HPLC法测定冬虫夏草中核苷类成分的含量

目的建立用HPLC法测定不同方法(熏干、新鲜和阴干)处理冬虫夏草样品中核苷类成分(腺苷、尿苷、肌苷、鸟苷和胸苷)含量的方法。方法样品用纯化水超声提取,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,柱温:30℃,流速:1.0mL·min-1。结果虫草中含有的5种核苷标准曲线的相关系数均在0.999 0以上,精密度检测RSD值为0.31%~1.95%(n=5),重复性检测RSD值为0.50%~2.56%(n=5),回收率在99.46%~100.11%之间。结论该方法灵敏、简便、快速、准确、重复性好,能有效测定虫草中核苷类成分的含量,可为评价虫草的质量提供依据。     

RP-HPLC法测定不同厂家阿胶中核苷类化合物的含量

目的:建立同时测定阿胶产品中多个核苷类化合物含量的方法,并评价相关阿胶产品的质量均一性。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Zorbax SB-C18柱,流动相为1mmol.L-1乙酸铵水溶液(A)-甲醇(B)(梯度洗脱),检测波长为260nm,流速为1mL.min-1,进样量为1μL,柱温为30℃。结果:胞嘧啶、胞苷、尿嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、鸟苷、腺苷检测浓度分别在一定的范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(均r=0.9999);平均回收率在94.3%～103.8%之间,RSD在0.2%～3.2%(n=3)之间。自制10批阿胶样品的核苷类化合物总含量的RSD为9.1%,而所有检测阿胶样品中核苷类化合物总含量的RSD则高达42.9%。结论:不同厂家阿胶产品质量可能存在较大的差异性;该方法可为阿胶产品的质量控制提供参考。     

不同产地人工蛹虫草子实体及冬虫夏草中核苷类成分的比较

目的 测定不同产地人工蛹虫草子实体与天然冬虫夏草中核苷类成分的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据. 方法 以尿苷、腺苷、虫草素为主要评价指标,采用高效液相色谱法测定9个厂家11批人工蛹虫草样品和4种来源天然冬虫夏草中核苷类成分的含量. 结果 不同产地人工蛹虫草的核苷含量为0.265%～0.870%,冬虫夏草核苷含量为0.168%～0.250%,其中虫草素含量变化较大,而天然冬虫夏草中几乎不含或含有少量虫草素. 结论 产地不同,人工蛹虫草中核苷类成分含量不同,但明显高于天然冬虫夏草中核苷类成分含量,其中腺苷、尿苷含量较为稳定,可为人工蛹虫草的合理开发利用和质量评价提供依据.     

HPLC法同时测定不同产地半夏中7种核苷类成分的含量

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定不同产地半夏中鸟苷、胸腺嘧啶核苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶7种核苷类成分含量的方法。方法 采用C₁₈色谱柱(赛默飞,5μm, 4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈(A)-0.05%磷酸溶液(B),梯度洗脱;流速1.0 ml/min;检测波长250 nm;柱温30℃;进样量10μl。结果 半夏中7种核苷类成分的分离度较好,鸟苷、胸腺嘧啶核苷、肌苷、尿苷、腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶的线性方程分别为Y_鸟苷=11.851X+3.562 1、Y_{胸腺嘧啶核苷}=9.422X+0.191 5、Y_肌苷=11.619X+2.816 0、Y_尿苷=11.818X-1.405 1、Y_腺嘌呤=14.849X+0.510 9、Y_腺苷=16.471X+1.906 3、Y_尿嘧啶=14.758X+5.562 5;平均加样回收率分别为99.41%、98.70%、98.84%、98.37%、97.83...     

