miR-425-5p在调控宫颈癌HeLa细胞功能中的作用及其机制

目的 miR-425-5p对宫颈癌HeLa细胞功能的调控作用及其机制。方法将体外培养的HeLa细胞分为miR-NC组(转染miR-425-5p模拟物对照)、miR-425-5p组(转染miR-425-5p模拟物)、anti-miR-NC组(转染miR-425-5p抑制剂对照)和anti-miR-425-5p组(转染miR-425-5p抑制剂)共四组。采用RT-PCR检测四组细胞中miR-425-5p的表达水平,CCK-8法、克隆形成试验、Transwell试验、划痕试验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、克隆形成、侵袭、迁移和凋亡能力。生物信息学软件预测、双荧光素酶报告基因试验检测miR-425-5p和磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)的靶向关系,Western blot检测miR-425-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果转染miR-425-5p模拟物后HeLa细胞中miR-425-5p的表达水平较miR-NC组明显升高,而miR-425-5p抑制剂后miR-425-5p的表达水平较anti-miR-NC组明显降低,差异均具有统计学意义(均P0.05)。与miR-NC组相比,miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显升高,而细胞凋亡率明显降低,差异均具有统计学意义(均P0.05);与anti-miR-NC组相比,anti-miR-425-5p组中细胞OD值、克隆形成率、迁移率和侵袭细胞数均明显降低,而细胞凋亡率明显升高,差异均具有统计学意义(均P0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实miR-425-5p能够与PTEN 3′UTR靶向结合,Western blot试验结果证实miR-425-5p可负向调控PTEN蛋白的表达。结论 miR-425-5p可促进HeLa细胞增殖、侵袭、迁移并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控PTEN表达有关。     

非转移性黑素瘤糖蛋白B对黑素瘤细胞增殖、迁移及黑素形成的影响北大核心CSCD

目的探讨非转移性黑素瘤糖蛋白B（GPNMB）对黑素瘤细胞增殖、迁移及黑素形成的影响。方法以人原代黑素细胞、黑素瘤细胞系M14、G-361为研究对象,采用免疫荧光法检测GPNMB表达量。细胞分为三组,实验组加入GPNMB—siRNA,阴性对照组加入阴性对照-siRNA,空白对照组为未经处理的细胞。实时定量逆转录（RT）-PCR检测GPNMB—siRNA的转染效率,以噻唑蓝法和Transwell小室法分别检测细胞的增殖及侵袭能力,并用分光光度计检测黑素水平,结果进行t检验分析。结果GPNMB—siRNA转染下调了GPNMBmRNA及蛋白的表达水平,并显著抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移能力。其中黑素瘤M14细胞和G361细胞的增殖能力分别降低35％和40％,迁移能力分别降低49％和51％;同时,黑素细胞、黑素瘤M14细胞和G361细胞黑素形成分别降低73％、82％和69％。结论GPNMB缺失能抑制黑素瘤的增殖、迁移以及黑素瘤中黑素的形成,表明GPNMB在黑素瘤的发生发展中起重要作用。     

