miR-885-3p靶向AKT1对结直肠癌细胞HT-29放射敏感性的影响

目的 探究miR-885-3p对结直肠癌细胞HT-29放射敏感性的影响以及作用机制。方法 荧光定量PCR检测经不同剂量（0、2、4、6、8 Gy）X射线照射后HT-29细胞中miR-885-3p的表达量;建立过表达miR-885-3p细胞株,功能试验探讨其对HT-29细胞放射敏感性的影响;生物信息学预测miR-885-3p下游调控的靶基因,双荧光素酶报告基因法进一步验证;上调和下调miR-885-3p表达量探讨miR-885-3p与靶基因丝苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）表达量的调控关系;慢病毒转染敲减AKT1表达量,观察其对HT-29细胞放射敏感性的影响;共转染miR-885-3p模拟物,探讨过表达AKT1对miR-885-3p诱导的HT-29细胞放射敏感性的影响。结果 miR-885-3p在放射诱导的HT-29细胞中表达上调（F=46.64,P<0.05）;过表达miR-885-3p和敲减AKT1可通过抑制HT-29细胞存活、促进其凋亡,从而增强HT-29细胞放射敏感性（t=12.33、12.95,P<0.05）,放射增敏比（SER）分别为1.602和1.946;抑制miR-885-3p可通过促进HT-29细胞存活、抑制其凋亡从而促进HT-29细胞放射抵抗（t=11.94,P<0.05）,SER为0.839;AKT1是miR-885-3p下游靶基因;过表达AKT1反转miR-885-3p增强HT-29放射敏感性的作用,SER为0.680。结论 miR-885-3p通过直接靶向AKT1增加结直肠癌HT-29细胞放射敏感性,为提高临床结直肠癌放疗敏感性提供一个靶点。     

miR-491-5p对缺氧诱导的滋养细胞凋亡的促进作用及其机制

目的 探讨microRNA-491-5p(miR-491-5p)在缺氧诱导的滋养细胞凋亡中的作用及其对子痫前期的影响。方法 选取人绒毛膜滋养层细胞，分为4组：对照组、缺氧组、缺氧+miR-491-5p mimic组和缺氧+miR-491-5p inhibit组。采用细胞活力染色检测滋养细胞凋亡情况，qRT-PCR检测miR-491-5p的表达，TargetScan数据库预测miR-491-5p的靶基因，双荧光素酶报告基因实验验证miR-149-5p与B-细胞淋巴瘤因子2样蛋白2基因(BCL2L2)的靶向关系。miR-491-5pmimic和inhibitor分别转染滋养细胞后，qRT-PCR检测miR-491-5p的表达，Westernblotting检测BCL2L2蛋白的表达改变，细胞活力染色、Western blotting、流式细胞术检测滋养细胞凋亡情况。结果 与对照组比较，缺氧组滋养细胞凋亡率明显增高(P<0.001),miR-491-5p表达明显增高(2.784±0.214 vs. 1.000±0.000,P<0.01)；生物信息学预测与双荧光素酶检测报告实验显示...     

miR-494-3p/RRS1轴对结直肠癌影响作用及机制

目的 探讨miR-494-3p/RRS1轴对结直肠癌的影响作用及机制。方法 选取内蒙古医科大学附属医院自2018年1月至2020年1月收治的192例结直肠癌患者为研究对象。收集患者的治疗前癌组织及癌旁组织。检测结直肠癌患者的miR-494-3p表达水平并分析其对结直肠癌患者生存率、细胞增殖的影响;分析RRS1对结直肠癌患者细胞增殖的影响及miR-494-3p靶向RRS1对结直肠癌患者细胞增殖的调控作用;分析miR-494-3p及RRS1对结直肠癌患者细胞周期相关因子表达水平的影响。结果 miR-494-3p在结直肠癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.05)。miR-494-3p高表达生存率高于miR-494-3p低表达(P<0.05)。与结直肠正常细胞株NCM460比较,miR-494-3p表达水平在结直肠癌细胞株RKO、HCT116、SW480、HT-29中均处于低表达水平,且SW480细胞株中miR-494-3p表达水平最低(P<0.05)。过表达miR-494-3p后,结直肠癌细胞SW480增殖水平下降(P<0.05);敲低miR-494-3p后,结直...     

