金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（CoCl2）诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为：①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现：CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系（p〈0.01）;而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响（p〉0.05）;gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达（p〈0.01）,对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响（p〉0.05）。结论：CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。     

氯化钴诱导心肌细胞化学性缺氧HIF-1α表达的研究

目的：观察不同浓度的氯化钴（CoCl2）对H9C2心肌细胞的影响及其诱导化学性缺氧的最佳浓度和时间。方法：用100、300、600、900、1200μmol／L的CoCI2处理H9C2心肌细胞,建立化学性缺氧诱导心肌细胞损伤的实验模型,分别于12、18、24、36、48h用Hoechst33342细胞核染色法检测心肌细胞凋亡：CCK-8试剂盒检测心肌细胞存活率;确定最佳诱导浓度600μmol／L后,分别于0、3、6、9、12、18、24、36、48h采用蛋白印迹法检测缺氧诱导因子1α（HIF-1α）蛋白的表达;确定最佳诱导时间后,用蛋白印迹法检测100、300、600、900、1200μmol／LCoCl2处理H9C2心肌细胞12h后HIF-1α蛋白的表达情况。结果：在600～1200μmo1／L浓度范围内,CoCl2呈剂量依赖性地抑制H9C2心肌细胞的存活。600μmol／LCoCl2诱导12h后H9C2心肌细胞产生明显凋亡．诱导12～48h范围内．12h时H9C2心肌细胞表达的HIF-1α蛋白最高：100～1200μmoI／LCoCl2诱导H9C2心肌细胞12h．其中600μmol／LCoCl2诱导时H9C2心肌细胞表达的HIF-α蛋白最高。结论：CoCl2诱导H9C2心肌细胞化学性缺氧的最佳浓度为600μmol／L．此时最佳时间为12h。     

二氯化钴化学诱导乏氧对人A549细胞株增殖和凋亡的研究

目的 探讨不同浓度CoCl2诱导乏氧对体外培养的人肺腺癌细胞株A549增殖、缺氧诱导因子-1α mRNA (HIF-1αmRNA)表达变化及诱导凋亡作用.方法 对肺腺癌细胞A549分别进行常规和氯化钴模拟乏氧培养,采用MTT法检测乏氧对A549细胞增殖的影响.实时荧光定量PCR法测定不同浓度CoCl2诱导乏氧HIF-1α mRNA表达水平的变化.Annexin V-FITC/PI双标记染色,流式细胞术检测不同浓度CoCl2诱导乏氧时A549细胞凋亡情况.结果 CoCl2对A549细胞增殖抑制作用表现出时间和剂量依赖性抑制作用.常氧条件下的A549细胞即有一定水平的HIF-1α mRNA的表达,随着CoCl2浓度的增加,HIF-1α mRNA水平呈上升趋势,经单因素方差分析统计,各组差异有统计学意义(F=195.414,P=0.000).流式细胞仪检测结果显示,正常对照组,50,100,200,400 μmol/L CoCl2不同浓度组A549细胞凋亡率分别为1.97％±0.40％,3.97％±0.15％,6.93％±0.29％,12.97％±0.45％和15.80％±1.37％,经单因素方差分析统计,各组差异有统计学意义(F=220.209,P=0.000).结论 CoCl2对肿瘤细胞的增殖凋亡的影响呈浓度依赖性,进行化学模拟低氧时,要考虑CoCl2的作用浓度.     

YC-1对Aβ寡聚体毒性的保护作用及其相关机制

目的:探讨YC-1针对Aβ寡聚体(ADDLs)毒性的保护作用及其相关机制。方法:原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系,应用不同浓度ADDLs(500 nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)干预以模拟体外AD模型,应用YC-1对此模型进行干预,以CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测NICD及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,采用real-time PCR检测Caspase-3 mRNA水平。结果:浓度≥2μmol/L的ADDLs干预明显降低混合培养体系细胞活力水平,并呈现浓度依赖性(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h显著降低细胞活力(P<0.01),YC-1可明显拮抗这种毒性作用(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h明显上调NICD及HIF-1α水平(P<0.01),YC-1可拮抗这种提高(P<0.05或0.01)。10μmol/L ADDLs干预4 h显著提高Caspase-3的mRNA水平(P<0.01),YC-1可显著抑制这种上调(P<0.05)。结论:ADDLs表现出对原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系的毒性作用,YC-1可发挥保护作用。     

