青蒿琥酯对骨髓瘤 RPMI 8226 细胞增殖、凋亡及对 Survivin、Caspase-3、Caspase-7 的影响

目的 探讨青蒿琥酯对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI8226 的增殖、凋亡及对凋亡相关基因 survivin 及 caspase-3、caspase-7 表达的影响。方法 采用 MTT 法检测青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,流式细胞仪分析细胞凋亡率,荧光定量 PCR (FQ-PCR) 检测 survivin 和 caspase-3、caspase-7 mRNA 表达水平变化,Western blotting 检验 Survivin蛋白表达变化,应用 Caspase-3/7 试剂盒检测 Caspase-3、Caspase-7 蛋白活性。结果 青蒿琥酯质量浓度从 2.5 μg/mL 增加至 50 μg/mL 时,青蒿琥酯体外对 RPMI8226 细胞的抑制率由 33.55% 增加到 74.71%。细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,50 μg/mL 青蒿琥酯诱导 RPMI8226 细胞最大凋亡率达 (68.1±5.9)%。不同质量浓度青蒿琥酯干预 48 h 后 Survivin mRNA 及蛋白表达水平明显降低,Caspase-3、Caspase-7 mRNA 及蛋白活性明显升高 (P＜0.01)。结论 青蒿琥酯对 RPMI8226 细胞有生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与增强 Caspase-3、Caspase-7 活性,抑制抗凋亡分子 survivin 表达有关。     

青蒿琥酯抗人食管癌作用与调控CDC25A表达的关系

目的 观察青蒿琥酯(artesunate, Art)对人食管癌Eca109细胞株及裸鼠移植瘤的抑瘤作用,探讨Art诱导肿瘤细胞周期阻滞是否与CDC25A表达有关.方法 MTT法测定Art对Eca109细胞及正常人外周血单个核细胞(hPBMC)增殖的影响;流式细胞术(FCM)测定肿瘤细胞的周期变化;观察Art对裸鼠人食管癌移植瘤的抑制情况; 采用RT-PCR及Western blotting方法检测CDC25A mRNA和蛋白表达情况.结果 Art能显著抑制Eca109细胞的增殖, IC50为 (68.80±0.76)μmol/L,而在刀豆蛋白A(concanavalin A, Con A)刺激下hPBMC的增殖则没有明显抑制作用.低浓度Art可将细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞显著减少,当浓度达到100 μmol/L时,Art可将细胞阻滞于G2/M期.Art对裸鼠肿瘤的体积抑瘤率最高可达76.4%,质量抑瘤率可达33.2%.Art可显著抑制Eca109细胞CDC25A mRNA及蛋白表达.结论 Art可抑制食管癌细胞及裸鼠移植瘤的生长,且无明显毒副作用,通过下调CDC25A的表达而调控细胞周期,是Art发挥抑瘤作用的重要机制.     

青蒿琥酯对大鼠肾小球系膜细胞细胞周期的影响

目的 观察青蒿琥酯（An）对大鼠肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells,GMC）细胞周期的影响。方法 用不同浓度的青蒿琥酯刺激多糖诱导增殖的大鼠肾小球系膜细胞,流式细胞仪检测其细胞周期的变化。结果 青蒿琥酯使细胞有丝分裂被阻滞于G0期,S期细胞比例下降,G0期细胞比例增加。结论 青蒿琥酯能够抑制脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖,这种作用可能是通过其抑制细胞分裂、复制实现的。     

