早期自然流产绒毛细胞染色体制备方法的改良及其临床应用

目的 改良早期自然流产胚胎绒毛膜细胞染色体的制备方法,并探讨其核型分析在自然流产病因诊断及下次妊娠指导中的临床作用.方法 于清宫手术时,无菌采集39例早期自然流产胚胎的绒毛；改进消化、低渗、固定等原位法制备绒毛细胞染色体的关键步骤；G显带法进行核型分析.结果 39例流产绒毛标本中,培养成功38例(97.4％),其中检出异常核型26例(68.4％),与正常核型比较,差异有统计学显著性意义(P＜0.01).26例异常染色体核型分布及其构成结果显示,核型异常以数目异常为主,与结构异常组比较,差异具有统计学显著性意义(P＜0.01).结论 胚胎染色体异常是早期自然流产最常见的原因,主要表现为数目异常.改良的绒毛细胞培养法和原位制备法具有成功率高、操作简便、耗时短及有利于准确进行核型分析的优点；对流产原因的查明,以及合理指导下次妊娠具有重要的临床意义.     

112例妊娠早期自然流产患者绒毛细胞培养及核型分析

目的 探讨绒毛细胞染色体异常与妊娠早期自然流产间的临床关系。方法 对112例妊娠早期自然流产患者绒毛细胞进行短期培养、染色体制备及核型分析。结果 成功检测绒毛标本105例,占93.75%(105/112)。其中,检出正常核型50例,占47.62%(50/105);异常核型55例,占52.38%(55/105)。异常核型中以数目异常为主,其中三体型最为常见(33例),三倍体6例,四倍体及复合三体各1例,嵌合体2例,性染色单体1例,结构异常6例,另有染色体正常变异5例;正常核型中男性20例,女性30例。结论 胚胎染色体异常是导致妊娠早期自然流产的重要因素之一,临床上开展流产绒毛染色体检查有利于判断本次流产原因,合理指导下次妊娠。     

早期自然流产胚胎染色体核型分析

目的总结早期自然流产胚胎的异常核型发生率,并对染色体异常核型的相关因素进行分析。方法对2017年6月-2018年6月在我院确诊为早期自然流产的300例患者进行回顾性分析,对流产后绒毛组织进行G显带核型分析,总结异常核型发生率,同时对孕妇年龄、自然流产次数与异常核型发生率的相关性进行分析。结果300例早期自然流产患者中,胚胎异常核型发生率为52.0%(156/300),其中数目异常148例,占94.87%,结构异常8例,占5.13%。年龄≥35岁孕妇的胚胎异常核型发生率高于年龄<35岁孕妇,且自然流产次数越多,胚胎异常核型发生率越低。结论早期自然流产的主要原因是胚胎染色体数目异常,年龄和自然流产次数是引发胚胎染色体异常的主要危险因素,而通过染色体核型分析,可及早明确自然流产的病因,并为再次妊娠风险的评估提供科学依据,同时也为优生优育提供科学指导。     

湖南郴州地区106例自然流产绒毛细胞染色体核型分析

目的探讨自然流产与绒毛组织细胞染色体异常的关系。方法对106例自然流产患者取绒毛组织原位培养进行染色体G显带核型分析。结果培养成功102例,成功率为96.23%,检出染色体异常共35例(34.31%),其中染色体数目异常30例(85.71%);结构异常4例(11.43%);数目合并结构异常1例(2.86%)。结论染色体异常是早期自然流产的重要原因之一,胚胎染色体检测对分析自然流产原因具有重要意义,可为临床咨询提供重要的理论依据。     

