微小RNA - 184促进滋养层细胞凋亡而引起复发性流产的研究

目的 探究微小RNA - 184（miR - 184）在调控女性滋养层细胞凋亡中的作用及其分子机制，为复发性流产的预防和治疗提供新思路。 方法 采用复发性流产绒毛膜组织和滋养层Swan 71细胞，采用含过表达miR - 184的质粒转染Swan 71细胞后，流式细胞仪测定细胞凋亡率，CCK8测定细胞增殖，实时荧光定量PCR和western blot法测定细胞中miR - 184、Noxa1和MCL1的表达水平。同时也在复发性流产组织中测定上述分子的表达水平。采用t检验比较两组数据的差异，采用重复测量方差分析比较两组增殖曲线。结果 与人工流产组相比，复发性流产组中miR - 184上调6.24倍（t = 3.59，P＜0.05），Noxa1上调2.19倍（t = 2.55，P＜0.05），MCL1下调80.3%（t = 2.63，P＜0.05）。与对照组相比，过表达miR - 184的滋养层细胞凋亡率增加6%（t = 4.62，P＜0.05），细胞增殖下降（F = 10.52, P＜0.05），Noxa1表达上调1.94倍（t = 7.20，P＜0.05），MCL1表达下调55.7%（t = 7.20，P＜0.05）。结论 miR - 184在复发性流产组织中高表达，其通过活化Noxa1/MCL1凋亡通路而诱导滋养层细胞凋亡，最终引发流产，为miR - 184参与调控复发性流产的发生发展提供了实验依据。     

反复不明原因自然流产孕妇外周血单个核细胞中lncRNANEAT1和TLR2表达

目的:探讨反复不明原因自然流产孕妇外周血单个核细胞(PBMC)中lncRNA NEAT1和TLR2表达。方法:回顾性收集2016年5月-2018年3月本院就诊的孕妇临床资料,选取97例不明原因自然流产患者(自然流产组)、50例正常妊娠要求人工流产孕妇(正常早孕组)、54例健康非孕妇女(健康非孕组),检测外周血PBMC中lncRNA NEAT1和TLR2mRNA表达水平,TLR2蛋白表达,血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平。Pearson相关性分析反复自然流产患者lncRNA NEAT1与TLR2 mRNA、TNF-α、IL-1β、IL-6相关性,ROC曲线分析lncRNA NEAT1与TLR2mRNA对反复自然流产的诊断价值,logisitic回归分析反复不明原因自然流产的影响因素。结果:与健康非孕组和正常早孕组比,自然流产组患者外周血PBMC中lncRNA NEAT1、TLR2mRNA和蛋白、血清TNF-α(19.73±4.47pg/ml、9.31±2.57pg/ml、10.24±3.15pg/ml)、IL-1β(7.51±1.01pg/ml、2.39±0.54pg/ml、2.58±0.59pg/ml)和IL-6表达水平(25.39±5.47pg/ml、12.15±3.54pg/ml、13.52±3.76pg/ml)均升高(P0.05)。反复自然流产患者lncRNA NEAT1与TLR2mRNA、TNF-α、IL-1β、IL-6表达水平均呈正相关(P0.05)。lncRNA NEAT1和TLR2均是反复不明原因自然流产的影响因素,联合诊断时灵敏度(93.6%)、特异度(90.4%)和曲线下面积(0.906)最高(P0.05)。结论:lncRNA NEAT1可能通过调控TLR2信号通路下游相关炎性因子表达参与反复不明原因自然流产的发生,可能成为潜在的治疗靶点。     

下调LOX基因对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及机制研究

目的 探讨LOX对肾癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响及其作用机制。方法 将si-con、si-LOX质粒分别转染至786-0细胞中,记为si-con组、si-LOX组,转染采用脂质体法。蛋白质印迹（Western Blot）检测赖氨酰氧化酶(LOX)、周期素依赖性激酶4（CDK4）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、蛋白激酶B（Akt）表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果 与正常肾小管上皮细胞HK-2相比,肾癌细胞786-0、GRC-1、A498中LOX表达水平显著升高（P＜0.001）。敲减LOX肾癌细胞786-0的活力显著降低（t=8.440,P＜0.001）,786-0细胞的凋亡率显著升高（t=25.628,P＜0.001）,G0/G1期细胞所占比例增加（t=7.211,P＜0.001）,S期细胞所占比例减少（t=13.190,P＜0.001）,786-0细胞中CDK4、Bcl2、p-Akt表达水平显著降低（t=15.660、13.914、12.349,P＜0.001）,786-0细胞中Bax表达水平显著升高（t=22.057,P＜0.001）。结论 敲减LOX能抑制肾癌细胞增殖,促进细胞凋亡,影响细胞周期,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关,可为肾癌的治疗提供新思路。     