RP-HPLC法测定不同产地荜澄茄中芦丁的含量

目的建立测定不同产地荜澄茄中芦丁含量的RP-HPLC法。方法采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-体积分数为0.05%的磷酸(体积比为38∶62)为流动相,流速为1 mL.min-1,检测波长为254 nm。结果芦丁的质量浓度在1.664~62.400 mg.L-1(r=0.999 4)内与色谱峰面积呈良好线性关系,平均回收率为101.2%(RSD=2.3%)。结论该方法可作为该药材质量控制的一项指标。     

天然与发酵培养冬虫夏草中核苷类成分的含量及其变化

目的 比较天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量,并对其变化进行考察。方法 采用高效毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中核苷类成分的含量;考察湿热对冬虫夏草中核苷类成分含量的影响。结果 人工冬虫夏草的核苷含量明显高于天然冬虫夏草;新采集的天然冬虫夏草中核苷类物质含量极低,而采集日久者核苷类成分含量却较高;湿热可明显增加天然冬虫夏草中核苷类物质的含量,但对人工冬虫夏草中核苷类成分的含量无明显影响。结论 天然和人工冬虫夏草中核苷类成分存在一定差异,天然冬虫夏草中核苷类物质可能主要来源于大分子核苷(酸)的降解,腺苷在天然冬虫夏草质量控制中的应用价值尚值得进一步研究。     

RP-HPLC法测定不同产地黄芩中5种黄酮苷元成分的含量

目的:建立测定不同产地黄芩中5种黄酮苷元成分含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Extend-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为276 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为35℃。结果:去甲汉黄芩素、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A的进样量分别在0.018 0⁰.108 0、0.378 00.108 0、0.378 0².268 0、0.094 52.268 0、0.094 5⁰.567 0、0.022 50.567 0、0.022 5⁰.135 0、0.035 40.135 0、0.035 4⁰.212 4μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 9、0.999 5、0.999 6、0.999 5、0.999 5);精密度、重复性、稳定性试验的RSD<3%;加样回收率分别为98.72%(RSD=2.5%,n=6)、101.80%(RSD=2.0%,n=6)、99.25%(RSD=2.3%,n=6)、98.71%(RSD=1.5%,n=6)、99.05%(RSD=1.2%,n=6)。结论:该方法操作简便、快速,结果准确,可用于黄芩中黄酮苷元成分的含量测定。     

不同产地黄芩中黄芩苷含量的RP-HPLC法测定方法分析

目的：对不同产地黄芩中黄芩苷含量测定方法进行分析探讨,为今后的中药有效成分研究工作提供可靠的参考依据。方法采取反相高效液相色谱法（RP-HPLC）对黄芩中黄芩苷含量进行测定,选用Eclipse XDB-C18色谱柱,流动相配比为甲醇-体积分数为0.4%的磷酸,检测波长为280 nm。结果不同产地黄芩中黄芩苷的含量存在较大的差异（P〈0.05）。结论经反相高效液相色谱法对黄芩中黄芩苷含量进行检测具有明显优势。     

HPLC法同时测定人工蛹虫草不同部位中5种核苷类成分的含量

目的:建立同时测定人工蛹虫草不同部位中5种核苷类成分含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为InertSustain C18,流动相为甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为0.6 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为30℃。结果:尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素检测进样量线性范围分别为0.568~3.408μg(r=0.999 9)、0.284~1.704μg(r=0.999 9)、0.264~1.584μg(r=0.999 9)、0.232~1.392μg(r=0.999 9)、1.672~10.032μg(r=0.999 8);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率分别为98.2%~103.9%(RSD=1.97%,n=9)、96.2%~101.6%(RSD=1.76%,n=9)、96.7%~102.0%(RSD=1.94%,n=9)、95.1%~99.4%(RSD=1.43%,n=9)和95.6%~101.3%(RSD=1.82%,n=9)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于人工蛹虫草中5种核苷类成分含量的同时测定,蛹虫草不同部位中所含核苷类成分含量不同。     

