三七总甙对增生性瘢痕的作用

背景：增生性瘢痕的传统治疗手段如手术切除、类固醇激素、抗代谢药、免疫抑制剂和放射疗法等,均易复发或有严重的不良作用而限制了其临床应用。近年来应用活血化瘀类中药提取成分治疗增生性瘢痕取得了较为理想的进展,而且不良反应小。 目的：通过组织染色及相关基因检测的方法,观察三七总甙对兔耳增生性瘢痕的作用以及对转化生长因子β1 mRNA表达的影响。 方法：创建兔耳增生性瘢痕模型,约术后4周,按随机数字表法将24只大耳白兔分为3组,三七总甙组、曲安奈德组及空白对照组每组8只。以曲安奈德为阳性对照,分组分次瘢痕基底局部给药,用药5次后取瘢痕组织,以苦味酸酸性复红染色法、苏木精-伊红染色法对胶原纤维、成纤维细胞进行观察,应用反转录PCR方法检测细胞内转化生长因子β1基因的表达情况。 结果与结论：苏木精-伊红染色结果示三七总甙组兔耳瘢痕中成纤维细胞数量低于空白对照组,与曲安奈德组无明显差异。苦味酸酸性复红染色结果示三七总甙组兔耳瘢痕中胶原纤维较空白对照组排列整齐,与曲安奈德组无明显差异。基因检测结果显示三七总甙组、曲安奈德组转化生长因子β1 mRNA的表达显著低于空白对照组(P < 0.05)。提示三七总甙及曲安奈德均能通过抑制转化生长因子β1 mRNA的表达,降低转化生长因子β1在瘢痕组织中的含量,从而抑制成纤维细胞的过度增殖及以胶原为主的细胞外基质过度沉积,进而降低胶原纤维合成,来达到有效抑制瘢痕组织过度增生的目的。     

胰岛素促进大鼠移植脂肪微血管的形成

背景：细胞培养实验发现胰岛素不但能促进血管内皮细胞的增殖和修复,还能有效促进前脂肪细胞的增殖和分化,体内实验观察胰岛素对移植脂肪新生微血管的影响罕有报道。 目的：探讨胰岛素对大鼠移植脂肪内微血管形成的作用。 方法：将48只SD大鼠随机分成胰岛素组和对照组,从大鼠输卵管旁取出1 mL脂肪组织,制成脂肪颗粒移植到大鼠背部,建立颗粒脂肪移植模型。胰岛素组在移植前将脂肪颗粒放入浓度为300 mU/L的胰岛素中预处理;对照组对移植脂肪组织不施加处理因素。在移植后10,20,28 d取移植的脂肪组织做苏木精-伊红和CD34血管染色,观测移植脂肪细胞变化和微血管生长情况。 结果与结论：苏木精-伊红染色切片中可见移植体内有成熟脂肪细胞,细胞体积变小,部分脂肪细胞有破裂萎缩现象,细胞间有纤维组织增生,胰岛素组脂肪细胞周围纤维组织少于对照组。在10,20 d,胰岛素组微血管密度为(3.92±0.12)个/HP和(6.96±0.42)个/HP,对照组为(2.05±0.21)个/HP和(4.40±0.36)个/HP,胰岛素组微血管密度均高于对照组,两组比较差异有显著性意义(P < 0.01)。提示胰岛素能促进移植脂肪块内微血管生长,提高移植脂肪的存活率。     

Tumstatin对兔耳增生性瘢痕的抑制作用

目的 探讨肿瘤抑素(Tumstatin)对兔耳瘢痕组织生长情况的影响.方法 建立兔耳增生性瘢痕模型,用Tumstatin对兔耳腹侧建立的增生性瘢痕模型通过在体局部注射进行干预,随机设立Tumstatin治疗组、Tumstatin预防治疗组、曲安奈德对照组、生理盐水对照组;停止药物注射21天后各组同时于每只兔的双侧对称部位取材瘢痕组织,每一取材瘢痕组织均分成同样大小的四等份,分别进行组织形态学观察、CD34免疫组化方法测定血管密度的变化、观察血管内皮细胞与成纤维细胞凋亡的变化情况.结果 Tumstatin预防治疗组和Tumstatin治疗组中,新生毛细血管密度、内皮细胞活性以及成纤维细胞数量都较曲安奈德和生理盐水对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Tumstatin能够较曲安奈德更明显地抑制增生性瘢痕的生长,为Tumstatin用于防治增生性瘢痕的可行性提供了初步的理论依据.     