LncRNA CRNDE靶向miR-384影响结直肠癌细胞放射敏感性的研究

目的 研究长链非编码RNA （Lnc RNA）结直肠肿瘤差异表达基因（CRNDE）对结直肠癌细胞放射敏感性的影响及其机制。方法 以结直肠癌HT-29细胞作为体外研究对象,转染CRNDE shRNA,实时定量PCR测定干扰效果。以8 Gy X射线照射转染CRNDE shRNA后的HT-29细胞,四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡水平。平板克隆实验检测放射敏感性。生物信息学软件预测CRNDE与miR-384有互补结合位点,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将CRNDE shRNA和miR-384 inhibitor共转染至HT-29细胞中,以8 Gy剂量照射处理,MTT和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡变化。结果 CRNDE shRNA能够降低HT-29细胞中CRNDE表达水平（1.00±0.08 vs. 0.42±0.06,t=10.051,P<0.05）。CRNDE shRNA和放射均可以抑制HT-29细胞增殖并诱导细胞凋亡,并且二者联合具有协同作用[凋亡率：（2.27±0.13）%、（23.58±2.35）%、（26.91±2.81）%、（36.84±3.24）%,F=24.66,P<0.05;吸光度（A）值：0.45±0.06、0.30±0.02、0.28±0.03、0.20±0.02,F=106.21,P<0.05]。CRNDE shRNA转染后可以提高HT-29细胞放射敏感性,放射增敏比为1.374。CRNDE靶向负调控miR-384表达。miR-384 inhibitor能够拮抗CRNDE shRNA对放射处理的结直肠癌细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 下调LncRNA CRNDE表达可增强结直肠癌细胞的放射敏感性,其作用机制与靶向负调控miR-384表达有关。     

miR-375-3p抑制DNA双链断裂的同源重组修复增强结直肠癌细胞放射敏感性的研究

目的:探究miR-375-3p调控结直肠癌细胞放射敏感性的作用和机制。方法:在结直肠癌细胞HCT116及HT29中过表达miR-375-3p,利用CCK-8法检测细胞增殖能力,利用克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,利用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡,利用流式细胞术检测细胞周期分布。过表达...     

miR-218-5p抑制NRAS表达调控非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡

目的 探究miR-218-5p靶向调控NRAS基因表达在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖和凋亡中的作用及其机制。方法 qRT-PCR和Western blot分别检测组织和细胞中miR-218-5p和NRAS的表达。取NSCLC细胞A549进行分组和转染：Blank组、NC组、miR-218-5p mimic组、miR-218-5p inhibitor组、si-NRAS组、oe-NRAS组、miR-218-5pmimic+oe-NC组和miR-218-5pmimic+oe-NRAS组。荧光素酶报告实验验证miR-218-5p与NRAS基因的靶向关系。MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-218-5p在NSCLC组织及NSCLC细胞株中呈低表达,而NRAS呈高表达（均P<0.05）。与Blank组、NC组比较,miR-218-5p mimic组NSCLC细胞增殖活力降低,凋亡率上升（均P<0.05）;miR-218-5p inhibitor组NSCLC细胞增殖活力增高,凋亡率下降（均P<0...     

miR-9对神经纤毛蛋白-1的靶向调控及其在辐射效应中的作用

目的：构建has-miR-9表达质粒和NRP1-3’UTR荧光素酶报告质粒,探讨miR-9对 NRP1的靶向调控作用及其在A549 细胞中的辐射效应。方法：利用生物信息学方法预测has-miR-9与NRP1-3’UTR的结合位点;将miR-9序列插入载体pcDNA-DEST47中构建真核表达质粒,同时构建NRP1-3’UTR的野生型和突变型荧光素酶报告质粒,并与pcDNA-DEST-miR-9质粒共转染至A549细胞,分析miR-9对其调控作用;miR-29b作为阴性对照,观察miR-9对NRP1的靶向作用。采用Western blot方法,验证miR-9对NRP1蛋白表达的抑制作用及照射后A549细胞NRP1蛋白表达变化;采用实时定量PCR方法检测10 Gy电离辐射照射后A549细胞miR-9表达量。结果：荧光素酶活性实验结果显示,miR-9可以显著下调野生型NRP1-3’UTR质粒的荧光素酶活性（t=3.906,P<0.05）,而不影响突变型质粒的荧光素酶活性,同时证实miR-9以外的miRNA（miR-29b）不能抑制野生型NRP1-3’UTR质粒的荧光素酶活性。转染miR-9 mimic后,在A549细胞中,靶基因NRP1蛋白的表达受抑制。10 Gy照射后,A549细胞中miR-9表达量下调（t=37.319,P<0.05）,而NRP1蛋白表达升高。结论：在A549辐射效应中miR-9通过靶向结合NRP1基因3’UTR,特异性调控NRP1蛋白表达。     