反相高效液相色谱法同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌苷含量方法的研究

目的建立同时测定冬虫夏草中腺苷、虫草素、肌苷的HPLC方法。方法采用RP-HPLC法,色谱柱：Agilent C18柱（250 nm×4.6 mm,5μm）,甲醇与水梯度洗脱,柱温：30℃,流速：1.0 mL.min-1,检测波长：260 nm。结果腺苷进样量在0.200 8~1.004μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2 876X＋0.458 8,r=0.998 7,平均加样回收率为100.5%,RSD为2.33%;虫草素进样量在0.202 2~1.011μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2 018X＋8.726,r=0.999 2,平均加样回收率为99.3%,RSD为2.03%;肌苷进样量在0.201 4~1.007μg与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=5 845X-5.685,r=0.999 4,平均加样回收率为100.2%,RSD为1.44%。结论本方法简便、准确,重复性好,可用于同时检测冬虫夏草中的腺苷、虫草素及肌苷的含量测定。     

双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物的含量

目的:建立以双波长薄层扫描法测定虫草类制剂中核苷类化合物含量的方法。方法:采用以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板,以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-水-氨水(8∶2∶6∶0.5∶0.12)为展开剂,双波长反射法锯齿扫描,测定波长为254nm,参比波长为300nm。结果:腺苷、尿嘧啶、尿苷的点样量分别在11.16～58.03μg(r=0.998 5)、1.04～6.24μg(r=0.991 5)、0.8～4.8μg(r=0.991 2)范围内与各自斑点面积积分值呈良好线性关系;三者的平均回收率分别为95.559%、96.366%、95.270%,RSD分别为0.74%(n=6)、0.73%(n=6)、0.98%(n=6)。结论:本方法简便、准确、重现性好,可用于虫草类制剂的质量控制。     

RP-HPLC法测定北虫草发酵培养物中虫草素的含量

目的:建立测定北虫草发酵培养物中虫草素含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为DIAMONSIL-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-甲醇(5∶90∶5),流速为0.8mL·min-1,柱温为40℃,检测波长为259nm。结果:虫草素检测浓度在2.56～51.20μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9998);平均回收率为98.35%,RSD=2.71%(n=6)。结论:本方法灵敏、快速、准确,适用于北虫草发酵培养物中虫草素的检测。     

GC-MS法分析青海省不同产地冬虫夏草中的脂肪酸

目的 分析比较青海省4个地区7个不同产地的11批冬虫夏草中的脂肪酸类成分.方法 采用一步皂化甲酯化法衍生冬虫夏草中的脂肪酸类成分,GC-MS法和对照品对照定性、定量分析脂肪酸的组成和含量.结果 青海省产的冬虫夏草中主要含有C14～C20的13种脂肪酸,其总量为67.376～148.494 mg·g-1;其中,棕榈酸、油酸、亚油酸等3种脂肪酸的含量较高,其总含量占13种脂肪酸总量的92.74％～96.23％;同一样品中,不饱和脂肪酸与饱和脂肪酸的比例为3.08 ～7.71;C18和C16的脂肪酸种类最多、含量最高,C18/C16为3.05～8.18;C18脂肪酸中C18∶1/C18∶2为1.10 ～2.91.结论 青海省不同产地的冬虫夏草样品中13种脂肪酸的组成差异较小,但脂肪酸的含量和比例差异较大.     

毛细管电泳法测定冬虫夏草中核苷类的含量

目的 :探讨毛细管电泳法测定天然和人工冬虫夏草中腺苷、鸟苷和尿苷等核苷含量的可行性。方法 :采用BeckmanP ACESystem 5 0 10高效毛细管电泳仪 ,Beckman无涂层毛细管 (5 7cm× 75 μm ,有效长度 5 0cm) ,自动压力 (5 86kPa)进样6s ,检测波长 2 5 4nm ,电压 2 0kV ,温度 2 0℃ ,运行缓冲液为 0 2mol·L- 1 硼酸 (用 5mol·L- 1 氢氧化钠溶液调pH 8 5 )。进样前 ,毛细管分别以 1mol·L- 1 氢氧化钠溶液和运行缓冲液冲洗 5min。结果 :该法平均回收率腺苷为 97 0 % ,鸟苷为98 4% ,尿苷为 97 1% ;RSD分别为 0 72 % ,0 6 7% ,0 6 2 % (n =6 )。结论 :该法快速简便 ,灵敏度高 ,重现性好。     