过氧化物酶体增殖物激活型受体α不同激活物对HepG2细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂表达的影响

目的:观察不同的过氧化物酶体增殖物激活型受体α对人肝瘤细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂mRNA表达及其活性的影响,探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α在1型纤溶酶原激活物抑制剂基因调控中的作用。方法:实验于2004-04/2005-04在军事医学科学院放射医学研究所药理毒理实验室完成。分别以终浓度为50和100μmol/L的过氧化物酶体增殖物激活型受体α不同特异性激活物非诺贝特和亚油酸作用于人肝瘤细胞,设未加入非诺贝特和亚油酸作用于人肝瘤细胞为空白对照组。采用半定量反转录-聚合酶链式反应法检测人肝瘤细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂及过氧化物酶体增殖物激活型受体α的mRNA水平,发色底物法检测1型纤溶酶原激活物抑制剂的活性变化。结果:①与空白对照组相比,非诺贝特组在50和100μmol/L浓度诱导下1型纤溶酶原激活物抑制剂mRNA表达分别减少31.97%,45.49%(P<0.05,0.01);亚油酸组在50和100μmol/L浓度诱导下1型纤溶酶原激活物抑制剂mRNA表达分别增加43.0%,129.0%(P<0.05,0.01)。②与空白对照组相比,非诺贝特组在50和100μmol/L浓度诱导下1型纤溶酶原激活物抑制剂蛋白活性分别降低39.3%,49.6%(P<0.01);亚油酸组在50和100μmol/L浓度诱导下1型纤溶酶原激活物抑制剂蛋白活性分别升高37.5%,112.6%(P<0.01)。与空白对照组相比,人肝瘤细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体αmRNA表达量在非诺贝特组100μmol/L浓度诱导下明显增高79.79%(P<0.05),在亚油酸组50和100μmol/L浓度诱导下则分别显著增高46.73%(P<0.05),79.45%(P<0.01),非诺贝特组50μmol/L浓度诱导下使人肝瘤细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体αmRNA表达量有升高趋势,但差异不明显。结论:过氧化物酶体增殖物激活型受体α激活物可以影响人肝瘤细胞1型纤溶酶原激活物抑制剂的基因转录及过氧化物酶体增殖物激活型受体αmRNA的表达,且均呈一定剂量依赖性,但非诺贝特和亚油酸对1型纤溶酶原激活物抑制剂的作用迥然不同。     

利多卡因对肺癌A549细胞增殖、侵袭及AMPK/mTOR/4EBP1信号通路的影响

目的探讨利多卡因对肺癌A549细胞增殖、侵袭及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)信号通路的影响。方法设肺癌A549细胞组,5-氟尿嘧啶组(50μmol/L),利多卡因低剂量组(100μmol/L)、高剂量组(200μmol/L),以上各组每组设6个平行孔,培养72 h。试验结束后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖水平,transwell小室测定细胞侵袭水平,实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法测定细胞AMPK、mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白,以及磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化4EBP1(p-4EBP1)蛋白表达水平。结果与肺癌A549细胞组比较,5-氟尿嘧啶组、利多卡因低剂量组、利多卡因高剂量组吸光度值、存活率及mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白、p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白表达水平降低,穿膜数减少(P<0.05),AMPK mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与5-氟尿嘧啶组比较,利多卡因低、高剂量组吸光度值、存活率及mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白、p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白表达水平升高,穿膜数增加(P<0.05),AMPK mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);与利多卡因低剂量组比较,利多卡因高剂量组吸光度值、存活率及mTOR、4EBP1 mRNA和蛋白、p-mTOR蛋白、p-4EBP1蛋白表达水平降低,穿膜数减少(P<0.05),AMPK mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论利多卡因对肺癌A549细胞增殖、侵袭具有明显抑制作用,其机制可能与利多卡因通过激活AMPK表达进而抑制mTOR/4EBP1信号通路的激活有关。     

