还原型谷胱甘肽对60Co γ射线激活核转录因子-кB影响研究

目的 探讨还原型谷胱甘肽(GSH)对<'60>Co γ射线引起的人肺腺癌A549细胞中p65蛋白表达情况的影响.方法 按处理方法不同将人肺腺癌A549细胞分为假照组、单纯照射组、GSH组、GSH+照射组.免疫印迹法检测各组细胞质和细胞核中p65蛋白的表达情况;免疫荧光法检测各组细胞中p65在细胞质和细胞核中的定位变化.结果 <'60>Co γ射线照射后,p65蛋白在细胞核中的表达量随着吸收剂量的增加逐渐增多;GSH+照射组与单纯照射组相比,细胞核中p65的表达明显减少;但p65在细胞总蛋白中的表达没有明显变化.免疫荧光法检测到单纯照射组与假照组比较,细胞核内p65的表达量增多;GSH+照射组细胞核内p65的表达量相对单纯照射组明显减少.结论 γ射线照射后人肺腺癌A549细胞核内p65的表达量增多,但GSH可以减少p65在细胞核内的表达,抑制p65的入核.     

细菌防护液对~(60)Coγ射线照射小鼠骨髓细胞生物学效应的影响

探讨细菌防护液 (BPL)与受 6 0 Coγ射线照射小鼠骨髓细胞生物学效应的关系。应用流式细胞仪(FCM)检测细胞的凋亡指数和免疫参数 (CD4 、CD8 、NK)。结果显示 BPL能够降低细胞凋亡率 ,同时提高细胞的增殖率 (P<0 .0 1)。其作用机制可能与提高 NK细胞活性和 CD4 、CD8 数量有关。进一步证实 ,BPL对辐射损伤细胞有一定的保护作用。     

~(60)Coγ射线诱发小鼠DNA甲基化改变

目的探讨基因组启动子甲基化谱及DNA甲基化酶1(DNMT1)表达量在60Co-γ射线照射小鼠各组织的变化及其意义。方法 SPF级C57BL/6J雄性小鼠12只随机分为对照组和照射组,照射组小鼠接受4Gy60Co-γ射线单次全身照射后,均眼球摘除取血后处死,收集各脏器组织,进行外周血白细胞计数和骨髓嗜多染红细胞微核计数,应用甲基化DNA免疫沉淀-芯片(MeDIP-chip)杂交技术对γ射线照射小鼠肝组织基因组启动子(promoter)CpG岛甲基化改变进行分析,并采用免疫组化(SP)法和蛋白质印记(western blot)法检测小鼠各组织DNMT1的表达情况。结果与对照组比较,照射组小鼠基因组启动子甲基化谱发生了明显改变,照射组1 300个基因的启动子CpG岛发生了新的甲基化,660个基因发生去甲基化;提高筛选标准,最后可得到发生明显甲基化的基因有Trim71、Sema3f、Pcdh8、Sox4、1110034A24Rik、Limk1、Nefl、Xpr1,明显去甲基化的基因有Sfrs18、Dr1、Ankrd42、Nae1、Sfi1、Accn1、Srd5a1、Nsun2、Eif1a、Dusp5;照射组小鼠除肺组...     

~(60)Coγ射线对生理盐水和玉米中黄曲霉孢子的辐照效应研究

目的研究γ射线对黄曲霉孢子辐照效应。方法两种介质中不同浓度黄曲霉孢子经不同剂量辐照后进行菌落计数,计算D10值和理论最小杀灭剂量,并实验验证实际最小杀灭剂量。结果生理盐水中高浓度孢子D10值0.39kGy,最低杀灭剂量2.5kGy,低浓度孢子D10值0.47kGy,最低杀灭剂量1.5kGy;玉米中高浓度孢子D10值为0.67kGy,最低杀灭剂量3.0kGy,低浓度孢子D10值为0.72kGy,最低杀灭剂量2.0kGy。结论 3.0kGy可用于粮食中黄曲霉的杀灭。     

60Co-γ射线对小鼠骨髓细胞微核率影响

微核是细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时,仍然留在细胞质中的染色单体或染色体的无着丝粒断片,这种情况的出现往往是受到染色体断裂剂作用的结果^[1].骨髓细胞微核数增高是全身一次性γ射线照射引起染色体损伤的主要表现之一,在一定范围内,骨髓细胞微核率与照射剂量成正比与恢复时间呈反比^[2].因此,骨髓细胞微核率的变化常常作为判定辐射损伤的程度以及评价辐射损伤保护作用重要指标^[3-4].本研究采用不同剂量γ射线照射小鼠,不同时间采集骨髓,观察微核细胞率的变化,以期探讨剂量与时间反应关系,为相关实验提供科学依据.     

