济南市轻重症手足口病患儿肠道病毒71型结构蛋白基因特征分析

目的 比较分析济南市轻重症手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)病原肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)结构蛋白基因及氨基酸变异情况。方法 对2017年济南市轻重症手足口病患儿EV71细胞分离株结构蛋白基因序列进行RT-PCR扩增测序,应用EditSeq和MegAlign等软件对结构蛋白基因进行序列拼接及核苷酸、氨基酸同源性比对,应用Mega 5.2软件构建VP1基因系统进化树。结果 轻重症患儿EV71分离株结构蛋白基因核苷酸和氨基酸同源性分别为93.0%～98.8%和99.0%～99.8%,均属于C4a基因亚型。经VP1基因同源性分析,济南市EV71分离株与2017年江苏株（GenBank ID: MG520666,同源性99.3%）、2015年河南株（KU744452,同源性99.2%）、2015年北京株（KU376386,同源性99.2%）及2016年山东潍坊株（MG588036,同源性99.0%）亲缘关系较近。死亡患儿EV71分离株VP1蛋白出现E145Q突变,重症EV71分离株分别出现VP1蛋白A19V、T101I,VP3蛋白M150I突变。结论　济南市轻重症HFMD患儿EV71分离株均属于C4a亚型,与江苏、河南、山东及北京等地的EV71株亲缘关系较近,其VP1蛋白145位氨基酸残基可能是影响病毒毒力的重要位点。     

从手足口病病例分离的两株柯萨奇病毒A组4型毒株的VP4～VP2区基因特征分析

目的研究2008年甘肃省从手足口病（Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD）患儿分离的柯萨奇病毒A组4型（Coxsackievirus A4,CVA4）的VP4～VP2区特征。方法采集门诊就诊的两例HFMD患儿的临床标本,接种人横纹肌肉瘤细胞（Human Rhabdomyosarcoma,RD细胞）分离病毒,然后对阳性病毒分离物使用逆转录-聚合酶链反应法扩增病毒VP4～VP2区,并进行核苷酸序列测定和分析,通过生物信息学的方法进行分子定型,最后与其它16株基因数据库中登录的CVA4株构建亲缘进化树图。结果使用RD细胞成功地从两例HFMD患儿的临床标本中分离到病毒,分子定型鉴定为CVA4。2株CVA4在VP4～VP2区核苷酸同源性为94.6%,氨基酸同源性为100%;与CVA4原型株High Point/USA/1948株的核苷酸和氨基酸同源性分别为85.5%～85.8%和99.3%。在亲缘进化树图中显示,2株CVA4分离株位于独立的进化支中。结论与基因数据库中登录的在日本、蒙古分离的CVA4株相比,从甘肃省2008年HFMD病例分离的两株CVA4,在VP4～VP2区核苷酸序列上差异很大。同源进化分析结果表明,甘肃省CVA4属于独立的进化支。     

长沙市2010年手足口病EV71型VP1区基因序列分析

目的了解2010年长沙市手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）重症和普通病例肠道病毒71型（human Enterovirus 71,EV71）VP1区基因特征。方法收集12例HFMD重症和普通病例的咽拭子或肛拭子标本进行VP1区基因RT-PCR扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用sequin软件提交至GenBank,Lasergene和Mega5软件对测序结果进行氨基酸比对分析和构建进化树。结果 12株EV71 VP1区基因序列在进化树上与C基因型中的C4a亚型代表株属同一分支,在核苷酸同源性分析中,12株EV71与C4a亚型代表株（3254-TAI-98）的同源性达到92.6%-93.3%,高于与A、B、C1、C2、C3、CVA16型或亚型代表株的同源性（分别为79.9%-80.7%、83.1%-84.0%、87.9%-88.7%、89.1%-89.8%8、7.8%-88.2%和57.3%-58.4%）;12株EV71病毒VP1之间的核苷酸有高度的同源性：同源性为98.1%-100.0%,高于与C4亚型代表株的同源性（92.6%-93.3%和91.8%-92.7%）。2010年分离自长沙的重症和普通病例与2008年分离自北京、深圳和阜阳的EV71病毒VP1基因序列之间的氨基酸变异位点少。结论 2010年长沙市流行的EV71型病毒属于C基因型中的C4亚型;12例HFMD重症和普通病例的EV71 VP1区基因序列差异较小;不同时间、不同地区和不同病例来源的EV71 VP1区氨基酸变异位点无关联。     

