等生理过程中发挥重要作用;然而,NF-κB在人类多种恶性肿瘤中过表达,在肿瘤的发生、发展和免疫炎症反应中也起着重要的调控作用。在结直肠癌中NF-κB同样呈高表达,且呈激活状态。NF-κB信号通路被激活后,NF-κB转入细胞核内,通过与下游靶基因结合,促进目的基因的转录,从而调控目的蛋白的表达,并介导多条信号通路,促进肿瘤细胞血管生成、增加肿瘤细胞增殖、抗凋亡和促进肿瘤细胞的侵袭、迁移和转移能力,以及对放化疗的抵抗,甚至诱导肿瘤细胞获得干性等恶性表型。研究表明,NF-κB过表达的结直肠癌患者病情进展较快,生存时间较短,NF-κB可作为结直肠癌患者疗效监测和预后监测的一个生物标志物,针对NF-κB及其信号通路的分子靶向治疗为结直肠癌患者治疗提供潜在的策略。     

姜黄素增强人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1放射敏感性的研究

目的 研究姜黄素对人乳头瘤状甲状腺癌细胞TCP-1放射敏感性的影响,并探索姜黄素可能作用的信号通路,为甲状腺癌放射增敏剂的开发提供新的思路。方法 使用姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1,CCK-8法检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,western blot检测p50、p65、凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达变化。使用NF-κB信号通路抑制剂PDTC抑制NF-κB信号通路活性,检测细胞增殖、克隆形成和凋亡变化。结果 姜黄素和放射性碘处理人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1后,细胞增殖率下降,克隆形成减少,凋亡上升,凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,促凋亡蛋白Bax表达上调,并呈浓度依赖性。这些结果表明姜黄素可增加TPC-1细胞的放射敏感性。碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路活化,姜黄素可以抑制碘放射后TPC-1细胞NF-κB通路的激活。使用抑制剂抑制NF-κB通路的活性,细胞增殖下降,克隆形成减少,凋亡上升,放射敏感性升高。结论 姜黄素可能靶向NF-κB信号通路,通过抑制NF-κB信号通路活性调节甲状腺癌细胞的放射敏感性。     

NF-κB信号通路在食管鳞癌细胞系中的激活

目的核转录因子NF-kappaB(NF-κB)是一种重要的转录因子,参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。本研究拟通过检测NF-κB信号通路在食管鳞癌细胞系中是否存在,分析NF-κB在食管鳞癌细胞中的激活状态及其对食管鳞癌细胞的生存及转化作用。方法采用免疫细胞化学法和Western blotting法检测两株食管鳞癌细胞系中NF-κB亚单位p50和p65,阻遏物IκBα及其上游激酶IKKβ的蛋白表达。并采用EMSA法检测两株食管鳞癌细胞核中NF-κB与DNA的结合活性。结果食管鳞癌细胞中存在激活的NF-κB信号通路,p50、p65、IκBα及其上游激酶IKKβ的蛋白在细胞质中均表达,并且p50/p65在细胞核中具有较高的DNA结合活性。结论本研究发现NF-κB信号通路在两种食管鳞癌细胞系被激活,提示激活的NF-κB信号通路可能在食管鳞癌发生中起重要作用。     

TNF-α通过NF-κB信号通路调控宣威肺癌恶性生物学行为

摘 要：［目的］ 探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）通过影响核因子-κB（NF-κB）信号通路对宣威肺癌恶性生物学行为的调控。［方法］ ELISA检测临床收集宣威肺癌、非宣威肺癌及正常人血清样本中TNF-α水平。RT-qPCR、Western blot检测人支气管上皮样细胞16HBE、人肺腺癌细胞A549及宣威肺癌细胞XWLC-05中TNF-α;CCK-8检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;Transwell检测细胞迁移能力;Western blot检测NF-κB经典及非经典信号通路相关蛋白水平。［结果］ TNF-α在宣威肺癌患者血清及细胞中显著性高表达,差异均有统计学意义（P<0.05）。沉默TNF-α不仅阻滞细胞周期、抑制细胞增殖及迁移,并促进凋亡（P<0.05）;也抑制NF-κB经典信号通路。XWLC-05被外源性TNF-α促进的恶性生物学行为可被NF-κB信号通路抑制剂扭转（P<0.05）。［结论］ TNF-α通过激活NF-κB经典信号通路促进宣威肺癌细胞恶性生物学行为。     

QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷（AS）诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞）,采用慢病毒转染的方式,构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷＋QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时,加入40 μmol/L 亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO2同等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理。采用细胞计数（CCK-8）检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较,砷处理组增殖率比例明显降低（P<0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较,砷处理组总凋亡率比例明显升高（P＜0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较,砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高,Bax的蛋白表达水平较低（P＜0.05）。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中,QRICH1通过调节NF-κB p65的表达,进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。     

胃癌细胞中COX-2通过NF-κB/Snail调控E-cadherin表达的机制

目的 探讨COX-2调控E-cadherin表达的相关信号通路及分子机制,揭示COX-2与胃癌侵袭转移的关系及作用机制.方法 采用不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞来昔布干预人胃癌细胞株SGC-7901不同时间后,应用实时荧光定量RT-PCR法和Western blot法检测SGC-7901细胞中COX-2、NF-κB、Snail及E-cadherin mRNA和蛋白的表达情况.结果 随着塞来昔布作用剂量的增大和干预时间的延长,COX-2、NF-κB和Snail mRNA及蛋白的表达量均显著下降(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性降低;E-cadherin mRNA及蛋白的表达量上升(P＜0.05),呈剂量和时间依赖性升高.采用Spearman相关分析,显示COX-2与NF-κB及COX-2与Snail蛋白表达呈正相关性(r =0.881,P＜0.01;r =0.839,P＜0.01);COX-2与E-cadherin蛋白表达呈负相关性(r=-0.814,P＜0.01).结论 COX-2可能通过NF-κB/Snail信号通路调控E-cadherin的表达,进而参与胃癌的浸润转移过程.     

敲减lncRNA RP1-261G23.7抑制胶质瘤细胞增殖和迁移及其机制探讨北大核心

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)RP1-261G23.7对人胶质瘤细胞增殖及迁移的影响及可能的调控机制。方法:采用GEPIA数据库分析RP1-261G23.7在胶质瘤组织中的相对表达。采用qRT-PCR检测RP1-261G23.7在4种胶质瘤细胞系(U87MG、SNB-19、U251、LN382)中的相对表达。采用Lipofectamine3000向胶质瘤细胞U87MG中单独转染si-RP1-261G23.7质粒(si-RP1-261G23.7组)和si-NC对照质粒(si-NC组)。采用CCK-8实验和细胞划痕实验检测转染后U87MG细胞的增殖及迁移能力。采用生物信息学、qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验研究RP1-261G23.7和miR-525-5p表达的关系。Western blotting检测NF-κB信号通路蛋白的表达。结果:与正常组织相比,RP1-261G23.7在胶质瘤组织中表达上调(P<0.01)。与人脑星型胶质正常细胞系(HEB)相比,RP1-261G23.7在四种胶质瘤细胞系中表达均上调(P<0.01),U87MG细胞中RP1-261G23.7相对表达量最高(P<0.01)。与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7显著抑制了U87MG细胞的增殖(P<0.05)和划痕愈合(P<0.01)。RP1-261G23.7能够直接互补结合miR-525-5p(P<0.01)。与si-NC组相比,敲减RP1-261G23.7表达显著促进了U87MG细胞中miR-525-5p的表达(P<0.01),NF-κB信号通路蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论:胶质瘤组织和细胞系中RP1-261G23.7表达明显上调,敲减RP1-261G23.7通过促进miR-525-5p表达、干扰NF-κB信号通路活化,抑制胶质瘤U87MG细胞的增殖和迁移,可能为胶质瘤的靶向治疗开辟新的路径。     

HKDC1 upregulation promotes glycolysis and disease progression,and confers chemoresistance onto gastric cancer

There is increasing evidence that hexokinase is involved in cell proliferation and migration. However, the function of the hexokinase domain containing protein-1 (HKDC1) in gastric cancer (GC) remains unclear. Immunohistochemistry analysis and big data mining were used to evaluate the correlation between HKDC1 expression and clinical features in GC. In addition, the biological function and molecular mechanism of HKDC1 in GC were studied by in vitro and in vivo assays. Our study indicated that HKDC1 expression was upregulated in GC tissues compared with adjacent nontumor tissues. High expression of HKDC1 was associated with worse prognosis. Functional experiments demonstrated that HKDC1 upregulation promoted glycolysis, cell proliferation, and tumorigenesis. In addition, HKDC1 could enhance GC invasion and metastasis by inducing epithelial–mesenchymal transition (EMT). Abrogation of HKDC1 could effectively attenuate its oncogenic and metastatic function. Moreover, HKDC1 promoted GC proliferation and migration in vivo. HKDC1 overexpression conferred chemoresistance to cisplatin, oxaliplatin, and 5-fluorouracil (5-Fu) onto GC cells. Furthermore, nuclear factor kappa-B (NF-κB) inhibitor PS-341 could attenuate tumorigenesis, metastasis, and drug resistance ability induced by HKDC1 overexpression in GC cells. Our results highlight a critical role of HKDC1 in promoting glycolysis, tumorigenesis, and EMT of GC cells via activating the NF-κB pathway. In addition, HKDC1-mediated drug resistance was associated with DNA damage repair, which further activated NF-κB signaling. HKDC1 upregulation may be used as a potential indicator for choosing an effective chemotherapy regimen for GC patients undergoing chemotherapy.     