青蒿琥酯诱导人前列腺癌PC-3细胞分化及周期阻滞

目的：探讨青蒿琥酯（artesunate，ART）对人前列腺癌细胞株PC-3分化及周期阻滞的影响。方法：培养人前列腺癌PC-3细胞至对数生长期，ART处理PC-3细胞48h后，流式细胞术（flow cytometry．FCM）检测PC-3细胞的细胞周期分布状况，酶联免疫吸附测定法检测细胞培养上清液前列腺特异性抗原（prostate specific antigen，PSA）含量．透射电镜观察细胞形态学变化。结果：与空白对照组比较，ART高剂量组PC-3细胞G0／G1＋S期比率减少明显（P〈0．05）。ART高剂量组和中剂量组PC-3细胞G2／M比例高于顺铂组和空白对照组（P〈0．05）；ART各剂量组细胞上清液中PSA水平均低于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。透射电镜观察显示细胞胞浆内出现空泡，细胞极性增强，细胞核靠向细胞一侧，对侧的微绒毛明显增多。结论：青蒿琥酯有诱导人前列腺癌PC-3细胞周期阻滞的作用，并能一定程度地诱导前列腺癌PC-3细胞分化。     

青蒿琥酯联合来那度胺对多发性骨髓瘤耐药细胞株的作用

目的 探讨青蒿琥酯联合来那度胺对多发性骨髓瘤耐药(MM.1R)细胞株增殖的影响并分析其作用机制.方法 实验设4组,空白对照组只加RPMI 1640培养液、来那度胺组加20μmol/L来那度胺、青蒿琥酯组加25μg/mL青蒿琥酯、来那度胺联合青蒿琥酯组加20μmol/L来那度胺浓度和25μg/mL青蒿琥酯浓度,终体积为200μL,分别对MM.1R细胞株处理24和48 h,MTT法检测细胞增殖;Western blot检测来那度胺联合青蒿琥酯处理24和48 h,MM.1R细胞株NF-κB P65蛋白,Bcl-2家族抗凋亡蛋白Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad,多药耐药基因MDR1蛋白表达产物P-gp的表达水平.结果 来那度胺、青蒿琥酯、来那度胺联合青蒿琥酯处理24和48 h,各组抑制率分别为15.16%、28.28%、45.98%和17.19%、34.53%、65.16%,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),来那度胺联合青蒿琥酯组抑制率高于单药处理组(P<0.05),两药联合有良好的协同效应,两药联合处理48 h抑制率高于24 h,抑制效应呈时间依赖性;来那度胺联合青蒿琥酯处理24和48 h,MM.1R细胞株P-gp、NF-κB P65、Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad表达量均低于对照组(P<0.05),两药联合处理48 h,MM.1R细胞株NF-κB P65、Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad蛋白表达量低于24 h(P<0.05),表现出时间依赖性.结论 青蒿琥酯、来那度胺可抑制耐药MM细胞增殖,两药联合有协同效应,时间依赖性下调NF-κB P65蛋白、Bcl-2家族抗凋亡蛋白Bcl-xl、Mcl-1、p-Bad的表达,降低P-gp表达水平可能为其逆转肿瘤细胞耐药的作用机制.     

基因芯片技术分析青蒿琥酯抑癌作用机制

目的利用基因芯片检测青蒿琥酯作用于K562细胞后的基因表达情况,从基因水平上探讨青蒿琥酯抑制K562细胞增殖的作用机制。方法K562细胞经不同浓度青蒿琥酯处理24h,倒置光显微镜和荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞周期变化。提取总RNA,逆转录生成cDNA,cDNA与基因芯片杂交,扫描仪检测杂交结果。结果倒置光显微镜观察到青蒿琥酯处理的K562:细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,漂浮细胞增多。荧光显微镜观察到青蒿琥酯处理的K562:细胞染色质高度浓缩、边缘化,凝聚成明亮的团块,即凋亡小体。流式细胞仪检测青蒿琥酯处理K562细胞G2期细胞的比例明显增加。扫描信号,分析数据显示10条基因表达有差异,p21、chk1表达上调,cyclinB1、cyclinE1、E2F1、DNA-PK、hTERT、bcl-2、jnk、VEGF表达下调。结论青蒿琥酯可以抑制K562细胞增殖,作用机制与改变细胞周期某些调控物质的基因表达、诱导K562细胞凋亡有关。     