柯萨奇病毒B组3型四川分离株的基因特征分析

目的了解从四川省急性弛缓性麻痹(acute flaccid paralysis,AFP)病例和手足口(hand-foot-and-mouth disease,HFMD)病例中分离到的柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)的基因特征,探索其变异规律及在四川省的传播动态。方法对2008—2020年AFP病例和2013—2019年非肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV 71)和柯萨奇A16型(Coxsackie virus A16,CVA 16)感染的HFMD病例标本进行细胞分离培养,血清学鉴定,全VP1基因序列的测定及核苷酸同源性和遗传进化的分析,用MEGA6.0软件以邻位连接法构建遗传进化树,bootstrap检验1 000次;以Kimura 2参数方法计算基因型间遗传距离。结果从2008—2020年4 378份四川省AFP病例标本中分离鉴定到13株CVB3,从2013—2019年四川省454份非EV 71和CVA16感染的HFMD病例标本中分离鉴定到1株CVB3。14株CVB3四川分离株之间核苷酸同源性为84.4~98.8%,氨基酸同源性为84.1~100.0%。14株CVB3均属于G基因型,其中11株在G1基因亚型,3株在G2基因亚型。结论四川省存在CVB3病毒的多条传播链,流行趋势呈现周期性变化;G1、G2两种基因亚型在四川省同时流行,G1基因亚型为四川省CVB3的优势基因亚型。     

北京市西城区手足口病患儿肠道病毒71型VP1区基因进化分析

目的了解北京市西城区2015年手足口病（HFMD）患儿肠道病毒71型（EV 71）分离株VP1区基因特征,分析其变异情况。方法收集北京市西城区2015年HFMD病原学检测分型鉴定为EV 71的阳性标本,对部分标本进行病毒分离、培养,并通过实时荧光PCR鉴定阳性培养物。EV 71阳性培养物提取病毒核酸,对其VP1区全长序列进行PCR扩增和测序。从Genbank中选取EV 71不同基因型别参考序列,利用生物信息学软件进行同源性和系统进化分析。结果共分离到6株EV 71（Genbank登录号为KU376383-KU376388）,其VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.00%~99.00%和98.00%~100.00%,与参考序列VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为81.00%~97.00%和93.00%~100.00%。进化分析显示,6株EV 71均为C4a基因亚型。结论 2015年北京市西城区EV 71流行株属于C4a亚型,未出现明显变异。     

吉林省2018—2021年柯萨奇病毒A组16型病毒基因特征分析

目的 探讨2018年、2019年和2021年流行于吉林省的柯萨奇病毒A组16型肠道病毒流行特征、种系进化及基因变异特征。方法 收集2018年、2019年和2021年吉林省手足口病例临床标本,通过病毒分离筛选出60株CVA16的阳性毒株,并对其VP1编码区全基因组核苷酸序列进行测定和分析。结果 60株CVA16分离株中有15株为B1a基因亚型,45株为B1b基因亚型;CVA16分离株氨基酸序列的14、23、164、235、251及266位点发生了氨基酸突变。结论 CVA16为吉林省手足口病的主要病原体之一,15株CVA16分离株为B1a基因亚型,45株CVA16分离株为B1b基因亚型,与2008年青海株相比共发生了6处氨基酸位点突变。     

2015年昆明市柯萨奇病毒A16型VP1区基因特征分析

目的 研究昆明市2015-2016年手足口病患儿肠道病毒分子流行病学及探讨柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CVA16）VP1基因遗传变异与其时间和空间分布模式的相关性。方法 采集患儿的咽拭子和肛拭子样本,采用逆转录聚合酶链式反应分子鉴定法分别扩增肠道病毒71型和CVA16的VP1基因全长,随机选取2015年9份CVA16阳性样本进行测序并与数据库参考株构建系统进化树。对不同年份来源的CVA16病毒株间遗传距离与分离年份时间进行相关性和回归分析,并分析不同地理群体间的遗传距离与地理距离的相关性（Mantel检测）。结果 采样年度中大多数患儿为CVA16感染（咽拭子和肛拭子检出率分别为29.41%和15.69%）,其与肠道病毒71型感染的比率分别为2.5 ∶1和2.0 ∶1。VP1基因系统进化分析显示9株CVA16昆明分离株均属于B基因型B1b亚型,且进一步划分成两个亚簇;种系进化及统计学分析显示VP1基因变异与时间推移和地理距离均具有正相关关系（均有P<0.05）。结论 2015年昆明市9株CVA16分离株为新生成的变异毒株,提示CVA16在昆明存在一定的地域流行特点。     

