细胞焦亡在胃癌中的作用及中医药调控研究进展

细胞焦亡是区别于细胞凋亡、坏死、细胞增多症、铁死亡和自噬的一种新型炎性胱天蛋白酶（Caspase）依赖性程序性细胞死亡。细胞焦亡依赖于Caspase蛋白家族的激活,切割关键介质蛋白使细胞膜形成孔隙,诱导促炎细胞因子白细胞介素-1β和白细胞介素-18成熟并释放到细胞外环境中,产生级联炎症反应。胃癌是一种恶性的消化道肿瘤疾病,具有难治愈、预后差、放化疗并发症多等特点。目前胃癌的发病机制尚不明确,越来越多的研究发现,细胞焦亡与胃癌发生发展关系密切,这种新型的死亡方式被广泛关注。细胞焦亡对于胃癌而言是一把双刃剑,一方面可以释放促炎细胞内容物来放大或维持炎症,诱导细胞的“炎-癌”转化;另一方面细胞焦亡可以增强化疗药物的敏感性,增强治疗效果,提高胃癌生存率。近年来,中医药抗肿瘤作用机制的研究成为研究热点,并在临床应用中疗效显著,因此,以中医药调节细胞焦亡作为切入点可能是未来治疗胃癌的新方向。基于上述研究,该文总结了细胞焦亡关键蛋白与胃癌发生、发展的作用机制,归纳了中药复方及中药活性成分通过介导细胞焦亡通路,减轻胃黏膜损害,降低胃癌发生率,以及预防肿瘤转移与复发的作用,以期为今后探索细胞焦亡机制和中医药治疗胃癌提供新思路。     

天然化合物通过细胞焦亡途径抗肿瘤作用的研究进展

细胞焦亡是由半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶介导,并伴随炎症反应和参与机体免疫应答的一种程序性细胞死亡方式,又称炎性细胞死亡。细胞焦亡途径分为经典途径以及非经典途径。多项研究表明,细胞焦亡参与多种肿瘤疾病的发展进程,并且焦亡相关因子不仅具有化疗增敏作用及肿瘤预后指示因子的潜能,而且其对肿瘤微环境的影响也是目前的热点研究方向。天然化合物结构多样,来源广泛,具有多靶点、多通路、药理作用广泛等特点,一直是抗肿瘤新药研发的重要来源。多种天然化合物被发现可通过诱导肿瘤细胞焦亡发挥抗肿瘤作用。从细胞焦亡发生的分子机制和焦亡与肿瘤的关系及天然化合物,如黄酮类、萜类、多酚类、醌类等成分靶向焦亡的研究进展进行综述。以期为天然化合物通过细胞焦亡途径抗肿瘤的后续研究提供最新思路与方向。     

