在淋巴细胞转化试验中~3H-TdR掺入法与~3H-UR掺入法的比较

<正> 用3~H-TdR 掺入法淋巴细胞转化测定(简称淋转)肿瘤病人的细胞免疫功能已有不少报道,本文在3~H-TdR 掺入法淋转的基础上,对37例癌症病人作了3~H-UR(氚尿嘧啶核苷)掺入法淋转,以便了解癌病人淋转的 RNA 合成水平,以及与 DNA 合成间的差异。现将方法和结果简述如下。     

小鼠白细胞介素3活性检测影响因素的初步研究

<正> 白细胞介素3(Interleukin 3,IL_3)是近年来发现的淋巴因子之一。关于小鼠白细胞介素3活性检测目前有四种方法:(1)20-α羟基类固醇脱氢酶法;(2)鼠骨髓细胞集落形成试验;(3)鼠骨髓细胞H_3-TdR掺入法;(4)IL_3生长依赖株32D增殖~3H-TdR掺入法。这些检测方法以32D依赖株~3H-TdR     

四种检测集落刺激因子活性方法影响因素探讨

本文对四种集落刺激因子(CSF)活性检测方法(琼脂半固体法,~1H-TdB骨髓细胞掺入法,D-~3H-半乳糖骨髓细胞膜掺入法及MTT比色法)的检测条件进行了摸索,确定了包括细胞密度,血清浓度,细胞培养时间及培养基选择等条件,并用rmGM-CSF和LP3-CM作为CSF标本进行了对比试验,结果表明此四种方法之间具有良好的相关性,应用中可互相代替。     

H_2O_2和NO对滑膜成纤维细胞增殖反应的影响

采用~3H-TdR掺入法和MTT比色法研究过氧化氢(H_2O_2)和一氧化氮(NO)对兔滑膜成纤维细胞(SF)增殖反应的影响。结果表明,在使用亚适SF浓度(5×10~7细胞/L)时,~3H-TdR掺入法和MTT比色法检测结果一致。H_2O_22和亚硝基铁氰化钠(NO供体)在低浓度时促进SF增殖反应,而在高浓度时抑制其增殖反应,提示H_2O_2和NO对SF增殖反应具有双向调节作用。     

性染色体结构异常的DNA复制及失活类型 Ⅰ.X-常染色体易位,环状染色体,染色体断片,等臂染色体及假同形双着丝粒

本文用高分辨染色体分析及BrdUrd掺入法研究了结构异常的性染色体复制类型,共研究了性染色体结构异常14例,包括2例非平衡的X常染色体(XA)易位,7例X和Y染色体断片或环状染色体和5例双着丝粒等臂染色体(Xq)。应用高分辨染色体技术和BrdUrd掺入实验证明,在人类淋巴细胞培养中,细胞周     

胃癌单抗与柔红霉素和氨甲喋呤交联物的制备及其细胞毒作用

采用葡聚糖氧化将胃癌单抗(McAb)与抗癌药物柔红霉素(DNR)和氨甲喋呤(MTX)同时交联(McAb-PAD<分别采用噻唑蓝活细胞染色法(MTT 法)及~3H-TR 掺入法检测交联物的细胞毒作用,结果表明两种检测方法敏感性无明显差异,并且证实文联物对肿瘤靶细胞具有较强的选择性杀伤效应。     

~(125)I-UdR掺入法测定恶性血液病淋巴细胞转化率

<正> 测定淋巴细胞转化反应的同位素掺入法,多选用~3H-TdR掺入法,而~125I-UdR掺入法国内外报道甚少,且具体方法及结果不尽一致。本文报道本所建立的~125I-UdR掺入法检测淋巴细胞转化率及在临床中的初     