miR-203调控锌指蛋白281表达对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响

【摘要】 目的 初步探究微小RNA-203（miR-203）调控锌指蛋白281（ZNF281）对黑素瘤细胞增殖、迁移的影响。方法 常规培养人血管内皮细胞系ECV304、人黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2,实时荧光定量PCR检测各细胞系中miR-203表达情况,Western免疫印迹法检测各细胞系中ZNF281蛋白水平。A375、M14细胞分别分为5组：对照组（细胞正常培养）、miR-203模拟物对照组（加入miR-203模拟物阴性对照）、miR-203抑制剂对照组（加入miR-203抑制剂阴性对照）、miR-203模拟物组（加入miR-203模拟物）、miR-203抑制剂组（加入miR-203抑制剂）。实时荧光定量PCR检测各组A375、M14细胞中miR-203的表达,CCK8法检测各组A375、M14细胞增殖活性,Transwell实验检测各组A375、M14细胞迁移数量,Western免疫印迹法检测各组A375、M14细胞中ZNF281蛋白的表达。双荧光素酶验证miR-203与ZNF281的靶向关系。多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q法。结果 与血管内皮细胞系ECV304相比,黑素瘤细胞系A375、M14、SK-MEL-28、SK-MEL-2中miR-203表达水平较低（均P < 0.05）,ZNF281蛋白水平较高（均P < 0.05）。与对照组、miR-203模拟物对照组、miR-203抑制剂对照组相比,miR-203模拟物组A375、M14细胞中miR-203水平均显著升高（F = 487.632、68.454,均P < 0.05）,细胞迁移数量均显著降低（均P < 0.05）,ZNF281蛋白表达均显著降低（均P < 0.05）;miR-203抑制剂组A375、M14细胞中miR-203表达均显著降低（均P < 0.05）,细胞迁移数量均显著增加（均P < 0.05）,A375细胞中ZNF281蛋白表达显著升高（均P < 0.05）,36、48、60、72 h A375细胞增殖活性显著升高（均P < 0.05）,24、36、48、60、72 h M14细胞增殖活性均显著升高（均P < 0.05）。miR-203与ZNF281之间存在靶位点。结论 上调miR-203表达可抑制黑素瘤细胞增殖、迁移,下调miR-203表达可促进黑素瘤细胞增殖、迁移,可能通过调控ZNF281的表达实现。     

miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 研究miR-145对人角质形成细胞系HaCaT细胞增殖、细胞周期及凋亡的调控效应。 方法化学合成miR-145的模拟物,采用瞬时转染的方法过表达miR-145。采用实时PCR方法检测miR-145的表达。MTS方法检测过表达miR-145对HaCaT细胞增殖的影响。流式细胞仪分析过表达miR-145对细胞周期及凋亡的影响。采用荧光素酶实验,实时PCR和Western印迹鉴定NRAS是否为miR-145的靶基因。 结果 与阴性对照（NC）mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组miR-145表达水平上调（85.00 ± 1.21）倍,两组差异有统计学意义（t = 115.90,P < 0.001）。转染miR-145 mimics有抑制HaCaT细胞的增殖作用（F = 8.76,P = 0.008）;转染后的时间因素（24、48、72、96 h）对细胞有影响（F = 17.85,P < 0.001）,转染mimics和培养时间之间不存在交互作用（F = 1.21,P = 0.18）。与NC mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组的早期凋亡、晚期凋亡细胞比例均明显增加,差异有统计学意义（18.9% ± 4.1%比4.3% ± 1.2%,t = 7.126,P < 0.01;9.3% ± 2.3%比3.6% ± 1.6%,t = 12.38,P < 0.01）。与NC mimics转染组相比,miR-145 mimics转染组HaCaT细胞的G2及S期细胞比例均明显降低,差异均有统计学意义（6.26% ± 1.2%比19.36% ± 3.45%,t =7.610,P = 0.017;7.91% ± 1.3%比18.56% ± 5.23%,t = 7.230,P = 0.019）,而处于G1期的细胞比例升高,差异也有统计学意义（85.83% ± 5.2%比62.08% ± 6.23%,t = 11.78,P = 0.007）。与NC mimics联合psi-CHECK2-NRAS-wild组相比,在293T细胞中共转染miR-145 mimics和psi-CHECK2-NRAS-wild质粒,其荧光素酶值明显下降,miR-145可抑制含NRAS mRNA 3′UTR报告基因的荧光素酶表达（t = 11.09,P = 0.008）;而将NRAS mRNA 3′UTR报告基因上miR-145的结合位点进行突变后,转染miR-145 mimics对含NRAS mRNA 3′UTR报告基因的荧光素酶表达无明显的影响（P > 0.05）。实时PCR和Western印迹结果表明,过表达miR-145 mimics后,NRAS mRNA表达水平未出现明显变化（P > 0.05）,对NRAS蛋白水平的表达有明显的抑制（1.52 ± 0.07比0.20 ± 0.02,t = 28.43,P < 0.01）。 结论 miR-145可能通过NRAS影响HaCaT细胞的周期从而抑制细胞的增殖,同时促进HaCaT细胞的凋亡。     