谷胱甘肽纳米Fe3O4对人肺腺癌细胞SPC-A1影响

目的研究氧化型谷胱甘肽（GSSG）修饰的超顺磁性纳米粒子在体外对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响。方法分别通过光学显微镜、透射电镜观察加入磁性纳米粒子培养后细胞形貌变化及细胞传代后磁性纳米粒子在细胞质内分布状态。用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）染色法、乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒、血细胞计数等方法，测定加入磁性纳米粒子培养后细胞存活率与LDH释放水平变化，测定吸收磁性纳米粒子后细胞生长曲线变化。结果加入含磁性纳米粒子培养液后，细胞形貌没有显著改变，细胞传至6代后胞质内仍存在磁性纳米粒子。培养液中分别加入3种浓度（0．6，1．05，1．5mg／ml）磁性纳米粒子后，细胞存活率均〉90％，细胞LDH释放水平与空白对照相比没有明显改变。内吞磁性纳米粒子后细胞生长曲线没有明显改变。结论在一定浓度范围内（0～1．5mg／ml）。GSSG修饰的超顺磁性纳米粒子对细胞的形貌、存活、传代、生长曲线没有显著影响，显示了较好的生物相容性；透射电镜观察内吞的粒子可以在细胞内保留数代，显示了细胞对纳米粒子的高保留性。GSSG修饰的超顺磁性纳米粒子在生物医学中具有潜在应用价值。     

60Coγ-射线诱导人膀胱癌EJ细胞中磷酸化组蛋白H2AX焦点形成

目的探讨^60Coγ-射线是否可在人膀胱癌EJ细胞中诱导磷酸化组蛋白H2AX焦点形成以及形成的焦点数量与照射剂量及照射后时间的关系。方法免疫印迹法和流式细胞分析法用于检测不同剂量^60Coγ-射线照射后脚细胞中γH2AX蛋白表达的变化；免疫荧光法检测不同剂量照射后以及2Gy照射后不同时间日细胞中γH2AX焦点的数量。结果γ-射线照射后γH2AX蛋白表达明显增加，但量效关系不明显；免疫荧光法可检测γH2AX焦点形成的数量和大小，并且存在剂量-效应关系及有时间依赖性，随着照射剂量的增加，γH2AX焦点数目及大小均明显增加，照射的剂量范围从0．1～4．0Gy均可检测，照射后24h仍可检测到γH2AX焦点，但焦点数随时间延长而减少、减弱。结论免疫荧光法检测照射后γH2AX焦点数目可敏感、直观地反映DNA损伤及修复情况，有望成为辐射检测及辐射致癌的好的生物指标。     

五指毛桃水提液对~(60)Coγ射线所致小鼠组织DNA损伤的防护作用

目的探讨五指毛桃水提液对60Coγ射线损伤小鼠组织DNA的防护作用。方法 40只SPF级雄性小鼠随机分为5组,阴性对照组给予生理盐水,单纯照射组作为辐射模型组,3个低、中、高给药+辐射组分别给予相当于生药5、10、20g·kg-1·d-1的五指毛桃水提液,连续灌胃到第7天。除阴性对照组外,所有小鼠接受全身一次性60Coγ照射,照射剂量为6Gy。照射后第2天处死小鼠,取肺、肝、睾丸、股骨和外周血,分别制作单细胞悬液,用单细胞凝胶电泳实验进行DNA损伤检测。结果辐射模型组小鼠组织细胞DNA的尾部DNA百分率(tail DNA%)和尾矩高于阴性对照组(P0.01),各辐射+给药组的tailDNA%和尾矩均显著低于辐射模型组(P0.01),且随着给药剂量的增加,tail DNA%和尾矩降低。结论五指毛桃水提液对60Coγ射线损伤小鼠组织DNA具有一定的防护作用。     

60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响

目的研究60Co γ射线照射对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和照射组,照射组细胞分别用60Co γ射线5Gy、10Gy、20Gy单剂量照射心肌细胞,照射后48h检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)浓度,流式细胞仪检测60Coγ射线照射对体外培养的心肌细胞凋亡的影响,照射后48h及120h用结晶紫试验及MTT试验检测照射后心肌细胞活性变化,结果照射组LDH浓度明显高于未照射组,且随照射剂量增加而升高。照射后48h凋亡细胞较对照组升高,凋亡细胞比例与照射剂量呈正相关。结晶紫试验及MTT试验均提示照射后48h照射组心肌细胞活细胞活性与对照组无明显差异,照射后120h照射组活细胞活性明显低于对照组,且与照射剂量相关。结论60Co γ射线单剂量照射可直接损伤心肌细胞,降低体外培养的心肌细胞活性,促进心肌细胞凋亡。     