新型高频方波电脉冲对大鼠肝癌消融治疗的影响

目的探讨新型高频方波电脉冲对大鼠肝癌消融治疗的影响。 方法肝癌McA-RH7777细胞体外培养制备肿瘤细胞悬液，清洁级SD大鼠50只经肝内注射法建立肝癌模型。建模后1周，随机选取40只肝癌模型大鼠，按照简单抽样方法分为实验组(n＝26)和对照组(n＝14)。实验组大鼠肝脏肿瘤在2 000 V/cm场强下接受电脉冲处理，对照组脉冲场强为0，频率均为1 Hz，脉宽为100 μs。2组大鼠术前3、1 d及术后1、7、14、21、30 d分别尾静脉采血，全自动生化分析仪监测血清生化指标[谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酐、血尿素氮、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)]及肿瘤标志物甲胎蛋白(AFP)水平变化；分别记录2组大鼠术前1 d，术后7、14、21 d肿瘤长径变化和术后60 d生存时间改变，记录治疗过程中相关性并发症情况；术后30 d分别随机处死实验组和对照组各2只大鼠，检测2组大鼠消融靶区肿瘤组织蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2原癌基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达水平；术后30 d，切取2组肿瘤消融区域组织分别行苏木精-伊红染色、血管内皮生长因子(VEGF)免疫组织化学染色观察组织形态学改变，行KI67免疫组织化学染色、TUNEL染色分别计算肿瘤细胞增殖率及细胞凋亡率。对数据行t检验、重复测量方差分析、Kaplan-Meier曲线分析及χ²检验。 结果实验组术前3、1 d及术后1、7、14、21、30 d，大鼠不同时相点ALT、AST、CK、LDH水平比较，差异均有统计学意义(F＝41.458、39.842、33.343、52.335，P值均小于0.05)，大鼠不同时相点肌酐、血尿素氮比较，差异均无统计学意义(F＝0.702、2.429，P值均大于0.05)；对照组术前3、1 d及术后1、7、14、21、30 d，ALT、AST比较，差异均有统计学意义(F＝12.267、3.646，P值均小于0.05)；大鼠不同时相点肌酐、血尿素氮、CK、LDH比较，差异均无统计学意义(F＝0.885、1.100、1.773、1.338，P值均大于0.05)。术前3、1 d实验组和对照组大鼠ALT、AST、肌酐、血尿素氮、CK及LDH水平比较，差异均无统计学意义(P值均大于0.05)；术后1、21、30 d，实验组和对照组ALT、AST比较，差异均有统计学意义(t＝5.414、-9.993、-9.362, 4.345、-4.802、-7.159，P值均小于0.05)；术后1、7、14、21、30 d，实验组和对照组肌酐、血尿素氮比较，差异均无统计学意义(t＝0.651、0.322、0.045、-0.760、-0.741，4.345、0.784、-1.835、-4.802、-6.415；P值均大于0.05)。术后1、7 d，实验组和对照组CK、LDH比较，差异均有统计学意义(t＝5.613、4.437，7.817、5.183，P值均小于0.05)。术前3、1 d及术后1、7、14、21、30 d，实验组肿瘤标志物AFP水平分别为(4.63±0.53)、(4.84±1.63)、(5.54±1.96)、(3.87±2.19)、(2.34±0.28)、(1.61±0.51)、(1.18±0.36) ng/L，差异有统计学意义(F＝44.339，P<0.05)；对照组各时相点血清AFP水平分别为(4.44±0.91)、(4.61±0.91)、(4.86±0.95)、(5.55±1.08)、(6.10±1.42)、(6.93±1.80)、(6.70±2.69) ng/L，差异有统计学意义(F＝6.184，P<0.05)。术前3、1 d，实验组与对照组AFP水平比较，差异均无统计学意义(t＝0.862、0.501，P＝0.414、0.619)；术后7、14、21、30 d，实验组与对照组比较，差异均有统计学意义(t＝-2.682、-9.004、-10.809、-7.762，P值均小于0.05)。实验组术前1 d，术后7、14、21 d的肿瘤长径分别为(11.2±3.1)、(8.1±2.3)、(5.3±1.6)、(3.5±1.1) mm，而对照组各时相点的肿瘤长径分别为(9.8±2.1)、(14.1±2.7)、(17.8±3.7)、(14.4±2.7) mm；术前1 d，2组间肿瘤长径比较，差异无统计学意义(t＝1.526, P＝0.135)；术后7、14、21 d，实验组与对照组的肝脏肿瘤长经比较，差异均有统计学意义(t＝-7.330、-14.800、-18.244，P值均小于0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示，实验组术后Caspase-3、Bax较对照组表达水平增高，Bcl-2表达水平下降。术后30 d，肿瘤组织行苏木精-伊红染色，实验组可见大量的组织坏死，有明显的细胞凋亡区，而细胞的管道结果保持完好；对照组肿瘤细胞未见明显破坏。术后30 d，肿瘤组织行VEGF免疫组织化学染色，实验组可见细胞结构排列尚清晰，未见明显细胞破坏，仅有少量棕黄色阳性染色(1＋，中等染色)；对照组可见细胞组织排列紊乱，大量棕黄色阳性染色(4＋，强染色)。术后30 d，肿瘤组织行KI67免疫组织化学染色。实验组可见细胞结构排列完整，未见明显破坏，仅有少量棕黄色阳性染色(1＋，弱染色)；对照组可见组织结构紊乱，细胞可见大量棕黄色阳性染色(4＋，强染色)。术后30 d，肿瘤组织行TUNEL染色。实验组可见细胞排列稍紊乱，管道结构不清晰，大量棕黄色阳性染色；对照组可见组织排列整齐，仅有少量棕黄色阳性染色。实验组与对照组的肿瘤细胞增殖率分别为(2.8±0.8)%、(43.1±3.8)%，比较差异有统计学意义(t＝3.765，P<0.05)。TUNEL染色结果可见实验组强染色，而对照组呈弱染色或不染色；实验组与对照组肿瘤细胞凋亡率分别为(76.85±10.27)%、(2.56±1.67)%，比较差异有统计学意义(t＝4.456，P<0.05)。 结论新型高频方波电脉冲可有效控制大鼠肝癌的局部进展。     