白血病相关长链非编码RNA在氢醌诱导TK6恶性转化细胞中的表达及其调控机制

目的探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对白血病相关长链非编码RNA(lncRNA)的表达影响及其相关的调控机制。方法以磷酸盐缓冲液(PBS)处理的TK6细胞为PBS对照组,以10.0μmol/L HQ诱导的TK6恶性转化细胞为HQ染毒组;在调控机制探讨中以10.0μmol/L HQ诱导的TK6恶性转化细胞为对照,同时设10.0μmol/L HQ+5μmol/L 5-氮杂胞苷(5-Aza C,DNA甲基转移酶酶抑制剂)组和10.0μmol/L HQ+200 nmol/L曲古抑菌素A(TSA,蛋白去乙酰化酶抑制剂)组。以反转录实时荧光定量-聚合酶链反应(q RT-PCR)检测白血病相关lncRNA表达量以及Tet1、Tet2、Tet3的mRNA表达量。以蛋白免疫印迹检测Tet1、Tet2蛋白表达水平。结果与PBS对照组相比,HQ诱导的TK6恶性转化细胞中lncRNA HOTAIRM1、lncRNA BCO35666和lncRNA NEAT1表达下降,lncRNA HOTAIRM1表达下降最为显著,lncRNA NELT1、lncRNA ANKR036BP1、lncRNA LUNAR1、lncRNA SENCR和lncRNA UCA1表达上升,UCA1的表达升高最为明显;Tet1、Tet2、Tet3的mRNA表达下降,Tet2、Tet3的下降均有统计学意义(P0.05),Tet1、Tet2的蛋白表达下降。与HQ染毒组比较,经5-Aza C与TSA处理的HQ诱导的TK6恶性转化细胞lncRNA HOTAIRM1和lncRNA NEAT1表达上升,而lncRNA BCO35666表达下降;Tet1、Tet2、Tet3 mRNA在HQ+5-Aza C处理组中表达均升高,Tet1、Tet2升高均有统计学意义(P0.05),而在HQ+TSA处理组中Tet1表达升高(P0.05),Tet3表达下降(P0.05);Tet1、Tet2的蛋白表达与mRNA结果一致。结论在HQ诱导的TK6恶性转化细胞中,DNA甲基化与DNA去甲基化可能相互作用共同调控lncRNA HOTAIRM1、lncRNA NEAT1的表达。     

肺结核患者外周血中长链非编码RNA MALAT1、NEAT1和NEAT2的表达研究

  目的   分析肺结核患者与健康对照之间外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)MALAT1、NEAT1和NEAT2的表达差异。   方法   利用定量逆转录聚合酶链式反应技术检测79例肺结核患者和82例健康对照PBMC中lncRNA的表达水平, 同时进一步分析lncRNA表达水平与肺结核患者部分临床特征、实验室指标之间的联系。   结果   肺结核患者PBMC中MALAT1、NEAT1的表达水平均高于健康对照, 差异有统计学意义(Z=-4.386, P < 0.001; Z=-10.175, P < 0.001);NEAT2在两组之间的表达差异无统计学意义(Z=-0.203, P=0.839)。LncRNA表达水平与肺结核患者部分临床特征、实验指标关联分析结果显示, 初治肺结核患者PBMC中NEAT2的表达水平高于复发肺结核患者, 而痰涂片阳性肺结核患者PBMC中NEAT2的表达水平低于痰涂片阴性患者, 差异均有统计学意义(均有P < 0.05);MALAT1水平与血沉含量之间呈负相关(r_s=-0.256, P=0.034)。   结论   MALAT1、NEAT1在肺结核患者外周血中是异常表达的, 可能参与了肺结核的发病过程。     

