碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移和转移的影响

目的探讨抗氧化剂碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用,并对观察碧萝芷对MCF-7细胞的转移和迁移功能的影响。 方法用10、20、40 μg/ml的碧萝芷处理乳腺癌MCF-7细胞作为实验组,空白对照组只加入DMEM培养基(无血清), MTT法在处理细胞后24、48、72 h于波长490 nm处测定各组吸光度值;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;用β-半乳糖苷酶染色法检测MCF-7细胞衰老率;用Transwell小室法分别检测各浓度碧萝芷对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响;用Western blot法分别检测乳腺癌MCF-7细胞衰老相关蛋白P53、P21、P16、P27、E2F1以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)-2、MMP-9的表达。细胞迁移、侵袭数目及各种蛋白的表达水平比较采用单因素方差分析,吸光度值比较采用重复测量的方差分析,两两比较采用LSD法。 结果MTT结果显示,在处理乳腺癌MCF-7细胞24、48、72 h后,各组吸光度值比较,差异有统计学意义(F＝149.439, P<0.001),在不同时间点之间比较,差异有统计学意义(F＝27.922,P<0.001);分组与时间点之间存在交互作用(F＝18.466, P<0.001)。流式细胞仪检测结果显示：空白对照组及10、20、40 μg/ml碧萝芷组的细胞凋亡率分别为(2.36±0.27)%、(6.44±1.43)%、(7.52±2.09)%和(11.68±1.65)%,差异有统计学意义(F＝19.143, P<0.001)。β-半乳糖苷酶染色法结果显示：空白对照组和10、20、40 μg/ml碧萝芷组的细胞衰老率分别为(5.35±1.32)%、(20.08±2.14)%、(40.55±4.61)%和(59.26±4.10)%,差异有统计学意义(F＝150.150, P<0.001)。Transwell小室结果显示：空白对照组及10、20、40 μg/ml碧萝芷组的迁移细胞数目分别为(41±5)、(27±2)、(19±1)、(11±2)个,差异有统计学意义(F＝59.330, P<0.001);侵袭转移的细胞数目分别为(24±4)、(17±1)、(12±2)、(7±2)个,差异也有统计学意义(F＝26.230, P<0.001)。Western blot结果显示：碧萝芷可上调P53、P21、P16、P27蛋白表达(F＝263.905、424.937、217.515、391.115,P均<0.001),下调E2F1蛋白的表达(F＝64.003,P<0.001);同时,各组MCF-7细胞中的MMP-2及MMP-9蛋白表达水平明显降低(F＝44.104、45.594, P均<0.001)。 结论碧萝芷可能是以促衰老的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,且能抑制细胞的迁移和转移。     