miR-200b-5p靶向ATAD2调控P13K/AKT信号通路参与宫颈癌血管生成的作用机制

目的探究miR-200b-5p靶向调控ATAD2基因介导P13K/AKT信号通路对宫颈癌血管生成的作用机制。方法采集2016年3月至2018年3月间日照市妇幼保健院诊治的90例宫颈癌手术切除患者的术中标本作为研究对象。将采集到的标本行免疫组化检测,qRT-PCR检测组织miR-200b-5p、ATAD2表达,Western blot检测组织中ATAD2蛋白表达。细胞转染并分组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b-5p、ATAD2、PI3K、AKT mRNA表达水平;Western blot检测ATAD2、PI3K、AKT、VEGF蛋白表达水平。体外管腔形成实验比较各组管腔数目。结果宫颈癌组织中miR-200b-5pmRNA低表达,ATAD2 mRNA表达水平及蛋白表达均呈高表达,差异均具有统计学意义(均P0.05);并伴随高VEGF阳性表达率和MVD。细胞转染实验提示与Blank组和NC组相比,miR-200b-5p mimic组miR-200b-5p表达量显著升高,ATAD2、PI3K、AKT表达显著下降,差异均具有统计学意义(均P0.05);miR-200b-5p mimic组和ATAD2siRNA组VEGF、ATAD2、PI3K、AKT蛋白表达水平均显著下降,差异均具有统计学意义(均P0.05);且miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组表达趋势相比miR-200b-5p mimic组更显著,差异均具有统计学意义(均P0.05);而miR-200b-5p inhibitor组差异与之相反,差异均具有统计学意义(均P0.05)。体外管腔形成实验提示管腔数目变化miR-200b-5p inhibitor组显著上升,miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组显著下降,差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论促进miR-200b-5p表达,抑制ATAD2基因,抑制PI3K、AKT表达,从而抑制P13K/AKT信号通路,最终实现对人宫颈癌细胞血管生成的抑制。     

皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的影响

目的探讨皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达以及其对促血管新生因子VEGF-A和VEGFR-1的影响。方法 Northern blotting检测原代人黑素瘤细胞、黑素瘤细胞株A375和原代人表皮黑素细胞miRNA-34c表达。构建miRNA-34c基因过表达与基因敲低的黑素瘤细胞株A375细胞系即高表达miRNA-34c组和低表达miRNA-34c组,以空载体转染黑素瘤细胞株A375作为空载体对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性。qRT-PCR和Western blotting分别检测各组VEGF-A、VEGFR-1 mRNA和蛋白表达。结果与原代人表皮黑素细胞相比,黑素瘤细胞株A375和原代人黑素瘤细胞中miRNA-34c的表达降低(P<0.05)。高表达miRNA-34c组、低表达miRNA-34c组和空载体对照组细胞增殖活性无明显差异(P>0.05)。高表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体对照组降低(P<0.05)。低表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体组升高(P<0.05)。结论 miRNA-34c在皮肤黑素瘤中呈现特异性下调,miRNA-34c可能通过对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的下调参与皮肤黑素瘤的发生与发展。     

犀地凉血方通过LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络对HaCaT细胞增殖、凋亡影响的研究

目的探讨犀地凉血方对HaCaT细胞LncRNA NEAT1/miR-485-5p/STAT3调控网络及细胞增殖、凋亡的影响。方法以IL-17诱导的HaCaT细胞为研究对象, 通过qPCR、Western印迹法检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3 mRNA和蛋白在HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK细胞)中的表达。采用荧光原位杂交技术(FISH)观察LncRNA NEAT1、miR-485-5p在HaCaT细胞中的表达;采用双萤光素酶报告基因实验验证LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3之间的靶向调控关系。犀地凉血方煎煮取汁给予大鼠灌胃后采集含药血清, 以含药血清干预和/或LncRNA-NEAT1过表达载体转染HaCaT细胞, 将HaCaT细胞分对照组、过表达LncRNA NEAT1组、犀地凉血方组、犀地凉血方+过表达LncRNA NEAT1组, 采用qPCR、Western印迹法、流式细胞仪、CCK8等实验技术分别检测LncRNA NEAT1、miR-485-5p、STAT3表达及细胞增殖、凋亡情况。采用独立样本t检验、单因素方...     