IL-1β对AVP诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的抑制作用

目的　探讨白介素 1β(IL 1β)对精氨酸加压素(AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CF)胶原合成的影响。方法　采用3H 脯氨酸掺入法 ,观察IL 1β对AVP诱导的CF胶原合成的影响。结果　 ( 1)在基础状态下 ,1×10 5U/LIL 1β组CF3H 脯氨酸掺入率为 ( 94 7± 2 1 4)cpm/ 5× 10 3 细胞 ,较对照组〔( 16 5 7± 31 2 )cpm/ 5× 10 3 细胞〕显著降低 (P <0 0 5 ) ;( 2 )CF3H 脯氨酸掺入率随AVP作用浓度的增加而增高 ,其中 10 7,10 6mol/LAVP组的CF3H 脯氨酸的掺入率分别为 :( 5 41 3± 95 8和 5 6 5± 72 4)cpm/ 5×10 3 细胞 ,明显高于对照组〔( 16 5 7± 31 2 )cpm/ 5× 10 3 细胞 ,P均 <0 0 1〕 ;( 3)IL 1β可以浓度依赖的方式抑制 10 7mol/LAVP诱导的CF3H 脯氨酸掺入率 ,其中 1× 10 5U/LIL 1β AVP组和 2× 10 5U/LIL 1β AVP组CF3H 脯氨酸的掺入率分别为 :( 2 71 3± 42 2和 2 19 7± 37 1)cpm/ 5× 10 3 细胞 ,较AVP组明显降低 (分别为P <0 0 5 ,P <0 0 1)。结论IL 1β可抑制基础状态下和AVP诱导的CF合成胶原 ,对逆转高血压病心肌肥厚可能有一定的作用     

B细胞生长因子活性上清对人—人杂交瘤细胞生长影响的研究

本研究用金黄色葡萄球菌(Cowan 1株)死菌制剂(SAC)刺激人B淋巴细胞建立了人B细胞生长因子(BCGF)的检测系统。发现经PHA刺激的人扁桃体细胞培养上清可以促进SAC活化的B细胞的生长,~3H-TdR掺入率提高了2～3倍。同时,用~3H-TdR掺入法和有限稀释法观察了该上清对人-人B细胞杂交瘤生长和克隆率的影响,发现其可以促进人-人B细胞杂交瘤的生长、~3H-TdR掺入率提高2～3倍,可提高克隆率3倍以上。但人-人B细胞杂交瘤可吸收掉上述BCGF活性上清中的促杂交瘤细胞生长因子(HGF)活性,而对BCGF活性无明显影响。提示该上清同时具有人BCGF和HGF活性,部分BCGF活性与HGF活性可能是由不问的分子所介导。     

S-亚硝基谷胱苷肽对糖基化终产物诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞增生的影响

为探讨脂溶性NO前体药物S 亚硝基谷胱苷肽 (S nitrosoglutathione ,GSNO)对糖基化终产物 (advancedglycosyla tionendproducts ,AGEs)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增生的影响 ,利用体外培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,用MTT法、同位素掺入法及细胞计数法测定其增殖率的变化 ,观察不同浓度的AGEs对血管平滑肌细胞的增殖的影响以及不同浓度的GSNO对AGEs作用的预防和逆转作用。MTT法测定的OD值、3 H 胸腺嘧碇核苷 (3 H TDR)掺入量、细胞计数均显示AGEs可以使血管平滑肌细胞数明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;而用GSNO干预后 ,AGEs的上述作用被明显抑制 (P <0 0 5 )。提示NSNO可以抑制AGEs诱导的血管平滑肌细胞的增殖     

测定淋巴细胞增殖的MTS和XTT比色法的建立

目的建立用新型四唑氮盐MTS和XTT做比色分析测定淋巴细胞增殖效应的方法.方法分别用MTS、XTT结合PMS,对小鼠脾淋巴细胞密度和增殖进行比色测定,选择最佳实验条件,并将这两种方法与3H-TdR掺入法和MTT法比较.结果用MTS和XTT比色分析法测定小鼠脾淋巴细胞的增殖,在0.5～4×109/L的范围内,所获光吸收(A)值与细胞密度呈良好的相关性.最佳细胞密度为2×109/L,最佳反应时间为6h,最佳PMS的终浓度为1×10-4mol/L.两种比色法与3H-TdR掺入法的结果相一致,且两种新方法较MTT法灵敏.结论MTS和XTT比色分析法可代替3H-TdR掺入法和MTT法,用于测定淋巴细胞的增殖效应.     

