乌鲁木齐市耐多药结核分枝杆菌基因突变特征分析

目的 了解耐四种一线抗结核药物结核分枝杆菌的有关基因突变特征。方法 对19例耐多药结核病患者和254例全敏结核病患者痰液标本中分离的结核分枝杆菌进行药物敏感性试验,提取其DNA进行PCR扩增,对扩增产物测序并与标准株H37Rv进行比对。结果 19株耐多药结核杆菌和254株全敏结核杆菌均未检测到耐异烟肼基因inhA突变;耐多药组突变率最高的为耐异烟肼katG基因,突变位点为315;耐利福平的突变基因是rpoB,耐药位点为526和531,531位点突变率高于526位点;耐乙胺丁醇的突变基因是embB,耐药位点为206;耐链霉素的突变基因是rpsL和rrs,耐药位点分别为43和1401,rpsL基因的突变率高于rrs基因。结论 耐多药结核分枝杆菌耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素的突变基因分别为katG、rpoB、embB、rpsL和rrs,这对今后乌鲁木齐市耐多药结核病的快速诊断和控制提供了理论依据。     

福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征

目的初步分析福建耐多药结核病(multi-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离结核分枝杆菌利福平和异烟肼的耐药相关基因突变情况。方法自福建福州肺科医院收集耐多药结核分枝杆菌临床分离菌株,采用PCR测序技术测定利福平和异烟肼耐药相关基因,包括rpoB、katG、inhA和mabA-inhA,并与标准菌株基因序列比对,分析基因突变特点。结果共对67株MDR-TB菌株进行了分析,91.04%的菌株在rpoB81 bp RRDR区发生突变,其中,88.06%(59/67)的MDR-TB菌株在rpoB531、526和516位发生突变;79.10%的菌株在katG、inhA或mabA-inhA上发生突变,59.70%(40/67)的菌株在katG315或者mabA-inhA(-15)位发生突变,没有检测到同时在inhA结构基因和基因调节区发生突变的菌株。结论 PCR-DNA测序分析技术可以用于检测MDR-TB临床分离菌株对RFP和INH的药物敏感性。     

江西1010例PCR-线性杂交酶显色法检测结核分枝杆菌耐药性结果分析

目的 评价PCR-线性杂交酶显色法在江西的应用效能，分析江西地区结核分枝杆菌相关耐药基因rpoB、katG、inhA的变异特征。方法 采集江西省肺结核涂阳患者痰标本或经离培养获得的分离株共1010例，采用PCR-线性杂交酶显色法检测rpoB、katG、inhA基因突变情况，同时对其中860例进行了罗氏药敏检测。结果 以罗氏药敏为“金标准”评价PCR-线性杂交酶显色法检测利福平耐药性的敏感度和特异度分别为88.69%和96.24%；检测异烟肼耐药性的敏感度和特异度分别为77.29%和96.39%。在304株利福平耐药rpoB突变株中，突变频率高的位点是531位点、526位点次之；309株katG和inhA基因突变株中，katG S315T1占73.14%、inhA C15T占12.62%。异质性耐药突变菌株占3.61%。结论 PCR-线性杂交酶显色法是耐药结核病快速筛查的有效方法，江西利福平、异烟肼耐药株主要基因突变型为rpoB的S531L和katG的S315T1，高水平耐药菌株所占比例大。     