岩鹿乳康对乳腺癌细胞的作用及其分子机制

目的研究岩鹿乳康对乳腺癌细胞增殖及凋亡的作用，探讨其相关分子机制。 方法用0、1、2、5 mg/L的岩鹿乳康溶液分别处理2种乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231)，用细胞计数检测试剂盒8(CCK8)检测细胞在490 nm波长处的吸光度值，用平板克隆实验评估乳腺癌细胞的增殖情况，用流式细胞仪评估乳腺癌细胞的凋亡情况，用Western blot检测相关蛋白的表达，包括剪切的聚乙二醇核糖聚合酶(cleaved PARP)、磷酸化信号转导与转录激活因子3( p-STAT3)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(p-MEK)。吸光度值、克隆数、凋亡率、各蛋白相对表达量等指标满足正态分布和方差齐性，用±s表示，各组间比较采用方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中，0、1、2、5 mg/L岩鹿乳康组的吸光度值比较，差异有统计学意义(F＝43.187、28.163，P均<0.001)，各组吸光度值两两比较，差异均有统计学意义(P均<0.050)；4组的细胞克隆数比较，差异有统计学意义(F＝62.928、48.975，P均<0.001)；在MCF-7细胞中，1 mg/L组与2 mg/L组比较，差异无统计学意义(P＝0.082)，其余组间比较差异均有统计学意义(P均<0.050)。在乳腺癌细胞MCF-7中，0、1、2、5 mg/L岩鹿乳康组的细胞凋亡率分别为(0.67±0.05)%、(6.84±0.35)%、(12.34±0.58)%和(19.09±1.04)%，4组比较，差异有统计学意义(F＝802.097，P<0.050)；在乳腺癌细胞MDA-MB-231中，0、1、2、5 mg/L岩鹿乳康组的细胞凋亡率分别为(0.49±0.06)%、(6.65±0.35)%、(13.06±0.72)%和(15.42±0.70)%，4组比较，差异有统计学意义(F＝795.239，P<0.050)；两两比较中，各浓度组相互比较，差异均有统计学意义(P均<0.050)。Western blot检测结果显示：在乳腺癌细胞MCF-7中，0、1、2、5 mg/L岩鹿乳康组的p-ST相对表达量分别为0.193±0.015、0.133±0.006、0.092±0.003和0.043±0.002；p-AKT相对表达量分别为0.257±0.015、0.143±0.006、0.089±0.004和0.044±0.003；p-MEK相对表达量分别为0.760±0.020、0.563±0.030、0.343±0.021和0.183±0.031，4组比较，差异均有统计学意义(F＝174.771、353.658、282.679，P均<0.001)，且各组两两比较，差异均有统计学意义(P均<0.050)。在乳腺癌细胞MDA-MB-231中，0、1、2、5 mg/L岩鹿乳康组的p-STAT3相对表达量分别为0.173±0.015、0.150±0.010、0.123±0.006和0.069±0.003，p-AKT相对表达量分别为0.250±0.010、0.200±0.010、0.150±0.010和0.090±0.010，p-MEK相对表达量分别为0.273±0.006、0.240±0.010、0.137±0.015和0.086±0.003，4组比较，差异均有统计学意义(F＝64.297、140.750、245.790，P均<0.001)；其中1 mg/L组与0 mg/L组的p-STAT3表达比较，差异无统计学意义(P＝0.090)，其余各组间比较差异均有统计学意义(P均<0.050)。 结论岩鹿乳康具有抑制乳腺癌细胞增殖和促进乳腺癌细胞凋亡的作用，其作用机制可能与JAK/STAT3、PI3K/AKT和MAPK信号通路有关。     

乳腺癌多药耐药DEDD作用及机制研究

目的 死亡效应结构域DNA结合蛋白(death effector domain DNA-binging protein,DEDD)可抑制乳腺癌的生长和转移,但在乳腺癌多药耐药中的作用尚不明确.本研究将探讨DEDD在人乳腺癌多药耐药中的作用及机制.方法 通过转染DEDD-shRNA建立稳定敲低DEDD表达的MCF-7人乳腺癌细胞株,MTS实验检测多柔比星、紫杉醇对MCF-7 WT(Wild type,野生型)、MCF-7 control shRNA和MCF-7 DEDD-shRNA细胞活力的影响,Annexin-V和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染后流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白质印迹法检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在药物干预后的蛋白表达水平.结果 多柔比星干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=89.49,P＜0.001)、不同时间(F=50.81,P＜0.001)组间比较差异有统计学意义.多柔比星干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50分别为(0.97±0.15)和(0.62±0.09) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(0.46±0.05)和(0.26±0.03) μmol/L和MCF-7 control shRNA细胞(0.39±0.05)和(0.25±0.03)μmol/L,P＜0.001.紫杉醇干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=15.94,P＜0.001)、不同时间组间(F=129.70,P＜0.001)比较差异有统计学意义.紫杉醇干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50为(16.74±2.26)和(9.88±1.47) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(13.39±1.44)和(7.69±0.92) μmol/L(P=0.001)和MCF-7 control shRNA细胞(12.58±1.15)和(7.17±1.12) μmol/L(P＜0.001).多柔比星干预后24 h后流式细胞凋亡结果显示,不同处理(F=131.46,P＜0.001)、不同浓度组间(F=160.95,P＜0.001)比较差异有统计学意义.正常培养状态下,MCF-7 control shRNA细胞和MCF-7 DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(14.32±1.47)％和(11.58±1.63)％,而给予0.5μmol/L和1 μmol/L多柔比星作用24 h后,M[CF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(21.62±1.97)％和(24.39±2.36)％,明显低于MCF-7 control shRNA细的(36.26±1.87)％和(38.23±1.46)％,P＜0.001.同样,紫杉醇干预后24 h,不同处理(F=124.81,P＜0.001)、不同浓度组问(F=172.56,P＜0.001)细胞凋亡率比较差异有统计学意义.给予9.37和18.74 μmol/L紫杉醇作用24 h后,MCF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(30.26±1.63)％和(32.18±2.16)％,明显低于MCF-7 control shRNA组的(53.84±2.17)％和(58.27±2.16)％,P＜0.001.多柔比星作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=14.67,P＜0.001)、不同时间(F=6.39,P=0.006)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予0.5 μmol/L多柔比星作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.87±0.04、1.06±0.02和5.25±0.18.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.多柔比星作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为1.06±0.01、0.97±0.04和2.98±0.13.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平出现回落,但仍显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.同样,紫杉醇作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=7.26,P=0.004)、不同时间(F=8.32,P=0.002)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予9.37 μmol/L紫杉醇作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.81±0.05、2.25±0.10和1.78±0.14.其中MCF-7 control shRNA组细胞BCRP表达水平高于MCF-7 WT (P＜0.001)和MCF-7 DEDD-shRNA (P=0.002)组.而紫杉醇作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.73±0.04、1.73±0.05和3.12±0.12,MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平继续增高,且显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.结论 敲低DEDD表达可增强乳腺癌细胞的抗肿瘤药耐药性,BCRP的表达增加可能是低表达DEDD乳腺癌细胞多药耐药的机制之一.     