基于网络药理学及实验研究探讨紫檀芪调控凋亡及GSDME介导的细胞焦亡途径抗脑胶质瘤的作用机制北大核心CSCD

研究天然化合物紫檀芪(pterostilbene,PTE)通过调控细胞焦亡及凋亡途径发挥抗脑胶质瘤的作用,通过网络药理学及分子对接方法分析PTE抗脑胶质瘤的可能通路及靶点。通过网络药理学筛选PTE作用靶点和脑胶质瘤靶点,构建靶点网络及蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,预测PTE可能作用靶点,通过AutoDock对核心靶点进行分子对接,通过富集分析预测PTE抗胶质瘤的作用途径;通过CCK-8法检测PTE对胶质瘤细胞U87MG、GL261细胞活力的影响;使用不同浓度PTE处理U87MG、GL261细胞,通过克隆形成实验检测PTE对细胞增殖的影响;划痕实验检测不同浓度PTE对胶质瘤细胞迁移能力的影响;采用Hoechst染色法观察PTE诱导胶质瘤细胞凋亡情况;采用JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;通过倒置显微镜及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验观察PTE对胶质瘤细胞的焦亡诱导作用,Hoechst 33342/PI双染色法检测胶质瘤细胞膜的完整性;Western blot检测PTE诱导胶质瘤细胞后的细胞焦亡及凋亡相关蛋白表达变化。该研究共获得PTE抗脑胶质瘤的靶点37个,富集分析提示PTE通过多种信号途径包括癌症途径、癌症中蛋白聚糖、PI3K/AKT通路、凋亡调节通路等途径发挥抗脑胶质瘤的作用;分子对接显示PTE与主要靶点之间具有良好的结合活性;与空白组相比,PTE能显著降低U87MG、GL261细胞活性;与空白组相比,PTE组细胞的增殖、迁移、贴壁能力显著降低;与空白组比较,PTE可以诱导2种胶质瘤细胞凋亡,并且随药物浓度升高作用越明显;与空白组比较,PTE可以诱导U87MG细胞线粒体膜电位下降,并且随药物浓度升高作用越明显;与空白组相比,PTE组胶质瘤细胞出现焦亡特异性外观增多和LDH释放逐渐增加;Hoechst 33342/PI染色显示,与空白组相比,PI阳性细胞数量随着PTE浓度增加而显著增多;与空白组比较,PTE组凋亡相关蛋白活化聚(ADP-核糖)聚合酶1(cleaved PARP1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)表达水平明显升高,B淋巴细胞瘤(B-cell lymphoma,Bcl)-2表达水平明显降低;与空白组比较,PTE组细胞焦亡相关蛋白活化半胱天冬酶3(cleaved caspase-3)、焦孔素E(gasdermin E,GSDME)-N活化水平明显升高,焦孔素D(gasdermin D,GSDMD)-N、活化半胱天冬酶1(cleaved caspase-1)活化水平未见明显变化。综上,PTE通过抑制细胞活力、增殖、迁移能力发挥抗脑胶质瘤的作用,并可通过激活caspase-3/GSDME介导的细胞焦亡途径及线粒体凋亡途径发挥抗脑胶质瘤效应。     

雷公藤甲素对GSDME依赖性肝癌细胞焦亡的影响

目的:探究雷公藤甲素对肝癌细胞Bel-7402焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养肝癌细胞Bel-7402,CCK-8检测不同浓度的雷公藤甲素(2.5、5.0、10.0μg/mL)对肝癌细胞活力影响;PI/DAPI染色观察细胞焦亡形态变化;ELISA试剂盒检测IL-1β和IL-18释放量;Western blotting检测Caspase-3、GSDME、IL-1β和IL-18表达;转染GSDME siRNA 24 h后PI/DAPI染色检测细胞焦亡形态变化。结果:CCK-8检测发现,随着雷公藤甲素浓度增加,Bel-7402细胞活力明显降低(P<0.01);给予雷公藤甲素(10.0μg/mL)能够明显促进细胞焦亡,升高细胞上清液中IL-1β和IL-18含量,促进Caspase-3、GSDME-N、IL-1β和IL-18表达(P<0.05或P<0.01);siGSDME能够明显抑制细胞焦亡形态变化,降低细胞焦亡数目。结论:雷公藤甲素能够促进GSDME依赖性细胞焦亡,抑制肝癌细胞增殖。     

细胞焦亡在糖尿病及并发症中的研究进展

<正>流行病学调查显示,糖尿病(diabetes mellitus, DM)业已成为导致成人死亡的十大原因之一^[1]。预计2030年全球DM患病人数将达5.78亿,2045年将上升至7亿,而中国位居全球DM发病率榜首^[2]。DM的病理机制十分复杂,近年研究表明炎性因子在DM进程中具有至关重要的作用^[3]。细胞焦亡是近年新定义的有异于细胞凋亡、自噬、坏死的新型细胞死亡形式,1992年由Zychlinsky等首次在弗氏志贺菌感染的巨噬细胞中发现,     