江苏省结核分枝杆菌耐药相关基因突变特征研究

目的探讨江苏省结核分枝杆菌耐药相关基因的基因型特点及其与耐药表型的关系,为开展耐药结核病快速诊断提供依据。方法通过基因测序技术,分析结核分枝杆菌利福平(rifampin,RFP)耐药相关基因rpoB和异烟肼(isoniazid,INH)耐药相关基因katG不同位点的突变频率,探讨基因型与耐药表型的关系。结果共收集新登记涂阳病人菌株283株,其中255株结核分枝杆菌成功测序,包括38株RFP耐药株,50株INH耐药株,48株链霉素耐药菌株,21株乙胺丁醇耐药株,34株耐多药菌株。28株(11.0%)在rpoB 81bp的基因核心区发生了点突变,21株出现单个位点突变外,7株出现两位点突变,突变形式主要为rpoB531 TCG→TTG单个位点突变。30株(11.8%)发生了katG基因区的突变,所有突变形式为katG315AGC→ACC。rpoB基因突变全部发生于RFP耐药菌株中,katG基因突变全部发生于INH耐药菌株中。结论检测rpoB与katG基因位点的突变对判断江苏省地区耐药结核以及耐多药结核有重要的价值,可以为开展耐药结核病早期诊断提供科学依据。     

反向斑点杂交技术在结核分枝杆菌耐药性检测中的应用研究

目的利用反向斑点杂交技术，建立结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药相关基因突变的快速检测方法。方法根据结核分枝杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因中常见耐药突变区的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分枝杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在36株RFP耐药菌中，有32株被检出在rpoB基因上发生突变，突变检出率为88．89％（32／36）；在39株INH耐药菌中，有30株被检出在katG或inhA基因上发生基因突变或缺失，检出率为76．92％（30／39）；在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34）；在32株EMB耐’药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32）。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）四种主要一线抗结核药的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。     

福建省耐多药结核分枝杆菌相关耐药基因突变特征分析

目的分析福建省耐多药结核分枝杆菌耐药相关基因rpoB、katG和rpsL的突变特征,为建立快速分子药敏方法提供科学依据。方法收集监测点的痰培养分离菌株进行菌种鉴定、药物敏感性试验。选取46株耐多药结核分枝杆菌和15株全敏感株,扩增rpoB、katG和rpsL的基因片段,测序,比对分析。结果全敏感株rpoB和rpsL基因未检测到突变。耐多药菌株rpoB、katG和rpsL基因的突变率分别为91.30%,80.43%,30.43%。耐多药菌株三个基因的突变率均高于全敏感株的突变率,差异均有统计学意义(χ2值分别为46.67,4.29和11.58,P均<0.05)。katG、rpoB基因同时存在突变的耐多药菌株占80.43%,三个耐药基因均有突变的耐多药菌株占30.43%。结论福建省耐多药结核分枝杆菌的常见突变位点为rpoB531和rpoB526,katG315,rpsL43。     

结核分枝杆菌耐药基因的研究进展

随着分子生物学的发展，对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）耐药基因的了解正在逐步加深，已经发现的耐药基因包括与耐利福平有关的rpoB，与耐异烟肼有关的katG、inhA、ahpC、oxyR-ahpC间隔区、kavA，与耐链霉素有关的rpsL和rrs，与耐吡嗪酰胺有关的pncA及与耐乙胺丁醇有关的embC、embA和embB等。当上述基因的某些位点发生突变时，MTB就有可能对相应的药物产生耐药性。本文将对MTB耐药性与耐药基因的关系以及耐药严重程度与耐药基因的关系等做一综述。     

多色荧光探针的滚环扩增技术检测结核分枝杆菌耐药基因

本研究旨在构建基于核酸滚环扩增（RCA）的简便快速、超灵敏的光学生物传感技术,并将其运用于结核杆菌耐药相关基因的多重检测。本研究在2020年2月至2021年5月期间,于陆军军医大学第一附属医院检验科,针对异烟肼、利福平和链霉素耐药的高频基因突变位点katG315（AGC?ACC）、rpoB531（CAC?TAC）和rp...     