LRRK2在乳腺癌细胞增殖和耐药中的作用及其机制研究

目的:探讨LRRK2在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌细胞增殖、凋亡及耐药的作用和分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测了48例乳腺癌组织及其配对正常组织中LRRK2表达;并检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A、乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、BT-483及阿...     

肾癌中PPARα通过IKK改变NF-κB信号通路活性的实验研究

目的:观察对舒尼替尼耐药的肾癌细胞系(A498、Caki-1、786-O)中PPARα调控NF-κB信号通路活性的作用机制。方法:首先培养对舒尼替尼耐药的三种肾癌细胞系(A498、Caki-1、786-O),上调和下调PPARα的表达后,用Western blot法和荧光素酶法,分别检测耐药和敏感细胞系中NF-κB p65的表达水平以及NF-κB 活性。用RT-PCR和Westen blot法分别检测空白对照组和NF-κB+SN50（信号通路抑制组）中,PPARα 的 mRNA 和蛋白表达水平。在稳定过表达PPARα和低表达PPARα时用Westen blot法分别检测耐药细胞株(A498)中IKK,P-IKK,P-NF-κB p65蛋白的表达水平。结果:舒尼替尼耐药的肾癌细胞系中,下调PPARα,抑制NF-κB p65的表达。抑制NF-κB信号通路,PPARα表达变化未出现显著性差异。上调PPARα基因表达,IKK、P-IKK、P-NF-κB p65蛋白的表达显著性升高。结论:PPARα 可能通过改变上游基因IKK的表达来调控NF-κB 信号通路活性。     

NF-κB inhibition in human hepatocellular carcinoma and its potential as adjunct to sorafenib based therapy

Nuclear factor-kappaB (NF-κB) has been shown to play an important role in the development and progression of cancer. In this study, we systematically examined NF-κBp65 signaling pathway in both human hepatocellular carcinoma (HCC) tissue and HCC cell lines. NF-κBp65 signaling pathway is aberrantly expressed and activated in both human HCC tissue and HCC Hep3B cells. Inhibition of NF-κB activity significantly reduced proliferation and invasion of Hep3B cells as well as down-regulated the expression of invasion-related molecules including matrix metalloproteinase (MMP)-2, MMP-9, membrane type-1 MMP (MT1-MMP), urokinase plasminogen activator (uPA) and vascular endothelial growth factor (VEGF). Hep3B cells exhibited a dose-dependent increase in apoptosis after receiving sorafenib treatment. Inhibition of NF-κB activity strongly sensitized Hep3B cells to sorafenib-induced cell death. Mechanistically, combined treatment of sorafenib and NF-κB inhibition enhanced inhibition of MAPK signaling and down-regulation of anti-apoptotic protein Mcl-1 expression. These observations indicate that inhibition of NF-κB may be a potential antineoplastic therapy for HCC, especially the combination of NF-κB inhibition and sorafenib provides a novel therapeutic strategy for patients with advanced-stage HCC.     

Connective tissue growth factor enhances the migration of gastric cancer through downregulation of E-cadherin via the NF-κB pathway

Local invasion and distant metastasis are difficult problems for surgical intervention and treatment in gastric cancer. Connective tissue growth factor (CTGF/CCN2) was considered to have an important role in this process. In this study, we demonstrated that expression of CTGF was significantly upregulated in clinical tissue samples of gastric carcinoma (GC) samples. Forced expression of CTGF in AGS GC cells promoted their migration in culture and significantly increased tumor metastasis in nude mice, whereas RNA interference-mediated knockdown of CTGF in GC cells significantly inhibited cell migration in vitro. We disclose that CTGF downregulated the expression of E-cadherin through activation of the nuclear factor-κappa B (NF-κB) pathway. The effects of CTGF in GC cells were abolished by dominant negative IκappaB. Collectively, these data reported here demonstrate CTGF could modulate the NF-κappaB pathway and perhaps be a promising therapeutic target for gastric cancer invasion and metastasis.