染料木素对人子宫内膜癌细胞系HEC-1B体内外增殖抑制作用的研究

目的研究染料木素(genistein,GEN)对人子宫内膜癌细胞系HEC-1B细胞体内外增殖的抑制作用,探讨其抗癌作用的机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色分析(MTT)、病理组织切片HE染色等方法,分别检测体内外GEN对人子宫内膜癌细胞系HEC-1B增殖的抑制效果。结果体外实验:GEN浓度为0~25μmol/L时,对HEC-1B细胞有明显促进增殖作用(P<0.05),随着GEN浓度升高至50μmol/L时,对HEC-1B细胞则呈现抑制作用,当GEN浓度为100μmol/L时,则显示了明显的生长抑制作用(P<0.05),其抑制率达到55%。体内实验:人子宫内膜癌裸鼠模型经100μmol/L染料木素处理后体内平均瘤质量明显减小(P<0.05),抑瘤率可达39%,且处理后肿瘤组织微血管数量减少,部分区域坏死明显。结论染料木素能够明显抑制人子宫内膜癌细胞及其移植瘤的生长,其机理可能为通过和雌激素竞争结合雌激素受体,减轻雌激素促细胞增殖作用和抑制肿瘤血管生成导致肿瘤细胞坏死,从而发挥抗肿瘤作用。     

二氯化钴浓度对急性早幼粒白血病细胞系NB4增殖的影响

目的观察体外低氧环境对人急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4的细胞增殖及低氧诱导因子(HIF-1α)基因表达水平的影响。方法体外培养NB4细胞,分别用0、50、100、200、400、800μmol/L二氯化钴(Co Cl2)处理24、48、72 h,收集细胞观察Co Cl2对NB4细胞增殖的影响,CCK-8法检测细胞增殖率;RT-PCR检测HIF-1α基因的表达水平。结果 CCK-8法结果表明,Co Cl2终浓度为0、50、100、200μmol/L时的吸光度(A)值依次升高,400、800μmol/L的A值依次降低,差异均有统计学意义(P均0.05);RT-PCR结果显示,Co Cl2终浓度在50、100、200、400、800μmol/L时的HIF-1α表达水平差异均有统计学意义(P均0.05);显微镜下可观察到低浓度Co Cl2促进细胞增殖,高浓度Co Cl2致使细胞增殖受抑制。结论低浓度的Co Cl2可以促进NB4细胞增殖,HIF-1α基因可能参与该过程。     

苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的作用机制探究

目的探讨苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法实验对象为人子宫内膜癌细胞株Ishikawa(常规培养),采用MTT法检测不同浓度苦参碱(0、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)作用24 h、48 h后对Ishikawa细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术检测苦参碱对Ishikawa细胞周期的影响,采用Western Blot技术检测苦参碱对Ishikawa细胞血管内皮生长因子(VEGF)、核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达的影响。结果随着苦参碱药物浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率明显升高,呈一定的剂量依赖性;苦参碱作用24 h IC50为44.655μg/ml,苦参碱作用48h IC50为20.664μg/ml。Ishikawa细胞接受不同浓度苦参碱处理48 h后,G1期细胞百分比的增高情况明显,G2期以及S期细胞百分比降低(P0.05),且随着苦参碱药物浓度的增加,变化越显著(P0.05)。不同浓度苦参碱可有效抑制Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达(P0.05),且随着浓度的增高,Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达越低(P0.05)。结论苦参碱能够对人子宫内膜癌细胞产生明显的抑制,而且具有一定程度上的剂量依赖性,其可能具有将肿瘤细胞阻滞于G1期的作用机制,抑制VEGF、NF-κB p65蛋白表达。     