人红细胞对LAK细胞DNA合成和IL-2受体表达影响的研究

本文用~3H-TdR掺入法、APAAP免疫染色法和MTT法研究人红细胞(RBC)对LAK细胞DNA合成、IL-2受体(IL-2R)表达及杀伤活性的影响。人RBC对LAK细胞DNA合成有抑制作用,对LAK细胞IL-2R表达和杀伤活性有促进作用。随RBC浓度增加,抑制作用和促进作用均明显加强。     

超声辐照对血管紧张素Ⅱ诱导的牛主动脉平滑肌细胞增殖的影响

为观察不同剂量的超声辐照对牛主动脉平滑肌细胞 (CASMC)增殖的影响 ,寻找出抑制细胞增殖的最佳辐照剂量 ,利用体外培养的牛主动脉平滑肌细胞 ,用细胞计数法、MTT法、3H 胸腺嘧啶核苷 (3H thymidine,3H TdR)掺入法测定细胞增殖率的变化 ,观察不同浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞增殖的影响以及不同剂量的超声辐照对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增值的预防和逆转作用。细胞计数、MTT法、3H TdR掺入法均显示 1 0 - 9～ 1 0 - 7mol L浓度的AngⅡ可使血管平滑肌细胞数明显高于对照组 (P <0 0 5 ) ;而用一定剂量超声辐照后 ,AngⅡ诱导的上述作用被明显抑制 (P <0 0 5 ) ,提示一定频率和剂量的超声辐照可以抑制CASMC增殖     

几种生物材料对人表皮细胞DNA合成的影响

目的　探讨Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠对人表皮细胞DNA合成的影响 ,为其在创伤创面的应用提供实验依据。方法　采用正交试验方法 ,以体外培养的人表皮细胞为实验模型 ,用3 HTdR掺入法分别测定各实验组3 HTdR掺入值 ,以反应其DNA合成水平的变化。结果　Ⅰ型胶原、壳聚糖、海藻酸钠处理组3 HTdR掺入值均较对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,Ⅰ型胶原、壳聚糖与海藻酸钠合用可显著提高人表皮细胞3 HTdR掺入值 (P <0 .0 5 )。结论　Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠对人表皮细胞DNA合成具有促进作用 ,Ⅰ型胶原、壳聚糖与海藻酸钠合用对人表皮细胞DNA合成具有协同作用 ,提示Ⅰ型胶原、壳聚糖和海藻酸钠在皮肤创伤创面的治疗中具有应用前景。     

奥曲肽抑制肝星状细胞增殖及细胞外基质合成

目的:探讨奥曲肽对肝星状细胞(HSC)增殖与细胞外基质(ECM)合成的影响。方法:采用胶原酶二步原位灌注法分离、培养大鼠HSC,并分别给予转化生长因子1(TGFβ1)(2.5μg·L^-1)、奥曲肽(Oct)(0.01-10μg·L^-1)或TGFβ1(2.5μg·L^-1)+Oct(0.01-10mg·L^-1)干预,分别用MTT法、[³H]-TdR和[³H]-脯氨酸掺入法及放射免疫法检测各处理组HSC增殖及ECM合成水平。结果:Oct能不同程度抑制HSC[³H]-TdR掺入和增殖;能够显著抑制体外培养HSC[³H]-脯氨酸掺入,降低上清液透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)和IV型胶原(CIV)水平;TGFβ1能够诱导HSC表达ECM上调,Oct能够阻断TGFβ1对HSC的调控作用。结论:Oct能够有效地抑制HSC增殖及ECM合成与分泌。     

ET-1和bFGF促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的协同作用及其机制研究

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和内皮素-1(ET-1)促进血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的协同作用,并进一步研究可能的机制。方法:5-溴-2’-脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法和细胞计数法观察对VSMC增殖的影响,Western免疫印迹法观察ET-1对VSMCbFGF和成纤维细胞生长因子受体-1(FGFR-1)蛋白表达的影响。结果:bFGF和ET-1能协同促进VSMCBrdU掺入和细胞增多,并且在一定剂量和时间范围内呈量效、时效关系。同时ET-1剂量依赖性上调bFGF和FGFR-1蛋白,表达高峰分别为24和48h,二丁酸佛波脂(PDBU)预耗竭细胞内蛋白激酶C(PKC)后该上调作用显著下降。结论:bFGF和ET-1对VSMC增殖具有协同作用,与ET-1上调bFGF和FGFR-1蛋白有关,上调作用呈PKC依赖性。     