青蒿琥酯对K562细胞bcl-2基因表达的影响

【目的】研究青蒿琥酯诱导K562细胞凋亡过程中bcl-2表达的改变。【方法】培养K562细胞,倒置光显微镜和荧光显微镜观察青蒿琥酯处理的K562细胞形态,RT-PCR检测bcl-2的表达。【结果】K562细胞经青蒿琥酯处理48h后,倒置光显微镜：细胞出现不同程度的皱缩,核分裂相减少,细胞密度下降,细胞出现发泡现象,细胞内可见多个折光性较强的圆形小泡样结构。荧光显微镜：染色质高度浓缩、边缘化,凝集成明亮的团块。RT-PCR显示青蒿琥酯处理的K562细胞的bcl-2的表达下调。【结论】青蒿琥酯抑制K562细胞生长的机制可能与bcl-2基因的表达下调有关。     

青蒿琥酯对HeLa细胞生长的抑制作用

目的 研究青蒿琥酯对HeLa细胞生长抑制作用。方法 MTT法测定青蒿琥酯对HeLa细胞增殖抑制；用透射电镜观察青蒿琥酯对肿瘤细胞形态学影响；用流式细胞仪检测肿瘤细胞周期变化和细胞凋亡率；用免疫组化法观察肿瘤细胞端粒酶活性。结果 MTT实验表明青蒿琥酯作用HeLa细胞72h后，细胞存活率明显下降，而且随着药物浓度的增加，抑制作用增强；流式细胞仪检测青蒿琥酯可引起HeLa细胞阻滞于G1期，细胞凋亡率在一定范围内与药物浓度呈正比；透射电镜观察细胞超微结构呈现典型的凋亡特征；免疫组化检测细胞端粒酶活性降低。结论 青蒿琥酯可抑制HeLa细胞生长，诱导细胞发生凋亡，可降低细胞端粒酶活性。     

青蒿琥酯诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡

目的研究青蒿琥酯(artesunate,ART)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡以及细胞内游离Ca2 浓度([Ca2 ]i)的影响。方法ART处理PC-3细胞后,透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,激光共聚焦扫描显微镜检测PC-3细胞[Ca2 ]i变化。结果ART诱导PC-3细胞发生典型的凋亡形态学变化和G2/M期阻滞;ART100,10,1μmol/L组及阳性对照组的凋亡率分别是8.9%,10.7%,21.0%,24.6%,均高于阴性对照组(P<0.05)。ART作用PC-3细胞后,[Ca2 ]i在15~30min内显著升高,0.5~1h维持在较高水平,4~24h后降到阴性对照组水平。结论青蒿琥酯有诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡和周期阻滞的作用,上调[Ca2 ]可能在其抗肿瘤机制中起重要作用。     

酪氨酸激酶抑制剂抑制骨髓瘤细胞的增殖及黏附

目的 观察酪氨酸激酶抑制剂ST1571对骨髓瘤细胞系RPM18226细胞增殖、黏附以及黏附诱导耐药的影响。方法该试验采用MTT法检测ST1571对骨髓瘤细胞增殖的影响；流式细胞仪检测对细胞周期的影响；结晶紫染色法分析RPM18226细胞与纤连蛋白（fibronectin，FN）的黏附率；MTT法检测ST1571对瘤细胞耐药的影响；结果ST1571明显抑制KPM18226细胞的增殖，24、48和72hIC50值分别为（34．52&#177;2．31）、（28．46&#177;1．58）和（25．74&#177;2．44）μmol／L。25μmol／L ST1571处理24h，G1期细胞由55．8％增加至72．4‰S期细胞由34．8％减至15．6％。KPM18226细胞与FN黏附1、6和12h，其黏附率分别为（43．71％&#177;2．18％）、（55．63％&#177;1．56％）和（63．42％&#177;2．46％）；非抑制浓度ST1571（20μmol／L）处理1、6和12h后黏附率分别降为（15．12&#177;1．04）％、（17．58&#177;1．32）％和（17．24&#177;1．59）％；组间差异有显著性（P〈0．05）；阿霉毒作用后，FN黏附组细胞IC50值[（1．46&#177;O．04）μmol／L]显著高于BSA组[（0．78&#177;0．03）μmol／L]（P〈0．05）；FN联合ST1571组IC50值[（0．81&#177;0．05）μmol／L]与BSA联合ST1571组[（0．74&#177;0．02）μmol／L]相比差异无显著性（P〉0．05），但却低于FN组（P〈0．05）。结论ST1571能抑制KPM18226细胞的增殖、并可降低KPM18226细胞与FN的黏附率及逆转黏附介导的阿霉素耐药。     