盐城市肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型分子流行病学特征分析

目的分析盐城市手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)病原学及分子流行病学特征,了解盐城市近年来HFMD病原学构成和肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CA16)毒株流行概况。方法收集HFMD样本,对阳性标本进行病毒培养和分离,提取病毒RNA,利用逆转录-聚合链酶反应、序列测定和基因进化树构建、同源性分析等方法,对阳性扩增产物进行基因型鉴定。结果盐城市HFMD病原学构成以EV71和CA16循环交替流行为主,其他肠道病毒占较大比例。基因进化树图结果显示:EV71毒株均为C4a亚型,CA16毒株为B1a和B1b亚型交替流行,其中以B1b亚型为流行优势株。同源性分析结果显示:EV71和CA16各亚型之间核苷酸和氨基酸同源性较高,亚型之间亲缘性较近,相对于原始株已发生较大变异。结论盐城市EV71和CA16毒株流行优势株遗传性较稳定,基因亚型与国内外研究结果相一致。     

龙岩市手足口病柯萨奇A10型病毒VP1区基因特征分析

目的对从龙岩市手足口病患者分离的其他肠道病毒柯萨奇A10型进行分子鉴定,并对其VP1区序列进行基因特征分析。方法肠道病毒通用阳性未分型咽拭标本,用人横纹肌肉瘤细胞进行病毒分离,对分离株的VP1区进行扩增并测序。通过BLAST程序比对,鉴定病毒的血清型。与GenBank中其他已知基因亚型的核酸序列进行同源性分析,构建遗传进化树。结果 55份未分型标本中,2株鉴定为CVA10病毒株。VP1区片段核苷酸序列长度分别为289bp和290bp,编码96个氨基酸。遗传进化分析显示,2株CVA10毒株为D组基因亚型。第93个氨基酸位点发生变异,由异亮氨酸(I)取代缬氨酸(V)。结论龙岩市手足口病原除EV71和CVA16外,还包含CVA10等。应加强对其他肠道病毒引发手足口病的监测,掌握其流行及病毒遗传进化特征,为防控提供科学依据。     

盐城市2018-2019年手足口病和疱疹性咽峡炎病原学特征分析

目的 探讨盐城市近年手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)和疱疹性咽峡炎病原学特征,以及柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CVA4)、10型(CVA10)分离株VP1区序列分子进化规律.方法 收集全市哨点监测医院诊断为HFMD和疱疹性咽峡炎病例标本,采用实时荧...     

宁夏地区2008年柯萨奇病毒A组16型VP1区基因特征分析

目的 研究宁夏地区2008年引起手足口病(HFMD)暴发的柯萨奇病毒A组16型(CVA16)的基因特征.方法 对宁夏地区2008年HFMD患者临床标本中分离到的CVA16,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行VP1编码区基因扩增,对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析.根据VP1区核苷酸序列与国内其他省份以及国际报道的CVA16株序列(来源于基因库)构建基因亲缘关系树.结果 共分离到70株CVA16,其在VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别为90.8%～100.0%和98.9%～100.0%.亲缘进化树显示全部CVA16株可分为A和B两个基因型,B基因型又可分为B1和B2两个基因亚型.宁夏地区CVA16全部属于B1基因亚型,同时包含B1a和B1b两条进化分支,提示存在两大传播链.结论 宁夏地区分离的CVA16株与国内其他地区CVA16株类似,有B1a和B1b两个进化分支在共同循环,且与周边国家和地区流行的CVA16在基因亲缘关系和流行时间关系上都很接近,存在共同进化和循环.     

小学生伤害的流行病学特征分析

20 0 1年 9月在杭州市区对随机抽取的 3所小学进行有关伤害的调查和流行特征分析 ,结果报告如下。1.对象与方法 :采用分层、多阶段抽样方法 ,随机抽取 3个城区 ,每城区抽取 1所小学 ,再从每个年级抽取 1个班。共抽取 3所学校 ,18个班 ,96 4人。采用一人一表的问卷调查方式 ,询问 2 0 0 0年 9月至 2 0 0 1年 9月期间的伤害发生情况。在向学生和家长讲清调查目的、填表方法及注意事项后 ,由经过统一培训的防疫医师、校医及班主任在家长的协助下指导学生完成。凡有下列情况之一者纳入伤害统计范围 :①到医院或校医务室诊治 ;②由家长或老师作过…     

甘南县四起家庭成员患肾综合征出血热的特点分析

1994～ 2 0 0 0年我县共发生肾综合征出血热病例 1388例 ,在进行个案流行病学调查中发现 ,有四起属家庭成员患病 ,共计 9例 ,现将其特点分析如下。1.基本情况 :第一起于 1994年 11月 19日、2 0日、2 2日发生在长吉岗乡巨强村一户村民家中 ,父女 3人因在野外劳动时食用被鼠污染的食物而感染 ,父亲死亡。第二起于 1999年 12月 12日、18日发生在长吉岗乡巨一村一户村民家中 ,母女相继发病 ,母亲死亡。第三起于 1999年 12月 5日、2 1日发生在东阳镇和平村一户村民家中 ,母子 2人发病 ,儿子为 3个月的婴儿。第四起于 2 0 0 0年 12月 17日、2 5日…     