γ-射线对人支气管上皮细胞let-7α表达影响的研究

目的 探讨γ-射线对人支气管上皮细胞(16HBE)let-7α表达影响.方法 用60Coγ-放射源0.2～8.0 Gy照射16HBE后8 h,用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术测定let-7α的相对表达;同时测定了2.0 Gy照射16HBE后4、8和24 h细胞let-7α的相对表达.结果 16HBE let-7α表达因照射剂量和照射后时间的不同而异,1.0～8.0 Gy照射后能明显下调16HBE Let-7α的表达(P<0.05),0.2和0.4 Gy照射组与未照射对照组相比,16HBE let-7α的表达出现上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);2.0 Gy照射后4、8和24 h 16HBE let-7α的表达与未照射组相比出现上调趋势(P<0.05).结论 γ-射线可以影响16HBE let-7α表达.     

^60Coγ射线诱发人外周血GADD45A基因表达的变化研究

目的探讨电离辐射诱导人外周血GADD45A基因的表达变化,为寻找急性照射条件下辐射损伤早期诊断标志物提供实验依据。方法采集无急慢性疾病、不抽烟、年龄在26～29周岁的3名男性非放射性工作者外周血各10ml,分为10组,每组1ml。利用中国辐射防护研究院。^60Co照射装置对采集的血样分组照射,剂量率为0．313Gy／min。吸收剂量分别为0．05、0．1、0．2、0．4、0．6、0．8、1、2和3Gy,照射后的人外周血于37℃培养箱中静置2h后提取RNA,利用实时荧光定量PCR技术对外周血GADIM5A基因进行检测。结果实时荧光定量PCR检测结果表明各剂量组与对照组相比,其基因表达均有显著变化。0．05～0．6Gy剂量组与对照组相比基因表达下调,其中0．05～0．2Gy之间,随着照射剂量的增加,基因表达量逐渐降低;0．2～0．6Gy之间,随着照射剂量的增加基因表达量又逐渐增加。0．8Gy时,基因表达量增幅较大,高于对照组和1Gy剂量组。1～3Gy剂量组基因表达量均高于对照组,且随着剂量增大,表达量增加,具有明显剂量相关性。结论电离辐射可以诱导人外周血GADD45A基因的差异表达,1～3Gy之间具有明显剂量相关性。0．05～0．2Gy之间外周血淋巴细胞表现出辐射刺激效应。     

γ-射线对人支气管上皮细胞let-7a表达影响的研究

目的探讨γ-射线对人支气管上皮细胞(16HBE)let-7a表达影响。方法用60Coγ-放射源0.2~8.0 Gy照射16HBE后8 h,用TaqMan探针实时定量聚合酶链反应技术测定let-7a的相对表达;同时测定了2.0 Gy照射16HBE后4、8和24 h细胞let-7a的相对表达。结果16HBElet-7a表达因照射剂量和照射后时间的不同而异,1.0~8.0 Gy照射后能明显下调16HBElet-7a的表达(P<0.05),0.2和0.4 Gy照射组与未照射对照组相比,16HBElet-7a的表达出现上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);2.0 Gy照射后4、8和24 h 16HBElet-7a的表达与未照射组相比出现上调趋势(P<0.05)。结论γ-射线可以影响16HBElet-7a表达。     

~（60）Co─γ射线辐照香味蒜蓉对某些营养素含量的影响

本文提出了香味蒜蓉￣（６０）Ｃｏ－γ射线辐照杀菌单元操作方法，通过对辐照杀菌化学效应的研究，建立了１７种人体必需氨基酸含量及氨基酸总量与辐照剂量的数学模型和大蒜素、维生素Ｃ、蛋白质、总糖、脂肪、总酸、水分等成分与辐照剂量的关系模型。     