负压伤口治疗对糖尿病足创面肉芽组织血小板源生长因子表达的影响

目的探讨负压伤口治疗技术(NPWT)的应用对糖尿病足肉芽组织血小板源生长因子(PDGF)表达的影响。 方法选取解放军白求恩国际和平医院2010年1月至2014年12月收治的40例糖尿病足患者,采用单纯随机抽样法将患者随机分为NPWT组(20例)和对照组(20例),NPWT组创面采用负压伤口治疗技术治疗,对照组采用传统纱布换药治疗。两组分别于治疗前及治疗第12天取创面肉芽组织2份,一份置于4%多聚甲醛溶液中保存,行苏木精－伊红(HE)染色和免疫组织化学染色,HE染色观察肉芽组织形成情况,免疫组织化学染色观察肉芽组织PDGF的表达情况,通过Motic Medical 6.0数码医学图像分析系统检测吸光度值对PDGF蛋白行定量分析。同时,另一份肉芽组织标本－80℃冰箱中保存,采用Western blot法检测PDGF蛋白表达量。数据应用SPSS 13.0软件进行分析,PDGF吸光度值及PDGF蛋白表达量比较采用两独立样本t检验。 结果两组治疗前HE染色可见炎症细胞多,成纤维细胞、新生血管形成较少;两组治疗第12天肉芽组织HE染色均可见新鲜肉芽组织的形成,表现为新生血管、成纤维细胞增多,但与对照组相比,NPWT组新生肉芽组织增多较为明显。免疫组织化学分析显示,两组治疗后均可见PDGF蛋白表达上调;NPWT组治疗第12天PDGF吸光度值(0.41±0.05)与治疗前(0.29±0.04)比较,差异有统计学意义(t＝8.63,P<0.05);对照组治疗第12天PDGF吸光度值(0.33±0.04)与治疗前(0.28±0.04)比较,差异也有统计学意义(t＝3.62,P<0.05);但是,NPWT组治疗前后PDGF吸光度变化值为0.13±0.05,与对照组治疗前后PDGF吸光度变化值(0.05±0.03)比较,差异有统计学意义(t＝5.89,P<0.05)。Western blot分析显示,NPWT组治疗第12天PDGF蛋白表达量为0.24 ±0.04,与治疗前PDGF蛋白表达量(0.11±0.03)比较,差异有统计学意义(t＝11.01,P<0.05);对照组治疗第12天PDGF蛋白表达量为0.17±0.03,与治疗前PDGF蛋白表达量(0.12 ±0.03)比较,差异亦有统计学意义(t＝6.06,P<0.05);但是,NPWT组治疗前后PDGF蛋白表达量的变化值为0.12 ±0.03,与对照组治疗前后PDGF蛋白表达量的变化值(0.05 ±0.02)比较,差异有统计学意义(t＝9.06,P<0.05)。 结论应用NPWT可明显促进创面肉芽组织PDGF表达上调,从而促进创面的愈合。     