不同肤色个体表皮角质形成细胞Caspase14表达的研究

目的 探讨不同肤色人群角质形成细胞中Caspase14表达变化,明确黑素细胞和（或）黑素对其表达的影响。 方法 以Western印迹检测不同肤色个体原代角质形成细胞Caspase14的表达。取体外培养不同肤色的2代角质形成细胞,分别加入不同肤色的黑素细胞在分化培养基下共同培养24 h,以不加黑素细胞组为对照,Western 印迹检测Caspase14的表达。结果 浅、深肤色个体包皮原代角质形成细胞Caspase14的表达存在显著差异,深肤色者（Fitzpatrick Ⅳ/Ⅴ）原代角质形成细胞中Caspase14的表达显著高于浅肤色者（FitzpatrickⅠ/Ⅱ）（P ＜ 0.01）;深、浅肤色个体的角质形成细胞在与不同肤色个体的黑素细胞在分化培养基中共培养后24 h后,检测发现,与对照组相比,浅肤色个体角质形成细胞Caspase14表达的增加,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,而深肤色个体角质形成细胞Caspase14的表达则显著上调（P ＜ 0.05）。结论 深肤色个体角质形成细胞Caspase14表达显著高于浅肤色个体者。黑素细胞显著增加深肤色者角质形成细胞中Caspase14水平的表达。     

miR-21、miR-494对黑素瘤A375细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞的最佳有效转染浓度及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响.方法 取6个浓度梯度的miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞,实时荧光定量PCR法检测相应的miRNA.继而用Cy5标记的miRNA模拟物阴性对照转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率.用流式细胞仪检测转染后细胞增殖的变化.结果 从A375细胞中成功提出miRNA.定量PCR结果显示,当转染物miR-21抑制物浓度为120 nmol/L时,转染细胞内有miR-21模拟物最大程度的下调表达,2-△△Ct值为0.80(0.65 ～ 0.92),低于对照组;当miR-494模拟物浓度为250 nmol/L时,转染细胞内有miR-494模拟物最大程度的上调,2-△△Ct值为126.82(111.52～144.22),明显高于对照组;miR-21抑制物转染组与miR-494模拟物转染组G1期细胞比率分别为(61.61±3.25)％、(61.05±3.17)％,高于对照组(P＜0.05);增殖指数分别为(38.39±3.25)％、(38.95±3.17)％,低于对照组(P＜0.05);细胞凋亡率分别为(27.74±1.39)％、(34.30±2.35)％,高于对照组(P＜0.01),细胞转染效率达90％以上.结论 miR-21抑制物和miR-494模拟物促使肿瘤细胞的G1期阻滞和促进凋亡作用,miR-21可增强A375细胞增殖,有原癌基因样功能;miR-494可抑制A375细胞增殖,有抑癌基因样作用.     

miR-769-5p在皮肤黑素瘤中的表达及其对细胞增殖的影响

目的探究miR-769-5p在皮肤黑素瘤(malignant melanoma,MM)中的表达,以及其对人黑素瘤A375、G361细胞增殖的影响,以期为疾病的临床治疗提供新思路。方法收集本院保存的62例MM患者肿瘤组织以及对应癌旁组织进行研究,实时定量PCR(qRT-PCR)检测组织中miR-769-5p的表达,分析miR-769-5p表达与患者临床病理参数的关系,体外培养A375、G361细胞,转染miR-769-5p inhibitor分为空白对照组、阴性转染组、miR-769-5p转染组,MTT法检测细胞增殖情况;平板细胞克隆实验检测菌落形成情况;流式细胞仪检测细胞凋亡以及周期分布情况;裸鼠模型肿瘤形成实验评估体内肿瘤生长情况。结果 MM组患者miR-769-5p mRNA表达明显高于癌旁组织(P0.05)。miR-769-5p表达与性别、年龄、病灶溃疡情况无关,与淋巴结转移、临床分期相关(P0.05)。与HEM-L细胞系相比,A375、G361细胞系miR-769-5p mRNA表达均升高(P0.05)。与空白对照组、阴性转染组相比,miR-769-5p转染组细胞中miR-769-5p表达、菌落数量、小鼠肿瘤体积均降低,细胞抑制率、G1期DNA含量均升高(P0.05)。结论 miR-769-5p在MM中呈高表达,抑制其表达后能够影响细胞周期的进展,使细胞阻滞于G0/G1期,进而降低细胞增殖进程。     