长链非编码RNA NORAD抑制人脐静脉内皮细胞的血管生成

目的 探究长链非编码RNA中DNA损伤激活的非编码RNA(non-coding RNA-activated by DNA damage,NORAD)对人脐静脉内皮细胞血管生成的影响和机制。方法 本文以人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）为研究对象，采用小干扰RNA和过表达质粒分别转染细胞24 h，采用逆转录-实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫印迹实验（western blot,WB）检测mRNA和蛋白水平。染色质免疫沉淀技术（ChIP）检测转录因子FOXP3(forkhead box P3)在血管形成关键蛋白VEGFA(vascular endothelial growth factor A)启动子区的结合情况。血管生成实验检测HUVEC血管生成功能。采用两独立样本t检验或单因素方差检验法进行数据分析。结果 在HUVEC中过表达NORAD后（增加57.96倍，t=68.761,P<0.001）,VEGFA和FOXP3的mRNA水平分别上调2.96倍（t=8.942,P=0.001）和2.23倍（t=7....     

PTEN在体外受精-胚胎移植胎盘及胚胎组织中的表达及意义

目的：研究体外受精-胚胎移植（IVF-ET）对早期胎盘绒毛和胚胎组织中第10号染色体上缺失的磷酸和张力蛋白同源基因（PTEN）和蛋白表达的影响。方法：收集8例IVF-ET患者胚胎移植后30～45 d行减胎术的胎盘绒毛组织和胚胎组织作为IVF-ET组，10例自然妊娠行人工流产患者的早期胎盘绒毛组织和胚胎组织为对照组。采用免疫组织化学方法和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测组织中PTEN蛋白和mRNA的表达及分布差异。结果：PTEN蛋白表达于胎盘绒毛细胞滋养层细胞和合体滋养层细胞的细胞膜和细胞质，广泛表达于胚胎各个胚层。IVF-ET组胎盘绒毛组织中PTEN蛋白表达量低于对照组，差异有统计学意义（t=2.325，P=0.027）；PTEN蛋白在2组患者胚胎组织中表达量差异无统计学意义（P=0.288）。PTEN mRNA在IVF-ET组胎盘绒毛组织中表达量低于对照组，差异有统计学意义（t=2.512，P=0.017），在2组患者胚胎组织中表达量比较，差异无统计学意义（P=0.371），与免疫组织化学结果一致。结论：IVF-ET技术的体外操作可能影响胎盘组织PTEN基因和蛋白的表达，但未显著影响早期胚胎组织的PTEN表达，其潜在意义有待进一步研究。     

Id-1在子宫内膜异位症在位及异位内膜中的表达及意义

目的探讨DNA结合抑制因子（Id）-1在各期子宫内膜异位症（EMS）在位及异位内膜中的表达及意义。方法选择2013年1月至6月因不孕症或盆腔包块于珠海市妇幼保健院妇科就诊并住院的73例患者为研究对象。按照组织病理学检查结果,将其分为实验组和对照组。其中,经组织病理学检查证实为EMS的在位及异位内膜标本各50例（分别包括增殖期子宫内膜标本28例及分泌期子宫内膜标本22例）纳入实验组,同时,以23例非EMS患者的正常子宫内膜标本（包括增殖期子宫内膜标本14例及分泌期子宫内膜标本9例）纳入对照组（本研究遵循的程序符合珠海市妇幼保健院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,分组征得受试对象知情同意,并与之签署临床研究知情同意书）。所有标本分别采用免疫组织化学技术SP法和实时荧光定量PCR法检测Id-1蛋白和mRNA的表达,并分析其表达水平在各期EMS及月经周期的差异。各组患者一般情况比较,其差异无统计学意义（P〉0.05）。结果实验组EMS在位内膜标本的Id-1蛋白表达阳性率和mRNA相对表达量明显高于对照组,且差异有统计学意义（χ^2=11.585,P=0.009;t=13.585,P=0.000）;EMS在位内膜标本的Id-1蛋白表达阳性率和mRNA相对表达量低于EMS异位内膜组,且差异有统计学意义（χ^2=9.860,P=0.020;t=0.485,P=0.001）。对不同分期EMS在位内膜标本的Id-1蛋白和mRNA表达水平进行比较,Ⅲ-Ⅳ期子宫内膜标本比Ⅰ-Ⅱ期高,且差异有统计学意义（χ^2=9.839,P=0.020;t=9.708,P=0.000）;对不同分期EMS异位内膜的Id-1蛋白和mRNA表达水平进行比较,Ⅲ-Ⅳ期子宫内膜标本比Ⅰ-Ⅱ期高,且差异有统计学意义（χ^2=10.110,P=0.018;t=9.577,P=0.000）。正常子宫内膜、EMS在位及异位内膜的增殖期和分泌期Id-1蛋白及mRNA表达水平比较,其差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 Id-1高表达与EMS的发生、?     