Survivin shRNA与大黄素联合应用抗人卵巢癌细胞株增殖的实验研究

目的:探讨靶向survivin基因的shRNA与大黄素联合应用体外抗人卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910增殖的作用.方法:构建携带靶向survivin基因的shRNA质粒载体,脂质体法转染.MTT法检测survivin shRNA质粒转染或/和大黄素处理后SKOV3和HO8910细胞的增殖率,FCM法检测细胞凋亡情况.结果:Survivin shRNA质粒转染24h后SKOV3和HO8910细胞的增殖率下降,凋亡率增加,与空白对照组差别均有统计学意义(P＜0.05);大黄素对SKOV3和HO8910细胞的抗增殖作用呈浓度和时间依赖模式;survivin shRNA与大黄素(60μmol/L)联合应用组SKOV3和HO8910细胞的增殖率低于单药应用组(P＜0.05),凋亡率高于单药应用组(P＜0.05).结论:Survivin shRNA与大黄素联合应用能够增强抗人卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910的体外增殖作用.     

异黏蛋白调控三阴性乳腺癌细胞干性的机制研究

目的研究异黏蛋白(MTDH)对三阴性乳腺癌干性的调控机制,并探讨miR-30a-5p对MTDH的调控作用。 方法(1)回顾性分析2017年5月至2018年9月湖北医药学院附属太和医院手术治疗的37例三阴性乳腺癌患者的肿瘤组织标本及同期非三阴性乳腺癌手术切除标本37例。采用免疫组织化学方法检测所有标本中MTDH的表达。(2)用定量RT-PCR和Western blot检测MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468 4种细胞系中MTDH的mRNA和蛋白表达。(3)为了探讨MTDH对三阴性乳腺癌细胞干性、细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响,用MTDH的siRNA转染三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468(siMTDH组),无效干扰RNA转染的细胞作为对照组。用Western blot检测MDA-MB-231、MDA-MB-468细胞系中干细胞标志物sox2、Nanog及CD133相对表达量,用细胞克隆实验观察细胞克隆数,用Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Myc和cyclin D1的表达。(4)荧光素酶报告实验：为评估miR-30a-5p能否靶向调控MTDH,用MTDH的3′-UTR和miRNA-30a-5p合成含有MTDH 3′-UTR野生型和突变型荧光素酶报告质粒,分别转染HepG2细胞,pGL3空载体转染细胞作为空载体组,24 h后观察荧光。三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织中MTDH蛋白表达比较用t检验。4种细胞系中MTDH mRNA及蛋白表达比较用方差分析。对照组与siMTDH组中sox2、Nanog、CD133、β-catenin、Myc、cyclin D1蛋白表达及细胞克隆数比较用t检验。细胞相对荧光比值比较采用方差分析。组间两两比较采用LSD法。 结果(1)三阴性乳腺癌组织中MTDH蛋白相对表达量为2.82±1.37,而非三阴性乳腺癌组织为5.65±2.02,差异有统计学意义(t＝-7.046, P<0.001)。(2)在4种细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468及MCF-10A)中,MTDH mRNA表达比较,差异有统计学意义(F＝7 155.320, P<0.001)。两两比较结果显示：与正常乳腺细胞(MCF-10A)比较,乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468)中MTDH mRNA表达增加(P均<0.001);与MCF-7比较,MDA-MB-231、MDA-MB-468中的MTDH mRNA表达量更高(P均<0.001);MDA-MB-468中的MTDH mRNA表达低于MDA-MB-231细胞(P<0.001)。4种细胞系中,MTDH蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(F＝90.053, P<0.001)。两两比较结果显示：与正常乳腺细胞比较,乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-468)中MTDH蛋白相对表达量增加(P均<0.050);与MCF-7比较,MDA-MB-231、MDA-MB-468中的MTDH蛋白相对表达量更高(P均<0.050);MDA-MB-468中的MTDH蛋白相对表达量低于MDA-MB-231细胞(P<0.050)。(3)在三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MDA-MB-468中,对照组与siMTDH组的干细胞标志物sox2、Nanog及CD133相对表达量比较,差异均有统计学意义(MDA-MB-231：1.19±0.10比0.52±0.05,1.16±0.13比0.34±0.03,1.19±0.06比0.54±0.08,t＝10.304、10.959、11.700,P＝0.001、0.005及P<0.001;MDA-MB-468：1.26±0.05比0.34±0.02,1.19±0.07比0.52±0.04,1.21±0.02比0.37±0.01,t＝31.185、15.584、75.001,P均<0.001);对照组与siMTDH组的细胞克隆数比较,差异均有统计学意义(MDA-MB-231：87.33±9.02比33.33±3.51,t＝9.664,P＝0.001;MDA-MB-468：70.67±4.73比24.33±3.21,t＝14.041,P<0.001);对照组与siMTDH组的Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin、Myc及cyclin D1蛋白表达比较,差异均有统计学意义(MDA-MB-231：0.26±0.06比0.08±0.01,0.74±0.03比0.32±0.00,0.72±0.01比0.26±0.04,t＝5.115、21.222、21.690,P均<0.050;MDA-MB-468：0.33±0.03比0.15±0.06,0.56±0.04比0.22±0.02,0.65±0.02比0.31±0.02,t＝4.973、13.969、21.897,P均<0.001)。(4)荧光素酶报告实验结果显示：3组细胞相对荧光比值比较,差异有统计学意义(F＝174.189,P<0.001),空载体组与突变型质粒转染组的相对荧光比值均高于野生型质粒转染组(P均<0.001)。 结论miR-30a-5p可靶向调控MTDH,参与三阴性乳腺癌细胞干性调控,miR-30a-5p/MTDH通路可能是一个新的治疗靶点。     