应用DNA微阵列技术研究三氧化二砷对RPMI 8226细胞的作用

目的:应用cDNA芯片技术研究三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226的作用。方法:采用包含4096个人类基因的cDNA表达谱芯片,检测三氧化二砷作用于RPMI8226细胞24h前后其基因表达的变化。结果:在mRNA水平上,273个基因的表达发生了明显改变,其中121个基因表达上调,152个基因表达下调。结论:三氧化二砷可引起RPMI8226细胞株一系列基因表达的改变。ZFYVE16、TXNIP及ALK1基因可能与RPMI8226细胞的分化与凋亡密切相关。     

Bcl-1 Rearrangement and Cyclin D1 Protein Expression in Multiple Myeloma Precursor Cells

Nonrandomized chromosomal translocations of-- 1ten take place in multiple myeloma (MM) patientsand many of them involve immunoglobulin heavychain gene flgH) at 14q32. 3 and BCLI gene at11q13, leading to the rearrangement of Bcl-l/lgHgenes and the overexpression of cell cyclin DI protein[1'2]. In this study, the MM precursor cells werestudied in the respects of cyclin DI protein overexpression and BCL--l gene rearrangement to investigate the role of cyclin DI protein in the pathogenesiso…     

尿多酸肽(CDA-2)诱导多发性骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡的实验研究

[目的]观察尿多酸肽(CDA-2)对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226抑制增殖和凋亡作用。[方法]应用MTT法,检测CDA-2对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响。通过Hochest33258染色、流式细胞仪(AnnexinV和PI双染色)检测细胞凋亡。[结果]CDA-2明显抑制RPM18226细胞的增殖。CDA-2作用RPM18226细胞增殖24h的半数抑制浓度(IC50)分别为1.64mg/g。采用Hochest33258染色,荧光显微镜下观察CDA-2以2mg/g及4mg/g终浓度作用于RPM1822624h后细胞形态改变,可见明显的凋亡小体出现。AnnexinV-PI双标记法流式细胞仪分析结果显示,RPMI8226细胞2mg/gCDA-2作用6、12、24h后,早期凋亡细胞百分数分别为5.43%、12.02%、29.07%,明显高于空白对照组4.88%。[结论]CDA-2对MM细胞株RP-MI8226有生长抑制作用,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用。     