circAPLP2对结直肠癌细胞SW480侵袭与转移的影响及其机制

目的 探讨circAPLP2对结直肠癌细胞SW480侵袭与转移的调控作用及其分子机制。方法 采用在线数据库Starbase预测circAPLP2与miR-497-5p的结合位点,TargetScan预测miR-497-5p与FGFR1的结合位点。采用qRT-PCR检测LoVo、DLD1、SW480、SW620、Caco-2、HCoEpiC细胞中circAPLP2、miR-497-5p的相对表达水平,Westernblotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平。取SW480细胞,设置：(1)siNC组(转染siControl)与sicircAPLP2组(转染sicircAPLP2),采用qRT-PCR检测circAPLP2、miR-497-5p、FGFR1 mRNA的相对表达水平,Western blotting检测FGFR1蛋白的表达;(2)Vector组(转染对照空载质粒)与circAPLP2组(转染circAPLP2过表达质粒),采用qRT-PCR检测miR-497-5p、FGFR1mRNA的相对表达水平,Westernblotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平;(3)si...     

微小RNA-29b靶向卷曲蛋白6参与急性髓系白血病细胞柔红霉素耐药的分子机制

目的 探究微小RNA-29b(miR-29b)靶向卷曲蛋白6(FZD6)参与急性髓系白血病(AML)细胞柔红霉素(DNR)耐药的分子机制。方法 CCK-8检测AML细胞系在不同DNR浓度下的生存能力，实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测AML细胞系中miR-29b的表达。选取THP-1细胞为研究对象，分为Control组(正常培养)、miR-NC mimics组(转染miR-NC mimics)、miR-29b mimics组(转染miR-29b mimics)、miR-29b mimics+pcDNA组(转染miR-29b mimics和pcDNA)、miR-29b mimics+pcDNA-FZD6组(转染miR-29b mimics和pcDNA-FZD6),转染24 h后使用10 mM DNR处理培养24 h。qRT-PCR和免疫印迹(Western blot)检测各组DNR处理的THP-1细胞中miR-29b和FZD6表达水平。生物信息学和双荧光素酶报告基因预测并检测miR-29b和FZD6靶向关系。CCK-8、Edu法和流式细胞术分别检测DNR处理的各组THP-1细胞增...     

miR-193b在HepG2细胞中下调K-Ras蛋白表达

目的探讨microRNA-193b（miR-193b）在HepG2细胞中对K-Ras蛋白表达的调控作用。方法 Tar-getScan软件预测获得miR-193b调控候选靶基因K-ras;构建包含预测miR-193b作用靶位点的K-rasmRNA3′UTR野生型和突变型荧光素酶报告基因载体pGL-KRAS和pGL-Mu-KRAS,检测转染HepG2细胞的荧光素酶活性;合成miR-193b的dsRNA,转染HepG2细胞,实时定量PCR和Western印迹检测对K-rasmRNA和蛋白表达的影响。结果与结论 miR-193b可以与K-rasmRNA3′UTR结合。在HepG2中,miR-193b在mRNA和蛋白水平下调K-ras基因表达。     

不同海拔高度大鼠腰椎局部细胞因子的变化

目的探讨高原大鼠腰椎局部细胞因子变化。方法选用Wistar雌性大白鼠各15只,分别在海拔3100m高原及1500m饲养3个月后,处死实验动物,取第三腰椎,匀浆后取上清液,采用放射免疫分析法测定细胞因子TNF-α和IL-6的含量。结果高原组大鼠腰椎TNF-α和IL-6的含量显著高于平原组(P<0.01)。结论高原因缺氧等因素,可使腰椎匀浆内细胞因子含量升高,骨吸收增加,可能是引起腰腿痛发病率增高的原因之一。     