刺参酸性黏多糖联合氟尿嘧啶对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制作用

目的观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)联合氟尿嘧啶(5-FU)对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制作用,并对其作用机制进行探讨。方法 50只SPF级昆明种小鼠于右前肢腋部皮下接种H22肝癌细胞悬液,24 h后随机分为5组,分别为空白对照组(生理盐水)、5-FU组(5-FU 20 mg/kg)、SJAMP组(SJAMP 25 mg/kg)、低剂量5-FU+SJAMP组(5-FU 10 mg/kg+SJAMP 25 mg/kg)、高剂量5-FU+SJAMP组(5-FU 20 mg/kg+SJAMP 25 mg/kg)。HE染色观察各组肿瘤组织病理学改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中PCNA、P53、P21、Cyclin D1及CDK4蛋白的表达水平;Real-time PCR方法检测肿瘤组织中P53、P21、Cyclin D1及CDK4 mRNA的表达水平。结果与空白对照组相比,其余4组荷瘤小鼠肿瘤实体的平均质量均明显减小(P0.05)。5-FU组及联合用药组抑瘤率均超过50%,高剂量5-FU+SJAMP组抑瘤率高达62.73%。HE染色显示给药组肿瘤细胞排列疏松,细胞质固缩,核质比减小。免疫组化及Real-time PCR结果显示,给药组中与细胞增殖相关基因的PCNA蛋白,P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达较空白对照组中的表达明显减弱(P0.05),P21蛋白及mRNA的表达明显增强(P0.05),高剂量5-FU+SJAMP组相关基因mRNA及蛋白变化更加显著(P0.05)。结论 SJAMP与5-FU均能通过下调PCNA蛋白、P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达、上调P21蛋白及mRNA的表达,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。SJAMP与5-FU合用具有一定的协同作用,能够明显增强抑瘤效果。     

刺参酸性黏多糖对H22荷肝癌小鼠肿瘤细胞增殖相关基因表达的影响

目的观察刺参酸性黏多糖(Stichopus japonicus acidic mucopolysaccharide,SJAMP)抑制H22荷肝癌小鼠肿瘤细胞增殖的作用,并探讨其可能机制。方法以H22荷肝癌小鼠为对象,随机分为对照组、5-FU(5-Fluorouracil,氟尿嘧啶20mg/kg)、SJAMP低、中、高剂量(6.25、12.5、25mg/kg)5组。分别采用腹腔注射方式连续给予对应试剂12 d。HE染色观察肿瘤组织病理学改变;分别采用免疫组化法检测肿瘤组织中PCNA、P53、P21、Cyclin D1及CDK4蛋白表达水平;Real-time PCR法检测P53、P21、Cyclin D1及CDK4 mRNA的表达水平。结果 SJAMP各剂量组H22肿瘤组织生长比较缓慢,其中SJAMP高剂量组肿瘤质量与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色观察到SJAMP中、高剂量组肿瘤组织较阴性对照组细胞数目少,排列疏松,坏死区多。免疫组化及Real-time PCR结果显示,SJAMP中、高剂量组中与细胞增殖相关基因的PCNA蛋白,P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达较阴性对照组中的表达明显下调(P<0.05),P21蛋白及mRNA的表达明显上调(P<0.05)。结论 SJAMP能够抑制小鼠H22移植瘤的生长。SJAMP发挥抑瘤作用的作用机制可能是其能够调节肿瘤细胞内细胞增殖相关基因与蛋白的表达,以达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。[营养学报,2014,36(3):263-267,272]     

干扰lncRNA RHPN1-AS1表达通过靶向miR-339-5p对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA PCNA1(lncRNA RHPN1)反义AS1(RHPN1-AS1)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:将si-NC(lncRNA RHPN1-AS1阴性对照组)、si-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1组)、pcDNA(真核表达载体组)、pcDNA-RHP...     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。     

The ethanol extract from Artemisia princeps Pampanini induces p53-mediated G1 phase arrest in A172 human neuroblastoma cells