曲尼司特减轻松木屑烟雾吸入性损伤大鼠肺组织胶原沉积的研究

目的观察曲尼司特对松木屑烟雾致大鼠肺组织损伤后胶原蛋白合成的影响,为曲尼司特防治松木屑烟雾吸入性损伤致肺组织胶原沉积乃至纤维化提供可行性。 方法将72只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组、对照组、治疗组、盐水组,每组18只。对照组、治疗组和盐水组大鼠吸入松木屑烟雾共15 min(每间隔5 min吸烟1次,每次5 min,共吸烟雾3次),对照组不给予任何治疗,治疗组和盐水组于吸入烟雾后6 h,分别每天经腹腔注射1次曲尼司特(200 mg·kg^-1)和0.9%氯化钠溶液0.5 mL,正常组大鼠不予致伤、治疗。伤后7、14、28 d,各组取肺组织行苏木精-伊红、Masson染色,并行组织病理评分和计算胶原沉积率(CVF),碱水解法测定肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,对数据行单因素方差分析、t检验。 结果(1)苏木精-伊红染色：松木屑烟致伤后7 d,对照组和盐水组大鼠肺组织中均可见不同程度炎性细胞浸润、充血、肺间质水肿,随着观察时间的延长,肺组织炎性细胞浸润增加、出血增多,肺间隔逐渐增宽。伤后7、14、28 d,治疗组肺组织病理评分[(2.60±0.63)、(4.05±0.20)、(3.80±0.23)分]分别低于对照组[(3.20±0.28)、(5.00±0.40)、(8.48±0.51)分]和盐水组[(3.20±0.16)、(5.20±0.33)、(8.20±0.52)分],差异均有统计学意义(t＝-1.732、-1.837、-4.025、-5.745、-16.673、-15.556, P<0.05),除伤后7 d,治疗组与正常组[(2.20±0.23)分]比较差异无统计学意义(t＝1.188, P>0.05),伤后14、28 d,治疗组均高于正常组,差异有统计学意义(t＝12.438、9.798, P<0.05);(2)胶原沉积：伤后7 d,对照组和盐水组大鼠小气道周围胶原纤维沉积增加,随着观察时间的延长,肺间质逐渐出现大面积的胶原沉积。伤后7、14、28 d,治疗组的CVF[(5.22±0.26)%、(6.66±0.59)%、(4.86±0.44)%]均低于对照组[(6.21±0.31)%、(11.64±0.39)%、(36.17±2.24)%]和盐水组[(6.20±0.56)%、(11.11±1.01)%、(33.72±4.41)%],差异均有统计学意义(t＝-4.893、-3.170、-8.476、-10.184、-27.491、-13.014,P<0.05),且除伤后28 d,治疗组CVF与正常组[(4.54±0.23)%]差异无统计学意义(t＝3.860, P>0.05),伤后7、14 d的治疗组均高于正常组[(4.54±0.23)%、(4.54±0.23)%],差异均有统计学意义(t＝1.275、6.646, P<0.05);(3)HYP表达：伤后7、14 d,治疗组[(0.77±0.01)、(0.97±0.01) μg/mL]、对照组[(0.93±0.01)、(1.27±0.18) μg/mL]和盐水组[(0.92±0.01)、(1.23±0.16) μg/mL]大鼠肺组织中HYP表达均高于正常组[(0.66±0.06)、(0.66±0.06)μg/mL],差异均有统计学意义(t＝3.619、9.134、8.918、10.739、6.309、6.652,P<0.05),且伤后14、28 d治疗组[(0.97±0.01)、(0.83±0.02) μg/mL]显著低于对照组[(1.27±0.18)、(1.43±0.16) μg/mL]和盐水组[(1.23±0.16)、(1.42±0.15) μg/mL],差异均有统计学意义(t＝-3.232、-3.230、-7.699、-7.913,P<0.05),伤后28 d,治疗组[(0.83±0.02) μg/mL]与正常组[(0.66±0.06) μg/mL]低于对照组[(1.43±0.16) μg/mL]和盐水组[(1.42±0.15) μg/mL],差异均有统计学意义[(t＝-7.699、-7.913、-9.326、-9.564, P<0.05),且治疗组与正常组间比较差异无统计学意义(t＝5.720, P>0.05)。 结论曲尼司特减轻了松木屑烟雾吸入性大鼠肺组织病理损伤程度,减少胶原沉积和HYP的表达。     