脉冲电磁场对去势大鼠腰椎局部细胞因子及骨组织学影响

目的：探讨脉冲电磁场对去势大鼠腰椎局部细胞因子及骨组织学的影响。方法：选用健康Wistar雌性大白鼠共18只,随机分为A组（双侧卵巢切除＋脉冲电磁场治疗组）,B组（双侧卵巢切除组）,C组（伪去势组）,每组6只。A组于术后3d置脉冲电磁场治疗,每天1次,1h／次,共治疗3个月,电磁场频率为2Hz。3个月后处死所有大鼠,取大鼠的全部腰椎和股骨,腰椎匀浆后取上清液,采用放射免疫法测定肿瘤坏死因子（TNF—α）和白细胞介素-6（IL-6）含量。股骨固定,脱钙,常规石蜡切片,HE染色观察骨组织学变化。结果：B组大鼠腰椎TNF—α含量显著高于A、C组（P〈0．01）。B组IL-6含量与A、C组比较显著增高（P〈0．01）。A组同C组比较TNF-α和IL-6含量无统计学差异。骨组织学观察：B组股骨与A、C组比较骨皮质变薄,骨髓腔扩大,骨小梁分布稀疏,骨小梁粗细不均,见断裂现象。A组与C组比较无明显差别。结论：去势大鼠腰椎TNF-α和IL-6含量显著高于正常对照组,大鼠去势后股骨骨小梁明显变细,数量减少,分布稀疏。脉冲电磁场能明显降低去势大鼠腰椎TNF—α和IL-6的含量和抑制骨吸收。     

大鼠严重胸部创伤肺泡与间质巨噬细胞分泌TNF-α、IL-6的差异及意义

目的 观察大鼠严重胸部创伤后肺泡（AM）及间质（IM）巨噬细胞两类亚群分泌TNF—α、IL-6的篇异,并探讨其意义。方法 利用小型多功能生物撞击机,以400kPa驱动压力对大鼠右侧上胸壁进行致伤,建立大鼠严重胸部创伤模型,支气管肺泡灌洗,机械结合酶消化法分离、培养肺泡及间质巨噬细胞,动态检测创伤前、创伤后2、4、8、16、24小时以及复合LPS攻击后肺泡及间质巨噬细胞分泌TNF—α、IL-6的水平。结果 创伤复合LPS攻击后,AM,IM分泌TNF-α、IL-6增加,伤后4、8、16小时时相点AM分泌TNF—α显著高于IM;伤后每个时相点IM分泌IL-6均显著高于AM。结论 大鼠严重胸部创伤对AM、IM分泌TNF—α、IL-6具有不同影响,其在创伤后机体免疫功能紊乱的过程中具有不同作用,本研究为创伤性急性肺损伤的发病机制提供了一定的实验及理论依据。     

静脉血白细胞过滤法对犬白细胞免疫功能的影响

 目的 了解静脉血白细胞过滤模型对犬白细胞免疫功能的影响.方法 21只犬静脉麻醉后随机分为两组.白细胞滤除组11只犬双侧颈外静脉穿刺后行静脉血白细胞过滤.对照组10只犬双侧颈外静脉穿刺后持续镇静.以开始白细胞过滤为起始时间,检测白细胞滤除组犬0、1、2、6 h及对照组相对应时间点TNF-α、IL-6浓度、中性粒细胞上CD11/18、单核细胞上CD14的平均荧光强度.将犬处死后取右上肺组织测定髓质过氧化物酶(MPO)活性及HE染色行镜下病理检查.结果 两组血浆TNF-α浓度,中性粒细胞上CD11/18,单核细胞上CD14的表达无统计学差异.白细胞滤除组IL-6浓度在1 h点和2 h点明显低于对照组.两组肺组织MPO活力无统计学差异.两组肺病理切片均无明显病理学改变.结论 静脉血白细胞过滤法不会对机体脏器造成炎性损伤,并能降低部分炎性因子.     

小鼠钟基因Period2(Per2)抑制乳腺癌细胞生长的研究

目的 研究小鼠节律基因Period2（Per2）对小鼠乳腺癌细胞（EMT6）的生长抑制及诱导凋亡的作用。方法 将pcDNA3．1（＋）-Per2转导入EMT6细胞内,同时设立转染空质粒pcDNA3．1（＋）入细胞的对照组。以RT-PCR、Western blot、流式细胞技术来检测Per2基因和蛋白的表达;采用MTT、细胞生长曲线、细胞平板集落形成实验检测Per2过表达后对小鼠乳腺癌细胞的生长抑制作用;通过流式细胞技术、DNA梯形带、hochst33258荧光染色和电镜技术检测nr2过表达后对小鼠乳腺癌细胞凋亡的影响。结果 小鼠节律基因nr2过表达抑制EMT6细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡率增加。结论 本研究发现小鼠节律基因Per2可能通过使EMT6细胞阻滞于G1期,并诱导细胞凋亡来实现对该肿瘤细胞的生长抑制作用。     