复发性自然流产夫妇染色体核型的检验分析

目的探讨复发性自然流产与染色体核型之间的相关性,为临床自然流产的诊治提供参考依据。方法选取2010年3月至2013年3月该地区51对夫妇外周血进行淋巴细胞培养,均进行染色体核型分析,观察染色体异常分布情况,同时比较流产次数和染色体之间相关性。结果 51对102例受试者中,复发性自然流产(RSA)患者染色体异常32例(31.37%),其中以多态变异比率最高,占染色体异常数的56.25%,占总数的17.65%,明显高于其他染色体异常率,且与其他变异比较,差异具有统计学意义(P0.05);RSA和染色体异常核型中男10例(31.25%),女22例(68.75%);女性显著高于男性,且差异具有统计学意义(P0.05);其中以多态变异最常见,占56.25%;染色体多态性中以46XY(Y≥18)发生率最高,占33.33%,流产次数最高,占30.77%;RSA次数和染色体异常率中以流产3次异常率最高,占43.48%。结论染色体异常是复发性流产的一个重要因素,复发性流产不仅和染色体结构有关,同时和染色体多态性变异也有一定关联性。     

自然流产绒毛细胞培养方法的比较及核型分析

目的 探讨两种方法对绒毛细胞培养结果的影响及核型分析在诊断自然流产病因和妊娠指导中的作用.方法 无菌采取100例自然流产患者子宫绒毛,其中75例应用细胞培养法,25例应用直接法,进行染色体制备及核型分析.结果 75 例应用培养法,成功67例,异常33例;25例应用直接法,成功16例,异常11例.两种方法相比培养法成功率显著高于直接法（P＜0.05）;两种方法的异常率无显著差异（P＞0.05）.异常核型以数目异常为主,并以三体征最常见.结论 采用培养法制备绒毛染色体的方法比较理想.流产绒毛染色体检查有利于查明该次流产的原因,并对下次妊娠有较好的指导意义.     

孕早期自然流产组织基因组拷贝数变异分析

目的探讨孕早期自然流产的遗传学病因。方法孕早期流产孕妇433例,其中适龄组(30岁)226例,中间组(30~35岁)129例,高龄组(35~40岁)61例和超高龄组(≥40岁)17例;应用微阵列比较基因组杂交技术检测孕早期自然流产组织基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)。结果 433例孕早期自然流产组织中,200kb以上基因组CNVs 259例(59.82%),其中染色体数目异常180例(41.57%),染色体结构异常79例(18.24%);CNVs主要分布在15、16、22及X染色体(6.70%、9.70%、8.55%、9.24%),染色体数目异常发生率最高的为16-三体(8.78%),其次是22-三体(8.08%),染色体结构异常多发生于15号染色体(3.23%)及X染色体(2.08%);适龄组、中间组染色体数目异常发生率(32.30%、44.19%)均低于高龄组(63.93%)和超高龄组(64.71%)(P0.05),且适龄组低于中间组(P0.05),高龄组与超高龄组比较差异无统计学意义(P0.05);适龄组染色体结构异常发生率(23.01%)高于高龄组(8.20%)(P0.05)。结论 CNVs主要分布在15、16、22及X染色体,染色体数目异常是导致孕早期自然流产的主要原因,孕妇年龄可影响胚胎染色体数目异常发生率,而对染色体结构异常的发生影响不明显。     

自然流产夫妇262 例染色体核型分析

目的 探讨自然流产与染色体异常的关系.方法 采集262 例自然流产史夫妇外周血,进行淋巴细胞培养,常规法制备G 显带染色体标本, 分析镜下核型.结果 262 例有自然流产史夫妇,检出20 例异常核型,异常核型比例为7.6%(20/262),无一例夫妇同时存在异常核型.检出染色体核型多态性15 例,发生率为5.7%(15/262).20 例异常核型中,男性染色体异常占检出异常核型总数的70%(14/20),高于女性的30%(6/20);常染色体异常比例与性染色体异常比例均为50%(10/20).常染色体异常:平衡易位5 例,倒位5 例; 性染色体异常:小Y 3 例,次缢痕增长4 例,倒位1 例,Turner 综合征1 例,Turner 综合征嵌合体1 例.常染色体多态性9 例,性染色体多态性6 例.结论 自然流产夫妇中,男性染色体异常发生率高于女性.核型异常主要类型为,常染色体及Y 染色体异常.此外,染色体多态性发生率较高.对于存在自然流产史的夫妇,进行染色体检查,有助于病因的分析与诊断,并为生育指导提供重要的依据.     