冬凌草甲素协同马法兰对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖和凋亡的影响

目的: 观察冬凌草甲素（oridonin）和马法兰( melphalan)单药及联合用药对人骨髓瘤RPMI-8226细胞生长、凋亡和细胞周期的影响及二者的协同作用,阐明药物联合应用对骨髓瘤细胞的毒性增强作用。方法: 本实验共设4个RPMI-8226细胞处理组,即空白对照组（未加任何药物）、冬凌草甲素（10 μmol/L）组、马法兰（30 μmol/L）组和联合（冬凌草甲素 10 μmol/L + 马法兰 30 μmol/L）组。MTT法检测各用药组作用不同时间后RPMI-8226细胞的增殖抑制率,采用两药相互作用指数（CDI）评价联合用药性质;Annexin-Ⅴ/PI双染检测细胞凋亡率;流式细胞术检测药物作用前后细胞周期分布。结果:与空白对照组比较,冬凌草甲素组、马法兰组和联合组RPMI-8226细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01),均具有时间-效应依赖性,联合组各时间点细胞增殖抑制率明显高于单药组(P<0.01)。各时间点CDI值均小于1,即冬凌草甲素可协同提高马法兰的细胞毒作用。冬凌草甲素和马法兰单独处理RPMI-8226细胞36 h,细胞凋亡率分别为15.01%±0.47％ 和20.03%±1.30％,而联合组细胞凋亡率为43.06%±1.96％,与单药组比较显著升高(P<0.01)。流式细胞术DNA含量分析,各药物组RPMI-8226细胞主要阻滞于G0/G1期,S期细胞比例明显减少,除冬凌草甲素组S期细胞比例外,其余药物组各期细胞比例与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),联合组与单药组比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论: 冬凌草甲素联合马法兰通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制骨髓瘤细胞的增殖,其作用具有协同性。     

雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞周期及P21wap1/cip1和P27kip1表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇对多发性骨髓瘤细胞 RPMI 8226 增殖和周期的影响,探讨细胞周期调控蛋白 P21wap1/cip1 和 P27kip1 在其中的作用和意义。方法 采用 MTT 比色法和流式细胞术检测雷公藤内酯醇对 RPMI 8226 细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,半定量 RT-PCR 和 Western blotting 法检测 RPMI 8226 细胞中 P21wap1/cip1、P27kip1 mRNA 和蛋白表达。结果 雷公藤内酯醇能明显抑制 RPMI 8226 细胞增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,雷公藤内酯醇作用 48 h 的 IC₅₀ 值为 (71.18±2.01) nmol/L。雷公藤内酯醇还可以诱导 RPMI 8226 细胞周期阻滞于 G₀/G₁ 期,随着雷公藤内酯醇浓度的增加,G₀/G₁ 期细胞逐渐增多,S 期细胞逐渐减少。经雷公藤内酯醇干预后周期调节蛋白 P21wap1/cip1 和 P27kip1 的 mRNA 和蛋白表达水平明显上调。结论 雷公藤内酯醇可以抑制 RPMI 8226 细胞增殖,该抑制作用是通过调控 P21wap1/cip1 和 P27kip1 的表达,从而阻止细胞周期 G₀/G₁ 期过渡实现的。     

没食子儿茶素没食子酸酯诱导人口腔上皮癌细胞G1期阻滞

目的 探讨没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人口腔上皮癌KB细胞株增殖的影响及其分子机制.方法 采用MTT法测定EGCG对KB细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞术分析经EGCG处理48 h后KB细胞周期改变;通过RT-PCR和免疫印迹分别检测Cyclin A、Cyclin D1和Cyclin E表达改变.结果 EGCG对KB细胞增殖具有抑制作用,EGCG(25,50,100,200,400,800μmol/L)作用KB细胞48 h后,细胞活性分别是(85.4±2.4)%、(80.4±2.8)%、(51.5±4.5)%、(30.2±1.9)%、(25.3±1.5)%和(20.0±1.1)%,与对照组(100.0±2.2)%比较具有显著性差异(P<0.05);24 hMTT结果也显示相同趋势,呈浓度依赖;EGCG(100μmol/L)处理后G1期细胞百分数为(73.5±4.4)%,与对照组(47.3±3.5)%比较具有显著性差异(P<0.05);EGCG下调Cyclin A和Cyclin E表达.结论 EGCG通过诱导G1期阻滞,抑制KB细胞增殖,其诱导细胞周期阻滞作用与下调Cycline E表达相关.