In the present study, the antiproliferative effects of the ethanol extract of Artemisia princeps Pampanini (EAPP) and the mechanism involved were investigated. Of the various cancer cells examined, human neuroblastoma A172 cells were most sensitive to EAPP, and their proliferation was dose- and time-dependently inhibited by EAPP. DNA flow cytometry analysis indicated that EAPP notably induced the G(1) phase arrest in A172 cells. Of the G(1) phase cycle-related proteins examined, the expressions of cyclin-dependent kinase (CDK) 2, CDK4, and CDK6 and of cyclin D(1), D(2), and D(3) were found to be markedly reduced by EAPP, whereas cyclin E was unaffected. Moreover, the protein and mRNA levels of the CDK inhibitors p16(INK4a), p21(CIP1/WAF1), and p27(KIP1) were increased, and the activities of CDK2, CDK4, and CDK6 were reduced. Furthermore, the expressions of E2F-1 and of phosphorylated pRb were also decreased, and the protein levels of p53 and pp53 (Ser15) were increased. Up-regulation of p21(CIP1/WAF1) was found to be mediated by a p53-dependent pathway in EAPP-induced G(1)-arrested A172 cells. When these data are taken together, the EAPP was found to potently inhibit the proliferation of human neuroblastoma A172 cells via G(1) phase cell cycle arrest.     

骨桥蛋白在体外对小鼠子宫内膜蜕膜化的调节作用

目的:探讨骨桥蛋白（osteopontin,OPN）是否参与体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞（mouse endometrial stromal cells,mESCs）蜕膜化的过程及其调节作用。方法:采用雌激素（10 nmol/L）和孕酮（1 μmol/L）处理mESCs进行体外诱导蜕膜化,检测OPN的表达变化。设立 ...     

长链非编码RNA核富含丰富的转录本1对癫痫模型海马神经元凋亡的影响和作用机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)核富含丰富的转录本1(NEAT1)对癫痫细胞模型海马神经元凋亡的影响及作用机制,以期为NEAT1成为癫痫治疗的新靶点提供依据。方法 于2019年8月—2020年10月期间,体外培养大鼠海马神经元细胞,无镁诱导制备癫痫海马神经元模型,实验分为:对照组(正常细胞外液)、模型组(无镁细胞外液)、转染对照组(转染非特异性siRNA+无镁细胞外液)和转染组(转染NEAT1特异性siRNA+无镁细胞外液)。实时荧光定量PCR(qPCR)检测NEAT1和miR-29b-3p的表达变化,双荧光素酶报告基因实验检测NEAT1是否靶向调控miR-29b-3p,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,AnnexinV-FITC/PI双染色法检测海马神经元细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果 与对照组相比,模型组海马神经元凋亡率及NEAT1、Bax、TLR4和NF-κB的表达水平升高(F＝50.980、73.668、65.635、13.203、10.292,P＜0.05),IL-1、IL-6和TNF-α的含量增多(F＝33.107、33.857、51.129,P＜0.05),miR-29b-3p和Bcl-2的表达水平降低(F＝145.023、67.655,P＜0.05);而抑制NEAT1的表达能够降低神经元凋亡,抑制Bax、TLR4和NF-κB的表达,促进miR-29b-3p和Bcl-2的表达,减少IL-1、IL-6和TNF-α的分泌。双荧光素酶报告基因实验证实NEAT1和miR-29b-3p的靶向关系。结论 lncRNA NEAT1靶向下调miR-29b-3p的表达阻断TLR4/NF-κB信号通路来抑制癫痫模型海马神经元的凋亡。     

子痫前期滋养细胞ABCG2表达的研究

目的探讨正常及子痫前期胎盘滋养细胞分化前、后胎盘表达的主动转运因子ATP结合匣式转运子G2 (ABCG2)mRNA及蛋白的表达变化。方法酶消化法原代培养正常及子痫前期胎盘绒毛滋养层细胞,经传代与纯化后免疫鉴定滋养细胞及其纯度。收集培养后72 h (未分化状态)及培养后6 d (分化状态)的细胞,裂解后应用实时荧光定量PCR及Western Blot检测各组细胞ABCG2 mRNA及蛋白的表达水平。结果成功自正常及子痫前期胎盘中原代培养人绒毛滋养层细胞,未分化状态下子痫前期滋养细胞ABCG2mRNA及蛋白的表达平均值为正常的2. 54及2. 06倍,分化状态下子痫前期滋养细胞ABCG2mRNA及蛋白的表达为正常的1. 65及1. 53倍;正常胎盘滋养细胞分化后ABCG2 mRNA及蛋白表达增高3. 55及4. 06倍,子痫前期组仅增加2. 31及3. 03倍。结论自子痫前期及正常胎盘原代培养滋养细胞区分不同分化状态,实时荧光定量PCR及Western Blot检测子痫前期滋养细胞不同分化时期ABCG2 mRNA及蛋白的表达均高于正常,但滋养细胞分化后子痫前期ABCG2 mRNA及蛋白表达增长的程度低于正常。     