一种改良拷贝数变异检测技术在自然流产遗传学检测中的应用

目的探讨一种高通量多重基因拷贝数检测技术(CNVplex)在孕早期自然流产遗传学检测中的临床应用价值。方法收集196例孕早期自然流产组织,清除蜕膜后绒毛组织每份分为2个组,一组采用染色体核型分析技术检测,另一组提取DNA采用CNVplex进行检测,比较2种方法的检测结果。结果 196例孕早期流产绒毛中,细胞培养成功175例(成功率为89.29%),染色体核型分析检出异常染色体核型98例(异常检出率为56%),包括染色体数目异常96例、结构异常2例;CNVplex检测成功194例(成功率为98.98%),检出拷贝数异常115例(异常检出率为59.29%),包括染色体整条拷贝数异常107例、染色体部分片段拷贝数异常8例。在染色体核型分析失败的21例样本中,CNVplex共检出染色体拷贝数异常16例。在175例2种方法都检测成功的样本中有10例结果不符,其中染色体核型分析检出的2例多倍体、2例嵌合体以及1例易位型22三体CNVplex未能检出;其余5例CNVplex结果显示为染色体部分片段拷贝数异常,而染色体核型结果为正常或不明确,该5例样本均采用随访夫妻染色体检测和荧光原位杂交(FISH)验证。结论 CNVplex的检测成功率高,能有效检出染色体小片段拷贝数异常,适用于孕早期自然流产遗传学快速检测,是传统染色体核型分析技术的有益补充。     

荧光原位杂交技术检测130例自然流产绒毛染色体结果的观察与分析

目的应用荧光原位杂交技术(FISH)对130例自然流产患者的绒毛染色体进行检测,探讨并评估FISH在诊断自然流产绒毛染色体异常中的价值。方法采用13、21和16、22及18、X、Y三组染色体探针,对130例自然流产患者的绒毛标本进行FISH检测。结果 130例自然流产的绒毛染色体FISH检测中,检测成功129例,检测成功率99.2%,其中异常染色体细胞数>10%者65例,核型异常率为50.3%。结论 FISH技术不受标本污染限制,能快速、准确地诊断自然流产绒毛染色体数目畸变,与常规染色体核型分析相结合,可为临床自然流产的病因探讨提供更为准确的依据。     

Pilot study on assessing medical, psychological and psychosocial factors in stillbirth and spontaneous abortion and recurrent abortion

84 women (mean age: 29 years) with a history of spontaneous abortion (unexplained in 95% of cases) were compared with a control group (n = 72). Two subgroups, each of 31 women were selected, in which cases with recurrent spontaneous abortion were compared with uncomplicated pregnancies. Psychological disturbances, ineffective coping strategies and medical risk factors were significantly increased in the abortion group, but socioeconomic (occupational, financial) problems linked with higher social class level less importantly. In women with recurrent spontaneous abortions psychological problems and depressive coping modes were predominant, in uncomplicated pregnancies the risk factors were very low. The most frequent psychological disturbances in the abortion group were mourning reactions after pregnancy loss. It appears that psychological factors are less a cause than the consequence of the abortion event. Moreover, both the multifactorial hypothesis of early pregnancy wastage, and the importance of prenatal diagnosis in order to identify possible risk factors, especially in cases of habitual abortion, are stressed.     

正常妊娠反复自然流产绒毛及蜕膜组织中细胞因子信号转导负调控因子的表达:改变Th1/Th2平衡调节可影响妊娠结局

背景:细胞因子信号转导负调控因子(suppressors of cytokine signaling,SOCS)参与多种细胞因子信号通路的调节,SOCS1-3对妊娠的调节作用较为突出。目的:通过检测反复自然流产患者和正常妊娠绒毛及蜕膜组织中SOCS3蛋白表达,了解反复自然流产患者SOCS3蛋白的表达。方法:Westenblotting方法检测反复自然流产患者和正常妊娠绒毛组织及蜕膜组织SOCS3的表达。结果与结论:与正常妊娠组相比,反复自然流产组SOCS3在绒毛组织中表达减少(P<0.05),在蜕膜组织中表达减少(P<0.01)。推测SOCS3蛋白可能影响妊娠结局,反复自然流产组SOCS3表达降低,可能导致Th2反应降低,从而导致流产发生。     