Fam114A1蛋白对黑素细胞生物学功能影响的初步研究

【摘要】 目的 初步探讨Fam114A1对黑素细胞生物学功能的影响。方法 以黑素瘤细胞A375为工具细胞株,通过慢病毒转染的方式构建稳定过表达和抑制Fam114A1蛋白的细胞株,即过表达组和表达抑制组,以转染空载慢病毒的A375细胞作为对照组。实时荧光定量PCR检测Fam114A1对黑素合成相关基因酪氨酸酶（TYR）、酪氨酸酶相关蛋白1（TYRP1）、前黑素小体蛋白（PMEL）、小眼畸形相关转录因子（MITF）和多巴色素异构酶（DCT）mRNA表达的影响,Western印迹法检测TYR、MITF蛋白的表达,MTT法、Transwell迁移和黏附实验分别检测Fam114A1对A375细胞增殖活性、迁移细胞数及黏附能力的影响。统计分析采用单因素方差分析和Dunnett-t检验。结果 荧光显微镜观察慢病毒转染效率均在90%左右。与对照组A375细胞Fam114A1相对表达水平（0.850 ± 0.120）相比,过表达组显著升高（1.507 ± 0.170,t = 5.888,P = 0.001）,而表达抑制组显著降低（0.397 ± 0.120,t = 4.065,P = 0.007）,成功构建稳定过表达和抑制Fam114A1的A375细胞株。实时荧光定量PCR及Western印迹结果显示,表达抑制组TYR和MITF mRNA及蛋白表达均显著低于对照组（均P < 0.01）,而过表达组TYR和MITF mRNA及蛋白表达与对照组差异无统计学意义（均P > 0.05）。与对照组相比,表达抑制组细胞增殖活性和黏附能力显著增强（P = 0.009、0.001）,细胞迁移能力显著减弱（P = 0.005）,而过表达组仅细胞迁移能力显著增强（P = 0.021）。结论 Fam114A1可影响A375的增殖活性、迁移和黏附能力,且影响黑素合成相关蛋白TYR和MITF的表达,可能是一种参与调控黑素细胞生物学活性的功能蛋白。     