环状RNA circ_0007823在三阴性乳腺癌中的表达及其对细胞生物学行为的影响

目的研究三阴性乳腺癌中环状RNA circ_0007823的表达量及其影响三阴性乳腺癌(TNBC)细胞生物学行为的可能机制。 方法按照纳入及排除标准，纳入2016年1月至2020年12月上海市长宁区妇幼保健院收治的女性TNBC患者120例，按照随机数字表法从中选择30例进行回顾性研究。运用实时定量RT-PCR检测circ_0007823在TNBC组织及癌旁正常组织中的表达量，用t检验比较其差异。按照circ_0007823在TNBC组织中的表达量中位值为截点，将30例患者分为circ_0007823高表达组与circ_0007823低表达组，采用Fisher确切概率法比较circ_0007823高、低表达组间临床病理特征的差异。为了研究circ_0007823过表达在TNBC细胞中的作用，将MDA-MB-231细胞分为2组：circ_0007823过表达质粒转染组和空载体转染组(对照)，分别转染circ_0007823过表达载体质粒及空载体质粒。转染48 h后，使用Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力，使用CCK-8法检测细胞的增殖活性。为了进一步研究circ_0007823突变在TNBC细胞中的作用，将MDA-MB-231细胞分为3组：circ_NC组、circ_0007823-Mut组、circ_0007823-WT组，分别转染空载体、circ_0007823突变型和circ_0007823野生型质粒。转染48 h后，使用Transwell实验检测细胞的迁移及侵袭能力；转染0、24、48、72、96 h后，使用CCK-8法检测细胞的增殖活性。使用双荧光素酶报告基因实验验证circ_0007823与miR-182-5p的关系。运用RT-PCR及Western blot实验检测过表达circ_0007823后MDA-MB-231细胞中miR-182-5p及靶基因FOXF2的表达。迁移细胞数、侵袭细胞数的2组比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用Tukey法。细胞吸光度值的2组比较采用t检验，不同时间点的多组比较采用重复测量方差分析，组间两两比较采用Bonferroni法。 结果TNBC组织中circ_0007823的表达量较癌旁正常组织降低(5.97±3.08比20.28±5.44，t＝16.469，P<0.001)。TNBC组织中circ_0007823的表达量与淋巴结转移相关(P＝0.014)。与空载体组相比，circ_0007823过表达组迁移细胞数降低(120.67±6.81比107.00±3.61，t＝5.857，P＝0.028)，侵袭细胞数也降低(94.00±3.61比58.33±3.06，t＝107.000，P<0.001)，吸光度值下降(0.73±0.02比0.63±0.02，t＝7.187，P＝0.001)。circ_NC组、circ_0007823-Mut组、circ_0007823-WT组迁移细胞数分别为120.67±6.81、109.67±6.51、82.00±17.91，差异有统计学意义(F＝38.550，P<0.001); 3组侵袭细胞数分别为272.33±6.03、261.67±2.52、194.67±9.02，差异有统计学意义(F＝128.648，P<0.001)。circ_0007823-WT组的迁移及侵袭细胞数较对照组、circ_0007823-Mut组均下降(P均<0.001)。circ_NC组、circ_0007823-Mut组、circ_0007823-WT组MDA-MB-231细胞吸光度值比较，差异有统计学意义(组间比较，F＝297.883，P<0.001；不同时间点比较，F＝1 207.174，P<0.001；交互作用，F＝42.433，P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验证实circ_0007823与miR-182-5p具有靶向结合位点。与对照组相比，circ_0007823过表达质粒转染MDA-MB-231细胞后，circ_0007823的表达量升高(1.01±0.9比9.30±2.47，t＝-5.794, P＝0.029)，miR-182-5p的表达量降低(1.00±0.11比0.86±0.09，t＝2.838，P＝0.022)，FOXF2的mRNA表达量升高(0.87±0.11比1.06±0.24，t＝2.697，P＝0.027)。 结论circ_0007823在TNBC中低表达，对TNBC细胞增殖、侵袭及迁移能力有抑制作用，并可与miR-182-5p靶向结合，上调FOXF2表达。     