基质细胞衍生因子-1α联合Integra支架修复全层皮肤缺损创面的实验研究

观察基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)联合Integra支架促进全层皮肤缺损创面愈合的作用,并探讨其作用机制。 方法选取6～8周龄的雄性健康C57小鼠30只,在其脊柱两侧对称部位分别作直径1 cm的圆形全层皮肤缺损创面,采用真皮支架Integra作为创面覆盖物。将30只小鼠背部左右对称创面按随机数字表法分为2组：SDF-1α组和对照组,各30个创面。SDF-1α组经皮下往创面内注射SDF-α,对照组皮下注射磷酸盐缓冲溶液。术后第3、6、12、18和24天观察创面的愈合时间和愈合创面收缩情况,并留取创面及周围组织标本行苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色观察浸润细胞、肉芽组织厚度及血管化情况。对数据进行t检验。 结果(1) SDF-1α组创面完全愈合时间为(15.7±1.6)d,明显短于对照组的(19.6±1.8)d,差异有统计学意义(t＝3.967,P<0.05);(2)SDF-1α组术后第3、6、12天愈合创面收缩率分别为(7.3±3.3)%、(14.7±8.4)%、(27.6±6.3)%,与对照组[(8.3±2.5)%、(17.5±6.4)%、(31.2±16.5)%]比较,差异均无统计学意义(t＝0.6427、0.262、0.208,P值均大于0.05);SDF-1α组术后第18、24天愈合创面收缩率为(36.6±6.7)%、(58.2±7.1)%,小于对照组[(67.6±10.7)%、(81.1±8.3)%],差异均有统计学意义(t＝2.463、2.094,P值均小于0.05);(3)创面肉芽组织术后第3天SDF-1α组浸润细胞数目为(181.7±28.8)个/视野,与对照组[(190.8±33.4)个/视野]比较,差异无统计学意义(t＝ 4.08, P<0.05);术后第6天SDF-1α组浸润细胞数目[(382.2±43.4)个/视野],与对照组[((478.2±38.8)个/视野]比较,差异无统计学意义(t＝ 6.20,P<0.05);(4)肉芽组织的厚度术后第6、12天SDF-1α组创面的肉芽组织厚度为(255.8±41.8)、(387.6±36.8)μm,均小于对照组(407.3±43.4)、(490.2±49.4)μm],差异均有统计学意义(t＝4.08、6.159,P值均小于0.05);(5)SDF-1α组术后第24天愈合创面与正常皮肤更为相似,对照组瘢痕明显,表皮薄;(6)SDF-1α组术后第12天创面肉芽组织中CD3、CD31阳性细胞的密度稍高于对照组,肉芽组织的血管密度明显高于对照组。 结论局部使用SDF-1α可以促进全层皮肤缺损创面肉芽组织血管化,改善创面修复的效果。     

双层人工真皮联合自体刃厚皮移植修复烧创伤后骨/肌腱外露创面的临床效果

目的探讨双层人工真皮联合自体刃厚皮移植修复烧创伤后骨/肌腱外露创面的临床效果。 方法选择2019年11月至2022年8月期间内蒙古包钢医院烧伤科收治的符合入选标准的60例烧创伤后骨/肌腱外露患者作为研究对象,对其病例资料进行回顾性分析。根据创面修复方法不同将患者分为对照组和观察组,每组各30例。患者入院后完善相关检查,常规应用青霉素类抗生素控制感染,根据创面细菌培养结果及药物敏感试验结果调整抗生素的应用。观察组患者Ⅰ期行手术清创及双层人工真皮移植;待人工真皮完全血管化后,Ⅱ期去除人工真皮的硅胶层,再次修整创面,移植自体刃厚皮片。对照组待创面具备植皮条件后行单纯皮瓣或皮片移植修复创面。比较2组患者皮片/皮瓣成活率和创面愈合率、住院时间及住院费用、瘢痕生长情况。数据比较采用t检验及χ²检验。 结果术后10 d,观察组患者创面植皮术区皮片均成活,皮下无淤血及积液,皮片成活率为100%;对照组4例皮片移植患者皮下淤血较明显,皮片溶解坏死,2例皮瓣移植患者部分皮瓣远端血运障碍,缺血坏死,皮片/皮瓣成活率为80%,2组比较差异有统计学意义(χ²＝4.63, P＝0.03)。术后28 d,观察组创面全部愈合,术区无渗液、无红肿,创面愈合率为100%;对照组有6例患者创面未完全愈合,创面愈合率为80%,2组比较差异有统计学意义(χ²＝4.63, P＝0.03)。观察组患者平均住院时间及平均住院费用分别为(28.31±3.39) d、(6.58±1.21)万元,对照组患者平均住院时间及平均住院费用分别为(35.42±4.22) d、(3.27±1.10)万元,2组比较差异均有统计学意义(t＝7.21、11.13, P<0.05)。术后6个月,观察组温哥华瘢痕量表评分为(4.72±1.93)分,对照组为(5.88±2.12)分,2组比较差异有统计学意义(t＝2.22, P<0.05)。 结论双层人工真皮联合自体刃厚皮移植修复烧创伤后骨/肌腱外露创面,皮片/皮瓣成活率及创面愈合率高,可缩短平均住院时间,术后瘢痕增生较轻,值得临床推广应用。     