微小RNA-181b-5p对皮肤黑素瘤细胞株增殖和侵袭的作用及机制研究

【摘要】 目的 探讨微小RNA（miRNA）-181b-5p是否通过靶向普列克底物蛋白（PLEK）抑制皮肤黑素瘤（CM）细胞的增殖及侵袭能力。方法 生物信息学分析CM核心基因;双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-181b-5p和PLEK的靶向结合。采用RNA oligo和siRNA分别调控A375细胞miRNA-181b-5p和PLEK的表达,具体分组为：模拟物阴性对照组、miRNA-181b-5p模拟物组、抑制剂阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂组、PLEK siRNA组、siRNA阴性对照组、miRNA-181b-5p抑制剂和对照siRNA共转染组以及miRNA-181b-5p抑制剂和PLEK siRNA3共转染组。上述各组用相应试剂处理细胞48 h后,采用qPCR检测A375细胞中miRNA-181b-5p和PLEK mRNA的表达,Western印迹检测PLEK蛋白的表达,Transwell小室侵袭实验检测A375细胞的侵袭能力;继续培养24 ~ 96 h后,CCK8实验检测A375细胞增殖能力。结果 PLEK为CM的核心基因,CM原位癌组织较癌旁组织高表达PLEK（P = 0.031）,转移组织较原位癌组织高表达PLEK（P = 0.001）。与人表皮黑素细胞HEMa-LP相比,A375细胞高表达PLEK mRNA（3.884 ± 0.156比0.997 ± 0.010,t = 18.48,P < 0.001）及PLEK蛋白（2.840 ± 0.301比1.029 ± 0.094,t = 5.47,P = 0.005）,低表达miRNA-181b-5p（0.333 ± 0.042比0.967 ± 0.069,t = 7.83,P = 0.001）。双荧光素酶报告基因实验显示,miRNA-181b-5p和PLEK靶向结合。与模拟物阴性对照相比,miRNA-181b-5p模拟物转染后A375细胞的存活率显著降低（48 h,t = 7.96,P = 0.015;72 h,t = 7.50,P = 0.002;96 h,t = 7.96,P = 0.001）,侵袭能力也显著降低（t = 5.07,P = 0.007）;相反miRNA-181b-5p 抑制剂组A375细胞存活率高于抑制剂阴性对照组（24 h,t =5.38,P = 0.013;48 h,t = 5.36,P = 0.013;72 h,t =7.63,P = 0.005;96 h,t =5.99,P = 0.004）,侵袭能力也高于抑制剂阴性对照组（t = 7.24,P = 0.002）;与对照siRNA组相比,PLEK siRNA转染后A375细胞的增殖能力降低（48、72、96 h时,P值分别为0.015、0.011、0.001）,侵袭能力也降低（t = 4.93,P = 0.008）;与miRNA-181b-5p 抑制剂和对照 siRNA共转染组相比,miRNA-181b-5p 抑制剂和PLEK siRNA共转染组A375细胞的增殖率明显降低（24、48、72、96 h时,P值分别为0.042、0.042、0.037、0.017）,侵袭能力也明显降低（t = 8.52,P = 0.001）。结论 miRNA-181b-5p抑制A375细胞增殖和侵袭能力,其机制涉及靶向下调PLEK的表达。     

宽谱中波紫外线对人表皮黑素细胞非经典Wnt通路的作用研究

目的 探讨宽谱中波紫外线（BB-UVB）照射对黑素细胞增殖率、酪氨酸酶活性、黑素含量的影响。 方法 分别用0、10、20、30、40、50、100、200、300 mJ/cm2 BB-UVB照射原代培养的黑素细胞,采用CCK8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量。分别用0、30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,实时荧光定量PCR检测非经典Wnt通路相关基因mRNA的表达。100 mJ/cm2 BB-UVB照射黑素细胞,用Western 印迹检测作用前后非经典Wnt通路相关基因蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用独立样本t检验。 结果 与对照组相比,10 ~ 300 mJ/cm2 BB-UVB照射后,细胞增殖率均逐渐降低,BB-UVB剂量 > 100 mJ/cm2时细胞存活率 < 50%,同时,10 ~ 100 mJ/cm2 BB-UVB照射后酪氨酸酶活性逐渐增加,100 mJ/cm2 BB-UVB组黑素含量明显增加,差异有统计学意义（均P < 0.05）。30、50、100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1 mRNA的表达均较对照组逐渐减少,JNK、MITF、RAC1、TYR的表达均较对照组逐渐升高,而30、50 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量均较对照组降低,100 mJ/cm2 BB-UVB组WNT5A mRNA表达量则明显升高（P < 0.05）。100 mJ/cm2 BB-UVB照射后,WIF-1蛋白的表达量较对照组降低,WNT5A、JNK、MITF、RAC1、TYR蛋白表达较对照组升高（P < 0.05）。 结论 紫外线照射降低黑素细胞增殖率,提高黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量。WIF-1基因可能抑制黑素生成。WIF-1基因表达降低可能通过非经典通路Wnt蛋白的综合作用激活JNK/MITF/TYR通路,最终促进黑素合成。     

微RNA-125a靶向白细胞介素23受体信号通路抑制HaCaT细胞增殖机制的初步研究

目的 探讨微RNA(miR)-125a抑制角质形成细胞增殖的相关机制.方法 用白细胞介素(IL)-23干预处理人永生化角质形成细胞(HaCaT)24h后,分为miR-125a组和miR-NC组,分别转染miR-125a过表达质粒和过表达对照质粒.采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测两组转染后0、24、48、72 h H...     

miR-26a靶向EZH2在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中的作用机制研究

目的:探讨长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中miRNA-26a的表达情况,以及上调或下调miR-26a表达对全基因组甲基化水平、靶基因组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2（EZH2）及细胞老化的影响。方法:以10 J/cm 2 UVA照射人皮肤成纤维细胞,分别在第0、3、7天提取RNA,实时定量反转录PCR（...     

