高效液相色谱法测定林可霉素B组分的含量

林可霉素(Lincomycin,国内称洁霉素)在发酵过程中同时生成林可霉素A、林可霉素B及差向林可霉素等组分.A、B两组分其化学结构上的区别在于吡咯环上的R基因.     

林可霉素发酵后期的工艺改进

本文从磷酸根离子对林可霉素发酵的影响方面着手,重点考查了在林可霉素发酵中后期,用分批补加适量浓度磷酸盐的方法来代替原始工艺中的补加全料的工艺改进,通过对比这两种方案对林可霉素合成过程中的碳源、氮源、菌丝生长量以及pH的影响,确定了有效增加林可霉素合成速率的最佳补磷方案,同时,此工艺替代也实现了在工业发酵过程中对原材料的大幅度节约.     

林可霉素发酵过程代谢特性与pH调控的研究

本文采用FUS-50L(A)罐发酵生产林可霉素.研究发现,在发酵初期(0～24h)和前期(24～40h),通过严格控制硫酸铵和葡萄糖的补入时机和补入速率,可使林可链霉菌保持较高较稳定的生理活性,并实现菌体由初级代谢向次级代谢的过渡.在发酵中期(40～140h)和后期(140h～发酵终点).当pH和湿菌体浓度(PMV)分别在6.9和54%左右,硫酸铵和葡萄糖的平均添加速率分别为0.08和0.5g/(L·h)左右时,每24h林可霉素的产量可增加1100μg/ml左右.在分批补料发酵生产中,将pH控制在6.6～6.9的范围内,林可霉素可达到较高的发酵水平.     

克林霉素磷酸酯的“不良反应”——解析“克林霉素磷酸酯”生产工艺和质量标准

<正>克林霉素磷酸酯(clindamycin phosphate,CMP)是林可霉素系列产品之一(原美国普强公司,现美国辉瑞公司),于70年代开发产品。林可霉素系列产品已发现10多个化合物,其中有4个化合物用于临床。盐酸林可霉素(lincomycin hydrochloride,LCM)三级发酵提取产生。主要制成胃肠道给药剂     

糖代谢关键酶活性对林可霉生物合成影响的研究

研究了林可霉素糖代谢的关键酶,己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、磷酸果糖激酶和异柠檬酸脱氢酶,以及它们在发酵过程中的活性变化与菌体代谢的变化规律,比较了菌株W11-2和S-41在发酵过程中酶活性的变化趋势,进一步阐明了林可霉素合成和糖代谢关键酶活性的关系。研究表明在发酵的生长阶段,提高糖代谢GK、PFK、G6PDH的活性有利于菌体生长;己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶的活性和林可霉素合成有正相关性。在林可霉素合成期提高HMP途径的代谢流量,减少EMP途径的代谢流量有利于林可霉素的合成,该研究为发酵工艺的调控和菌种代谢工程的改造提供依据。     

旁路代谢酶抑制剂对林可霉素发酵的影响

目的 研究林可链霉菌的发酵工艺,提高林可霉素的产量.方法 在林可链霉菌发酵产林可霉素的过程中,在一定时间添加一定量的旁路代谢酶抑制剂丙氨酸和三甲胺,用生物效价法测定发酵液中林可霉素的产量.结果 在发酵开始时添加0.01％的丙氨酸,同时在24h时添加0.02％的三甲胺,使林可霉素的产量提高26％.实验发现该种添加方法抑制了糖酵解途径中的丙酮酸激酶和莽草酸途径中的邻氨基苯甲酸合成酶的酶活,使菌体内积累高浓度的林可霉素的前体酪氨酸及L-多巴,进而提高了林可霉素的产量.结论 该种发酵工艺使林可霉素产量得到显著提高.     

一种复合蛋白粉对林可霉素发酵的影响

经前期摇瓶试验筛选获得一种能够提高林可霉素发酵水、平的复合蛋白粉,使摇瓶发酵单位提高至4500μg/ml。在200 L发酵罐放大试验过程中,结合中间补料,考察了氮源对林可霉素产生菌菌丝生长及产物合成的影响。结果表明,含有复合生白粉的培养基中,溶解磷浓度显著高于对照组和其他试验组,显著延缓菌丝自溶,使林可霉素发酵单位提高至9561μg/ml。添加相相同浓度无机磷的培养基试验组虽然同样能够延缓菌丝的自溶和促进林可霉素的合成,但其提高能力远低于含复合蛋白粉培养基组。推测复合蛋白粉中的有机磷源可能在林可霉素的,生物合成过程中起重要作用。     

酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素

目的 建立酶标仪法测定微孔板发酵液中林可霉素的含量。方法 对酶标仪法的主要影响因素进行优化,并验证此 方法的精密度;在此基础上,分别利用酶标仪法与分光光度计法测定 25 株突变株经 48 孔板发酵后林可霉素的含量并进行曲线 拟合,以验证两种方法的相关性。结果 确定了在测定林可霉素含量的适宜反应体系中 0.02mol/L 氯化钯溶液为 150μL,盐酸添 加浓度为 1mol/L,且该方法精密度良好;拟合曲线相关系数 R2 =0.9551,显示两种方法具有很好的相关性。结论 该实验结果表 明酶标仪法能准确、快速地测定微孔板发酵液中林可霉素的含量,为后续高通量选育林可霉素高产菌株奠定了基础。     

流加补料技术在林可霉素发酵中的应用

前期摇瓶预试验表明林可霉素(1)发酵过程中存在葡萄糖效应,整个发酵代谢过程特别是发酵前期耗氧量较高,于是在200 L发酵罐中针对上述两点进行了工艺优化。发酵中后期通过流加葡萄糖和硫酸铵解除葡萄糖效应,同时稳定1产生菌的发酵代谢环境,使整个发酵过程的菌丝形态呈现良好的新老接替,解决了1产生菌产抗后劲不足的问题。同时在流加补料工艺中延长了发酵周期,使1发酵放罐效价较分批补料工艺提高了50.3%,比目前国内1放罐的平均效价(7 500 g/ml)提高了91.1%。     