曲安奈德与甲基泼尼松龙影响周围神经再生的比较

背景：有研究证实甲基泼尼松龙在周围神经损伤后应用可促进神经再生;而曲安奈德在周围神经损伤方面的治疗效果尚未见报道。 目的：对比观察曲安奈德与甲基泼尼松龙在兔周围神经损伤后神经再生中的作用。 方法：36只新西兰大白兔随机数字表法分为曲安奈德组,甲基泼尼松龙组和对照组。兔双侧胫神经切断后行端端缝合,吻合口周围各组分别用曲安奈德注射液、甲基泼尼松龙注射液、生理盐水局部注射。 结果与结论：曲安奈德组和甲基泼尼松龙组步态、足底溃疡及愈合情况均优于对照组,且均较少出现神经吻合口周围粘连,镜下观察吻合口周围再生神经纤维较多,结缔组织增生较少;在神经传导速度、有髓神经纤维再生率、小腿三头肌湿质量比等方面明显优于对照组(P < 0.01)。曲安奈德组和甲基泼尼松龙组在上述各指标中无明显差异(P > 0.05)。提示周围神经损伤修复中局部应用曲安奈德或甲级泼尼松龙处理神经吻合口,能有效防止周围神经粘连,促进周围神经再生。     

RNAi沉默 N-cadherin 表达对 EC9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的: 探讨RNAi沉默 N-cadherin 表达对人食管鳞状细胞癌EC9706细胞体内生物学行为的影响。方法: 通过逆转录病毒介导的RNAi技术将 N-cadherin 基因的RNA干扰载体pMSCVneo/N-cadherin质粒及对照质粒pEGFP-MSCVneo质粒分别转染至人食管癌细胞系EC9706,运用G418进行抗性克隆的筛选和扩增,进而得到稳定转染的人食管癌细胞系EC9706(分别命名为干扰载体组和空载体组),将正常对照组、空载体组和干扰载体组EC9706细胞通过皮下注射的方式接种于裸鼠背部肩胛区,比较各组裸鼠成瘤期、成瘤大小、瘤体终重量及终体积等情况。运用免疫组织化学方法和Western blotting方法检测3组裸鼠移植瘤组织中E-cadherin、N-cadherin和MMP-9蛋白的表达情况。TUNEL法检测3组裸鼠移植瘤组织中细胞的凋亡水平。结果: (1)与正常对照组和空载体组相比较,干扰载体组裸鼠移植瘤的生长速率、成瘤大小、瘤体终重量和终体积明显降低(P<0.05)。(2)与正常对照组和空载体组相比,干扰载体组裸鼠移植瘤组织中N-cadherin和MMP-9的蛋白表达均下调(P<0.05),而E-cadherin的蛋白表达则无明显变化(P>0.05)。(3)与正常对照组(51.55±4.68)和空载体组(54.17±5.26)相比,干扰载体组(106.81±6.47)裸鼠移植瘤组织中凋亡的阳性细胞数明显增加(P<0.05)。结论: RNAi沉默 N-cadherin 表达可明显抑制EC9706细胞裸鼠体内移植瘤的生长,其作用机制可能是通过下调MMP-9的表达,降低细胞对细胞外基质的降解能力,进而降低EC9706细胞的体内侵袭力。RNAi沉默 N-cadherin 表达具有体内抑制食管鳞状细胞癌细胞生长的作用。N-cadherin可望成为抗食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子靶点。     

早期注射丹参酮ⅡA磺酸钠可抑制兔耳增生性瘢痕

背景：丹参酮ⅡA磺酸钠具有抗氧化、抑制纤维化等作用。 目的：观察丹参酮ⅡA磺酸钠早期局部注射对兔耳增生性瘢痕的影响。 方法：于兔耳腹侧面切除全层皮肤及软骨膜建立瘢痕模型,造模后28 d,分别在创面瘢痕内注射0.05,0.1,0.2 mg的丹参酮ⅡA磺酸钠或生理盐水,每周注射1次,共3周。 结果与结论：丹参酮ⅡA磺酸钠注射3周,兔耳瘢痕增生较轻,瘢痕厚度变薄;苏木精-伊红染色见瘢痕组织中胶原纤维减少,血管数目减少;Masson染色检测见瘢痕组织胶原纤维分布面积减少;电镜下瘢痕组织成纤维细胞数量减少,体积相对变小。说明早期注射丹参酮ⅡA磺酸钠对兔耳瘢痕增生有抑制作用。     