瓜蒌注射液对兔血管平滑肌细胞增殖细胞核抗原表达的影响

目的:观察瓜蒌注射液对血管平滑肌细胞(SMC)增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法:用免疫组织化学LSAB法检测培养的兔主动脉SMC中PCNA的表达,液闪法测定SMC氚-胸腺嘧啶核苷([³H]-TdR)掺入量,同时测定培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)、前列环素(PGI₂)及环磷酸腺苷(cAMP)的含量。结果:瓜蒌注射液能增加SOD活性,降低LPO和升高PGI₂、cAMP水平,抑制SMC的[³H]-TdR掺入量和PCNA的表达(P均＜0.05,0.01)。结论:瓜蒌有抑制SMC增殖的作用。     

LFA-1与抗CD3 mAb共刺激对狼疮肾炎PBMC增殖和IgG合成的影响

目的 :探讨LFA 1与抗CD3mAb共刺激对狼疮肾炎 (LN)患者外周血单个核细胞 (PBMC)增殖与免疫球蛋白 (IgG)合成的影响。方法 :分离LN患者及健康人 (正常对照 )的PBMC ,采用Ficoll梯度密度离心法。细胞增殖实验采用3 H TdR掺入法。IgG测定采用ELISA法。结果 :在抗CD3mAb诱导下 ,2 9例LN非活动期和活动期PBMC中 ,3 H TdR的掺入量和IgG的合成均增加 ,且活动期的增殖强于非活动期 (P <0 .0 1) ;而单纯用抗CD3mAb对 12例正常对照的PBMC没有影响 (P >0 .0 5 )。抗CD3mAb与抗LFA 1mAb共刺激 ,均可增加LN患者 (活动期和非活动期 )及正常对照PBMC3 H TdR掺入量和IgG合成 ,其中活动期增殖效应强于非活动期 (P <0 .0 1) ,后者又强于正常对照 (P <0 .0 1)。抗LFA 1中和抗体的加入 ,可明显抑制LFA 1诱导的共刺激效应 (P <0 .0 1)。结论 :LFA 1促进LN患者PBMC增殖和IgG合成 ,可能是其参与LN发病的机制之一     

细胞外信号调节激酶在缓激肽引起血管平滑肌细胞增殖反应中的调节作用

目的 :本研究主要从细胞外信号调节激酶 (ERKs)的角度 ,研究丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径在缓激肽 (BK)介导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)促增殖等反应中的作用及其可能的调控机制。方法 :通过3H 胸苷 ( 3H TdR)掺入率与SMC3H 亮氨酸掺入率分别反映SMC的DNA代谢与蛋白质合成代谢速率 ;并通过给予MAPK激酶 (MEK )特异性抑制剂PD0 980 5 9及ERKS抑制剂UO12 6预处理 ,观察它们对细胞蛋白合成和DNA代谢及细胞增殖的影响。结果 :①BK( 10 - 8mmol/L)处理 3 0minVSMC3H 胸苷掺入率和3H 亮氨酸掺入率均明显增高 ;②BK增高3H 胸苷掺入的作用可明显被PD0 980 5 9所抑制和部分被UO12 6所抑制 ;③BK增高3H 亮氨酸掺入的作用可部分被PD0 980 5 9和UO12 6所抑制。结论 :ERKs激活在缓激肽导致VSMC增殖反应中具有重要作用 ,并可通过ERKs信号途径的特异性抑制剂的抑制效应 ,影响血管平滑肌细胞的增殖效应     

几种抗癌药物对小鼠白血病L_(7212)肝脾的~3H-TdR掺入的影响(摘要)

可移植性615小鼠淋巴白血病L_(7212)是我国建立的实验白血病模型之一。本文观察了L_(7212)小鼠发病进程中肝、脾的~3H—TdR掺入变化及环磷酰胺、氮芥、靛玉红、促肾上腺皮质激素对其~3H—TdR掺入的影响。实验结果表明: 1、接种六天的L_(7212)小鼠肝、脾DNA的~3H—TdR的掺入量随注射~3H—TdR的时间而逐浙增加,在注射~3H—TdR后2—4小时掺入量趋于平稳。肝脏的掺入量比脾脏相应时间的掺人量高,速度也较快。说明白血病发病时小鼠肝脏的DNA合成比脾脏更为旺盛。 2、615小鼠在接种白血病L_(7212)后,小鼠的肝、脾被白血病浸润逐浙加重,肝脾指数