镧对仔鼠海马核转录因子-κB表达影响

目的探讨亚慢性氯化镧(La Cl3)暴露对子代大鼠海马组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法健康成年雌性Wistar大鼠24只,随机分为对照组及0.25%、0.5%、1.0%La Cl3组,染镧组仔鼠自雌鼠受孕至断乳后1个月通过自由饮水摄入镧;利用免疫组化法检测海马p-IKKα/β的分布和表达;应用Western blot法检测海马组织p-IκBα和p-NF-κBP65的表达。结果 0.25%、0.5%、1.0%La Cl3组仔鼠海马CA1区p-IKKα/β表达分别为(54.72±10.04)、(40.73±4.90)、(32.99±5.42),CA3区表达分别为(64.80±8.27)、(47.78±4.92)、(36.17±7.71),DG区表达分别为(303.67±34.78)、(166.83±29.8)、(87.01±17.40);CA1、CA3、DG区各染镧组仔鼠海马3区的p-IKKα/β表达与对照组比较,除DG区0.25%La Cl3组外其他各染镧组仔鼠海马p-IKKα/β表达均低于对照组(P<0.05);0.25%、0.5%、1.0%La Cl3组仔鼠海马p-IκBα和p-NF-κBp65蛋白表达IDV值分别为(0.58±0.06)和(0.46±0.06)、(0.49±0.07)和(0.36±0.08)、(0.36±0.09)和(0.25±0.08),均低于对照组的(0.68±0.05)和(0.56±0.08)(P<0.05),仔鼠海马p-IκBα和p-NF-κBp65蛋白表达均与La Cl3染毒剂量呈负相关(r=-0.994、-0.978,P<0.05)。结论亚慢性La C13染毒可引起子代大鼠海马细胞NF-κB活性降低,可能是镧引起学习记忆能力下降的机制之一。     

~(60)Coγ射线预辐照兔自体神经原位再植后的组织学观察

目的探讨变性神经移植后神经功能的恢复情况。方法将60Co先期辐射处理后的兔自体神经原位再植,观察术后4、6、8月神经组织情况,光镜观察吻合口远近端横断面新生神经纤维情况及计算机图像处理,在大体上评价神经功能恢复情况。结果 60Coγ射线预辐照兔自体神经原位再植后神经段神经纤维直径及髓鞘厚度可接近正常。结论长段自体神经(约3cm)经60Co先期处理后再植,神经轴突和神经髓鞘可再生。     

原花青素对高脂饮食大鼠胸主动脉壁过氧化物酶增殖激活受体γ及核转录因子-κB途径的影响

目的观察葡萄籽提取物原花青素(GSPE)对高脂饮食大鼠胸主动脉壁过氧化物酶增殖激活受体γ(PPARγ)mRNA表达及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组:对照组、高脂组、吡格列酮组、原花青素组。每组8只,其中吡格列酮组为阳性对照组。对照组饲基础饲料,其他3组饲高脂饲料。各组在饲喂饲料的同时,灌胃给相应的干预剂,吡格列酮和原花青素灌胃量分别是10mg/(kg.d)、100mg/(kg.d),吡格列酮组和高脂组灌蒸馏水。在0周、3周、6周空腹尾静脉采血,测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。实验期末,取大鼠胸主动脉组织,保存于-70℃。运用RT-PCR检测PPARγ的mRNA表达水平,EMSA检测NF-κB活性。结果(1)高脂组较对照组大鼠血清TC、TG水平含量明显升高(P<0.05)。原花青素组和吡格列酮较高脂组血清TG、TC的含量显著降低(P<0.05),原花青素组与吡格列酮组、对照组间差异无显著性。(2)高脂组与对照组相比,PPARγmRNA表达显著降低(P<0.05),胸主动脉壁NF-κB活性明显升高。(3)吡格列酮组与高脂组比较,胸主动脉壁PPARγmRNA表达水平升高(P<0.05)。(4)原花青素组与高脂组比较,胸主动脉壁PPARγmRNA表达水平明显升高(P<0.05),NF-κB活性显著降低。结论原花青素具有预防血清TG、TC升高的作用;原花青素能通过预防高脂状态下大鼠胸主动脉壁PPARγmRNA表达下调,抑制NF-κB的激活。     

雅安藏茶对~(60)Coγ辐射损伤小鼠的防护作用

目的探究雅安藏茶对~(60)Coγ射线辐射损伤小鼠的防护作用。方法实验选取48只雄性SPF级小鼠,随机分为:正常对照、辐射对照、阳性对照,以及雅安藏茶低、中、高剂量组共6组。每组连续灌胃对应受试样品15 d,其中灌胃D6,除正常组外,其余组给予剂量为5Gy的~(60)Coγ射线一次性全身照射。灌胃结束后,眼睑采血、解剖,测定外周血细胞、血液抗氧化酶指标(SOD、CAT)、骨髓DNA含量、胸脾指数及小鼠肝脏组织总抗氧化指标(T-SOD、T-AOC)、TP、MDA等相关指标。结果与辐射对照相比,雅安藏茶中剂量组对辐射损伤小鼠的外周血细胞含量明显提高,其中,淋巴细胞(LYM)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)含量分别极显著增加了44%、30%、36%(P0.01),红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)含量分别显著增加了7%、6%(P0.05),血液超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性分别极显著升高了67%、13%(P0.01),肝脏总超氧化物歧化酶(T-SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性分别极显著增高71%、17%(P0.01),肝脏丙二醛(MDA)含量极显著下降了27%(P0.01),小鼠体质量显著升高(P0.05),股骨骨髓DNA含量极显著增高了26%(P0.01),缓解脏器免疫器官的损伤。结论雅安藏茶对~(60)Coγ射线辐射损伤小鼠具有较强的防护作用,且具有一定的剂量效应。     