单链探针反向杂交试验快速检测结核分支杆菌5种耐药基因

目的:建立可同时检测结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变的单链探针反向杂交试验技术(PCR-LiPA),评价该技术检测结核分支杆菌利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇耐药性的应用价值。方法:采集临床标本,按照实验规程培养、鉴定结核分支杆菌,并对分离到的结核分支杆菌进行药敏试验;PCR扩增结核分支杆菌rpoB、katG、rpsL、rrs、embB耐药基因,单链探针反向杂交试验技术检测耐药基因。将PCR-LiPA结果与DNA测序比较验证方法的准确性,将PCR-LiPA结果与药敏结果比较,了解结核分支杆菌耐药性表型与耐药基因突变的相关性。结果:50株结核分支杆菌传统药物敏感性试验结果显示,12株耐INH,7株耐RFP,15株耐SM,2株耐EMB。PCR-LiPA方法分析结果:耐RFP菌株中4株rpoB基因突变;耐INH菌株中5株KatG基因突变;耐SM菌株中7株、SM敏感株1株rpsl基因突变;耐EMB菌株1株、EMB敏感株1株embB基因突变。与DNA测序结果的符合率为100%。结论:用PCR-LiPA可简便、快速、灵敏、特异地检测出一部分结核分支杆菌耐药株的rpoB、katG、rpsL、rrs、embB基因突变,可用于临床结核分支杆菌耐药性的辅助诊断手段。     

鄞州区50株结核杆菌6种耐药基因检测分析

目的：分析鄞州区结核杆菌耐药相关基因的突变特点,评价DNA测序分析在结核分枝杆菌耐药性检测中的价值。方法：利用DNA测序分析方法检测50株结核分枝杆菌的KatG、inhA、rpoB、embB、rpsL及rrs基因片段。结果;50株结核杆菌中,对INH、RFP、EMB、SM耐药的基因突变率分别为88％（包括KatG、inhA基因）、70％（rpoB基因）、100％（embB基因）、55％（包括rpsL、rrs基因）。其中INH耐药以KatG基因突变为主,SM耐药以rpsL基因突变为主,KatG基因突变多见于315位点,rpoB基因突变多见于531位点,embB基因突变多见于306位点,rpsL基因突变多见于43位点。结论：通过对结核杆菌常见耐药基因检测,将在短时间内区分敏感株及耐药株,有效指导临床用药,具有重要的意义。     

DNA芯片联合检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌及其临床应用

目的 开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因突变的DNA芯片.方法 根据结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果 .结果 35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果 与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外.结论 用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测.     

PCR-SSCP检测结核分枝杆菌利福平耐药性

目的:建立PCR-SSCP快速检测结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB突变。方法:用比例法筛选出70株耐利福平结核分枝杆菌临床分离株,用PCR-SSCP方法检测菌株ropB基因突变,并与比例法检测结果进行对比。结果:70株耐利福平菌株中,单耐利福平菌株为12株,同时耐福平和异烟肼菌株为58株。扩增菌株rpoB基因,70株结核分枝杆菌临床分离株ropB基因突变率为91.43%(64/70),其中,耐多药菌株ropB基因突变率为91.38%(53/58),单耐利福平菌株ropB基因突变率为91.67%(11/12)。结论:用PCR-SSCP技术检测结核分枝杆菌RFP耐药性所用时间大幅缩短,检测出的结果与传统方法一致率高,但结核分枝杆菌表型耐药菌株,存在rpoB基因位点无突变的现象,是否存在其他耐药位点或耐药机制,值得深入研究。     

宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变研究

目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征,为宁波地区耐多药结核病的有效防控提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素菌株40株和链霉素敏感菌株27株。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。对链霉素耐药与基因突变率关系之间的差异采用χ2检验,P0.05为差异有统计学意义。结果 40株耐链霉素菌株中,31株(77.50%)检测到rpsL发生突变。突变位点集中在第43位和第88位密码子;6株耐链霉素菌株(15.00%)检测到2种不同类型的rrs基因突变,分别为A1401G(7.50%,3/40);A514C(7.50%,3/40)。27株链霉素敏感菌株中有4株(14.81%)发生rpsL突变,突变位点集中在第104位和第119位密码子,1株链霉素敏感菌株的rrs基因检测到A1401G突变。耐多药结核分枝杆菌中链霉素耐药株rpsL基因突变率高于链霉素敏感株,两者之间差异有统计学意义(χ2=25.387,P0.05)。结论宁波地区耐多药结核分枝杆菌对链霉素的耐药与rpsL突变高度相关,耐药基因突变类型存在地域差异。     

rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究

目的 探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系. 方法 对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区（RRDR）的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析. 结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09％;53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58％,突变位点包括531、526、522、516、513、511,最主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变;RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义（P＜0.05）. 结论 岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因最主要的突变位点位于531位和526位.     