Abstract：

Objective To explore the effects of epigallocatechin-3-gallate(EGCG)on the proliferation ofhuman oral epithelial cancer eell line KB cells and the molecular mechanisms.Method KB cells were treated with various concentrations of EGCG for 24 or 48 h.MTT assay was used to test the cell viability.The changes of cell cycle in KB cells treated with EGCG for 48 h were analyzed using flow cytometry.The expressions of cyclin A,cyclin D1 and cyclin E were detected by RT-PCR and Western blotting.Reset The viability of KB cells treated with various concentrations of EGCG(25,50,100,200,400,and 800 μmol/L)for 48 h were decreased to(85.4±2.4)%,(80.4±2.8)%,(51.5±4.5)%,(30.2±1.9)%,(25.3±1.5)%,(20.0±1.1)%,respectively,showing significant difference from that of the control group[(100.0±2.2)%,P<0.05).EGCG decreased the viabilities of KB cells in a dose.dependent manner. Flow cytometry demonstrated that treatment with EGCG significantly increased the cell percentage in sub-G1 phase,which was(73.5±4.4)%after a 48-h EGCG treatment,significantly different from that in the control group[(47.3±3.5)%,P<0.05),EGCG-induced G1 phase arrest was correlated to the down-regulation of cyclin A and cyclin E.Conclusion EGCG inhibits the proliferation of KB cells by inducing G1 phase arrest,which involves the downregulation of cyclin E.     

白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞的体外抗癌作用

目的研究白藜芦醇对多发性骨髓瘤细胞体外抗癌作用,探讨其抗癌作用的分子机制。方法用MTT法检测白藜芦醇对骨髓瘤细胞系RPMI-8226和KM3增殖的影响;Annexin-V/PI双标流式细胞术检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞凋亡的影响;PI单标流式细胞术测定白藜芦醇对RPMI-8226、KM3细胞DNA分布的影响;Western-blotting方法检测白藜芦醇对RPMI-8226细胞Bcl-2、Bax、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2蛋白表达的影响。结果白藜芦醇对RPMI-8226和KM3细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制增殖作用呈时效和量效关系。25～100μmol/L白藜芦醇作用24h可诱导RPMI-8226细胞凋亡,100μmol/L作用24h时KM3细胞凋亡率达(26.5±2.7)%。白藜芦醇处理组RPMI-8226及KM3细胞周期均发生变化,细胞周期被阻滞于S期和G0/G1期。白藜芦醇以时间依赖方式下调抗凋亡蛋白Bcl-2、XIAP、c-IAP-1、c-IAP-2的表达,并可上调促凋亡蛋白Bax的表达,但白藜芦醇对各蛋白作用的动力学不同。结论白藜芦醇可通过调控细胞周期进程、诱导细胞凋亡而有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与调节Bcl-2和IAP家族蛋白的表达有关。     

大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞M期阻滞及其机制研究

目的:探讨大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞M期阻滞作用及其机制。方法:以MTT比色法检测人胃癌细胞系SGC-7901细胞的增殖抑制率;采用免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜检测等技术,比较药物处理前后M期细胞占总细胞数百分比的变化,观察细胞微管结构及细胞周期蛋白B1(cyclin B1)在胞内分布的变化,并做荧光定量分析cyclin B1在用药前后量的改变。结果:大蒜素抑制SGC-7901细胞的24h IC50为7.2μg/ml,72h IC50为20μg/ml;经大蒜素处理后,M期细胞占总细胞数的30.61%,明显高于对照组的4.69%(P<0.05)。经大蒜素处理后细胞变小变圆,微管结构消失,胞质模糊;而对照组细胞形态正常,微管结构清晰完整。经大蒜素处理后,胞质中cyclin B1表达升高,并向核内聚集,cyclin B1荧光定量明显高于对照组(P<0.01)。结论:大蒜素可以促进微管解聚,可以提高促成熟因子(MPF)的重要成份cyclin B1在细胞内的表达并促进其向核内转移,使细胞周期阻滞于M期。大蒜素可以作为一种新的作用于M期的抗肿瘤药物应用于临床。