比卡鲁胺联合紫杉醇对雄激素受体阳性三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用

目的探讨比卡鲁胺(BIC)联合化疗药物紫杉醇(PTX)对雄激素受体(AR)阳性的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及可能的作用机制。 方法采用CCK-8试剂盒观察不同浓度的BIC (0.1、1.0、10.0 μmol/L)和PTX(0.1、1.0、10.0、100.0、1 000.0、10 000.0 nmol/L)以单药及不同联合给药方式处理后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用。细胞增殖抑制率比较采用单因素方差分析。组间两两比较采用LSD法。选取10 nmol/L PTX及10 nmol/L DMSO分别处理MDA-MB-231细胞样品(各3个)72 h,采用生物信息学方法分析样品的相关基因表达芯片数据,采用校正t检验筛选出差异基因。 结果使用不同浓度的BIC分别处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h后,各组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在不同时间点差异均有统计学意义(F＝4.124、8.189、4.139, P＝0.037、0.004、0.032)。BIC 10.0 μmol/L组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在48 h最高,为(12.9 ± 5.5)%。不同浓度的PTX分别处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h后,不同浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率在不同时间点差异均有统计学意义(F＝8.407、47.432、14.907, P均<0.001)。PTX在48 h时对MDA-MB-231细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)为5 380.0 nmol/L。5 000.0 nmol/L PTX单药或联合不同浓度(0.1、1.0、10.0 μmol/L)的BIC同时处理MDA-MB-231细胞48 h后,5 000.0 nmol/L PTX单药处理组与3个实验组中细胞增殖抑制率分别为(53.2±2.7)%、(53.2±3.1)%、(51.7±3.4)%、(51.0±2.3)%,组间差异无统计学意义(F＝0.831,P＝0.492)。采用5 000.0 nmol/L PTX和10.0 μmol/L BIC以不同的序贯方式联合给药处理MDA-MB-231细胞(PTX 24 h ＋BIC 24 h组、BIC 24 h ＋PTX 24 h组、PTX 48 h ＋BIC 24 h组、BIC 48 h＋PTX 24 h组),并用5 000.0 nmol/L PTX(PTX 48 h组)和10.0 μmol/L BIC(BIC 48 h组)单药处理及同时联合给药(PTX 48 h＋ BIC 48 h组)分别处理MDA-MB-231细胞后,各组间细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F＝241.466,P<0.001)。其中,两两比较结果显示,PTX 24 h ＋BIC 24 h组细胞增殖抑制率为(72.9±1.9)%,高于BIC 24 h ＋PTX 24 h组的(42.9±1.7)%(P<0.001),PTX 48 h组的(60.9±3.7)%(P<0.001)和PTX 48 h ＋BIC 48 h组的(60.3±4.1)%(P<0.001)。PTX处理组中有EGR1、FST、FOS、IL8、IL6、RPL27A及CA2 7个基因的表达量与DMSO处理组比较,差异均有统计学意义(t＝18.647、10.336、10.098、9.683、9.408、9.050、8.001,P均<0.050)。 结论通过先PTX再BIC的序贯联合给药方式较单药及其他联合给药方式能够更有效抑制AR阳性三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖,两者间可能存在协同作用。     