淮南矿区尘肺结核患者结核分支杆菌L型耐药性及相关基因突变

目的探讨尘肺并发结核患者感染的结核分支杆菌L型（MTB—L）的耐药性及耐药株基因突变情况。方法在97例淮南矿区尘肺并发结核患者中分离出MTB—L52株，采用常规药敏试验（AST法）检测耐药性，采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR．SSCP）法检测katG、rpoB和rpsL耐药基因突变情况。结果52株MTB—L对异烟肼（INH）、利福平（RFP）和链霉素（SM）的耐药率分别为76．92％（40／52）、90．38％（47／52）和50．00％（26152），耐3种药物21例（40．38％），耐2种药物19例（36．54％），单耐药株12例（23．08％），耐药率100％。katG、rpoB和rpsL基因突变率分别为57．70％（30／52）、65．38％（32／52）和40．38％（21／52），52株MTB—L中有41株回复为MTB细菌型，回复率为78．85％（41／52），回复后耐药基因不变。PCR—SSCP法检出3个基因联合突变的有15株（15／52，28．84％），2个基因突变的16株（16／52，30．77％），单基因突变的6株（6／52，11．54％）。结论淮南矿区尘肺并发结核患者感染的MTB-L耐药情况严重，耐药率为100％，耐药株中存在katG、rpoB、rpsL耐药基因突变。     

结核分枝杆菌部分耐药相关基因的突变特点

目的 分析结核分枝杆菌耐药相关基因的突变特点,评价DNA序列分析用于结核分枝杆菌快速耐药性检测的应用价值.方法 利用DNA序列分析检测结核分枝杆菌的katG、rpoB和gyrA基因片段.结果 86.81%(79/91)异烟肼耐药株存在katG基因的点突变和/或单碱基插入,最常见的突变形式为R463L,占76.92%(70/91).90.38%(94/104)的利福平耐药株在rpoB基因耐药决定区(RRDR)发生突变,突变类型有26种,涉及11种氨基酸,突变集中在密码子第507～533位.70.49%(86/122)氧氟沙星耐药株在gyrA基因耐药决定区(QRDR)发生突变,突变主要形式为A90V、D94Y、D94N、D94H及S91P.结论 耐药相关基因突变的检测,可作为临床快速检测结核分枝杆菌耐药性的方法之一.     

某院结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因特征

目的了解某院结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpo B及异烟肼耐药相关基因kat G、inh A的突变特征,为耐药结核病的预防和治疗提供科学依据。方法收集83例结核病患者痰标本,分离培养MTB,采用BD960液体法检测利福平、异烟肼耐药性,提取菌株DNA,采用聚合酶链反应扩增rpo B、kat G、inh A全基因,对扩增产物进行测序分析。结果 83株样本中,39株对利福平耐药,51株对异烟肼耐药。耐利福平菌株rpo B基因突变率为97.44%(38/39),531位点突变率60.53%(23/38),526位点突变率23.68%(9/38),32株出现多位点联合突变。耐异烟肼菌株kat G基因突变率为98.04%(50/51),共发现16种突变类型,其中以kat G 315位点突变为主,占70.00%(35/50),1株为kat G与inh A联合突变。结论该院耐多药MTB产生耐药性与rpo B和kat G基因突变相关,检测MTB耐多药相关基因突变可为早期快速诊断耐药结核病提供参考依据。     