转化生长因子α及孕激素对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭能力的影响

目的观察转化生长因子α（TGFα）及孕激素对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭、转移能力的影响,探讨TGFα及孕激素对子宫内膜癌孕激素耐药发生的影响及机制。方法研究对象为子宫内膜癌Ishikawa细胞,经不同浓度TGFα及醋酸甲羟孕酮（MPA,1μM）处理,后分别采用MTT法、划痕实验及蛋白印迹法（Western-blot）,检测TGFα、MPA,观察TGFα、MPA及二者联合对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移运动能力的影响,及对细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、E-钙粘附蛋白（E-cadherin）表达的影响;DMSO溶剂对Ishikawa细胞增殖、迁移运动能力的影响作为对照。结果 MTT法检测结果示,与对照组比较,TGFα促进Ishikawa细胞的增殖（P〈0.05）,MPA抑制Ishikawa细胞的增殖（P〈0.05）,TGFα降低MPA对Ishikawa细胞的抑制作用;划痕实验结果示,TGFα组及MPA、TGFα联合组划痕处基本铺满细胞,对照组及MPA组均未铺满细胞。Western-blot法结果示,在TGFα作用下,Ishikawa细胞CyclinD1的表达升高,E-cadherin蛋白的表达降低;MPA与TGFα的作用相反,TGFα联合MPA与TGFα单独作用的结果相一致。结论 TGFα促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及迁移运动能力,拮抗MPA的抑制作用,其机制可能通过上调CyclinD1的表达及下调E-cadherin的表达而发挥作用。TGFα分泌的增加促进子宫内膜癌孕激素治疗失败的发生。     

缺氧诱导人视网膜色素上皮细胞整合素连接激酶的表达及其与HIF-1α、VEGF的相关性

目的:探讨缺氧条件下人视网膜色素上皮细胞(hRPE)整合素连接激酶(integrim linked kinase,ILK)的表达,及其与缺氧诱导因1α(hypoxia induciable factor,HIF-1α)及血管内皮生长因子(vascular cndothclial growth factor,VEGF)表达的相关性。方法:hRPE培养,COCL2(150"mol/L)建立化学缺氧细胞模型。免疫组化方法检测缺氧0、6、12、24、48、72hhRPE细胞ILK、HIF-1α、VEGF的表达。Western blot和RT-PCR方法检测以上缺氧时间细胞ILK、HIF-1α、VEGF的蛋白及其mRNA表达水平并进行图像分析。结果:ILK表达于正常培养的hRPE中,随着缺氧时间的延长,其表达增加,且与HIF-1α、VEGF的表达呈正相关性。结论:ILK可能作为低氧反应性因子与HIF-1α、VEGF共同参与hRPE的低氧病理过程。     

低氧诱导因子抑制剂对白血病细胞株HIF-1α和VEGF表达及诱导细胞凋亡作用的研究

本研究探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5′-hydroxymethyl-2′-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人急性白血病病细胞低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)和血管内皮因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的调节及诱导细胞凋亡作用。应用DAPI染色检查凋亡细胞的形态;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测K562、U937、Jurkat白血病细胞株hif-1α和vegf mRNA表达以及YC-1对U937细胞hif-1α、vegf mRNA表达影响;Western blot检测YC-1对U937细胞HIF-1α和VEGF蛋白表达,以及BAX、BCL-2、caspase-3蛋白变化,分析YC-1诱导U937细胞凋亡的可能机制。结果表明:在3种白血病细胞株均可见hif-1α和vegf mRNA表达。4μmol/L YC-1处理U937细胞(0、8、16和24小时)后,可见凋亡细胞出现的典型凋亡形态特征;流式细胞术检测的细胞0、8、16和24小时凋亡率分别为(4.87±0.70)%、(27.27±2.00)%、(51.53±2.81)%及(60.5±3.20)%;vegf mRNA表达下调,而hif-1αmRNA表达无明显变化;HIF-1α蛋白、VEGF蛋白和BCL-2蛋白表达下调,而BAX和caspase-3蛋白表达上调,BAX/BCL-2比率升高并呈时间依赖性(r=0.973,p0.01)。结论:3种白血病细胞株均显示hif-1α和vegf mRNA表达,YC-1可以抑制白血病细胞HIF-1α蛋白表达,进而下调VEGF,并通过上调BAX/BCL-2比率、caspase-3蛋白表达诱导细胞凋亡。     

缺氧诱导因子-1α低表达对肺癌A549细胞增殖及侵袭能力的影响研究

目的 研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)低表达对肺癌A549细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨相关机制.方法 取A549细胞进行缺氧培养,用于模拟肿瘤内部低氧微环境,设置为缺氧处理组,取正常培养的A549细胞设为正常组,比较两组HIF-1α表达.取对数期A549细胞,进行HIF-1α-siRNA、HIF-1α-pLe...     