中医药通过干预细胞焦亡治疗骨质疏松症的研究进展

细胞焦亡属于程序性细胞死亡方式,干预细胞焦亡,可达到防治多种疾病的目的。骨质疏松症作为一种全身性代谢性疾病,与细胞焦亡存在一定关系。中医药对骨质疏松症的防治具有独特优势。根据细胞焦亡现有相关研究,结合中医药治疗的优势,为今后的研究提供方向性指引,提高骨质疏松症的治疗效率,是该领域研究亟待解决的问题。该文以中医药、细胞焦亡、骨质疏松症的相关研究为切入点展开综述,为今后中医药通过干预细胞焦亡治疗骨质疏松症的研究提供理论依据和研究方向。     

中医药抑制细胞焦亡治疗脓毒症的研究进展与探析

脓毒症（sepsis）是一种与炎症相关的高死亡率疾病，目前临床的治疗手段多围绕抗感染、液体复苏及使用血管活性药物进行，但疗效有限，仍需进行机制研究以开发新疗法。细胞焦亡（pyroptosis）是一种受多靶点调控的细胞炎性程序性死亡模式，与机体炎症的调控密切相关。大量证据表明抑制细胞焦亡可以显著控制脓毒症发展、改善脓毒症造成的器官功能损伤。中医药具有多靶点、多通路治疗疾病的优势，近些年的研究显示中医药在通过抑制细胞焦亡多种途径的相关靶点治疗脓毒症方面可以发挥较好作用。本文旨在对近几年中医药抑制细胞焦亡多种途径治疗脓毒症的研究成果进行综述与探析，以期为未来探索中医药治疗脓毒症新型治疗策略的研究开展提供理论依据。     

细胞焦亡介导的阿尔兹海默症发病机制研究进展

阿尔茨海默症(Alzheimer's disease,AD)是一种多病因导致的慢性进行性神经退行性疾病.其主要病理特征包括β淀粉样蛋白(Aβ)沉积、Tau蛋白过度磷酸化及神经元丢失.神经元作为神经系统的基本单位,其丢失或死亡均是神经退行性疾病发病的根本原因.近年来,神经元死亡形式的研究日益增多,研究发现其死亡形式主要包...     

细胞焦亡与溃疡性结肠炎及中医药调控的研究进展

细胞焦亡是不同于细胞坏死、凋亡、自噬的细胞程序性死亡的一种新形式,表现为细胞不断肿胀直至胞膜破裂,导致细胞内容物的释放进而激活强烈的炎症反应。细胞焦亡信号通路分为依赖于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的经典途径和依赖于半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-4,5,11(Caspase-4,5,11)的非经典途径,其中经典途径中Caspase-1的激活依赖于炎性小体发挥作用,非经典途径则是直接激活Caspase-4,5,11,最终导致gasdermin D(GSDMD)蛋白裂解,诱导膜孔隙的形成,白细胞介素-1β(IL-1β),IL-18成熟及释放,细胞膜破裂而发生焦亡。溃疡性结肠炎是一种消化系统常见的疑难病,具有病程长、易复发、难治愈等特点。目前其发病机制尚未完全清楚,但近年研究发现细胞焦亡对溃疡性结肠炎的发生发展有重要作用。中医药防治该病由来已久,临床疗效显著,研究发现中药防治该病的作用机制与炎症小体、焦亡产物IL-1β,IL-18等关系密切,中医药调控溃疡性结肠的分子机制与细胞焦亡存在一定相关性。故本文就细胞焦亡与溃疡性结肠炎之间关系及中医药的调控作用进行综述。     