云南省结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征分析

目的 分析云南省结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB突变特征。方法 应用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）法对1株H37Rv结核分枝杆菌标准株及102株结核分枝杆菌临床分离株中包含"利福平耐药决定区"在内的rpoB基因片段进行扩增,并将扩增产物进行直接基因测序,测序结果用MEGA 5软件进行分析。结果 利福平耐药基因型与表型的符合率为92.00%（69/75）,突变类型11种,涉及氨基酸11种,均为碱基的点突变,单位点突变占92.96%,联合突变占7.04%,突变率最高的位点依次是rpoB531（43.66%）、rpoB526（26.76%）、rpoB516（9.86%）,前3个位点的突变占总突变的80.28%。初复治患者临床分离株rpoB耐药突变位点构成差异无统计学意义（（口恶）2=7.653,P=0.354）;耐多药结核与单耐利福平临床分离株rpoB突变位点构成差异有统计学意义（（口恶）2=16.917,P=0.010）。结论 对rpoB的突变的检测在云南省可作为利福平耐药筛查的重要指标。rpoB基因突变可能不受是否使用过利福平和使用时间长短的影响,但是异烟肼可能会影响结核分枝杆菌rpoB基因突变的分子机制。     

PCR-反向斑点杂交技术检测结核分枝杆菌及其耐药基因的突变

目的探讨PCR-反向斑点杂交技术用于检测结核分枝杆菌及其耐药基因突变的效果,了解绍兴地区结核分枝杆菌耐药基因的突变情况。方法根据结核分枝杆菌基因特征,运用反向斑点杂交技术构建特异性的PCR反应体系,并用10株非结核分枝杆菌、3株其他菌株（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和鲍曼不动杆菌）和1株H37Rv结核分枝杆菌对该反应体系进行验证,同时用该体系对来源于绍兴市立医院的125份抗酸杆菌涂片阳性痰液样本及150株结核分枝杆菌进行5种耐药突变基因（rpoB、katG、inhA、embB、rpsL）的检测。结果构建的PCR-反向斑点杂交体系用于10株非结核分枝杆菌、3株其他菌株的检测结果均为阴性,H37Rv标准株可检出,但未检出耐药突变位点。275份结核分枝杆菌样本中对4种抗结核药物均敏感的菌株有201份（73．1％）,单药耐药20份（7．3％）,耐多药54份（19．6％）;共检出133个耐药突变位点,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的耐药突变位点数分别为41个、51个、30个、11个;前5位突变位点为315M、43M、S531L、15M和H526Y。结论绍兴地区耐药结核分枝杆菌以耐多药为主。构建的PCR．反向斑点杂交体系用于检测结核分枝杆菌特异性强、灵敏度高,可快速检测结核分枝杆菌的耐药基因。     

合肥地区异烟肼耐药结核分枝杆菌KatG基因突变的分子特征

目的 了解合肥地区结核分枝杆菌异烟肼(Isoniazid,INH)耐药株katG基因突变特点.方法 应用PCR-直接测序法对合肥地区肺结核病人痰液中分离的86株结核分枝杆菌的katG基因731bp序列进行测定分析.结果 86株结核分枝杆菌中67株对INH耐药,19株对INH敏感;67株耐INH临床分离株中PCR成功扩增61株,其中56株发生katG基因突变,突变率为91.8％ (56/61);katG基因发生联合突变的有30株,突变率为49.2％ (30/61),26株发生katG基因单位点突变,突变率为42.6％ (26/61).突变位点主要集中在463位精氨酸和315位丝氨酸,突变率分别为93.4％(57/61)和42.6％ (26/61).而在19株INH敏感株中发现有78.9％ (15/19)株存在Arg4631eu突变,突变形式与INH耐药株相同.结论 在合肥地区,KatG基因315位密码子突变是菌株INH表型耐药的重要分子基础,以Ser315Thr错义突变为主.KatG基因463位密码子突变与INH耐药表型没有相关性,不是结核杆菌INH耐药的分子标志.该位点突变可能是基因多态性,与结核菌治疗带来的选择性压力无关.