Trans-10,cis-12, not cis-9,trans-11, conjugated linoleic acid inhibits G1-S progression in HT-29 human colon cancer cells

Commercial preparations of conjugated linoleic acid (CLA) contain both positional and geometric isomers of octadecadienoic acid, with cis-9,trans-11 CLA (c9t11) and trans-10,cis-12 CLA (t10c12) as the principal isomers. We showed previously that CLA reduced the incidence of colon tumors in rats treated with 1,2-dimethylhydrazine. In addition, our previous in vitro studies showed that t10c12 inhibited the growth of HT-29 and Caco-2 human colon cancer cells, whereas c9t11 had no effect on cell growth. In the present study, to examine the effects of the CLA isomers on cell cycle and cell cycle regulatory proteins, we treated HT-29 cells with various concentrations (0-4 micromol/L) of the individual CLA isomers. A DNA flow cytometric analysis revealed that t10c12 induced a G1 arrest, whereas c9t11 had no effect on the cell cycle. Western blot analysis of total cell lysates revealed no alteration in the protein expression of cyclin A, cyclin D, cyclin E, cyclin-dependent kinase (CDK) 2, or CDK4 due to t10c12 treatment. However, t10c12 substantially increased the protein expression and mRNA accumulation of the CDK inhibitor p21(CIP1/WAF1). The t10c12 isomer increased the association of p21(CIP1/WAF1) with CDK2 and proliferating cell nuclear antigen, but decreased the levels of phosphorylated retinoblastoma protein (Rb), with an increase in the levels of hypophosphorylated Rb protein. An in vitro kinase assay using histone H1 as a substrate showed that the activities of CDK2 were significantly decreased by t10c12. These results indicate that t10c12 exerts its growth inhibitory effects in colon cancer cells through the induction of G1 cell cycle arrest. The induction of p21(CIP1/WAF1) may be one of the mechanisms by which t10c12 inhibits cell cycle progression in HT-29 cells.     

trans-10,cis-12 conjugated linoleic acid inhibits the G1-S cell cycle progression in DU145 human prostate carcinoma cells

Conjugated linoleic acid (CLA) is a group of positional and geometric isomers of linoleic acid, and has evidenced anti-cancer activities in experimental animal cancer models and in vitro studies. The two predominant isomers of CLA are cis-9,trans-11 CLA (c9t11) and trans-10,cis-12 CLA (t10c12). The present study was performed to study the effect of the individual CLA isomers on DU145 cell growth. The cells were incubated in serum-free medium with different concentrations of the fatty acids. Treatment of cells with t10c12 (at 2.5-10 micromol/L) resulted in a dose-dependent reduction in the numbers of viable cells, whereas c9t11 CLA at a concentration of 5 micromol/L slightly increased viable cell numbers at 3 days (P < .05). DNA flow cytometric analysis revealed that the treatment of DU145 cells with t10c12 for 24 hours induced a small but significant increase in the number of cells in the G1 phase, accompanied by a complementary decrease in cells in the S phase. c9t, however, had no effect on cell cycle progression. To determine the molecular mechanisms underlying t10c12-induced G1 arrest, the levels of cell cycle regulatory proteins were estimated by western blot analyses. t10c12 induced a marked increase in p21(CIP1/WAF1) protein levels in a dose-dependent manner. p27(KIP1) was not affected by t10c12. t10c12 moderately decreased cyclin A and cyclin D1 protein levels (P > .05). However, t10c12 did not affect the expression of cyclin-dependent kinase (CDK) 2, CDK4, or cyclin E. t10c12 increased p21(CIP1/WAF1) bound to CDK2 and attenuated CDK2 activity. These results indicate that t10c12-induced p21(CIP1/WAF1) binds to CDK, and inhibits the activity of this enzyme, which results in the observed decrease in the G1-S progression in DU145 cells.