抗白灵霜在黑素合成中对TYR和MITF的调节作用

目的：明确抗白灵霜(KBL)在黑素合成中对TYR和MITF的调节作用。方法：体外培养小鼠B16黑素瘤细胞,分为空白对照组和不同浓度KBL（5 mg/mL,10mg/mL和15mg/mL）用NaOH溶解法检测黑素合成量,Real time-PCR检测TYR和MITF基因mRNA表达,Western Blot检测KBL组TYR和MITF蛋白的表达。结果：各浓度KBL组黑素合成量及TYR和MITF基因的mRNA和蛋白表达的水平均高于空白对照组,且呈浓度依赖性。结论：KBL可能通过上调MITF基因的表达,激活参与黑素合成的TYR以促黑素合成。     

人黑素瘤细胞株IGFBP7基因启动子区CpG岛异常甲基化的研究

目的 探讨人黑素瘤细胞株和原代黑素细胞IGFBP7启动子区CpG岛甲基化状态与IGFBP7表达的关系。 方法 亚硫酸氢钠修饰后测序法检测4株人黑素瘤细胞和原代黑素细胞中IGFBP7基因启动子区CpG岛DNA甲基化状态。 结果 IGFBP7表达阴性的3个细胞株（A375、M14、SK-MEL-1）和表达阳性的2个细胞株（MV3及原代黑素细胞）的甲基化模式存在差异,聚类分析各自聚为一类。结论 IGFBP7基因启动子区CpG岛甲基化状态和基因表达有一定相关性。     

miRNA-188-5p表达下调通过调控PTEN/Akt途径抑制皮肤鳞状细胞癌细胞的增殖和侵袭能力

【摘要】 目的 探讨miRNA-188-5p（miR-188-5p）在皮肤鳞状细胞癌（鳞癌）组织和细胞中的表达,分析其表达下调对皮肤鳞癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法 2012年11月至2018年10月在河南省新乡医学院第一附属医院收集50例手术切除的皮肤鳞癌组织及50例癌旁正常皮肤组织。实时荧光定量PCR（qPCR）检测皮肤鳞癌组织、癌旁正常皮肤组织、皮肤鳞癌细胞系SCL-1、A431、HSC-5和人永生化角质形成细胞株HaCaT细胞中miR-188-5p的表达。培养的A431和HSC-5细胞分别分为2组：miR-188-5p抑制剂组和阴性对照组,对转染miR-188-5p抑制剂的细胞和阴性对照组细胞,通过qPCR检测miR-188-5p的相对表达（2-△△Ct）,并以CCK8法和Transwell小室分别检测各组细胞的增殖活性和侵袭能力。双荧光素酶报告实验检测miR-188-5p和PTEN的相互作用,Western印迹法检测PTEN、总Akt（t-Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达。两独立样本比较采用t检验。结果 皮肤鳞癌组织中miR-188-5p的相对表达（5.213 ± 3.138）显著高于癌旁正常皮肤组织（1.010 ± 0.364,t = 9.187,P < 0.001）。SCL-1、A431和HSC-5细胞中miR-188-5p的表达（3.858 ± 0.163、7.068 ± 0.262和4.572 ± 0.413）均显著高于HaCaT细胞（1.079 ± 0.300,t = 17.890、21.110和8.737,均P < 0.05）。与阴性对照组相比,miR-188-5p抑制剂组A431和HSC-5细胞miR-188-5p表达显著下调（均P < 0.01）,细胞增殖和侵袭能力下降（均P < 0.05）。双荧光素酶报告实验显示,miR-188-5p表达下调显著上调A431和HSC-5细胞中PTEN的表达,但抑制p-Akt的表达。结论 miR-188-5p在皮肤鳞癌组织和细胞中高表达,且miR-188-5p表达下调可能通过调控PTEN/Akt途径,抑制皮肤鳞癌细胞增殖活性和侵袭能力。