细胞焦亡与肝脏疾病的相关性及中医药研究进展

细胞焦亡又称细胞炎性坏死,其形态学特征、发生及调控机制不同于凋亡、坏死等细胞死亡方式,是近年来发现并证实的一种依赖半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）的新型程序性细胞死亡方式。研究表明,细胞焦亡与肝脏疾病发生过程密切相关,在酒精性肝病（ALD）,非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）,肝纤维化和肝癌等病变过程中可能发挥着重要作用。细胞焦亡主要通过经典途径NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体活化Caspase-1,进而裂解效应蛋白消化道皮肤素D（GSDMD）,释放白细胞介素-18（IL-18）,白细胞介素-1β（IL-1β）等促炎细胞因子引起肝细胞炎性损伤,进而促进肝病的发生发展。临床上使用中药治疗肝脏疾病疗效独特,不良反应较低。中药干预肝脏疾病后,其阻断细胞焦亡信号通路方式为①抑制NLRP3炎症小体多蛋白复合物的组装和激活;②降低Caspase-1或Caspase-4/Caspase-5/Caspase-11的活性;③抑制GSDMD的裂解,减少IL-18和IL-1β促炎细胞因子的释放。通过这几个方面阻断焦亡信号通路,减轻肝脏炎症程度,从而发挥抗肝病作用。因此,深入研究细胞焦亡有利于认识肝脏疾病发生发展和转归中的作用,增强或抑制焦亡可能为中药防治肝病提供新策略。目前针对经典焦亡信号通路中的关键蛋白NLRP3炎症小体成为中药抗肝病靶点之一。该文简要概述了细胞焦亡与肝脏疾病的关系,对近年来中药单体、复方、有效部位和提取物的干预情况进行归纳总结,为进一步探索细胞焦亡致病机制及中药治疗肝脏疾病提供重要指导。     

天然药物抗肿瘤机制的研究进展

源自于天然的抗肿瘤药物在抑制、杀伤肿瘤细胞,改善症状的同时,也在减轻放化疗的不良反应方面发挥着重要作用,因而成为近年来的研究热点;主要是通过多种机制来诱导肿瘤细胞的死亡,如诱导细胞凋亡、发挥免疫调节、抗多药耐药、抑制肿瘤细胞血管的生成等多方面因素,因而体现了其抗肿瘤作用的应用价值和广阔前景,文章就其近几年的抗肿瘤机制研究进展作扼要综述。     

基于细胞焦亡探讨中草药抗肿瘤作用的研究进展＊

细胞焦亡是一种非凋亡形式的新型程序性细胞死亡方式。通过caspase‐1依赖的经典途径和caspase‐4/5/11依赖的非经典途径激活Gasdermin蛋白，导致细胞膜孔形成，伴随炎症小体激活释放炎性因子IL-1β和IL-18，最终导致细胞死亡。近年来越来越多研究发现细胞焦亡与肿瘤的发生发展密切相关。细胞焦亡相关的炎症小体、caspase酶、Gasdermin蛋白等参与肿瘤细胞生长、迁移、分化，诱导细胞焦亡可发挥肿瘤抑制功能并引起抗肿瘤免疫反应，表明细胞焦亡是抗肿瘤治疗的重要靶点。本文通过综述细胞焦亡的发生机制及其在肿瘤中的作用，总结分析中草药有效成分通过细胞焦亡途径发挥抗肿瘤作用的分子机制，以期为肿瘤的预防和治疗提供新思路、新策略。     

高分子材料载体在天然抗肿瘤药物中的研究进展

高分子材料作为在天然抗肿瘤药物载体研究领域的热点,近10年来取得了飞速的发展,尤其是在如何降低药物的毒副作用,促进药物在体内的溶解和释放,提高生物利用度方面取得了突破性的进展.现如今高分子材料作为载体应用于天然抗肿瘤药物,提高了药物的抗肿瘤的疗效,使大部分天然抗肿瘤药物制剂的开发成为可能,推动了高分子材料载体在天然抗肿...     