低氧模拟剂氯化钴对人单核细胞白血病细胞株SHI-1化疗敏感性的影响

【目的】研究氯化钴（CobaltChloride,CoCl2）模拟的化学性低氧是否能增强人单核细胞白血病细胞株SHI—l细胞对依托泊苷（VP-16）的敏感性,并探讨及其分子机制。【方法】在培养基中加入低氧模拟剂CoCl2（终浓度为100umol／L）模拟化学性低氧环境（低氧组）,并用正常培养基作对照（对照组）。分别在对照组和低氧组中加入不同浓度的VFL16（0．5,1．0,2．0μg／mL）,即VP16组和低氧＋VP-16组。检测各组的细胞的增殖抑制率（四甲基偶氮唑盐法）,细胞凋亡率（流式细胞术）,FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcl-2及Pax基因mRNA表达（实时定量PCR方法）。【结果】①低氧组SHF-1细胞增殖受到抑制,并随作用时间延长而逐渐增强。②低氧模拟剂CoCl2也可在一定程度上诱导SHI-1细胞凋亡,并对VP-16诱导的SHI-1细胞凋亡有促进作用（P〈0．05）。③低氧模拟剂CoCl2可以增强FAK、AKT、ERK、HIF-1α、Bcb2及Pax基因mRNA表达（P〈0．05）,且Bax／Bcl-2比值升高更为明显。CoCl2并不能使VP-16作用24h后SHF1细胞内FAK、AKT和Beg2基因mRNA表达发生明显变化,但可以使ERK、HIF-1α和PaxmRNA表达量增加（P〈0．05）,且Pax／Bcl-2比值升高。【结论】CoCl2模拟化学性低氧对SHI-1细胞生物学活性有一定的抑制作用并能增强其对VP-16的化疗敏感性,其分子机制可能涉及ERK介导的信号通路对HIF_1a表达的调控作用,以及HIF-1α介导的信号传导通路对Pax和Bcl-2基因表达的不均衡调控。     

三氧化二砷联合5-杂氮脱氧胞苷对K562细胞SHP-1、JAK3、TYK2基因表达的影响

本研究旨在探讨甲基化抑制剂三氧化二砷（As2O3）及5-杂氮脱氧胞苷（5-aza-CdR）对JAK-STAT信号转导通路中JAK家族成员JAK3、TYK2和造血细胞磷酸酶SHP-1在慢性髓系白血病细胞株K562中表达的影响及它们在白血病发病中的作用。K562细胞分为单药组、联合用药组及不加药物组（空白对照）。5-aza-CdR单用浓度为0．5、1、2μmol/L,As2O3单用浓度为1、2．5、5μmoL／L,As2O3 1μmol/L＋5-aza-CdR0．5μmol/L、As2O3 2．5μmoL／L＋5-aza-CdR1μmol/L。As2O3联合用药浓度为5μmol/L＋5-aza-CdR2μmol/L。对细胞分别处理24、48、72h后提取细胞总RNA,应用荧光实时定量PCR（Real-timequantitativepolymerasechainreaction,RQ-PCR）检测JAK3、TYK2及SHP-1的表达。结果表明,As2O3和5-aza-CdR单独作用及两药合用时,SHP-1 mRNA在K562细胞中的表达呈剂量及时间依赖性升高,JAK3mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,TYK2mRNA的表达呈剂量及时间依赖性降低,sHP-1与MK3、TYK2呈负相关,JAK3所受影响较TYK2更为显著。结论：As2O3 和5-aza-CdR单独及联合应用时,随着浓度增高和作用时间延长,SHP-1 表达上调,JAK3和TYK2表达下调,且两药有协同去甲基化作用;SHP-1基因可能通过抑制JAK／STAT通路发挥作用,以船所受影响较TYK2更为显著。在JAK／STAT通路中,JAK3可能发挥更为重要的作用。     