低强度微波对γ射线致人早幼粒白血病HL-60细胞损伤的影响

[目的]探讨低强度微波辐射对γ射线致人早幼粒白血病HL-60细胞的凋亡率、线粒体膜电位（mitochondrial membrane potential, MMP）和胞内游离Ca^2＋浓度改变的影响。[方法]将人早幼粒白血病HL-60细胞随机分为对照组、单纯微波组、单纯γ射线组和联合组（微波＋γ射线）。单纯微波组和联合组给予12gW／cm^2微波照射,每天1h,连续辐照3d;第4天给予单纯γ射线组和联合组8Gγγ射线照射。用钙离子依赖性磷脂结合蛋白-异硫氰酸荧光素／碘化丙啶（Annexin V—FITC／PI）双标记法检测细胞凋亡率,流式细胞仪检测线粒体膜电位和胞内游离Ca2＋浓度。[结果]与对照组相比,单纯γ射线组凋亡率明显增加（P〈0．05）;联合组凋亡率与单纯γ射线组相比显著降低（P〈O．05o与对照组相比,单纯γ射线组线粒体膜电位下降明显（P〈0．05）;联合组线粒体膜电位与单纯γ射线组相比显著升高（P〈0．05o与对照组相比,单纯γ射线组胞内游离Ca2＋浓度明显升高（P〈0．05）;与单纯γ射线组相比,联合组胞内游离Ca2＋浓度明显降低（P〈0．05）。[结论]本实验条件下,8Gyγ射线可以引起细胞凋亡率增加、线粒体膜电位下降和胞内游离Ca2＋浓度增高,导致细胞损伤。预先900MHz、12μW／cm^2低强度微波照射能够显著减轻γ射线引起的细胞损伤,表现为细胞凋亡率减少、线粒体膜电位升高和细胞内游离Ca^2＋浓度降低。     

微波及γ射线单独或联合辐射对人神经胶质瘤细胞HSP70表达的影响

[目的]探讨微波及γ射线单独或联合照射对入神经胶质瘤细胞（SHG44细胞）热休克蛋白70（HSP70）表达的影响。[方法]SHG44细胞按是否接受γ射线照射（5Gy）分为单独微波组（M组）和射线微波联合组（IM组）;两组又均以接受微波强度不同（0、2、4、6mW／cm^2）分为4个亚组,即M0、M2、M4、M6亚组和IM0、IM2、IM4、IM6亚组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞存活率,用western blot和RT-PCR方法检测HSP70的表达。[结果]与M0组相比,M4、M6、IM6组的细胞存活率均明显下降（P〈0.05或P〈0.01）,尤以IM6组下降为甚;且IM6组的细胞存活率也低于单独γ射线照射组（IM0组）,P〈0.01。与M0组相比,各剂量M组的HSP70表达差异无统计学意义;经γ射线照射后,即各IM组的HSP70表达较M0组均明显下降（P〈0.01）;而与IM0组相比,各IM组的HSP70表达差异无统计学意义（P〉0.05）。[结论]本实验条件下,微波和γ射线单独或联合辐射均能降低细胞存活率;γ射线照射能抑制HSP70的表达,但微波不能引起HSP70表达的明显变化。     

矢车菊素-3-O-葡糖苷干预核因子-κB通路抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡

目的研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-glucoside,C3G)对H₂O₂诱导人胚肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK-293)损伤的抗凋亡作用。方法以0.4 mmol/L H₂O₂诱导HEK-293细胞凋亡,1.25、5、20μmol/L C3G预处理,检测凋亡细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率和线粒体膜电位,免疫印迹法和反转录定量PCR(qRT-PCR)检测核因子(nuclear factor,NF)-κB凋亡信号通路中P65蛋白和mRNA表达量。结果 H₂O₂损伤细胞后,LDH释放率提高[(100±5.53)%比(57.28±4.83)%],线粒体膜电位下降[(55.97±1.89)%比100%],P65蛋白[(122.73±7.45)%比100%]和mRNA[1.66±0.06比1.00]表达均显著上调,差异均有统计学意义(P<0.0...