2010年济南地区人肠道病毒71型VP1区基因特征的分析

[目的]研究济南地区肠道病毒71型（EV71）的基因特征。[方法]对2010年济南地区手足口病病人的粪便、咽拭子等标本,通过RT—PCR扩增EV71VP1基因片段;选取EV71阳性的18株进行VP1全基因序列测定,用DNAS—TAR、Mega．4．0软件进行同源性分析,并构建系统进化树。[结果]与EV71A型和B型代表株亲缘性较远,核苷酸（氨基酸）同源性分别为81．8％～82．7％（83．7％～85．ooA）和94．3％～94．9％（97．3％～97．6％）;与C型代表株亲缘性较近,核苷酸（氨基酸）同源性为87．5％～99．1％（98．3％～100．0％）;18株EV71之间在VP1区核苷酸和氨基酸水平上有一定差异,同源性分别为97．1％～100．0％和99．3％～100．0％。构建系统进化树表明,18株EV71与C4亚型处于同一簇,属EV71型C4基因亚型。[结论]20LO年济南地区流行的EV71属肠道病毒71型属C4基因亚型。     

大连市肠道病毒71型VP1区段基因特征分析

目的:了解大连市手足口病病原体肠道病毒71型(EV71)分离株的基因特征。方法:从手足口患者粪便标本中分离EV71病毒,经RT-PCR扩增VP1全长,并进行核苷酸序列分析。结果:4株EV71分离株与C4亚型代表株具有较高的核苷酸和氨基酸序列同源性。在系统进化树上,4株EV71分离株与C4亚型代表株处于同一分支。结论:大连市手足口病患者中分离的EV71属C4亚型。     

CVA6高通量测序方法的建立及应用

目的 建立柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）基于多重PCR扩增的高通量测序方法，并应用于CVA6的基因进化研究。方法 利用PRIMER5.0设计7对CVA6型特异性引物，在同一体系构建并优化多重PCR高通量测序方法，并应用该方法对河南省39份CVA6标本开展基因测序，分析核苷酸氨基酸同源性和构建系统进化树。结果本研究成功建立基于多重PCR的CVA6高通量测序方法，基因特征分析表明此次河南省检出的CVA6流行亚型为D3a亚型，与山东、湖南、浙江、云南、辽宁、江西等地区的毒株亲缘关系较近。结论 本研究建立CVA6的高通量测序方法特异性强，扩增效率高，为CVA6型基因型遗传特征和变异规律提供了技术支持，可应用于CVA6的同源性分析及基因进化研究分析。     

Genetic characterization of enterovirus strains identified in Hand,Foot and Mouth Disease (HFMD): Emergence of B1c,C1 subgenotypes,E2 sublineage of CVA16, EV71 and CVA6 strains in India

Hand, Foot and Mouth disease (HFMD) is a common childhood disease and caused due to Enterovirus-A (EV-A), EV-B and EV-C species worldwide. Cases of HFMD were reported from, Ahmedabad (Gujarat, 2012) and Pune (Maharashtra, 2013–2014) in India. The present study highlights the identification of EV strains (CVA16, CVA6, CVA4 and Echo12), characterization of subgenotypes of CVA16, CVA6 strains during 2012–14 and CVA16, CVA6, EV71 strains reported from the earlier study (2009–10) in HFMD cases from India. A total 158 clinical specimens collected from 64 HFMD cases (2012–2014) were included in the study. EV detection was carried out by 5′NCR based RT-PCR, molecular typing and subgenotyping was by VP1/2A junction or VP1, full VP1 gene amplification respectively followed by phylogenetic analysis. The present study reports 63.92% (101/158) EV positivity by RT-PCR. Ninety four of the 101 (93.06%) EV positive strains were amplified by VP1/2A junction or VP1 regions. Sequence analysis revealed the presence of CVA16 (61.7%), CVA6 (34.04%), CVA4 and Echo12 (4.3%). A total of 114 EV positive strains were genotyped using full and partial VP1 region. All CVA16 Indian strains (n = 70) clustered with rarely reported B1c subgenotype, CVA6 (n = 43) and EV71 (n = 1) strains clustered with sub-lineage E2 and C1 subgenotypes respectively. In summary, the study reports genetic characterization of CVA16, CVA6, CVA4 and Echo12 strains in HFMD cases from India. Circulation of B1c subgenotype of CVA16, E2 sub-lineage of CVA6 and C1 subgenotype of EV 71 strains in HFMD cases were reported for the first time from India. This study helps to understand the genotype distribution, genetic diversity of EV strains associated with HFMD from Eastern, Western and Southern regions in India.