微RNA-3178和三羟异黄酮对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231化疗敏感性的影响

目的探讨微RNA(miRNA)-3178和三羟异黄酮(genistein, Gen)在三阴性乳腺癌化疗敏感性中的作用。 方法(1)分别用不同浓度的单药多柔比星(DOX, 0.125、0.250、0.500 μmol/L)、紫杉醇(PTX, 0.20、0.40、0.80 μmol/L)或联合Gen(2.5 μmol/L)处理MDA-MB-231细胞后,用MTT法检测细胞生长情况,并计算药物的IC₅₀;(2)采用小分子干扰RNA(siRNA)干扰技术,将miRNA-3178小干扰片段瞬时转染MDA-MB-231细胞(miRNA-3178 siRNA组),以转染无义siRNA的细胞作为阴性对照组,再用real-time PCR法检测干扰结果,并分别用不同浓度DOX或PTX处理miRNA-3178 siRNA组及阴性对照组细胞,检测2组细胞间化疗药物敏感性的差异;(3)分别用0.250 μmol/L DOX、0.40 μmol/L PTX及2.5 μmol/L Gen处理MDA-MB-231细胞,再用real-time PCR法检测所有处理组与未处理组细胞miRNA-3178表达量的差异。2组细胞间生长抑制率及miRNA-3178表达量的比较采用t检验,多组细胞间miRNA-3178表达量的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD法。 结果(1)MTT结果显示：用0.125、0.250、0.500 μmol/L DOX单药处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为16.7%±0.4%、25.9%±0.1%及44.9%±0.1%,联合2.5 μmol/L Gen处理后细胞生长抑制率均显著增加,分别为29.8%±0.3%、45.3%±0.4%及68.5%±0.4%,组间比较,差异均有统计学意义(t＝38.12、61.57、82.70,P均< 0.001);用0.20、0.40、0.80 μmol/L PTX单药处理MDA-MB-231细胞48 h后,细胞生长抑制率分别为15.3%±0.3%、27.9%±0.5%及39.2%±0.1%,联合2.5 μmol/L Gen处理后细胞生长抑制率也显著增加,分别为32.7%±0.7%、48.3%±0.1%及63.3%±0.2%,组间比较,差异也均有统计学意义(t＝34.41、58.63、213.91,P均<0.001)。DOX单独作用于细胞的IC₅₀为1.230 μmol/L,联合2.5 μmol/L Gen后,IC₅₀降低为0.440 μmol/L;PTX单独作用于细胞的IC₅₀为0.64 μmol/L,联合2.5 μmol/L Gen后,IC₅₀降低为0.27 μmol/L。(2)在不同浓度DOX(0.125、0.250、0.500 μmol/L)或PTX(0.20、0.40、0.80 μmol/L)的作用下,miRNA-3178 siRNA组MDA-MB-231细胞生长抑制率均明显低于其阴性对照组(转染无义siRNA)(12.3%±0.6%比16.7%±0.4%,21.2%±0.9%比25.9%±0.1%,27.2%±0.9%比44.9%±0.1%,t＝8.99、7.33、27.34,P均<0.050;8.8%±0.5%比15.3%±0.3%,13.4%±1.1%比27.9%±0.5%,20.2%±0.9%比39.2%±0.1%,t＝16.80、17.57、30.48,P均< 0.001)。(3)所有处理组及未处理组细胞间miRNA-3178表达量的差异具有统计学意义(F＝ 66.57,P<0.001)。组间两两比较显示,与未处理组相比,DOX(0.250 μmol/L)及PTX(0.40 μmol/L)处理组MDA-MB-231细胞miRNA-3178表达量无明显变化(P＝0.611、0.235),而Gen(2.5 μmol/L)可显著增加MDA-MB-231细胞miRNA-3178的表达量(11.10±0.33比5.77±0.21,P<0.010)。 结论Gen和miRNA-3178可能增加三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231对PTX和DOX化疗的敏感性。     