益气养阴活血方对糖尿病肾病大鼠NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/胱天蛋白酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）细胞焦亡通路,探讨益气养阴活血方防治糖尿病肾病（DKD）肾脏损伤的可能作用机制。方法 随机将50只雄性SD大鼠分为正常组8只、造模组42只。造模组高糖高脂饮食6周后予一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）诱导建立DKD大鼠模型。造模成功后随机分为模型组、缬沙坦组（8.33 mg·kg^-1）、益气养阴活血方低、高剂量组（11、22 g·kg^-1）。连续灌胃6周后检测各组大鼠空腹血糖（FBG）、总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（SCr）及24 h尿蛋白定量（24 h-UTP）;苏木素-伊红（HE）染色观察肾组织病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测各组大鼠肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均显著升高（P<0.01）,肾组织病变程度严重,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各药物组FBG、CHO、TG、BUN、SCr、24 h-UTP及血清IL-1β、IL-18水平均明显下降（P<0.05,P<0.01）,肾组织病变程度得到改善,且肾组织NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白及其mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,以益气养阴活血方高剂量组效果最佳。结论 益气养阴活血方可通过调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路抑制细胞焦亡,缓解DKD大鼠炎症反应,减轻肾脏病理损伤。     

基于阴阳理论研究中医药干预细胞焦亡的研究进展

细胞焦亡是一种炎症细胞程序性死亡方式,gasdermin家族（形成孔隙的效应蛋白家族）的多种成员主要通过激活胱天蛋白酶（Caspase）进行聚合和剪切,参与多种疾病的病理过程,如癌症、心肌缺血、肾损伤、骨关节炎等。细胞焦亡具有双向调节作用。诱导细胞焦亡的发生可促进病理条件下细胞的清除（如癌症、肿瘤细胞等）,但长期诱导的细胞焦亡可导致体内脂质和相关维生素代谢异常。调节焦亡和细胞增殖之间的平衡是中医药治疗疾病的一个重要靶点。阴阳学说贯穿中医诊断和治疗的全过程,用来解释人体的生理和病理变化,指导理论、疾病的诊断和治疗及保健。细胞增殖与细胞焦亡之间的平衡本质上是阴阳平衡在细胞水平上的体现,阴阳自和理论对阴阳平衡加以主导。中医药对细胞焦亡的干预主要体现在促进细胞焦亡（损其有余）和抑制细胞焦亡（补其不足）上,这与调节阴阳具有相同的意义。基于这一理论,该文通过阴阳学说揭示了中医抑制和促进细胞焦亡的关系,以期为阴阳学说的现代化提供理论支持,为疾病的诊断和治疗提供新的目标。     

黄连温胆汤对IGT大鼠骨骼肌细胞焦亡经典通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）/白细胞介素-1β（IL-1β）/白细胞介素-18（IL-18）经典通路,探讨黄连温胆汤对糖耐量低减（IGT）大鼠骨骼肌细胞焦亡的影响,并阐释其可能作用机制。方法 健康雄性SD大鼠予45%脂肪热能的高脂饲料长期喂养20周诱导IGT大鼠模型。造模成功后将实验分为4组,分别为正常组、模型组、阳性药组（盐酸二甲双胍,0.05 g·kg^-1·d^-1）和黄连温胆汤组（7.8 g·kg^-1d^-1）,正常组和模型组则给予相应体积蒸馏水,各组给药体积均为10 mL·kg^-1d^-1,连续灌胃给药4周。实验结束后取血分离血清并取大鼠骨骼肌进行液氮保存。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清IL-1β和IL-18含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测骨骼肌组织NLRP3,Caspase-1,GSDMD mRNA及蛋白表达水平;免疫荧光法观测骨骼肌组织GSDMD,IL-1β和IL-18蛋白表达;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠骨骼肌组织病理学变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中IL-1β,IL-18含量和骨骼肌组织中NLRP3,Caspase-1,GSDMD mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;免疫荧光检测显示IGT大鼠骨骼肌组织GSDMD,IL-18和IL-1β蛋白含量显著上升（P<0.01）;HE染色可见骨骼肌组织具有明显病理形态变化。与模型组比较,黄连温胆汤和盐酸二甲双胍组均可有效降低IGT大鼠血清IL-18和IL-1β含量和骨骼肌组织NLRP3,Caspase-1,GSDMD mRNA和蛋白表达（P<0.01）;免疫荧光技术结果表明黄连温胆汤能有效降低IGT大鼠骨骼肌组织GSDMD,IL-1β和IL-18蛋白含量（P<0.01）;HE染色结果表明黄连温胆汤能改善大鼠骨骼肌组织形态变化。结论 黄连温胆汤对IGT大鼠骨骼肌细胞焦亡具有抑制作用,其作用机制与调节细胞焦亡经典途径中NLRP3/Caspase-1/GSDMD/IL-1β/IL-18通路具有重要关系。     