胚胎血红蛋白基因变异与早期自然流产的相关性研究

目的:探讨胚胎血红蛋白基因变异与早期自然流产的相关性。方法:无菌收集40份早期自然流产的绒毛标本(自然流产组)及35份人工流产的绒毛标本(人工流产组),提取胚胎绒毛组织DNA,针对3个外显子及部分内含子、上游调控序列分片段设计引物,进行PCR扩增、测序,筛查基因突变。结果:所有胚胎绒毛组织血红蛋白ε、ζ基因的外显子片段均未发现突变。两组部分胚胎绒毛组织血红蛋白ε基因第一内含子84位点处发现4 bp CAAA插入序列,但其基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组部分胚胎绒毛组织血红蛋白ζ基因第一内含子128位点处发现58 bp插入序列,自然流产组血红蛋白ζ基因58 bp插入基因型频率高于对照组(P<0.05),关联性分析提示该基因片段变异与早期自然流产相关(r=0.26,P<0.05)。两组血红蛋白ζ基因58 bp插入纯合子基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胚胎基因血红蛋白ζ基因第一内含子第128位点处存在一58 bp插入变异,该变异与早期自然流产相关。     

PDW、NLR联合检测对复发性流产患者的诊断价值及临床意义

目的探讨血小板分布宽度(PDW)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)联合检测对复发性流产患者的诊断价值及临床意义。方法选取2018年5月至2019年5月上海市第一妇婴保健院收治的202例复发性流产患者作为复流组,同期选择人工流产正常妊娠妇女90例作为对照组。采集2组患者一般资料和PDW、血红蛋白(Hb)、红细胞比容(HCT)、红细胞计数(RBC)、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)等血清指标,并计算NLR。利用Logistic回归分析影响复发性流产的危险因素,并采用受试者工作曲线计算PDW、NLR对复发性流产的诊断价值。结果复流组Neu、NLR、PDW显著高于对照组,Lym明显低于对照组,差异有统计学意义(t=5.604,P=0.000;t=9.639,P=0.009;t=11.724,P=0.000;t=6.405,P=0.000);而2组间Hb、HCT、RBC,差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示,PDW、NLR是复发性流产的独立危险因素(均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析显示,PDW诊断复发性流产的曲线下面积为0.885,NLR为0.820,PDW、NLR联合检测曲线下面积为0.922,明显高于PDW、NLR单独检测(Z=3.213,P<0.05;Z=3.678,P<0.05)。结论复发性流产患者PDW、NLR明显升高,可作为复发性流产早期诊断的重要指标。     

泼尼松联合低分子肝素治疗免疫型复发性流产的疗效观察

[目的]观察泼尼松联合低分子肝素治疗治疗免疫型复发性流产的临床疗效.[方法] 121例经临床筛查确诊为免疫型复发性流产病人随机分为两组,治疗组61例应用泼尼松、低分子肝素进行治疗,对照组60例应用传统保胎方法治疗.观察并比较两组治疗效果.[结果]治疗组治疗成功50例(82.0%),对照组治疗成功22例(36.7%),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]泼尼松联合低分子肝素治疗免疫型复发性流产效果明显.     