急性肺损伤发病过程中IL-6与肺表面活性蛋白SP-A、SP-B的关系研究

目的:分析急性肺损伤中IL-6与肺表面活性蛋白-A(surfactant protein A,SP-A)和SP-B的含量变化及其相互关系,探讨急性肺损伤的发病机制.方法:用Wistar大鼠复制油酸性急性肺损伤动物模型,在不同时间点收集急性肺损伤大鼠血清标本及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF),用放射免疫法测定血清细胞因子IL-6的动态变化;采用ELISA法检测BALF中SP-A、SP-B含量的变化.结果与结论:急性肺损伤后大鼠血清中细胞因子IL-6的分泌水平显著上升(P<0.05), 而BALF中SP-A、SP-B含量显著降低,且血清中IL-6含量升高与BALF中SP-A、SP-B下降幅度呈显著负相关.结果提示急性肺损伤中IL-6分泌的升高与肺表面活性蛋白SP-A、SP-B含量的降低有显著的相关关系,炎症细胞因子IL-6 可能通过影响SP-A、SP-B的表达产生致病作用.     

阿尔茨海默病正电子显像剂11C-6-OH-BTA-1的制备

目的 研究脑内β-淀粉样蛋白的PET显像剂[N-甲基-11C]2-[4'-(甲氨基)苯基]-6-羟基苯并噻唑(11C-6-OH-BTA-1)的制备路线.方法 使用11C-三氟甲基磺酰甲烷(Triflate-CH3)进行11C标记,分别采用"反应瓶"法和"loop环"法制备11C-6-OH-BTA-1,应用C18 cartridge柱提纯产品.结果 2种方法从加速器开始生产11COx到生成11C-6-OH-BTA-1的时间相近,分别为33和32 min,按照加速器生产925 MBq 11C-Triflate-CH3计算,未校正11C衰变的情况下,无色澄清11C-6-OH-BTA-1注射液的产率为16%～44%,放化纯为92%～93%.结论 使用"loop环"法制备11C-6-OH-BTA-1,方法简单易操作.     

Effect of 6-aminonicotinamide on the pentose phosphate pathway: 31P NMR and tumor growth delay studies

6-aminonicotinamide (6AN) has been shown to enhance radio-sensitivity in vitro, although previous in vivo studies failed to show an effect. ³¹P NMR spectra were obtained by using a one-dimensional chemical shift imaging technique on a first generation transplant of the CD8FI spontaneous mammary carcinoma tumor model. Spectra were obtained both before and 10 h after treatment with 6AN (20 mg/kg). Changes in pH, nucleoside triphosphate/inorganic phosphate, and phosphocreatine/inorganic phosphate measured at 10 h post-6AN were not significant. A new peak was detected 10 h post-6AN, which was assigned to 6-phosphogluconate (6PG), indicating inhibition of the pentose phosphate pathway (PPP). Based on the spectral data demonstrating inhibition of the PPP at 10 h post-6AN, tumor-bearing mice were irradiated (15 Gy × 3 fractions) on Days 1, 10 or 11, and 21 10 h after administration of 6-aminonicotinamide (20 mg/kg). Tumor-bearing mice receiving 6AN alone (20 mg/kg × 3), radiation alone (15 Gy × 3), or saline were also studied. Tumor growth delay studies indicated that 6AN alone induced a small but significant tumor growth delay (4.3 ± 0.8 days). Radiation alone induced a tumor growth delay of 34.5 ± 2.7 days. Treatment with 6AN followed by radiation induced a tumor growth delay of 57.0 ± 3.8 days. This was significantly greater than the TGD values for treatment with 6AN alone or radiation (P < 0.01). No complete regressions were noted after treatment with 6AN or radiation alone. Concomitant therapy with 6AN plus radiation yielded 6/28 complete regressions (21%), which was significantly greater than radiation (P < 0.05) or 6AN alone (P < 0.01) on this mammary carcinoma.     

6S管理模式在中心ICU护理管理中的应用

应用6S管理办法提高科室护理的质量,改善科室的住院环境,提高病人满意度。在科室护理管理工作,应用6S管理方法。通过应用6S管理方法,科室护理质量、环境大大的改善,病人满意度得到了提高。     

罗格列酮对不稳定性心绞痛患者血清IL-6、TNF-α的影响

 目的 探讨罗格列酮对不稳定性心绞痛(UA)患者血清IL-6、TNF-α的影响.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA法)测定正常对照组、UA患者罗格列酮干预组和未干预组血清中IL-6、TNF-α水平的变化.结果 UA组血清IL-6、TNF-α水平显著高于正常对照组(P＜0.01),罗格列酮干预组血清IL-6、TNF-α含量显著低于未干预组(P＜0.05).结论 罗格列酮能降低UA患者IL-6、TNF-α的水平,可能通过保护血管内皮而起到抗动脉粥样硬化作用.