Delayed appearance of decorin in healing burn scars

AIMS: We have previously shown that hypertrophic scar tissue from burn patients contains abnormally high amounts of the proteoglycans versican and biglycan and reduced amounts of decorin, in comparison with normal dermis or mature scar. The lack of decorin may account for the poor organization of collagen fibrils in the nodular areas of these scars. Decorin has also been reported to neutralize the fibrogenic growth factor TGF-beta1. This study was conducted to monitor the time-course of expression of decorin in healing burn wounds by in-situ hybridization to determine whether its absence from hypertrophic scars could result from reduced synthesis. METHODS AND RESULTS: Scar tissue from 19 patients and normal dermis from six patients, was fixed in paraformaldehyde, embedded in paraffin and sectioned. Digoxigenin-labelled cRNA probes were prepared from a plasmid containing a 622-bp insert of human decorin cDNA and used for in-situ hybridization. Total numbers of connective tissue cells and cells positive for decorin mRNA were counted in 10 random fields in the upper (papillary), middle and lower (reticular) one-thirds of the dermis. In all regions the number and percentages of cells with decorin mRNA were low during the first 12 months after injury (eight samples), much higher between 12 and 36 months (seven samples) and low and similar to those in normal skin after 36 months (five samples). The differences between intermediate and early or late stage samples were statistically significant (one-way ANOVA). Immunohistochemistry showed little staining for decorin in early stage samples and much stronger staining in mid-stage. Late stage tissue showed intense staining for decorin, almost comparable to that in normal dermis. CONCLUSION: Expression of decorin in burn wounds is suppressed for about 12 months and then increases at a time when resolution of hypertrophic scarring is generally considered to occur.     

重组人内抑素对兔耳创面瘢痕组织血管内皮生长因子、转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的观察重组人内抑素(rh Endostatin)对兔耳创面瘢痕增生及血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β1(TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)表达的影响,探讨rh Endostatin抑制瘢痕增生的分子机制。方法健康新西兰大耳白兔20只,均分为正常对照组、模型组、生理盐水(NS)对照组、rh Endostatin(5 g/L)治疗组和醋酸曲安奈德(TA,40 g/L)对照组;除正常对照组外其余各组均进行增生性瘢痕动物模型的复制,在兔耳腹侧面制作1cm×1cm大小创面。术后第28天,rh Endostatin治疗组瘢痕皮内注射相应浓度rh Endostatin(100μl),NS对照组注射等量生理盐水,隔日1次,共6次;TA对照组瘢痕块内注入相应浓度曲安奈德(100μl),每周1次,共2次;模型组术后不接受处理。术后第47天摄片并收集瘢痕及正常皮肤标本,应用免疫组织化学方法检测VEGF、TGF-β1和b FGF的表达。结果形态学观察结果显示,术后第47天rh Endostatin治疗组瘢痕皮肤色泽变浅,变软变平,体积减小,与模型组和NS对照组比较有明显差异;免疫组织化学检测结果可见,与模型组和NS对照组相比,rh Endostatin治疗组VEGF和TGF-β1蛋白表达减少,b FGF表达增加,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论 rh Endostatin能有效抑制兔耳创面瘢痕增生,其机制可能与rh Endostatin影响VEGF、TGF-β1和b FGF蛋白的表达有关。     

Immunohistochemical localization of the proteoglycans decorin, biglycan and versican and transforming growth factor-β in human post-burn hypertrophic and mature scars

The distributions of the small proteoglycans, decorin and biglycan and the large proteoglycan, versican, in normal skin and post-burn hypertrophic and mature scars, were compared using monoclonal and polyclonal antibodies to the core proteins. Biglycan and verscan were virtually undetectable in normal dermis but readily seen in hypertrophic scars. Staining for decorin was strong throughout the dermis in normal skin but restricted to the deep dermis and a narrow zone under the epidermis in hypertrophic scar—areas which did not stain for versican. Decorin was absent or reduced in the nodules in these specimens. In mature post-burn scars, staining for all three proteoglycans demonstrated an intensity that was intermediate between that in normal dermis and that in the nodules of the hypertrophic scars. Transforming growth factor-β was present in the nodules of hypertrophic scars but the deep dermis of these specimens stained most intensely for this cytokine which was also found in the dermis of mature scars but was not detectable in normal dermis. The apparent co-distribution of decorin and transforming growth factor-β suggests that this proteoglycan may play an active role in the resolution of the scars. Changes in proteoglycan type and distribution could possibly account, at least in part, for the derangement of collagen and the altered physical properties of hypertrophic scar tissue.     