原因不明复发性流产患者蜕膜组织中蛋白激酶的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

目的观察并分析蛋白激酶在原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜组织中的表达情况,及其与胎盘蜕膜细胞凋亡的相关性。方法回顾性分析本院就诊的140患者,将其分成80例流产组和60例对照组。采用免疫组织化学染色法分别测定SGK在2组URSA患者蜕膜组织中的表达情况,同时采用DNA末端原位标记染色法(TUNEL法)分别检测流产组和对照组的细胞凋亡指数(AI)。结果流产组患者蜕膜组织中SGK的阳性表达率为25.0%,明显低于对照组的93.3%,2组比较差异具有统计学意义(P0.05);流产组的平均细胞凋亡指数为明显高于对照组,2组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论 URSA患者蜕膜组织中蛋白激酶的表达降低,与组织细胞凋亡明显增加存在相关性。     

不明原因复发性自然流产患者外周血淋巴细胞亚群特征的研究

目的 探讨不明原因复发性自然流产患者外周血免疫细胞亚群的特征.方法 将34例早孕难免流产患者分为不明原因复发性自然流产(URSA)和偶发性自然流产(SA)两组,采用流式细胞术检测患者外周血免疫细胞的特征,将两组的检测结果进行比对研究.结果 Th/Ts两组均见异常升高,URSA组为(2.77±5.16),SA组为(3.67±6.12);NK细胞比例URSA组为(15.57±6.45)%明显升高,而SA组仅为(11.38±3.66)%,两组差异有统计学意义(P<0.05).结论 URSA组与SA组均存在一定的免疫紊乱,共同的表现是特异性免疫方面均有Th/Ts异常升高,不同的表现是URSA组在非特异性免疫方面NK细胞比例增高较SA组更为明显.     

Proliferative responses to recall antigens are associated with pregnancy outcome in women with a history of recurrent spontaneous abortion.

Maternal tolerance of the fetal hemiallograft suggests that immunomodulation occurs during gestation. Therefore, recurrent spontaneous abortion (RSA) may represent a failure of the immune changes that maintain pregnancy. We hypothesized that fertile women but not women with RSA may lose their immune responses to recall antigens when pregnant. This phenomenon has been seen in immunosuppressed transplant recipients and is associated with graft survival. Therefore, we evaluated proliferative responses to recall antigens in four groups of women: group 1, nonpregnant fertile women with no history of pregnancy loss and at least one prior healthy pregnancy, n = 13; group 2, nonpregnant women with a history of three or more spontaneous abortions, n = 28; group 3, healthy pregnant women between 6 and 9 wk of gestation without a history of prior pregnancy loss, n = 15; and group 4, pregnant women between 6 and 9 wk of gestation, with a history of RSA, n = 22. Proliferative responses of peripheral blood leukocytes to the recall antigens influenza and tetanus, alloantigens, and phytohemagglutinin were determined prospectively. Positive responses (stimulation index > 3) to recall antigens (a response to either influenza or tetanus was considered positive) were as follows: group 1 (nonpregnant fertile women), 11/13 (85%); group 2 (nonpregnant RSA women), 24/28 (86%); group 3 (pregnant fertile women), 4/15 (27%) (P </= 0.007); and group 4 (pregnant RSA women), 13/22 (59%) (P = 0.032) [corrected]. In group 4, there was 100% fetal survival in the nine women who lost responsiveness to recall antigens; however, in the 13/22 patients who responded to recall antigens, 9/13 (69%) had a repeat spontaneous abortion. These findings suggest that immunosuppression, indirectly measured by proliferation to recall antigens, is necessary for early pregnancy maintenance. Furthermore, this approach may be useful for predicting pregnancy outcome for women with RSA and may provide a useful means for designing and monitoring therapies.     

不明原因早期复发性流产患者的宫腔镜检查

目的评价宫腔镜检查在不明原因早期复发性流产（EURSA）诊治中的价值 方法对我院2010年1月~2014年6月1359例EURSA患者行宫腔镜检查,并分析检查结果。 结果宫内病变检出率为29.9%,其中宫腔粘连发生率最高（14.3%）,随着流产次数增加宫腔粘连程度加重（P=0.003）;其他宫腔病变包括子宫内膜息肉（6.4%）、子宫内膜炎（3.8%）、不全中隔子宫（2.7%）、宫颈机能不全（1.3%）、子宫内膜结核（1.1%）、妊娠物残留（0.4%）。检查中并发症为人流综合症（0.7%）。 结论对不明原因早期复发性流产患者行宫腔检查可发现不利于妊娠的宫腔病变,值得临床推广。