细胞焦亡在针刺抗脑缺血再灌注损伤中的研究进展

针刺是治疗脑缺血再灌注损伤的有效方式,但其作用机制尚未能阐明。脑缺血再灌注后神经元损伤涉及多种机制参与和相互作用,细胞焦亡是一种伴随炎症反应的程序性细胞死亡方式,其形态学特征、发生及调控机制不同于其他细胞死亡方式。该文通过回顾近年针刺抗脑缺血再灌注损伤的相关研究,总结针刺对细胞焦亡及相关标志物的干预作用,同时探讨其中不足的地方,以期为针刺治疗脑缺血疾病提供新的研究方向及理论依据。     

中医药通过抑制细胞焦亡和炎性小体改善糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病（DN）是糖尿病的严重并发症,是慢性肾衰竭和终末期肾病的主要危险因素,也是糖尿病患者发病和死亡的主要原因和全球最主要的非传染性死亡原因,而细胞焦亡和炎性小体激活与DN的发生发展有着密切的关系,可以介导足细胞足突丢失和融合、炎症因子表达增加、巨噬细胞浸润、肾小球基质扩张和尿白蛋白与肌酐比值增加等多种病理变化,最终导致肾单位丢失和肾损伤。据研究报道,传统草药或经典处方中的多种活性成分在DN治疗中发挥着降糖、降脂、改善胰岛素抵抗、抗炎、抗氧化应激、调节免疫等多种作用,并且可以通过抑制炎症小体的激活,抑制肾细胞焦亡,拮抗DN炎症诱导的损伤,改善肾功能,减缓DN进展,疗效明确。中药干预DN具有多靶点、多信号通路、多系统等特点和作用,在防治DN上具有广阔前景。目前体内外关于中医药干预DN的研究众多,但是缺乏系统的、全面地对中医药干预DN模型实验研究的整理、概括和总结,该文就细胞焦亡和炎性小体的研究进展及在DN中的作用机制及中医药干预研究进展进行综述,以期为DN相关防治药物的研发提供思路和参考。     

中药对自身免疫性疾病细胞焦亡影响的研究进展

细胞焦亡是近年发现的一种细胞程序性死亡方式,由胱天蛋白酶（Caspase）介导,可导致细胞内炎性物质等释放到细胞外,诱发炎症级联反应。自身免疫性疾病（ADs）是一类机体免疫耐受受损、过量产生自身抗体,导致自身组织损害的疾病,其致病因素复杂,发病机制尚不明确。随着对细胞焦亡研究的深入,越来越多的结果表明细胞焦亡参与类风湿关节炎、溃疡性结肠炎、系统性红斑狼疮和银屑病等多种ADs的发病过程。临床治疗ADs多采用糖皮质激素类药物、抗风湿药物和生物制剂等,但是部分药物的治疗效果有限,且长期用药存在一些不良反应。中药治疗ADs在长期临床实践中证实了其安全性和有效性,具有多靶向性、不良反应小等特点,在控制病程方面有一定的优势。越来越多的研究发现多种中药组方制剂、单味药材和中药活性成分,发挥药效的机制可能是通过干预细胞焦亡从而治疗ADs。因此,该文综述了近年来中药对ADs中细胞焦亡影响的实验研究,以期为临床治疗和科学研究提供参考。