大鼠背部脊柱两侧全层皮肤圆形创面增生性瘢痕愈合过程中臭氧的作用**☆

背景：预防硬膜外瘢痕的形成,可减少腰椎手术失败综合征的发生。臭氧应用于腰椎间盘突出症的治疗已取得较好的临床效果。 目的：观察臭氧对大鼠伤口瘢痕愈合过程的影响。 方法：外科切口法制备大鼠背部脊柱两侧圆形全层皮肤创面增生性瘢痕模型,分为3组,纯氧组及臭氧组分别注射纯氧及30~40 mg/L臭氧,总量均为5 mL,空白组不注射任何药物,每周2次,4周后取瘢痕/肉芽组织标本,利用苏木精-伊红染色及免疫组化方法,对比观察各组标本瘢痕/肉芽组织外观及肿瘤坏死因子α、碱性成纤维细胞生长因子表达的变化。 结果与结论：与空白组及纯氧组相比,臭氧组愈后瘢痕面积较小,上皮生成较多,炎性细胞浸润较少,胶原纤维较纤细,且断裂较多;臭氧组肿瘤坏死因子α阳性细胞数较低(P < 0.01),碱性成纤维细胞生长因子阳性细胞数较高(P < 0.01)。提示臭氧通过其抗炎作用,减少炎性细胞浸润,并可通过抑制成纤维细胞及巨噬细胞释放的肿瘤坏死因子α以及提高碱性成纤维细胞生长因子的表达,减少胶原的过度合成,从而起到抑制肉芽组织炎症及瘢痕组织增生的作用。关键词：臭氧;瘢痕;伤口愈合;肿瘤坏死因子α;碱性成纤维细胞生长因子 缩略语注释：TNF-α: tumor necrosis fact-alpha,肿瘤坏死因子α;bFGF: basic fibroblast growth factor,碱性成纤维细胞生长因子 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.15.012     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景：蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。 目的：体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。 方法：体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。 结果与结论：蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为(15.2±2.0) μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达(P < 0.05)。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

重组人Ⅲ型胶原蛋白水凝胶对猪全层皮肤缺损创面修复的影响

目的观察重组人Ⅲ型胶原蛋白水凝胶用于治疗猪全层皮肤缺损创面，在创面愈合和血管新生，新生真皮胶原排列状态和胶原比例等方面的影响。 方法将重组人Ⅲ型胶原蛋白粉末与海藻酸钠粉末以质量比10∶1混合，溶于无菌磷酸盐缓冲液中，制备成胶原蛋白含量为10%的溶液，使用时以10% Ca^2＋溶液交联成凝胶状。以巴马小型猪作为实验动物制备动物模型，在每头猪背部正中线两侧旁开2 cm分别用手术刀制备3个边长5 cm深达肌肉筋膜的正方形全层皮肤缺损创面，采用同体自身对照，实验组用重组人Ⅲ型胶原蛋白水凝胶治疗，水凝胶外层覆盖无菌硅胶膜保湿；阳性对照组用可吸收性敷料治疗；阴性对照组仅用无菌硅胶膜覆盖。术后7、14、21、90 d，进行创面大体观察，并取材行苏木精-伊红染色，光学显微镜下观察创面修复情况、炎症反应，免疫组织化学染色法检测创面CD31的表达并计数新生血管数目，天狼猩红饱和苦味酸染色偏振光观察胶原纤维排列、Ⅲ型胶原蛋白比例。实验数据比较采用单因素方差分析、SNK-q检验或Kruskal Wallis H检验。 结果实验组创面肉芽组织平整，颜色鲜红，柔软湿润。光学显微镜下见实验组较阴性对照组组织炎症反应轻微，创面修复早期肉芽组织生长速度快。CD31免疫组织化学染色结果显示，术后7、14、21 d，实验组新生毛细血管数分别为(18.8±2.7)、(32.0±4.4)、(42.8±4.5)个/ hpf，而阴性对照组仅分别为(12.0±3.0)、(16.6±2.3)、(12.6±4.1)个/ hpf，各个时间点实验组新生毛细血管数均高于阴性对照组，差异均有统计学意义(P值均小于0.05)。术后14、21、90 d创面新生真皮组织天狼猩红饱和苦味酸染色结果显示，实验组较阴性对照组胶原纤维排列规整，与阳性对照组相似，而Ⅲ型胶原蛋白比例较阴性和阳性对照组均升高。 结论重组人Ⅲ型胶原蛋白水凝胶可促进全层创面愈合和血管新生，促进新生真皮组织胶原纤维有序排列，增加Ⅲ型胶原在新生真皮胶原中所占比例，从而改善创面愈合质量，并有望减轻创面愈合后的瘢痕形成。