盐酸林可霉素凝胶的稳定性考察

目的 研究不同条件下盐酸林可霉素凝胶的稳定性。方法采用高效液相色谱法测定盐酸林可霉素凝胶中林可霉素的含量，考察影响因素(光照、温度)实验、加速实验和长期留样试验对其稳定性的影响。结果盐酸林可霉素凝胶对强光照射不敏感，对高温(≥60℃)稳定性较差。结论盐酸林可霉素凝胶在生产和贮藏过程中光照无影响，在室温条件药物无变化，该药的有效期暂定为2 a。     

林可霉素发酵培养基的改进

目的 优化培养基，提高林可霉素发酵水平。方法 在培养基中加入营养液，采用正交设计实验，对林可霉素发酵培养基进行了优化改进。结果 筛选出最佳培养基配比。结论 营养液对发酵有影响作用，改进后的培养基，比原林可霉素发酵水平提高约8．7％。     

液化糖代替葡萄糖在林可霉素发酵中的应用

淀粉经双酶法制成的液化糖(单糖)可代替结晶葡萄糖(张力日:淀粉糖,1986,152页,轻工业出版社,北京),应用于林可霉素发酵。     

旋光法测定盐酸林可霉素滴眼液的含量

盐酸林可霉素(亦称洁霉素)滴眼液是目前临床眼科常用的抗生素之一。其处方为:盐酸林可霉素30g,氧化钠 8g,硼砂 3g,硫柳汞 0.1g,注射用水加至1000ml。对本品中盐酸林可霉素的含量测定,《上海市医院制剂手册》1995年第3版采用微生物检定法。根据盐酸林可霉素溶液具有右旋性的特点,我们采用旋光法测定其含量,获得较满意的结果,现介绍如下。     

高效液相色谱法同时检测盐酸林可霉素和硝酸咪康唑

目的采用高效液相色谱法同时测定盐酸林可霉素和硝酸咪康唑。方法Hypersil-CN色谱柱(4.6mm×200mm,5μm);流动相:0.05mol.L-1硼砂溶液(用磷酸调节pH至6.0)-甲醇(85∶15);检测波长214nm;流速1.0mL.min-1。结果盐酸林可霉素和硝酸咪康唑的线性范围分别为0.08~3.2mg.mL-1(r=0.9999)和0.08~1.6mg.mL-1(r=0.9993),平均回收率分别为100.0%、99.4%。结论该法简便准确,可用于盐酸林可霉素和硝酸咪康唑复方制剂含量的同时测定。     

24孔板优化林肯链霉菌发酵培养基

目的 优化林肯链霉菌发酵培养基。方法 采用24孔板,对现有的两种发酵培养基中各因素进行考察,筛选出较优发酵培养基;在此发酵培养基基础上,采用L25(56)正交设计方法,对可溶性淀粉、葡萄糖、豆饼粉、硫酸铵、玉米浆和磷酸氢二钾这6个可能影响林可霉素发酵水平的因素进行效应评价。结果 得到最佳发酵培养基(g/L)：可溶性淀粉30,葡萄糖105,豆饼粉22.5,玉米浆1,氯化钠2.25,碳酸钙6,硫酸铵2.65,硝酸钾1,磷酸氢二钾0.5。结论 对优化后的发酵培养基进行孔板发酵验证,林可霉素的平均发酵产量达到2288μg/mL,比未优化组提高了42.03%。     

林可霉素发酵生产过程中空气流量控制的研究

本文阐述了抗生素发酵生产过程中影响培养液溶解氧的主要因素,并通过实验探讨了林可霉素生产过程中发酵前、中、后期溶解氧的变化规律。实验结果应用于生产实际,既提高了发酵放罐总效价,又节约了能源。     

金属离子对林可霉素生物合成的影响

采用优化设计方法研究金属离子在林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)林可霉素生物合成中的交互作用,并应用均匀设计法,以最终发酵液的生物效价为目标函数建立模型,通过软件Uniform Design Version 3.00分析得出优化配比:FeSO4.7H2O 0.45g/L,CuSO4.5H2O 1g/L,MnCl21g/L;按优化方案添加金属离子,使发酵液的最终生物效价较原配方提高20%,明显提高了林可霉素的发酵水平。     

分光光度法测定盐酸林可霉素注射液含量的研究

中国药典1990年版二部规定,盐酸林可霉素注射液的含量测定系采用微生物检定法。该法化验时间需要16～18小时,不能作为生产过程中的中间含量控制方法,而采用监督投料不能确保盐酸林可霉素注射液的质量。为此,笔者通过查阅文献,利用盐酸林可霉素与氯化钯形成的络合物在20分钟内趋于稳定,在380±1nm波长处有最大吸收且4小时内无明显变化的特点,用分光光度法测     

西咪替丁对林可霉素生物利用度的影响

通过8名健康志愿者服药后的对照实验,用微生物法检测血药浓度,按一室模型配置求算药物动力学参数,探讨西咪替丁对林可霉素体内过程的影响。结果表明,西咪替丁不能改变林可霉素的吸收速率(Ka)和消除速率(Ke),但可通过增加其吸收程度或改变其分布容积,使林可霉素的血药浓度和生物利用度分别增加约19％和27％。     

林可霉素发酵过程中磷的调控

报道了对林可霉素发酵过程的中后期进行补磷控制，以及中间补磷量的推算和补磷方法。