发酵虫草菌粉中甘露醇含量的比色法测定

目的对比研究发酵虫草菌粉中甘露醇的提取和后处理方法,建立甘露醇含量的比色测定法。方法采用超声提取、高速离心分离进行样品预处理,比色法测定发酵虫草菌粉中甘露醇的含量。结果甘露醇的线性范围为20~90μg/mL,加样回收率为102.6%,RSD为1.34%,重复性实验的RSD为0.44%,供试品溶液在24 h内稳定。2001年生产的发酵虫草菌粉中甘露醇含量的平均值比前2年约高2%,含量变化范围比前两年稍小,3年内生产的各批次甘露醇含量波动均在10%左右,发酵虫草菌粉质量较为稳定。结论用超声离心比色法测定甘露醇含量,简捷快速,重现性好,回收率高,可以用于发酵虫草菌粉的质量控制。     

Simultaneous separation and determination of active components in Cordyceps sinensis and Cordyceps militarris by LC/ESI-MS

A simple and rapid isocratic LC/MS coupled with electrospray ionization (ESI) method for simultaneous separation and determination of adenine, hypoxanthine, adenosine and cordycepin in Cordyceps sinensis (Cs) and its substitutes was developed. 2-Chloroadenosine was used as internal standard for this assay. The optimum separation for these analytes was achieved using the mixture of water, methanol and formic acid (85:14:1, v/v/v) as a mobile phase and a 2.0×150 mm Shimadzu VP-ODS column. Selective ion monitoring (SIM) mode ([M+H]⁺ at m/z 136, 137, 268, 252 and 302) was used for quantitative analysis of above four active components. The regression equations were liner in the range of 1.4–140.0 μg ml⁻¹ for adenine, 0.6–117.5 μg ml⁻¹ for hypoxanthine, 0.5–128.5 μg ml⁻¹ for adenosine and 0.5–131.5 μg ml⁻¹ for cordycepin. The limits of quantitation (LOQ) and detection (LOD) were, respectively 1.4 and 0.5 μg ml⁻¹ for adenine, 0.6 and 0.2 μg ml⁻¹ for hypoxanthine, 0.5 and 0.1 μg ml⁻¹ for adenosine and cordycepin. The recoveries of four constituents were from 93.5 to 107.0%. The nucleoside contents of various types of natural Cs and its substitutes were determined and compared with this developed method.     

冬虫夏草菌丝体与天然冬虫夏草蛋白成分的分析比较

利用液体培养基对冬虫夏草菌丝体进行培养，在18～20℃ 160r/min摇瓶中培养72h，可得到266g/L的湿菌体，并对天然冬虫夏草和冬虫夏草菌丝体的蛋白粗提液进行了蛋白含量，SDS-PAGE和HPLC分析。结果表明天然冬虫夏草与冬虫夏草菌丝体中水溶性蛋白含量分别占其干重的2．00％和7．24％；在12％SDS-PAGE中低分子蛋白标准的回归方程为Y=5．01847-1．11588X，其相关系数r=-0．99131，由此推算出天然冬虫夏草与冬虫夏草菌丝体含有4种相同的蛋白质亚基，其相对分子质量分别为46971，51087，86681和95685；天然冬虫夏草中特有的蛋白质亚基的相对分子质量为l7142及小于12372的多肽，其余的蛋白质亚基稍有差异，在天然冬虫夏草中蛋白质亚基的相对分子质量为28942，37237和58091，而在冬虫夏草菌丝体中为28658，34920和55018。水溶性蛋白经HPLC分析，可以分离出不同的蛋白峰，冬虫夏草菌丝体所含蛋白质较天然冬虫夏草简单且分离效果好。