加速康复外科模式在乳腺癌术后早期患肢功能恢复中的应用

目的探讨加速康复外科模式在乳腺癌术后早期患肢功能恢复中的应用。 方法按照纳入及排除标准，选取2016年5月至2017年5月陆军军医大学西南医院医院收治的乳腺癌患者124例进行前瞻性研究，采用随机数字表法分为对照组和干预组，每组62例。对照组采用常规护理方法对患者进行患肢功能锻炼指导；干预组采用加速康复外科模式对患者进行术前宣教，术后由专人指导患肢功能锻炼，出院后由护理专家门诊评估并制定个体化锻炼方案及建立微信平台指导和督促。用t检验比较2组患者术后伤口恢复时间、引流时间以及住院时间的差异。在术后10 d、1个月及3个月，采用Constant-Murley肩功能测定标准评估患肢功能恢复情况，应用WHOQOL-BREF生活质量评定量表评估患者生活质量，并采用重复测量数据方差分析比较2组评分。 结果干预组的术后伤口恢复时间、引流时间以及住院时间分别为(7.5±2.1) d、(6.3±2.4) d及(7.6±2.4) d，明显低于对照组的(10.3±3.2) d、(10.2±3.7) d及(10.2±4.2) d(t＝5.762、6.963、4.232，P均<0.001)。干预组患者的术后患肢功能恢复情况评分优于对照组(疼痛：组间比较，F＝94.553，P<0.001；时间点比较，F＝723.882，P<0.001；交互作用，F＝21.356，P＝0.169；日常行为能力：组间比较，F＝351.725，P<0.001；时间点比较，F＝1 681.920，P<0.001；交互作用，F＝20.623，P<0.001；关节活动度：组间比较，F＝441.381，P<0.001，时间点比较，F＝2 458.887，P<0.001；交互作用，F＝28.420，P<0.001;肌力：组间比较，F＝84.571，P<0.001；时间点比较，F＝1 474.775，P<0.001；交互作用，F＝13.862，P<0.001)。干预组患者的术后生活质量评分也优于对照组(生活质量主观感觉：组间比较，F＝235.607，P<0.001；时间点比较，F＝607.245，P<0.001；交互作用，F＝1.913，P＝0.169；健康状况主观感觉：组间比较，F＝140.170，P<0.001；时间点比较，F＝618.834，P<0.001，交互作用，F＝1.533，P＝0.218；生理健康：组间比较，F＝72.713，P<0.001，时间点比较，F＝2 324.181，P<0.001；交互作用，F＝18.296，P<0.001;心理健康：组间比较，F＝64.987，P<0.001；时间点比较，F＝2 613.833，P<0.001，交互作用，F＝16.158，P<0.001；社会关系：组间比较，F＝58.654，P<0.001；时间点比较，F＝2 775.791，P<0.001；交互作用，F＝16.710，P<0.001；环境：组间比较，F＝59.818，P<0.001；时间点比较，F＝2 638.321，P<0.001；交互作用，F＝22.660，P<0.001)。 结论加速康复外科模式对乳腺癌患者术后进行患肢功能锻炼的干预可以显著提高患者功能锻炼的依从性，提高患者的生活质量。     