HIF-2α表达对低氧环境下胃癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨抑制缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)表达对人胃癌细胞株BGC823低氧状态下细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法利用氯化钴诱导的人胃癌细胞株BGC823作为研究对象,构建HIF-2α小干扰RNA(siRNA)特异性载体,转染低氧环境下的BGC823细胞,采用RT-PCR和免疫印迹法(Western blot)分别检测转染前后细胞中HIF-2αmRNA和蛋白表达,CCK-8法检测转染前后BGC823细胞增殖情况,流式细胞术检测转染前后BGC823细胞凋亡和细胞周期分布情况。结果低氧诱导下,BGC823细胞HIF-2α表达显著增多。低氧环境下,特异性转染HIF-2αsiRNA于BGC823细胞后,HIF-2αmRNA和蛋白表达水平均受到明显抑制,细胞增殖能力降低,凋亡率升高,分布于G2期细胞比例升高(P<0.05)。结论低氧环境下BGC823细胞表达HIF-2α增多,通过特异性HIF-2αsiRNA下调低氧环境下BGC823细胞中HIF-2α基因表达,能够抑制BGC823细胞增殖,改变细胞周期分布并诱导其凋亡,为胃癌分子靶向治疗提供新的证据。     

低氧诱导因子-1α抑制剂逆转K562/A02细胞多药耐药机制研究

目的 探讨低氧诱导因子抑制剂3-(5'-Hydroxymethyl-2'-furyl)-1-benzylindazoh(YC-1)对人白血病耐阿霉素细胞K562/A02的耐药逆转作用,并探讨逆转机制.方法 采用MTT法检测不同浓度YC-1和阿霉素(ADM)单独或联合使用48 h对K562/A02细胞和K562细胞增值抑制效应及耐药逆转效应;用流式细胞术检测0、5、10和20 μmol/L YC-1单独或联合1 mg/L阿霉素作用K562/A02细胞48 h后细胞凋亡率及联合应用后细胞内阿霉素浓度;半定量RT-PCR检测各组细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、mdr1基因mRNA表达变化;Western blot方法检测各组细胞HIF-1α、P-糖蛋白(P-gp)表达变化.结果 K562与K562/A02细胞对阿霉素的IC50值分别为(1.56±0.07)mg/L和(42.98±3.15)mg/L,耐药倍数为27.55倍.予5、10和20μmol/L YC-1作用后,K562/A02细胞对阿霉素的耐药倍数分别为24.63、16.38和10.71倍;0、5、10和20μmol/L YC-1单独或联合1 mg/L阿霉素处理K562/A02细胞48 h后,凋亡率分别为(1.9±0.9)%、(4.9±0.9)%、(5.8±1.1)%和(9.3±1.4)%与(2.3±0.7)%、(8.2±1.2)%、(19.0±1.7)%和(34.5 ±2.4)%.0、5、10和20 μmol/L YC1联合1 mg/L阿霉素处理K562/A02细胞48 h后细胞内阿霉素荧光强度分别为232±33、1300±219、1961±240和3342±269;随着YC-1浓度增加,HIF-1α mRNA表达没有明显差异,mdr1 mRNA逐渐下调,HIF-1±和P-gp表达均下调.结论 YC-1可以通过抑制HIF-1α蛋白表达,下调mdr1 mRNA水平和P-gp水平,增加细胞内阿霉素药物浓度,部分逆转K562/A02细胞耐药.     

缺氧对肾癌细胞STC1、HIF-1α及线粒体膜电势稳定影响的研究

目的检测缺氧条件下肾癌细胞斯钙素蛋白l（STCl）及线粒体膜电势稳定指标的变化,结合细胞增殖和Ca2＋水平,初步探讨肾癌细胞可能的抗乏氧机制。方法分别使用50μmol／L、100μmol／L、150μmol／L的CoCl2干预细胞培养基构建化学性缺氧模型;MTT法检测细胞生长情况,荧光分光光度法检测细胞内Ca2＋水平和线粒体膜电位（△ψm）,紫外分光光度计测MPTP,RT-PCR检测STCl、HIF-1α的基因表达情况。结果与对照组相比,缺氧能显著抑制细胞增殖,促进细胞内Ca2＋水平上升（P〈0．05）;缺阜可使MPTP开放度增加、△ψm减低（P〈0．05）,且此时细包内STCl、HIF-1α的基因表这脯（P〈0．05）;以上变化均随着缺氧程度的加剧而逐渐增大。结论缺氧条件下STCl、HIF-1α对Ca2＋的负调控可能有利于肾癌细胞线粒体膜电势稳定,对肾癌细胞起保护作用。