二硫键共价载紫杉醇胶束对乳腺癌的抑制作用

目的通过体内外实验评估二硫键共价载紫杉醇胶束[P(PEGMEA)-co-P(PDPHEMA)-g-PTX,简称二硫键紫杉醇]对乳腺癌的抑瘤效果。 方法(1)用0.0001、0.001、0.01、0.1、1、10、50、100、500 μg/ml二硫键紫杉醇溶液分别处理MCF-7细胞,用MTT法检测在490 nm波长处的吸光度值(D),并计算药物的半数抑制浓度(IC₅₀)。(2)用10 μg/ml胶束、紫杉醇及二硫键紫杉醇分别处理4种细胞系(MCF-7、MDA-MB-231、MCF-10A、U937),用MTT法检测在490 nm波长处的D值,并用流式细胞仪评估MDA-MB-231细胞凋亡情况。(3)利用MDA-MB-231细胞构建荷瘤裸鼠模型。选择荷瘤裸鼠18只,随机分为胶束组、紫杉醇组、二硫键紫杉醇组3组,每组6只,分别给药5 mg/kg;另选18只,随机分为3组,每组6只,胶束组给药16 mg/kg,紫杉醇给药5 mg/kg,二硫键紫杉醇给药16 mg/kg(载药率30.9%,含紫杉醇5 mg/kg)。分别记录肿瘤体积及重量,检测血常规,对肿瘤及重要内脏器官行病理检查。多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用LSD法;若数据不满足正态分布和方差齐性,用M(P₂₅～P₇₅)表示,采用非参数检验进行分析。 结果(1)二硫键紫杉醇对MCF-7细胞活力抑制作用呈浓度依赖关系(IC₅₀＝6.13 μg/ml)。(2)在MCF-7、MDA-MB-231、MCF-10A、U937细胞系,3组(胶束组、紫杉醇组、二硫键紫杉醇组)的D值比较,差异均有统计学意义(F＝133.152、139.673、17.364、14.900,P均<0.050),两两比较中紫杉醇组、二硫键紫杉醇组分别与胶束组比较差异均有统计学意义(P均<0.050),但二硫键紫杉醇组与紫杉醇组比较,差异无统计学意义(P＝0.091、0.071、0.188、0.616)。胶束组、紫杉醇组、二硫键紫杉醇组的MDA-MB-231细胞凋亡率分别为46.35%(45.20%～52.38%)、45.60%(45.03%～46.93%)、11.70%(11.00%～12.60%),差异有统计学意义(P＝0.003)。胶束组与紫杉醇组,胶束组与二硫键紫杉醇组间比较差异均有统计学意义(P均<0.017);紫杉醇组与二硫键紫杉醇组比较差异无统计学意义(P＝0.423)。(3)给荷瘤裸鼠注射5 mg/kg相应药物后,胶束组、紫杉醇组、二硫键紫杉醇组肿瘤体积分别为(5 465±1 105) mm³、(3 590±877) mm³、(4 125± 792) mm³,差异有统计学意义(F＝7.264,P＝0.005),肿瘤质量分别为(6.29±1.31) g 、(3.62±1.03) g、(4.58±0.92) g,差异也有统计学意义(F＝10.167,P＝0.001);紫杉醇组与二硫键紫杉醇组在肿瘤体积和质量方面的差异均无统计学意义(P＝0.345、0.296)。胶束组给药16 mg/kg,紫杉醇给药5 mg/kg,二硫键紫杉醇给药16 mg/kg后,裸鼠肿瘤体积分别为(3 251±679) mm³、(1 936±399) mm³、(1 637±371) mm³,差异有统计学意义(F＝16.100,P<0.001);肿瘤质量分别为(3.02±0.48) g、(2.00±0.18) g、(2.00±0.18) g,差异也有统计学意义(F＝18.147,P<0.001);紫杉醇组与二硫键紫杉醇组在肿瘤体积和质量方面的差异均无统计学意义(P＝0.385、1.000)。紫杉醇组裸鼠在给药2周后开始精神萎靡,活动量减少并死亡2只,其余2组裸鼠状态较好。3组裸鼠的红细胞、白细胞及血小板数量比较,差异均无统计学意义(F＝1.424、1.845、2.257,P＝0.276、0.197、0.144)。HE染色结果显示,紫杉醇组和二硫键紫杉醇组肿瘤组织内均可见广泛坏死灶。 结论二硫键紫杉醇胶束在体内外对乳腺癌细胞具有与紫杉醇相似的抑制作用,不良反应小,且有效抑制剂量更低。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

恶性肿瘤肝转移假性肝硬化发生机制及诊疗的研究进展

随着对恶性肿瘤的深入研究,越来越多的肿瘤患者接受到更规范更多线的治疗.更多线的化疗及靶向治疗,使一部分恶性肿瘤肝转移患者的肝脏发生类似肝硬化的形态学及临床改变,称之为假性肝硬化.由于假性肝硬化罕见,对于它的认识多来自于个案报道.因此,本文通过综述国内外关于假性肝硬化的个案报道及相关研究,对其发生机制、影像学及临床表现和...